凝血因子檢測方法學

1. 醫學檢驗，APTT、T T、PT、分別是用什麼檢測的

APTT是活化部分凝血活酶時間；主要是檢測身體血液中內源性凝血因子是否缺乏。

T T是血漿凝血酶時間；指受檢血漿中加入「標准化」的凝血酶後，血漿纖維蛋白原轉化成纖維蛋白所需的時間。

PT是血漿凝血酶原時間；通過檢測PT可以反映外源性凝血系統功能。

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APTT時間延長主要見於血友病、DIC、肝病、大量輸入庫存血等；APTT縮短主要見於DIC、血栓前狀態及血栓性疾病；APTT可作為肝素治療的監護指標。

T T延長見於低或無纖維蛋白原血症和異常纖維蛋白原血症、DIC、血中有肝素和類肝素物質存在。

PT延長主要見於先天性凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ減少及纖維蛋白原缺乏、獲得性凝血因子缺乏；PT縮短主要見於先天性凝血因子V增多、DIC早期、血栓性疾病、口服避孕葯等；監測PT可作為臨床口服抗凝葯物的監護。

這幾項屬於凝血功能測定，可以在術前了解患者有無凝血功能的異常，有效防止在術中及術後出現出血不止等意外情況，從而獲得最佳的手術效果。

2. 凝血檢驗的知識

凝血檢驗的知識

你知道應該如何檢驗凝血嗎?你知道凝血檢驗的技巧嗎?下面是我為大家帶來的關於凝血檢驗的知識，歡迎閱讀。

(一)PT和/或APTT延長

1. 了解患者有否家族出血史、個人出血史、肝病史、病人服葯情況(醫療史)。病人如有瘀點、紫癜、黏膜出血多提示血管或血小板異常;若為關節出血、胃腸道出血常提示單個因子缺乏。若病史陽性，必須請檢驗科做混合試驗等項目以便進一步查明原因。

2. 若家族出血史、個人出血史、肝病史、病人服葯情況(醫療史)等均陰性，第一步就是重新採集標本。因為標本凝固，或放置時間太長，或從用肝素的靜脈采血均可影響凝血試驗結果。若重新採集標本不影響結果，應進一步做混合試驗。

(二)凝血酶時間(TT)延長 TT延長，除以上兩點外，還應注意以下幾點：

1. 注意纖維蛋白原結果：因纖維蛋白原水平高或低，或有異常纖維蛋白原均可直接導致凝血酶時間延長，所以需做纖維蛋白原定量試驗。

2. FDP/fdp測定：血液中出現纖維蛋白原/纖維蛋白降解產物(FDP/fdp)。因FDP/fdp具有凝血酶抑制物樣作用，使TT延長，所以需做FDP/fdp半定量試驗。

3. 排除肝素：若標本為肝素污染，或病人體內存在肝素，凝血酶試驗結果異常。用硫酸魚精蛋白中和肝素後，再做TT將正常。

問：什麼是混合試驗

混合試驗是將病人血漿和正常人血漿做50:50混合進一步試驗。混合血漿試驗有助於鑒別PT與APTT結果異常的原因。

1. 若50:50混合試驗糾正了異常結果，說明病人多數為因子缺乏，應進一步檢測是哪個因子缺乏。但也不能排除出現低濃度抑制物。

2. 若50:50混合試驗不能糾正或僅部分糾正APTT結果，可能出現抑制物。若抑制物為抗體，通常是輸血、葯物、或某些疾病所致，有時無明顯原因。在大多數病例中，這些抗體只抗單個因子。

問：衛生部[2000]412號文件規定，停止使用出血時間測定項目的Duke法，必要時可使用出血時間測定器法檢測出血時間(BT)。請對後者進行介紹。

出血時間測定器法檢測BT是用一次性的出血時間測定器在前臂皮膚造成一“標准”創口(成人切口通常長5mm，深1mm)，記錄出血自然停止所需的時間即為BT。該法為有創性檢查，不作為手術前的常規，僅在懷疑有毛細血管和血小板方面的疾病，需用此項目進行鑒別診斷時才考慮進行。

BT的臨床意義：

1. 出血時間延長：血小板數量異常如血小板減少症;血小板質量缺陷如先天性和獲得性血小板病和血小板無力症等;某些凝血因子缺乏，如血管性血友病(vWD)、低(無)纖維蛋白原和彌散性血管內凝血(DIC)等;血管疾病，如遺傳性出血性毛細血管擴張症、單純性紫癜、過敏性紫癜等。阿斯匹林、非類固醇抗炎葯及其它抗血小板葯物、抗菌素如青莓素和頭孢類葯物等也可使BT延長。

