⑴ 核酸幾種方法
1.定磷法。簡單快捷，靈敏度高，但易受蛋白質和核苷酸影響。
2.定糖法。靈敏度高，但特異性差，戊糖也會產生反應，容易產生干擾。
3.紫外線吸收法。適用於濃度大的核酸溶液，而人體感染新冠病毒後，咽部所含的病毒量極少，無法通過此種方法被檢測。
4.熒光法。目前廣泛被使用的是熒光定量RT-PCR檢測法，通過對標本進行逆轉錄擴增、使病毒片段達到一定數量，可以被檢測到，但是由於受采樣標本、運輸等多種因素影響，也有假陰性的可能。
⑵ 核酸和蛋白質序列分析的內容和方法有哪些
核酸和蛋白質序列分析的內容和方法有哪些
蛋白質結構分析方法：X射線晶體衍射分析和核磁共振
x 射線衍射法的解析度可達到原子的水平，使它可以測定亞基的空間結構、各亞基間的相對拓撲布局，還可清楚的描述配體存在與否對蛋白質的影響。多維核磁共振波譜技術已成為確定蛋白質和核酸等生物分子溶液三維結構的唯一有效手段。NM R技術最大的優點不在於它的解析度，而在於它能對溶液中和非晶態的蛋白質進行測量。
蛋白質的序列結構測定:
1.到目前為止，最經典的蛋白質的氨基酸序列分析方法是，sarI等人基於Edman降解原理研製的液相蛋白質序列儀，及後來發展的固相和氣相的蛋白質序列分析儀。
2.質譜：早期的質譜電離的方式主要是電子轟擊電離(EI)，它要求樣品的揮發性好，一般與
氣相色譜聯用。但使用G C／M S分析，肽的長度受到限制，只能分析小的肽段。近年來，
在離子化的技術及儀器方面取得了突破性進展，使得質譜所能測定的分子量的范圍大大超
出了10k u。因此，軟離子化技術、基質輔助的激光解吸／離子化(MALDI)和電噴霧離子化(E SI)顯得尤為有前途。通過串聯質譜技術(MS／MS)和源後衰減基質輔助的激光解吸／離子化(PSD—MAIDI—MS)，人們就可以從質譜分析中獲得肽及蛋白質的結構信息。
⑶ 核酸檢測的方法
核酸檢測主要是鼻拭子或咽拭子法，經由鼻孔或口腔插入取得上呼吸道分泌物標本後送實驗室檢測。核酸檢測主要是指目前對於新型冠狀病毒肺炎的一種確診的實驗手段，核酸檢測一般分為鼻拭子、咽拭子或者肺泡灌洗液以及痰液，通過呼吸道的標本，我們在實驗室里可以檢測2019新型冠狀病毒的核酸，從而作為臨床診斷的一個重要的依據。那臨床上目前最常採用的檢測方法是鼻拭子或者是咽拭子，操作的時候由醫護人員採用特製的長柄取樣的棉簽，經由鼻孔或者經由口腔插入到鼻腔及咽腔中，在咽喉壁或者鼻腔的粘膜上進行塗抹，取得上呼吸道分泌物標本，這個標本取出之後再送到實驗室進行相關的核酸檢測。在做的過程中患者不用緊張，可能會有一些輕微的不適例如惡心，相信配合好醫護人員的話，能夠很快完成這個檢查，不會給您帶來很大的影響。
⑷ 檢測核酸純度方法
最近重新研讀了分子克隆第三版，有一個有趣的小發現，好像過去沒聽人說過。一般測核酸濃度都是用260nm的光吸收值來決定，同時用260/280的比值來判斷有無蛋白質污染。理想的比值是1.8~2.0左右。分子克隆第三版專門提到這種判斷核酸純度的辦法是不可靠的。原因在於蛋白質在260nm的消光系數比核酸小很多，即使有相當多的蛋白質污染，這個比值還是接近於理想的比值。另外，260/280比值尤其不能用於評判寡聚核甘酸的純度，因為嘌呤的消光系數比嘧啶大好多，寡聚核甘酸嘌呤嘧啶組成很可能不平均，所以很可能出現很純的樣品260/280比值卻比較小的情況。
