ALK基因檢測方法

⑴ ALK基因重組檢測試劑盒怎麼用，注意事項

對於晚期非小細胞肺癌，推薦所有腺癌或含腺癌成分的非小細胞肺癌患者，在診斷時常規進行ALK融合基因或ALK融合蛋白檢測。對於睜畢斗小活檢標本或者不吸煙悉磨的鱗狀細胞癌患者也建議進行ALK檢測。ALK融合基因在不吸煙或少吸煙的肺腺癌患者中發生比率較高，且通常數手與EGFR基因突變不同時存在於同一患者。

⑵ 哪些肺癌需要接受ALK融合基因檢測

各種條件允許的話，建議是所有肺鱗癌、肺腺癌的患者都做基因檢測。首先最應該檢測的是EGFR基因，其突變陽性的概率在我國非小細胞肺癌人中約佔30%以上，等於1/3的病人一線就適合吃TKI葯物。患者等待基因檢測可能需要較長的時間（一周至兩周），並且部分醫院該部分是醫保的，尤其需要強調的是這個等待是值得的，因為這個結果對下一步治療至關重要。此外，還應該檢測EML4-ALK融合基因，如果這個細胞發生融合基因表達陽性的話，另有靶向葯物治療，就是大眾尚不熟悉的克唑替尼，但是發生率在我國加起來不過10%，我們優先做EGFR基因檢測，再做EML4-ALK檢測。
而不同基因檢測的方法，所需要的時間也不盡相同。以檢測ALK基因為例，採用Ventana IHC這種免疫組化方法大約1—2天就可以出結果；採用FISH（熒光原位雜交）時大概需要3—4天出結果；採用PCR（聚合酶鏈反應）這種比較復雜的分子生物學檢測方法，則大約需要5—7個工作日出結果（國際上要求兩周之內出基因檢測結果）。

