球菌的鑒別方法

1. 乳酸菌桿菌和球菌如何鑒定

革蘭氏染色後鏡檢，可判斷一些長桿菌與球菌。
但很有些乳酸桿菌較短，容易誤認為是乳酸球菌。根據我經驗，短桿菌雖然像圓，但球菌其實更小更圓。還有，某些2聯、4聯球菌，若看得不仔細，也容易判斷成桿菌。
可用法國梅里埃公司的API 50試劑盒做一個糖發酵的生理生化鑒定，可判斷一部分，准確率還算不錯了。
另，還是需要結合其他的生理生化特徵來鑒定，然後查細菌手冊。
若能做個序列分析，那就最好了。
實際上嘛，若不想糾纏與屬、種、亞種的區分問題，只想區分乳酸桿菌與乳酸球菌的話，就是個經驗活，你鏡檢多了，自然就能更容易判斷些。

2. 細菌鑒定辦法有哪些, 常見細菌的鑒定辦法就可以~

一 澱粉水解試驗
（一）實驗原理
細菌對大分子的澱粉、蛋白質和脂肪不能直接利用,必須靠產生的胞外酶,如澱粉酶、蛋白酶和脂肪酶將大分子物質分解.胞外酶能分泌擴散到細胞外,將物質分解成小單位如糖、氨基酸、甘油與脂肪酸.這些小單位的物質能被細菌吸收和利用.水解過程可通過底物的變化來證明,如細菌水解澱粉的區域,用碘測定不再產生藍色；水解明膠可觀察到明膠被液化；脂肪水解後產生脂肪酸改變培養基的pH,其中的中性紅指示劑使培養基從淡紅色變為深紅色.
（二）實驗方法
將澱粉培養基溶化後,冷至45℃左右,以無菌操作製成平板.
取18-24h的純培養物點於平板上,每皿可點種3-5個菌株,適溫培養2-4d,形成菌落後,在平板上滴加盧戈氏碘液,以鋪滿菌落周圍為度,平板成藍色.如果菌落周圍有無色透明圈出現,說明澱粉已經被水解,實驗為陽性,否則為陰性.透明圈的大小一般說明水解澱粉的能力.
（三）實驗試劑的配製
肉湯蛋白腖瓊脂成分：蛋白腖10g,牛肉膏3g,氯化鈉5g,瓊脂17g,蒸餾水1000mL,pH7.2.
澱粉培養基製法：在肉湯蛋白腖瓊脂中添加0.2％的可溶性澱粉,校正pH值至7.6,分裝三角瓶,121℃ 20min滅菌備用.
盧戈氏(Lugol)碘液：碘片1g,碘化鉀2g,蒸餾水300ml,先將碘化鉀溶解在少量水中,再將碘片溶解在碘化鉀溶液中,混勻,定容.
二 糖發酵試驗
(一)實驗原理
單糖發酵是將葡萄糖,乳糖或麥芽糖等分別加入蛋白腖水培養基內,使其最終濃度為0.75-1％.並加入一定量酚紅指示劑及小倒管,製成單糖發酵管,接種細菌經37℃培養18-24小時,若能分解糖產酸則酚紅指示劑由紅變黃,若能分解甲酸有CO2和H2等氣體形成,小倒管內則聚集有氣泡；不分解,則指示劑不變色.
(二)實驗材料
1．菌種：大腸桿菌,傷寒桿菌18-24小時瓊脂斜面培養物.
2．培養基：葡萄糖發酵管,乳糖發酵管等.
(三)實驗方法
1．將傷寒桿菌,大腸桿菌按照液體接種方法分別接種於葡萄糖及乳糖發酵管內.
2．置37℃孵箱培養18-24小時.
3．觀察結果：由於一些細菌能分解某種糖類產酸,所以培養基中pH下降到7.0以下,在酚紅指示劑的顯示下,培養基顏色由紅變黃.產酸者以「+」表示,如果同時產生氣體,則培養基中小倒管內有氣泡出現,此乃產酸又產氣,以「♁」表示,不分解,則指示劑不變色,用「-」表示.
(四)實驗結果
傷寒桿菌 大腸桿菌
葡萄糖 + ♁
乳 糖 - ♁
(五)實驗試劑的配製
1.單糖發酵管的制備： 成分：蛋白腖水培養基 100ml ,0.2%酚紅 1ml ,所需糖（葡萄糖或乳糖）0.75-1g
製法：
（1）將上述成分溶化,混勻分裝於內含有倒置小玻璃管的小試管中,每管約2ml,加塞.