你所說的『消光系數『，是否就是吸光值的意思？如果你用連續波長測過核酸的吸光度時，就會發現，OD260,恰好是核酸吸光值最大的時候，從200-750,是一條曲線，260時是波峰，而280時，剛好是曲線下降到一半左右時的吸光值。而恰好280又是蛋白質的最佳吸收值。如果純的核酸，那曲線就是標準的，260/280就是1.8-2.0之間，如果混有蛋白質，多肽，酚之類的雜質，那280時的吸收峰就變高了，曲線隨之發生變形，而260時的吸收峰不變。就如你所說的「原因在 於蛋白質在260nm的消光系數比核酸小很多」，因此260的吸收峰幾乎不變。但280時卻不一樣。這時相反，核酸的消化系數比蛋白質小的多，因此，一旦有污染，280上升很快。因此260/280在有污染的情況下就會變小。所以，用260/280的方法，還是比較可靠的。當然更可靠的，就是用200-750的波長，連續掃描。直接觀察核酸的整條曲線，那比光靠260,280兩個吸收值，肯定要准確很多。其實平時在我們檢測時，我們也會檢測230,320,兩個值。至於這兩值的作用，我稍後再說。其實有230,260,280,320,這四個點。基本上也能確定下這條曲線的該一段的形狀了。
A 260 / A 280 的比值，用於評估樣品的純度，因為蛋白的吸收峰是 280 nm。純凈的樣品，比值大於 1.8（DNA）或者 2.0（RNA）。如果比值低於 1.8 或者2.0，表示存在蛋白質或者酚類物質的影響。A 230 表示樣品中存在一些污染物，如碳水化合物，多肽，苯酚等，較純凈的核酸 A 260 / A 230 的比值大於 2.0。A 320 檢測溶液的混濁度和其他干擾因子。純樣品，A 320 一般是 0。（320差不多也就是那條曲線剛下降到0的時候）。所以，當我們檢測260/280後，如果比值在1.8-2.0之間時，我們可以說其純度可以，那OD260的值就有效。否則，OD260的值判為無效。你說的嘌噙與嘧啶的吸光值，確實沒錯。但一般情況下，我們測的都是基因組、tRNA，mRNA、cDNA，所以其CG含量都比較均勻。都適用於這種方法。然而，在測某些CG含量明顯不均勻的情況下，比如人工合成的寡核苷酸、引物，在CG含量過大或者過小的情況下，我們就不能用260/280的方法了。不過一般自已合成的引物，都能保證純度的，買來的引物，或者托公司合成的寡核苷酸，也不需要我們用OD值方法重新測一下。因為產品包裝上寫著多少個OD，序列長度，都非常詳細，純度也是有保證的。
當OD 260/ OD280值=1.8說明所提的DNA質粒的純度比較高，所含的RNA或蛋白質污染很少，當 OD 260/ OD280值>1.8，說明有RNA污染，當OD 260/ OD280值<1.8時,說明所提的DNA中有蛋白質或者是抽提時用的苯酚未除凈，樓主所體的質粒DNA的260/280在2.0左右，說明有一定的RNA污染，在提質粒DNA中，一般是在提完質粒後，加入TE溶液時加入一定量的RNA酶。抽提1.5ml大腸桿菌過夜菌液時，最後加入20ul的TE溶液時加入1.5ul濃度為10mg/ml的RNA酶，一般就可以完全去除質粒中所含的RNA污染