⑶ 腫瘤個體化治療的ALK基因靶點檢測方法

近年來,腫瘤靶向治療的進展隨著分子生物學技術的發展和對發病機制從細胞、分子水平的進一步認識已經進入了一個全新的時代。這些領域的進展很快，在臨床取得了很好的效果。根據葯物的作用靶點和性質，可將主要分子靶向治療的葯物分為以下幾類：
1. 具有靶向性的表皮生長因子受體(EGFR)阻斷劑，如吉非替尼(Gefitinib，Iressa)；埃羅替尼（Erlotinib, Tarceva）;
2. 酪氨酸激酶受體抑制劑，如克唑替尼™（Crizotinib,Xalkori®）靶向分子包括ALK、肝細胞生長因子受體（HGFR，c-Met）和RON。易位可促使ALK基因引起致癌融合蛋白的表達。ALK融合蛋白形成可引起基因表達和信號的激活和失調，進而促使表達這些蛋白的腫瘤細胞增殖和存活。克唑替尼™在腫瘤細胞株中對ALK和c-Met在細胞水平檢測的磷酸化具有濃度依賴性抑製作用，對表達EML4-ALK或NPM-ALK融合蛋白或c-Met的異種移植荷瘤小鼠具有抗腫瘤活性。
3. 針對某些特定細胞標志物的單克隆抗體，如西妥昔單抗（Cetuximab,Erbitux）;抗HER-2的單抗，如赫賽汀（Trastuzumab, Herceptin）；
4．Bcr-Abl酪氨酸激酶抑制劑，如伊馬替尼（Imatinib）和達沙替尼（Dasatinib）；
5．血管內皮生長因子受體抑制劑，如Bevacizumab(Avastin)；
6．抗CD20的單抗，如利妥昔單抗（Rituximab）；
7．IGFR－1激酶抑制劑，如NVP－AEW541；
8．mTOR激酶抑制劑，如CCI－779；
9．泛素－蛋白酶體抑制劑，如Bortezomib；
10．其他，如Aurora激酶抑制劑，組蛋白去乙醯化酶（HDACs）抑制劑等。
臨床研究
研究1001（克唑替尼™客觀反應率為61%）
研究A8081001中截至2010年9月鎖定數據分析時，對119名ALK陽性局部晚期或帶困轉移的非小細蠢薯念胞肺癌患者進行了評估。他們的平均治療周期為32周。據研究者評估，有2例患者完全緩解，69例患者部分緩解，客觀緩解率為61%（95% CI: 52%, 70%）。在最初8周治療期間，腫瘤客觀緩解率為55%。中位緩解持續時間為48.1周。
研究1005（克唑替尼™客觀反應率為50%）
研究A8081005中截至2010年9月鎖定數據分析時，對136名ALK陽性局部晚期或轉移的非小細胞肺癌患者進行了評估。他們的平均治療周期為22周。據研究者評估，有1例患者完全緩解，67例患者部分緩解，客觀緩解率為50%（95% CI: 42%, 59%）。在最初8周治療期間，腫瘤客觀緩解率為79%。中位緩解持續時間為41.9周。
作為PROFILE 1005試驗的一部分，ALK熒光原位雜交檢測法已在病理標本中得以驗證，這也是目前唯一經臨床驗證的ALK檢測方法 。
研究A8081005仍在進行中，預計2013年第3季度完成。
2011年8月26日克唑替尼™在美國獲得批准，主要依據是PROFILE1005最先入選的136例ALK基因重排非小細胞肺癌患者緩解率為50%，其次是PROFILE 1001最先入選的119例ALK基因重排非小細胞肺癌患者緩解率為61%。
PROFILE107是一項克唑替尼和標准化療（培美曲塞或多西他賽）在ALK陽性非小細胞肺癌患者的非安慰劑對照試驗。347例受試患者均已接受過一線化療。PROFILE 1007試驗數據已在2012歐洲腫瘤內科學會（ESMO）上公布。結果表明：克唑替尼組的中位無進展生存期（PFS）為7.7個月，與接受化療的患者中位3.0個月的PFS相比（HR 0.49，95%CI 0.37-0.64，P <0.0001），克唑替尼的總有效率也顯著較高（65%對20%，P <0.0001）。
其他相關研究
研究A8081014是一項隨機、對照、開放的III期研究，比較了以250 mg BID起始劑量口服克唑替尼™與培美曲塞/順鉑,或培美曲塞/卡鉑化療一線手世治療晚期ALK陽性非鱗狀非小細胞肺癌的安全有效性。計劃入組334例患者以1：1比例隨機分配至A組（克唑替尼™）或B組（化療：培美曲塞/順鉑或培美曲塞/卡鉑）中。截至2012年11月，共隨機入組261例。預計2015年第4季度完成。
研究A8081029是一項正在進行的多中心、隨機、對照、開放的III期研究，在既往未經治療的東亞ALK陽性晚期非鱗狀非小細胞肺癌患者中比較了克唑替尼™與化療（即培美曲塞/順鉑或培美曲塞/卡鉑）的安全有效性。入組患者來自中國、台灣、香港、泰國和馬來西亞。計劃入組200例患者按1：1比例隨機分配至A組（克唑替尼™）或B組（化療：培美曲塞/順鉑或培美曲塞/卡鉑）中。其中，150例患者來自中國，而其餘50例患者來自其他亞洲國家。預計2015年第4季度完成。

⑷ ALK陽性非小細胞肺癌基因檢測

根據肺癌組織的癌細胞病理特徵分:非小細胞肺癌（NSCLC）約佔85%,小細胞肺癌（SCLC）：約佔15%。對於晚期非小細胞肺癌，推薦所有腺癌或含腺癌成分的非小細胞肺癌患者，在診斷時常規進行春謹ALK融合基因或ALK融合蛋白檢測。
對於小活檢標本或者不吸煙的鱗狀細胞癌患者也建議進行ALK基因檢測。2009年Shaw等將ALK基因重排陽性的肺癌列為非小細胞肺癌的一個特定分子亞型。
ALK融合型非小細胞肺裂睜癌不僅是基因序列層面的改變，ALK融合蛋白也是該類疾病中重要變異，因此將此類疾病統稱為「ALK陽性非小細胞肺癌」
。ALK陽性非小細胞肺癌，是一類驅動基因明確的肺癌類型。這一類型的非小細胞肺癌，對於新型靶向葯物--ALK抑制劑扒源基高度敏感。
中國非小細胞肺癌中ALK陽性率為3-11%,每年新發病例數約35000例。對於基因突變陽性的ALK陽性非小細胞肺癌，靶向治療無疑成為他們更好的治療選擇。

⑸ 肺癌的突變基因有哪些

脅人類的三大癌症肺癌，胃癌，肝癌。肺癌的發病率相對較高，肺癌是由於肺功能紊亂，已經完全不能按照人體所需來工作，肺癌早期的話可以通過手術進行治療，有康復的幾率，如果發展到晚期希望就非常渺茫了，只能說是延長他的生命周期，具體還是需要咨詢主治醫師的。