（2）小倒管排氣,滅菌（8-10磅,20-30分鍾）,貯存備用.
用途：供單糖發酵試驗用.
2.0.2%酚紅配製法
酚紅（phenol red）0.2g ,0.lmol/LNaOH 8ml ,蒸餾水 92ml
將酚紅入研缽徐徐加入0.lmol/LNaOH研磨,再補足蒸餾水即成.若需長時間保存,可高壓滅菌後貯存備用.
三 甲基紅（M.R）試驗
(一)實驗原理
某些細菌如大腸桿菌等分解葡萄糖產生丙酮酸,繼而分解為甲酸、乙酸、乳酸等,使培養基pH值降至4.5以下,加入甲基紅指示劑呈紅色,此為陽性反應；若產酸量少或產生的酸進一步轉化為醇、醛、氣體和水等,則培養基的酸鹼度仍在pH 6.2以上,加入甲基紅指示劑呈現黃色,為陰性反應.
(二)實驗材料
1. 菌種：大腸桿菌,產氣桿菌18-24h瓊脂斜面培養物.
2. 培養基：葡萄糖蛋白腖水培養基.
3. 試劑：甲基紅試劑.
(三)實驗方法
1. 分別將大腸桿菌,產氣桿菌接種於兩支葡萄糖蛋白腖水培養基中.
2. 置37℃培養2-3天取出,分別滴加甲基紅試劑2-3滴,混勻,觀察結果.
(四)實驗結果
大腸桿菌：+,產氣桿菌：-.
(五)實驗試劑的配製
1．甲基紅試劑的配製
甲基紅 0.04g, 95%酒精 60ml , 蒸餾水 40ml .
先使甲基紅溶解於酒精中,再加入蒸餾水,混合,搖勻即成.
2.葡萄糖蛋白腖水培養物
成分：蛋白腖5g 葡萄糖5g
製法：
（1）將上述成分溶解於蒸餾水中.
（2）調節pH至7.6,用濾紙過濾除渣.
（3）分裝中試管,每管約3-4ml,滅菌後備用.
用途：供甲基紅及V-P試驗用.
四 產吲哚（indole）試驗
(一)實驗原理
某些細菌如大腸桿菌,變形桿菌等具有色氨酸酶,能分解蛋白腖水培養基中的色氨酸,產生靛基質（無色吲哚）,再與歐立希試劑（對二甲基氨基苯甲醛）反應,形成紅色化合物—玫瑰吲哚,即為陽性反應.
(二)實驗材料
1. 菌種：大腸桿菌,傷寒桿菌18-24小時瓊脂斜面培養物.
2. 培養基：蛋白腖水培養基.
3. 試劑,歐立希（Ehrlich）試劑（對二甲基氨基苯甲醛）
(三)實驗方法
1. 分別將大腸桿菌,傷寒桿菌接種於兩支蛋白腖水培養基中.
2. 置37℃培養2-3天後,每管沿管壁各加歐立希試劑0.5-1ml於培養液面上,待1-2分鍾後觀察結果：在交界面出現玫瑰紅色環即為吲哚試驗陽性,無紅色環即為陰性.
(四)實驗結果
大腸桿菌：+ ；傷寒桿菌：- .
(五)實驗試劑的配製
1.蛋白腖水培養基的制備
成分：蛋白腖10g 氯化鈉5g 蒸餾水1000ml
製法：
（1）先用少量蒸餾水將蛋白腖和氯化鈉相混合溶解,再加足蒸餾水量.
（2）調節pH至7.6、用濾紙過濾.
（3）分裝中試管,每管約3-4ml,加塞滅菌後備用.
2. 歐立希（Ehrlich）試劑的配製
對位二甲基氨基苯甲醛 4g
95%酒精 380ml
濃硫酸或濃鹽酸80ml
三種成分混合即成,瓶口要嚴密,以免揮發.
五 硝酸鹽還原試驗
(一)硝酸鹽還原試驗原理：
硝酸鹽還原反應包括兩個過程：一是在合成過程中,硝酸鹽還原為亞硝酸鹽和氨,再由氨轉化為氨基酸和細胞內其他含氮化合物；二是在分解代謝過程中,硝酸鹽或亞硝酸鹽代替氧作為呼吸酶系統中的終末受氫體.能使硝酸鹽還原的細菌從硝酸鹽中獲得氧而形成亞硝酸鹽和其他還原性產物.但硝酸鹽還原的過程因細菌不同而異,有的細菌僅使硝酸鹽還原為亞硝酸鹽,如大腸埃希菌；有的細菌則可使其還原為亞硝酸鹽和離子態的銨；有的細菌能使硝酸鹽或亞硝酸鹽還原為氮,如假單胞菌等.硝酸鹽還原試驗系測定還原過程中所產生的亞硝酸鹽.