有關RNA的吸光度說明如下：260nm、320nm、230nm、280nm下的吸光度分別代表了核酸、背景（溶液渾濁度)、鹽濃度和蛋白質等有機物的吸光度值。OD260/OD280（R）體現了RNA中的蛋白質等有機物的污染程度，質量較好的RNA的R值應在1.8～2.0之間，當R<1.8時，溶液中的蛋白質等有機物的污染比較明顯；當R>2.2時，說明RNA已經被水解成了單核苷酸。在對核酸進行吸光度檢測時，需要注意稀釋液應使用TEBuffer。
⑸ 核酸檢驗方法
核酸檢測具體流程如下：
1. 核酸提取
使用硅膠柱離心、磁性硅膠顆粒分離方法以及自動化儀器等商品化試劑或設備並按說明書操作。提取RNA時應注意防止RNA降解。DNA應置於-20℃保存，RNA和需長期保存的DNA應置於-80℃保存。
2. 逆轉錄合成cDNA
逆轉錄cDNA合成反應需使用逆轉錄引物、dNTPs、逆轉錄酶、RNA酶抑制劑、DTT、緩沖液和適量無RNA/DNA酶的超純水以及RNA模板。在擴增儀或水浴箱中，在規定的溫度和時間下進行逆轉錄反應。建議使用商品化RT-PCR一步法試劑進行第一輪擴增反應。逆轉錄cDNA合成反應需使用逆轉錄引物、dNTPs、逆轉錄酶、RNA酶抑制劑、DTT、緩沖液和適量無RNA/DNA酶的超純水以及RNA模板。在擴增儀或水浴箱中，在規定的溫度和時間下進行逆轉錄反應。使用商品化RT-PCR一步法試劑進行第一輪擴增反應。
3. PCR擴增反應（使用二次擴增的套式PCR擴增方法）
PCR反應需使用引物、dNTPs、DNA聚合酶（如Taq酶等）、緩沖液、和適量無RNA/DNA酶超純水、以及模板（DNA或cDNA）。在擴增儀中，按照設定的程序進行擴增。使用二次擴增的套式PCR擴增方法。
4. 擴增產物定性分析
擴增產物常用分析方法是瓊脂糖凝膠電泳法，與分子量標准比較，判斷擴增片段是否在預期的分子量范圍內。其它擴增產物分析方法還有限制性內切酶酶切分析、特異性探針雜交分析以及DNA序列分析等。自動化核酸擴增儀使用酶聯比色分析或熒光探針雜交等原理測定。
5.結果判定和完成報告單
（1）實驗成立的條件：每一次檢測需同時做兩個陽性對照、兩個陰性對照，只有陽性對照擴增出預期的片段、陰性對照沒有擴增出任何片段、雙份平行樣品結果一致的情況下實驗才成立，可以作出核酸陽性或陰性反應結果的判定。
（2）HIV核酸檢測陽性：發現核酸陽性反應，應該重復採集樣品進行復測，復測結果呈核酸陽性反應則判定為核酸陽性，復測結果為核酸陰性反應則判為不確定結果，需進一步隨訪檢測。
（3）HIV核酸檢測陰性：只可報告本次實驗結果陰性。
（4）應在完成檢測後5個工作日內發出檢測報告。
⑹ 在基因操作實踐中有哪些檢測核酸和蛋白質相對分子量的方法
最簡單的就是電泳，核酸通過瓊脂糖、聚丙烯醯胺凝膠電泳，蛋白質通過SDS-PAGE
⑺ 核酸含量的測定方法及原理都有哪些
核酸檢測的主要原理其實是反轉錄和聚合酶鏈式擴增反應。也叫做RT-PCR。目前對新型冠狀病毒進行的核酸檢測也主要採用此種方式。簡單來說就是採取患者鼻咽拭子、痰和其他下呼吸道分泌物、血液、糞便，檢測人員通過。核酸提取試劑盒提取患者標本里邊兒的核酸，然後把提取到的核酸放進檢測試劑中進行復制擴增。然後再根據檢測結果進行判斷如果是陰性代表沒有感染，如果是陽性代表有感染。目前對新型冠狀病毒核酸檢測會存在假陰性的可能，所以可以選擇多次測量。如果連續兩次核酸檢測為陰性，同時沒有臨床症狀可以排除感染，並且對已經感染了新型冠狀病毒肺炎的患者，如果連續兩次檢測核酸為陰性，注意間隔時間必須大於一天，同時臨床症狀緩解，影像學好轉也可以解除隔離。