⑹ alk是什麼意思

根據肺癌組織的癌細胞病理特徵分:非小細胞肺癌（NSCLC）約佔85%,小細胞肺癌（SCLC）：約佔15%。

對於晚期非小細胞肺癌，推薦所有腺癌或含腺癌成分的非小細胞肺癌患者，在診斷時常規進行ALK融合基因或ALK融合蛋白檢測。 對於小活檢標本或者不吸煙的鱗狀細胞癌患者也建議進行ALK基因檢測。

ALK融合基因的產物是分子量為80 kD的融合腫瘤蛋白，其轉化細胞的能力已得到公認。P80NPM-ALK通過使大鼠纖維母細胞發生錨非依賴性（anchorage independent）生長，增殖率明顯增高。

它還可使Ba/F3細胞轉變為IL3非依賴性。通過逆轉錄病毒將NPM-ALK轉染小鼠骨髓細胞，這些小鼠隨之發生了T細胞和B細胞性大細胞淋巴瘤。

非小細胞肺癌中唯一驅動突變：

其中一組研究人員開發了逆轉錄病毒cDNA表達庫用於篩選新癌基因。他們轉染了提取自一位預先篩選顯示KRAS和EGFR突變陰性的62歲日本男性吸煙者肺腺癌的cDNA文庫，並設計生成了轉基因小鼠，在肺泡細胞中特異性表達EML4-ALK，由此生成了許多肺腺癌結節。

使用ALK抑制劑治療這些轉基因小鼠導致腫瘤負荷相比於未治療的小鼠減小。大部分小鼠很快在1個月內死亡。使用相同ALK抑制劑治療導致肺臟無EML4-ALK/3T3細胞浸潤且生存期延長。此研究有力證實了EML4-ALK是非小細胞肺癌中唯一的驅動突變。

以上內容參考：網路-alk

⑺ ALK基因檢測是什麼

ALK基因變異是非小細胞肺癌的一種分子亞型，該段運亞型的人群特徵多發於年瞎燃皮輕，肺腺癌，非吸煙人群。ALK基因檢測是一種對ALK基因是否正常的一種診斷方磨差法。

⑻ ALK為什麼這么「火」(二) | ALK融合基因檢測

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ALK融合基因

間變性淋巴瘤激酶（ALK）突變的形式有過量表達、與其他基因形成融合基因，發生點突變等等。

 ALK是非小細胞肺癌（NSCLC）常見的一種驅動基因，中國NSCLC突變陽性率5.3%。

ALK融合基因突變主要在肺腺癌里常見，一般肺鱗癌患者ALK融合基因突變概率很低。

有研究說亞裔的EGFR、KRAS野生型的腺癌患者，ALK陽性比例高達30%-42%，因此如果發現EGFR和KRAS是野生型，是更有必要測下ALK基因的。

下圖為非小細胞肺癌中ALK的重排形式

01

免疫組化（IHC）

原理：通過抗原和抗體的結合反應，配合信號級聯放大來檢測。羅氏公司的Ventana IHC 試劑盒可以達到與FISH檢測結果94%~100%的一致率。

判讀標準是腫瘤細胞胞漿出現簇狀黃棕色染色顆粒，胞膜著色則為陰性。歐盟和中國都已經批准Ventana IHC用於檢測ALK重排。

缺點：由於腫瘤異質性，靶蛋白的表達強度不均一。由於存在蛋白或RNA降解的可能，FFPE切片存儲大於3個月的不建議Ventana IHC檢測。

02

熒光原位雜交(FISH)

原理：分離探針的FISH方法，設計紅與綠兩個探針，分別標記ALK基因的兩端，一旦ALK基因發生斷裂重排或倒轉，紅綠信號便出現分離，而沒有發生斷裂的則呈現為黃色熒光信號。

判讀標准為單個視野中計數50個腫瘤細胞，>50%的細胞出現分離信號則判讀為陽性，如<10%細胞出現分離信號則判讀為陰性。如果10%~50%的細胞出現分離信號，則再次挑選50個腫瘤細胞，看計數100個細胞，是否有>15%的細胞出現分離信號（僅限用於雅培的分離探針試劑盒）。

缺點：無法判斷ALK的融合型，必須由經驗豐富的病理科醫師來完成。15%的臨界值存在一定爭議，由於腫瘤異質性、取樣偏差等問題，存在假陰性的可能。即漏檢ALK突變陽性患者。