(二)培養基：
硝酸鹽培養基.
(三)試劑：
甲液（對氨基苯磺酸0.8g+5mol/L醋酸100ml）；乙液（α-奈胺0.5g + 5mol/L醋酸100ml）.
(四)方法：
被檢菌接種於硝酸鹽培養基中,於35℃培養1～4d.將甲、乙液等量混合後（約0.1ml）加入培養基內,立即觀察結果.
(五)結果：
出現紅色為陽性.若加入試劑後無顏色反應,可能是：①硝酸鹽沒有被還原,試驗陰性；②硝酸鹽被還原為氨和氮等其他產物而導致假陰性結果,這時應在試管內加入少許鋅粉,如出現紅色則表明試驗確實為陰性.若仍不產生紅色,表示試驗為假陰性.
若要檢查是否有氮氣產生,可在培養基管內加一小倒管,如有氣泡產生,表示有氮氣生成.
(六)應用：
本試驗在細菌鑒定中廣泛應用.腸桿菌科細菌均能還原硝酸鹽為亞硝酸鹽；銅綠假單胞菌、嗜麥芽窄食單胞菌等假單胞菌可產生氮氣；有些厭氧菌如韋榮球菌等試驗也為陽性.
(七)實驗試劑的配製
硝酸鹽液體培養基
蛋白腖5.0g,KNO3 0.2g, 蒸餾水1000 mL,pH7.4,每管分裝4-5mL,121℃滅菌15-20min.
六 產氨實驗（尿素分解實驗）
(一)實驗原理
某些細菌如變形桿菌,具有尿素分解酶,能分解尿素而產生氨,氨溶於水變成氫氧化銨,使培養基變鹼而呈紅色即為陽性.
(二) 實驗材料
1. 菌種：變形桿菌,傷寒桿菌18-24小時瓊脂斜面培養物.
2. 培養基：尿素培養基.
(三) 實驗方法
1. 分別以斜面接種法將變形桿菌,傷寒桿菌接種於兩支尿素斜面培養基上.
2. 置37℃培養18-24小時.
3. 取出觀察結果,培養基變為紅色,即尿素分解試驗陽性,若不變色,即為尿素分解試驗陰性.
(四) 實驗結果
變形桿菌：+ ；傷寒桿菌：- .
(五) 實驗試劑的配製
1.尿素培養基的制備
成分： 蛋白腖1g 、氯化鈉5g、葡萄糖1g、蒸餾水900ml、瓊脂15-20g 、0.1%酚紅 12ml 、20%尿素水溶液（無菌）100ml .
製法：（1）除尿素、瓊脂和酚紅外,其餘成分溶於水中,加熱溶化,矯正pH至6.8-6.9.
（2）加入瓊脂和酚紅,115℃磅滅菌10min.
（3）冷卻至60℃後加入無菌尿素溶液,搖勻.
（4）分裝中試管（無菌）,每管3-4ml,置成斜面備用.
說明：（1）尿素不耐熱,也不能久存,只能用濾器除菌.
2.無菌尿素溶液制備：稱取尿素20g,混合於100ml蒸餾水中,充分搖勻,用G6濾菌器過濾除菌,以達到無菌的目的.
七 檸檬酸鹽利用試驗
(一)實驗原理
本試驗用於檢測細菌利用檸檬酸的能力.細菌利用檸檬酸鹽的能力不同,如各種腸細菌可利用檸檬酸為碳源,而大腸埃希氏菌則不利用檸檬酸鹽.因此,能否利用檸檬酸鹽是一項鑒別性特徵.培養基中含有檸檬酸鈉時,如將檸檬酸分解為CO2,則培養基中由於有游離鈉離子呈鹼性,使培養基中酚紅指示劑（pH6.8-8.4,黃→紅）由淡粉紅色變為玫瑰紅色以識別之.
(二)材料
檸檬酸鈉 2g、K2HPO4 1g、NH3H2PO4 1g、NaCl 5g、MgSO4 0.2g、瓊脂 1.5 2g、1%溴麝香草酚藍(酒精溶液)或0.04%苯酚紅 10ml、水 1000ml
將上述各成分加熱溶解後,調PH6.8,然後加入酚紅指示劑,搖勻,用脫脂棉過濾.製成後為黃綠色,分裝試管.121℃滅菌20min後製成斜面.
(三) 實驗內容
1.將試驗菌在斜面上劃線接種,適溫培養3-5天.