2. 出血時間縮短：見於某些嚴重的高凝狀態和血栓形成。

3. 凝血四項包括哪些檢查項目

凝血四項包括凝血酶原時間（PT）、活化部滑顫握分凝血活酶時間（APTT）、凝血酶時間（TT）、纖維蛋白原（Fbg）

1、血漿凝血酶原時間（PT）

是血檢前狀態、DIC及肝病診斷的重要指標，作為外源性凝血系統的過篩試驗，也是臨床口服抗凝治療劑量控制的重要手段。

2、凝血酶時間（TT）

肝素或類肝素物質增多、AT-Ⅲ活性增高、纖維蛋白原量和質異常

3、部分活化凝血活酶時間（APTT）

反映血漿中凝血因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ、Ⅻ洞銷水平，是內源性凝血系統的篩選試驗。常用APTT對肝素抗凝治療進行監控。

4、血漿纖維蛋白原（Fib）

增高：燒傷、糖尿病、急性感染、急性肺結核、癌腫、亞急性細菌信慶性心內膜炎、妊娠、肺炎、膽囊炎、心包炎、敗血症、腎病綜合症、尿毒症、急性心肌梗塞後。

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其他縮寫：

1、谷丙轉氨酶/丙氨酸氨基轉移酶SGPT/ALT（0-40U/L）

2、總膽紅質素（T-BIL：0～18.8umol/l）

3、血清白蛋白（ALB：35.0～55.0G/L）

4、鹼性磷酸酶（ALP）

5、γ-谷氨醯基轉移酶（GGT）

6、膽固醇（CHO）

7、甘油三脂（TG）

8、HB——血紅蛋白（Hemoglobin，HB）

9、SOS——臨時備用醫囑

10、AD——阿爾茨海默症（Alzheimer disease）

11、LV——亞葉酸鈣（Leucovorin Folinate，LV）

12、cp——腦性癱瘓（cerebral palsy）

4. 第八因子的測定法

根據中華人民共和國葯典三部 附錄X N 人凝血因子VIII測定法（一期法）
本法系用人凝血因子VIII缺乏血漿為基質血漿，採用一期法測定供試品人凝血因子VIII效價。
試劑
⑴3.8%枸櫞酸鈉9.5g，加水溶解並稀釋至250ml。
⑵咪唑緩沖液（pH7.3）取咪唑0.68g和氯化鈉1.17g，加水使溶解成100ml，加入0.1mol/L鹽酸溶液42.2ml，再加水稀釋至200ml，即得。
⑶稀釋液 取一體積的3.8%的枸櫞酸鈉加入5體積咪唑緩沖液混合，加適量20%人血白蛋白至終濃度為1%
⑷激活的部分凝血活酶（APTT）試劑
⑸人凝血因子VIII缺乏血漿 為人凝血因子VIII含量低於1%的人血漿或人工基質血漿
⑹0.05mol/L氯化鈣溶液 取氯化鈣（CaCl2·2H2O）147g，加水溶解並稀釋至1000ml，配製成1mol/L的氯化鈣貯存液，用前用水稀釋20倍，配製成0.05mol/L氯化鈣溶液。
標准液的制備
用人凝血因子VIII缺乏血漿將標准品稀釋成每1ml含1IU凝血因子VIII，再用稀釋液分別進行10倍、20倍、40倍和80倍稀釋，置冰浴待用。
供試品溶液的制備
用人凝血因子Ⅷ 缺乏血漿將標枝皮准品稀釋成每1ml含1IU凝血因子Ⅷ，再用稀釋伍猛液進行10倍和20倍或40倍稀釋，置冰浴待用。 取激活的部分凝血活酶試劑0.1ml，置37℃水浴保溫一定時間（一般4min），加入凝血因子Ⅷ缺乏血漿0.1ml、供試品溶液0.1ml，混勻，置37℃水浴保溫一定時間（一般5min），加已預熱至37℃ 0.05mol/L氯化鈣溶液0.1ml，記錄凝固時間。
用不同稀釋度的人凝血因子Ⅷ標准猛橘差溶液0.1ml替代供試品溶液，同法操作。
將標准溶液人凝血因子Ⅷ效價（IU/ml）的對數對其相應的凝固時間（秒）的對數進行直線回歸處理，求出直線回歸方程。計算供試品溶液人凝血因子Ⅷ效價，再乘以稀釋倍數，即為供試品人凝血因子Ⅷ效價（IU/ml）。