⑻ 核酸蛋白檢測儀步驟
核酸蛋白檢測儀使用並不難，那麼核酸蛋白檢測儀步驟是什麼呢？
在儀器使用前，首先連接好所需配套儀器：層析柱、恆流泵、自動部分收集器、記錄儀(色譜工作站)。將各類插頭與插座接妥(220v電源)。按下檢測儀on電源開關，電源指示燈亮，說明整台儀器電源開始工作，然後觀察光源指示燈，如果亮了，表示光源已開始工作，整台儀器可進入工作狀態，將檢測儀波長旋鈕旋到所需波長刻度上，把量程旋鈕撥到100%t檔(儀器預熱20分鍾，待基線平直後可加樣測試)。
接通記錄儀電源開關，使電源開關撥到「通」指示燈亮。可根據記錄儀說明書調換不同的紙速度，用戶根據需要自行掌握，測量用10mv檔。此時記錄儀指針從零點開始向右移動某一刻度，調節檢測儀「光量」旋鈕使指針停腔穗豎留在記錄儀大約中間位置5mv左右數字顯示為50左右。
把檢測分析儀器進樣口聚乙烯塑料管接到恆流泵上，使凝膠層析柱中緩沖液流過檢測儀(恆伍大流泵流量視凝膠層析柱大小選1-3ml/min)。用「調零」調整吸光度a值為0(量程開關撥到100%t調節光量旋族攜鈕，使記錄儀指針在10mv數字顯示為100，即透光率為100%。把量程開關撥到「0.0」檔，緩慢調節a調零旋鈕，使記錄儀指示在「o」位，檢測儀顯示為「o」)。以上步驟結束，析系統平衡後即可用洗脫液開始洗脫樣品，洗脫前再調一次吸光度0點。
⑼ 核酸檢測的方式有幾種
核酸定量常用方法如下：
1、光吸收法：核酸中鹼基共軛結構在近紫外光波長260納米處有最大吸收，吸收強度與核酸濃度成正比，因此可以用於核酸定量。
2、定P法：核酸中P含量約為0.095，因此可以通過測定樣品中的有機P量來進行核酸定量。核酸簡介：核酸是由許多核苷酸聚合成的生物大分子化合物，為生命的最基本物質之一。核酸廣泛存在於所有動植物細胞、微生物體內，生物體內的核酸常與蛋白質結合形成核蛋白。不同的核酸，其化學組成、核苷酸排列順序等不同。根據化學組成不同，核酸可分為核糖核酸和脫氧核糖核酸。DNA是儲存、復制和傳遞遺傳信息的主要物質基礎。RNA在蛋白質合成過程中起著重要作用，其中轉運核糖核酸，簡稱tRNA，起著攜帶和轉移活化氨基酸的作用；信使核糖核酸，簡稱mRNA，是合成蛋白質的模板；核糖體的核糖核酸，簡稱rRNA，是細胞合成蛋白質的主要場所。
⑽ 核酸含量測定的方法和原理都有哪些
① 光吸收法：核酸中鹼基共軛結構在近紫外光波長260nm處有最大吸收，吸收強度與核酸濃度成正比,因此可以用於核酸定量。
② 定P法：核酸中P含量約為9.5%，因此可以通過測定樣品中的有機P量來進行核酸定量。
③ 核糖含量測定法：包括RNA的地衣酚法及DNA的二苯胺法。
④ 定量PCR法：定量PCR技術是指以外參或內參為標准，通過對PCR終產物的分析或PCR過程的監測，進行PCR起始模板量的定量。
⑤ 核酸雜交半定量法：通過探針與核酸在膜上雜交顯色，與標准品顯色進行比較從而進行半定量。