2.若該菌能利用檸檬酸鹽,則可在此斜面上生長並將培養基由原來的淡粉紅色變為玫瑰紅色,此為陽性；顏色不變者為陰性.
八 油脂水解試驗
(一)原理
某些細菌能夠分泌脂肪酶（胞外酶）,能將培養基中的脂肪水解為甘油和脂肪酸.所產生的脂肪酸,可通過預先加入油脂培養基中的中性紅加以指示[指示範圍pH6.8（紅）～pH8.0（黃）].當細菌分解脂肪產生脂肪酸時,培養基中出現紅色斑點.
(二)實驗內容
1.將裝有油脂培養基的錐形瓶置於沸水浴中融化,取出並充分振盪（使油脂均勻分布）,再傾入培養皿中,待凝固後製成平板.
2.翻轉平板使底皿背面向上,用記號筆在其背面玻璃上劃成兩半.一半用於接種金黃色葡萄球菌作為陽性對照菌,另一半用於接種實驗菌大腸桿菌或產氣腸桿菌.接種時用接種環取少量菌在平板兩邊各劃線接種.
3.將接種完的平板倒置於37℃恆溫箱中,培養24h.
4.觀察結果時,注意觀察平板上長菌的地方,如出現紅色斑點,即說明脂肪已被水解,此為陽性反應.
（三）培養基配製
油脂培養基：蛋白腖10g,牛肉膏5g,氯化鈉5g,香油或花生油10g,中性紅（1.6%水溶液）約0.1ml,瓊脂15-20g,蒸餾水1000mL,pH7.2,121℃滅菌20min.
九 接觸酶試驗
(一)實驗原理
本試驗用於檢測細菌是否具有接觸酶活性.接觸酶又稱為過氧化氫酶,是一種以正鐵血紅素作為輔基的酶,能將過氧化氫分解為水和氧.一般好氧細菌與兼性厭氧細菌（除某些鏈球菌、乳酸桿菌等外）都能產生接觸酶,而厭氧細菌不產生接觸酶,這是用以區別好氧和厭氧菌的方法之一.
(二)材料
牛肉膏、蛋白腖瓊脂培養基,3%過氧化氫.
牛肉膏、蛋白腖瓊脂培養基：牛肉膏 0.3g、蛋白腖 1g、氯化鈉 0.5g、瓊脂 2g、自來水 100mL、pH 7.0～7.2 、滅菌.
(三)實驗內容
1.接種試驗菌,適溫下培養18-24小時.
2.將3%的過氧化氫滴於斜面菌苔上（或塗有菌苔的載玻片上）,靜置1-3分鍾後,如有氣泡產生即為陽性.不產生氣泡者為陰性.
(四) 應用
革蘭陽性球菌中,葡萄球菌和微球菌均產生過氧化氫酶,而鏈球菌屬為陰性,故此試驗常用於革蘭陽性球菌的初步分群.
十 革蘭氏染色
(一)實驗原理
革蘭氏染色法是細菌學中廣泛使用的一種鑒別染色法.通過結晶紫初染和碘液媒染後,在細胞壁內形成了不溶於水的結晶紫與碘的復合物,革蘭氏陽性菌由於其細胞壁較厚、肽聚糖網層次較多且交聯緻密,故遇乙醇或丙酮脫色處理時,因失水反而使網孔縮小,再加上它不含類脂,故乙醇處理不會出現縫隙,因此能把結晶紫與碘復合物牢牢留在壁內,使其仍呈紫色；而革蘭氏陰性菌因其細胞壁薄、外膜層類脂含量高、肽聚糖層薄且交聯度差,在遇脫色劑後,以類脂為主的外膜迅速溶解,薄而鬆散的肽聚糖網不能阻擋結晶紫與碘復合物的溶出,因此通過乙醇脫色後仍呈無色,再經沙黃等紅色染料復染,就使革蘭氏陰性菌呈紅色.
(二)實驗方法
革蘭氏染色法一般包括初染、媒染、脫色、復染等四個步驟,具體操作方法是：
1.塗片固定.
2.草酸銨結晶紫染1分鍾.
3.自來水沖洗.
4.加碘液覆蓋塗面染約1分鍾.
5.水洗,用吸水紙吸去水分.
6.加95%酒精數滴,並輕輕搖動進行脫色,20秒後水洗,吸去水分.
7.蕃紅梁色液（稀）染2分鍾後,自來水沖洗.乾燥,鏡檢.
[染色的結果]：革蘭氏正反應菌體都呈紫色,負反應菌體都呈紅色.
(三)應用
其重要的臨床意義在於：1.鑒別細菌 2.選擇葯物 3.與致病性有關：：革蘭氏陽性菌能產生外毒素,革蘭氏陰性菌能產生內毒素,兩者的致病作用不同.