03

反轉錄PCR（RT-PCR）

原理：通過預先設計好的引物對樣本的RNA進行逆轉錄來檢測融合突變，簡便可行，並可以確定ALK的融合型。

缺點：需要高質量的ALK RNA樣本，臨床大部分是石蠟樣本，RNA降解嚴重，影響檢出率，導致假陰性的結果，大於2年的標本不建議使用RT-PCR檢測，推薦新鮮腫瘤組織樣本。通過PCR引物只能檢測已知的融合基因型，無法囊括所有的融合型。

03

二代測序（NGS）

目前已經證實使用二代測序技術檢測基因擴增、基因重排是可行的，而且二代測序有助於發現ALK新的融合突變形式。而且僅需要少量樣本即可檢測多種基因的突變情況。

缺點：價格較高，判讀標准及後續驗證等亟待解決。

臨床常用的三種方法是FISH、Ventana IHC及RT-PCR，三種方法FISH的靈敏度最低。因此，如果是胸腔積液、細針穿刺取到的細胞學樣本做成的蠟塊，不建議使用FISH，避免假陰性。另外通過抽血檢測循環腫瘤DNA（ctDNA），循環腫瘤細胞（CTC）也正在發展起來。總之在面對ALK檢測結果模稜兩可的時候，一定要換一個檢測方法去驗證，也沒有哪一種方法靈敏度和特異性都是100%。

參考資料：

DOI: 10.20892/j.issn.2095-3941.2017.0017

，侵刪。

⑼ IHC20-1798腫瘤細胞ALk(+)是什麼意思

針對腫瘤細胞alk融合突變的檢測方法主要有並叢：fish、ihc（免疫組化）、qpcr、二代基因檢測等等。這個結果顯示肺腺癌細胞存在alk突變陽性，而alk突變是肺腺癌突變中的鑽石突變，靶向葯選擇多，現在針對alk突變的第四代靶向葯也已經上市，而且該突變不易對靶向葯產絕改櫻生耐葯，可控時間殲兄長，預後較好。

⑽ 最全梳理ALK基因突變和對應的靶向葯物

間變性淋巴瘤激酶（ALK）突變的形式有過量表達、與其他基因形成融合基因，發生點突變等等。ALK基因融合突變是非小細胞肺癌（NSCLC）常見的一種驅動基因，中國非小細胞肺腺癌中ALK融合突變陽性的比例為5.3%，在非小細胞肺腺癌、年輕患者（小於60歲）以及不吸煙的人群中發生率較高，ALK陽性的非小細胞肺癌被認為是一種分子亞型，相對應的靶向葯物與EGFR分子亞型完全不同。

ALK融合基因突變主要在肺腺癌里常見，一般肺鱗癌患者ALK融合基因突變概率很低，有報道說1400個肺鱗癌患者里ALK融合基因的發生率為1.3%。考慮到ALK總體突變頻率僅有5%，所以對於鱗癌患者也是可以做一下ALK檢測的。由於非小細胞肺癌里的驅動基因突變一般是互相排斥的，或者說一山不容二虎，癌細胞也沒有必要搞兩個驅動突變。有研究說亞裔的EGFR、KRAS野生型的腺癌患者，ALK陽性比例高達30%-42%，因此如果發現EGFR和KRAS是野生型，是更有必要測下ALK基因的。

一、ALK融合突變的檢測

圖5：L1198F導致的勞拉替尼耐葯對克唑替尼重新復敏

這是一個非常有意思的發現，即勞拉替尼這個葯物也不是最後的一張牌，這個葯物耐葯了，也許之前被放棄的葯物仍可以有效。所以也有說法ALK是一種鑽石突變。但需要謹慎的是不是每一個勞拉替尼耐葯的患者都這樣。我們從圖示看出患者同時存在C1156Y和L1198F突變，才造成了這種逆轉。也許其他的突變位點如L1196M等和L1198F就沒有這種協同效果。或者還有可能勞拉替尼耐葯的原因是其他的旁路激活，如KRAS或EGFR等，具體的還是可以根據基因檢測結果來謹慎分析和對待，不過現在的測序技術抽血測ctDNA檢測ALK的這些激酶突變總可能會有陰性，ArmsPCR等檢測方法也還沒有相應的產品，暫時只能盡量地取耐葯後的新發組織樣本，進行二代測序檢測。

編者：翱宇

參考文獻：

1、馮勤楊欣林冬梅，ALK陽性非小細胞肺癌的診斷，中國肺癌雜志2 0 1 5年2月第1 8卷第2期。

2、蔣濤周彩存，中國肺癌雜志2015年2月第1 8卷第2期

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