蛋白酶活性檢測方法

㈠ 怎樣檢測蛋白酶活性

在適宜條件下(溫度,pH),加入蛋清,若消失則有活性.

㈡ 測定鹼性蛋白酶活有哪些方法

鹼性蛋白酶酶活力檢測方法

酶活力是指酶催化某些化學反應的能力。酶活力的大小可以用在一定條件下它所催化的某一化學反應的速度來表示。測定酶活力實際就是測定被酶所催化的化學反應的速度。酶促反應的速度可以用單位時間內反應底物的減少量或產物的增加量來表示，為了靈敏起見，通常是測定單位時間內產物的生成量。由於酶促反應速度可隨時間的推移而逐漸降低其增加值，所以，為了正確測得酶活力，就必須測定酶促反應的初速度。

鹼性蛋白酶酶活測定原理 福林法原理

鹼性蛋白酶在鹼性條件下，可以催化酪蛋白水解生成酪氨酸。酪氨酸為含有酚羥基的氨基酸，可與福林試劑（Folin)（磷鎢酸與磷鉬酸的混合物）發生福林酚反應。（福林酚反應：福林試劑在鹼性條件下極其不穩定，容易定量地被酚類化合物還原，生成鎢藍和鉬藍的混合物，而呈現出不同深淺的藍色。）利用比色法即可測定酪氨酸的生成量，用鹼性蛋白酶在單位時間內水解酪蛋白產生的酪氨酸的量來表示酶活力，以此計算其酶活力。

酶活力測定實驗步驟

酶液制備：精確稱取干酶粉1g（±0.001），加入10mL緩沖液（2.2.5），在小燒杯中溶解，並用玻璃棒攪拌，靜置片刻後，將上層液小心傾入容量瓶中，沉渣部分再加入少量緩沖液，如此反復攪拌溶解4次，最後全部移入100mL容量瓶中。用緩沖液定容至刻度，充分搖勻，用四層紗布過濾。吸取濾液5mL，移入100mL容量瓶中，用蒸餾水稀釋至刻度，所得液位稀釋2000倍的酶液。（稀釋倍數具體要看待測酶樣品的酶活）

酶活定義

鹼性蛋白酶活力單位的定義：1克鹼性蛋白酶粉在pH10，40℃的條件下，每分鍾水解酪蛋白能產生1微克酪氨酸，定為一個酶活力單位。

酶活力測定注意事項

1、酶反應的溫度、pH和時間對被水解的肽鍵數量有直接的影響，因此必須嚴格控制。

2、用三氯醋酸終止反應後，過濾反應混合物所得的濾液必須是澄清的。

3、因為Folin試劑對酸性環境比較敏感，容易發生變化，因此在測定時有順序的規定，需要先加入碳酸鈉溶液形成一個鹼性環境，之後再加入Folin試劑，使其能正常發揮作用

㈢ 化學屏障測定血液蛋白酶含量

化學屏障測定血液蛋白酶含量的方法是：
1. 將血液樣本加入混合液中，混合液中含有一定量的蛋白酶底物；
2. 將混合液加入蔽族旁到一定量的化學屏障溶液穗悶中，宏橡屏障溶液中含有一定量的抑制劑；
3. 把混合液加入到一定量的檢測液中，檢測液中含有一定量的指示劑；
4. 測量混合液中指示劑的濃度，以此來估算血液樣本中蛋白酶的含量。化學屏障測定血液蛋白酶含量的方法是：
1. 將血液樣本加入混合液中，混合液中含有一定量的蛋白酶底物；
2. 將混合液加入到一定量的化學屏障溶液中，屏障溶液中含有一定量的抑制劑；
3. 把混合液加入到一定量的檢測液中，檢測液中含有一定量的指示劑；
4. 測量混合液中指示劑的濃度，以此來估算血液樣本中蛋白酶的含量。

㈣ 怎樣測定蛋白酶活力

先做個底物的標准曲線，然後底物加酶測吸光度，最後從標准曲線上找出對應的點，經過計算就能得到酶活值。

㈤ 怎樣檢測蛋白酶活性

在適宜條件下(溫度,pH),加入蛋山拿清,若消失則有鋒爛活性.786-028 786-320 是一些測逗基搭量蛋白酶活性的試劑盒

㈥ 蛋白酶活性測定

由於以蛋白激酶作為靶點的一系列葯物的成功開發，各個試劑公司競相開發相關的激酶檢測方法和試劑盒，用於篩選和優化新的化合物作為新葯候選者。其中以蛋白激酶的生化檢測方法最為繁多，表3給出了一些常用檢測方法、激酶抑制劑篩選試劑服務以及檢測設備提供商。

蛋白激酶的生化檢測侍團褲方法有2種不同的分類：

按照檢測目標分類或者按照檢測的方法學進行分類。

按照檢測目標，可以分為檢測ATP的消耗量、檢測ADP的生成量、檢老簡測多肽底物以及檢測激酶本身；

而按照檢測的方法學分類，則有同位素標記分析法、質譜、核磁共振、反相高效液相色譜、毛細管電泳、生化檢測方法等諸多手段。

雖然上述方法早已經見諸報道並被廣泛應用，然而，現在最經常使用的還是放射性同或謹位素標記ATP，熒游標記(包括熒光偏振熒光共軛能量轉移時間分辨熒光以及化學發光等)檢測方法。這些方法均以微孔板作為載體，具有試劑消耗量低，檢測速度快，通量高的優點，成為較普遍應用的一些蛋白激酶檢測方法。