3. 葡萄球菌的檢查有哪些方式

（1）血漿凝固酶試驗：血漿凝固酶是金黃色葡萄球菌所產生的，與其致病力有關的一種侵襲性酶，其作用是使血漿中的纖維蛋白在菌體表面沉積和凝固以阻礙吞噬細胞的吞噬。血漿凝固酶分為結合型和游離型。前者結合在細菌的細胞壁上，能直接作用於血漿中的纖維蛋白原，使之轉化為纖維蛋白，環繞菌體而形成凝塊。而游離型血漿凝固酶則在產生後被分泌到菌體外，不能直接作用於纖維蛋白原，但可以激活血漿凝血酶原，使之轉化成凝血酶，後者再作用於纖維蛋白原使其轉化為纖維蛋白擾漏。具體的測量方法也因此分為玻片法和試管法兩種。
玻片法將待試菌落乳化於玻片上的鹽水中，經10~20S證實無自凝後，用接種環取人或兔血漿一環，與乳化菌液混合，出現凝集者為陽性，另設生理鹽水為陰性對照。
試管法吸取0.5mL兔血漿與0.5mL金黃色葡萄球菌肉浸液肉湯24小時培養物充分混勻，置37℃培養，每隔半小時觀察一次，連續觀察6小時，出現凝固，即將小試管傾斜或倒置時，內容物不流動，判為陽性。

（2）耐熱核酸酶試驗：將24小時肉湯滑仔培養物沸水緩讓爛浴處理15min，用接種環劃線刺種於甲苯胺蘭-DNA平板，35℃培養24小時，在刺種線周圍出現淡粉色者為陽性。本試驗金黃色葡萄球菌為陽性。

（3）甘露醇發酵實驗金黃色葡萄球菌可發酵甘露醇。

（4）Staphaurex 膠乳凝集實驗是鑒定金黃色葡萄球菌的一種快速、簡便的商品化直接凝集試驗。其基本原理是在紙片上滴加包被有纖維蛋白原和IgG抗體的聚苯乙烯膠乳，然後用接種環挑取待鑒定菌株的新鮮培養物加入混勻，若出現凝集塊現象即為陽性。

5. 生化鑒定如上述，注意與其他凝固酶陽性的葡萄球菌的鑒別要點：PYR（吡咯烷酮-β-萘基醯胺試驗陰性；VP試驗陽性；鳥氨酸脫羧酶試驗陰性。

6. 免疫學方法用酶聯免疫吸附試驗和對流免疫電泳方法可檢測金葡菌的磷壁酸抗體。

7. 分子生物學方法包括PFGE脈沖場凝膠電泳以及酶切圖譜分析等。

4. 金黃色葡萄球菌鑒定方法

形態染色、菌落特徵。根據查詢金黃色葡萄球菌鑒定方法得知弊仿，金黃色葡萄球菌鑒定方法主要有：形態染色、菌落特徵、鑒定試驗等鑒定。金黃色葡萄球菌是一種常見的病做卜鏈原體，可引起皮膚軟組織感染純孫。

5. 如何鑒別致病性葡萄球菌與非致病性葡萄球菌

致病性與非致病性，從染色上很難區分，只能通過血漿凝固實驗才能區分，致病性的能夠凝固血漿。

致病性金葡菌首先要凝固酶陽性，其次可以嘗試利用血平板做皮團實驗，一般有致病性的金葡菌為完全溶血，也稱為β溶血。

葡萄球菌分為致病性葡萄球菌與非致病的表皮葡萄球菌及腐生葡萄球菌。很多細菌具有鹼基序列，即DNA序列。

金黃色葡萄球菌的核酸酶具有耐熱性，經100℃水浴15min不被破壞。把 色素、溶血、血漿凝固酶、耐熱核酸酶、甘露醇厭氧產酸等作為鑒別三種菌的依據，其中血漿凝固酶、耐熱核酸酶是最重要的鑒定指標。

(5)球菌的鑒別方法擴展閱讀：

葡萄球菌是最常見的化膿性球菌，是醫院交叉感染的重要來源，菌體直徑約0.8μm，小球形，但在液體培養基的幼期培養中，常常分散，細菌細胞單獨存在。

凝固酶有兩種：

一種是分泌至菌體外的，稱為游離凝固酶為蛋白質。作用類似凝血酶原物質，可被人或兔血漿中的協同因子激活變成凝血酶樣物質後，使液態的纖維蛋白原變成固態的纖維蛋白，從而使血漿凝固。

另一種凝固酶結合於菌體表面並不釋放，稱為結合凝固酶或凝聚因子，在該菌株的表面起纖維蛋白原的特異受體作用，細菌混懸於人或兔血漿中時，纖維蛋白原與菌體受體交聯而困液使細菌凝聚。游汪握物離凝固酶採用試管法檢測，結合凝固酶則以玻片法測試。

6. 如何鑒別肺炎球菌和甲型鏈球菌

甲型鏈球菌不分解菊糖，不被膽汁溶解，optochin試驗耐葯，而肺炎球菌分解菊糖，被膽汁溶解，對optochin試驗敏感。

一、肺炎鏈球菌：

在血瓊脂平板上可形成灰色扁平、中心凹陷，直徑為0.5~1mm的菌落，周圍有草綠色溶血圈。

膽汁溶解試閉余驗陽性、Optochin敏感試驗陽性，多數菌株分解菊糖。

二、甲型溶血性鏈球菌：

菌落呈灰色針尖狀，菌落周圍有2~4mm透明溶血環。

觸酶試驗陰性，分解葡萄糖產酸不產氣，對Optochin耐葯，不被膽汁溶解，不分解菊糖。

(6)球菌的鑒別方法擴展閱讀：

葡萄球菌和鏈球菌的鑒別用觸酶（過氧化氫酶）試驗即可，前者陽性，後者陰性。

甲鏈和肺鏈生物鑒別試驗有optochin敏感試驗、膽汁空唯溶菌試驗和菊糖分解實驗，後者全是陽性。

在化膿性球菌中，肺炎鏈球菌的致病力僅次於金黃色葡萄球菌。不同的是，到目前為止，肺炎鏈球菌極少對青黴素類抗生素產生耐葯性。肺炎球菌主要的致病物質是肺炎球菌溶血素及莢膜。莢膜具有抗原性，是肺炎鏈球菌分型的依據。此菌可引起大葉性肺炎、腦膜炎、支氣管炎等疾病。

7. 鑒別葡萄球菌有無致病性的標志

血漿凝固酶。
鑒別致病性葡萄球菌與顫信非致病性葡萄球菌的方法包括血漿凝固酶試驗、甘露醇發酵試驗、血瓊脂平板培養陪握等。
致病性葡萄球菌與非致病性葡萄球菌的方法包括血漿凝固酶試驗、甘露醇發酵試驗、血瓊脂平板培養等。如果血漿凝固酶試驗陽性、甘露醇發酵試驗有氣泡產生、血瓊脂平板蘆洞慶發現菌落周圍可見完全透明溶血圈，則表示屬於致病性葡萄球菌。

8. 細菌要怎樣識別

單個細胞是無色透明的，為了便於鑒別，需要給它們染上顏色。1884年丹麥科學家革蘭姆創造了一種復染法，就是先用結晶紫液加碘液染色，再用酒精脫色，然後用稀復紅液染色。

經過這樣的處理，可以把細菌分成兩大類，凡能染成紫色的，叫革蘭氏陽性菌；凡被染成紅色的，叫革蘭氏陰性菌。這兩類細菌在生活習性和細胞組成上有很大差別，醫生常依據革蘭氏染色法，選用葯物，診治疾病。為紀念革蘭姆，復染法又稱革蘭氏染色法。

細菌家族的成員，如果固定在一個地方生長繁殖，就形成了用肉眼能看見的小群體，叫菌落。菌落帶有各種絢麗的色彩，如綠膿桿菌的菌落是綠色的，葡萄球菌的菌落是金黃色的。

細菌菌落的形狀、大小、厚薄和顏色等特點，是鑒別各種菌種的依據之一。弗萊明就是通過觀察到金黃色的葡萄球菌落減少或消失，從而發現「吃」掉葡萄球菌的青黴素，劃時代地揭開了抗生素的秘密。

9. 球菌（醫學微生物學）

同學們應重點掌握：1．葡萄球菌屬 2．鏈球菌屬 3．肺炎鏈球菌 4．腦膜炎奈瑟菌 5．淋病奈瑟菌
病原性球菌主要引起化膿性炎症，又稱為化膿性球菌。主要包括葡萄球菌屬、鏈球菌屬和奈瑟球菌屬。
1．葡萄球菌屬
（1）形態、染色和分類
為革蘭染色陽性球菌，無鞭毛，無芽胞，不形成莢膜。根據色素及生化反應等不同，葡萄球菌可分為金黃色葡萄球菌(金葡菌)、表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌三種。金葡菌為血漿凝固酶陽性菌，表皮、腐生葡萄球菌為血漿凝固酶陰性菌，其中金葡菌多為致病菌。
（2）致病物質的種類
①血漿凝固酶：以能否產生此酶作為鑒定菌株致病性的指標。型洞雀
②葡萄球菌溶血素：能破壞多種細胞，故又稱為溶細胞毒素。
③殺白細胞素：可損傷中性粒細胞和巨噬細胞。
④腸毒素：直接或間接刺激嘔吐中樞，引起以嘔吐為主的食物中毒。
⑤表皮溶解毒素：裂解表皮組織的棘狀顆粒層，使表皮與真皮脫離。
⑥毒性休克綜合征毒素(TSST-1)：可抑制內毒素脫毒，使毛細血管通透卜早性增加，引起低血壓性休克。
⑦葡萄球菌表面蛋白A(SPA)：可與IgG抗體的Fc段非特異性結合，競爭性抑制吞噬細胞對細菌的吞噬作用。
（3）所致疾病
①化膿性炎症：傷口化膿性感染、中耳炎、肺炎、膿胸、腦膜炎、心內膜炎等。
②毒素性疾病：食物中毒、燙傷樣皮膚綜合征、中毒性休克綜合征。
③葡萄球菌性腸炎(假膜性腸炎)：由於長期使用廣譜抗生素引起的一種菌群失調症。
（4）致病性葡萄球菌的鑒別要點：初步診斷應符合以下特徵：
①鏡檢符合葡萄球菌的形態學特徵；②菌落色素為金黃色，並有透明溶血環；
③甘露醇發酵陽性；④血漿凝固酶陽性；⑤耐熱核酸酶檢測陽性。在專業實驗室進行腸毒素的鑒定。
2．鏈球菌屬
（1）形態、染色和分類
革蘭染色陽性，無芽胞，無鞭毛，幼齡菌可有透明質酸形成的莢膜。根據溶血現象不同可分為甲型溶血性鏈球菌(稱α溶血)，乙型溶血性鏈球菌(稱β溶血)和丙型溶血性鏈球菌(菌落周圍無溶血環)三大類。根據多糖抗原的不同，將乙型溶血性鏈球菌分為20個群(A~H，K~V)。對人類致病的90%屬於A群。
（2）致病物質的種類
①脂磷壁酸(LTA)。②M蛋白，具有抗吞噬作用。③侵襲性酶，包括透明質酸酶、鏈激酶(SK)、DNA酶(鏈道酶，SD)均可促進細菌在組織間擴散。
④鏈球菌溶血素，包括對氧敏感的鏈球菌溶血素O(SLO)和對氧穩定的鏈球菌溶血素S(SLS)。
⑤致熱外毒素，又稱紅疹毒素，是人類猩紅熱的主要毒性物質。
（3）所致疾病
①A群鏈球菌所致疾病有化膿性感染(淋巴管炎、扁桃體化膿、中耳炎等)，變態反應性疾病(風濕熱、急性腎小球腎炎)及中毒性疾病(猩紅熱)。②甲型溶血性鏈球菌可引起感染性心內膜炎。
（4）鏈球菌溶血素和臨床檢驗的關系
鏈球菌溶血素O(SLO)抗原性強，風濕熱尤其是活動期病例血清SLO抗體升高更顯著，≥l：400。臨床上常應用測定SLO抗體含量作為風濕熱活動性的輔助診斷。
3．肺炎鏈球菌
（1）形態和染色：革蘭染色陽性，無鞭毛，無芽胞，有些毒株形成莢膜，在血瓊脂平皿上形成α-溶血環。此菌可發酵菊糖，故膽汁溶菌試驗及菊糖發酵試驗可鑒別甲型溶血性鏈球菌及肺炎鏈球菌。
（2）主要致病物質與所致疾病
主要致病物質有：①肺炎球菌溶血素；②莢膜(主要致病因素，具有抗吞噬作用)；③紫癜形成因子，使試驗動物產生紫斑及皮膚出血。所致疾病為大葉性肺炎。
4．腦膜炎奈瑟菌
（1）生物學性狀：革蘭染色陰性，無鞭毛，無顫握芽胞，大多有莢膜和菌毛。營養要求較高，常用巧克力培養基培養，初次分離培養需提供5%~10%二氧化碳氣體。抵抗力弱。
（2）主要致病物質和所致疾病
致病物質有菌毛(吸附易感細胞)，莢膜(具有抗吞噬作用)，內毒素(引起發熱反應及低血壓休克)。所致疾病為流行性腦脊髓膜炎，簡稱流腦。
5．淋病奈瑟菌
（1）形態染色：革蘭染色呈陰性，咖啡豆狀成雙排列，無鞭毛，無芽胞，大多有莢膜和菌毛。
（2）致病物質及所致疾病
①菌毛；②淋病奈瑟菌可產生大量IgA1蛋白酶，破壞粘膜表面的特異IgA1，從而使淋病奈瑟菌大量增殖。淋病奈瑟菌是人類惟一宿主，經性接觸傳播，引起泌尿生殖系統感染。
（3）防治原則：取締娼妓，加強性病知識宣傳教育。治療首選青黴素，對新生兒用1%硝酸銀滴眼，以預防淋病性膿漏眼。
例題：肺炎鏈球菌的主要致病因素是：
A C反應蛋白 B 自溶酶 C 莢膜 D 外毒素 E 內毒素
答案：C
註：肺炎鏈球菌莢膜是其主要的致病因素，它具有抗吞噬功能。