5. 血液凝固分析儀檢測原理有哪些

不同類型的血凝儀採用的原理也不同，目前主要採用的檢測方法有：凝固法、底物顯色法、免疫法、乳膠凝集法等。由於在血栓/止血檢驗中最常用的參數，均可用凝固法測量，故目前半自動血凝儀基本上以凝固法測量為主，在全自動血凝儀中，也一定包括凝固法測量方式。
凝固法(生物物理法)
凝固法是通過檢測血漿在凝血激活劑作用下的一系列物理量 (光、電、機械運動等)的變化，再由計算機分析所得數據並將之換算成最終結果，所以也可將其稱作生物物理法。
a.電流法
電流法利用纖維蛋白原無導電性而纖維蛋白具有導電性的特點，將待測樣品作為電路的一部分，根據凝血過程中電路電流的變化來判斷纖維蛋白的形成。但由於電流法的不可靠性及單一性，所以很快被更靈敏、更易擴展的光學法所淘汰。
b. 光學法(比濁法)
光學法血凝儀是根據凝固過程中濁度的變化來測定凝血功能。
根據待驗樣品在凝固過程中光的變化來確定檢測終點的。當向樣品中加入凝血激活劑後，隨著樣品中纖維蛋白凝塊的形成過程，樣品的光強度逐步增加，儀器把這種光學變化描繪成凝固曲線，當樣品完全凝固以後，光的強度不再變化。通常是把凝固的起始點作為 0%，凝固終點作為100%，把50%作為凝固時間。光探測器接收這一光的變化，將其轉化為電信號，經過放大再被傳送到監測器上進行處理，描出凝固曲線。
光學法凝血測試的優點在於靈敏度高、儀器結構簡單、易於自動化 ; 缺點是樣品的光學異常、測試杯的光潔度、加樣中的氣泡等都會成為測量的干擾因素。
c.磁珠法
早期的磁珠法是在檢測杯中放入一粒磁珠，與杯外一根鐵磁金屬桿緊貼呈直線狀，標本凝固後，由於纖維蛋白的形成，使磁珠移位而偏離金屬桿，儀器據此檢測出凝固終點，這類儀器也可稱為平面磁珠法。早期平面磁珠法能有效克服光學法中樣品本底干擾問題，但存在靈敏度低等缺點。
現代磁珠法出現在 20世紀80年代末，90年代初進入商品化。現代磁珠法被稱為雙磁路磁珠法。雙磁路磁珠法的測試原理如下: 測試杯的兩側有一組驅動線圈，它們產生恆定的交變電磁場，使測試杯內特製的去磁小鋼珠保持等幅振盪運動。凝血激活劑加入後，隨著纖維蛋白的產生增多，血漿的粘稠度增加，小鋼珠的運動振幅逐漸減弱，儀器根據另一組測量線圈感應到小鋼珠運動的變化，當運動幅度衰減到50%時確定凝固終點。
底物顯色法(生物化學法)
底物顯色法是通過測定產色底物的吸光度變化來推測所測物質的含量和活性的，該方法又可稱為生物化學法。檢測通道由一個鹵素燈為檢測光源，波長一般為 405nm。探測器與光源呈直線，與比色計相仿。
血凝儀使用產色底物檢測血栓與止血指標的原理是 : 通過人工合成與天然凝血因子有相似的一段氨基酸排列順序、並還有特定作用位點的小肽，並將可水解產色的化學基因與作用位點的氨基酸相連。測定時由於凝血因子具有蛋白水解酶的活性，它不僅能作用於天然蛋白質肽鏈，也能作用於人工合成的肽鏈底物，從而釋放出產色基因，使溶液呈色。產生顏色的深淺與凝血因子活性成比例關系，故可進行精確的定量。目前人工合成的多肽底物有幾十種，而最常用的是對硝基苯胺(PNA)，呈黃色，可用405mm波長進行測定。
免疫學方法
在免疫學方法中以純化的被檢物質為抗原，制備相應的抗體，然後用抗原抗體反應對被檢物進行定性和定量測定。常用方法有 :
a.免疫擴散法。將被檢物與相應抗體在一定介質中結合，測定其沉澱環大小，與標准進行比較，計算待測物濃度。此法操作簡單，不需特殊設備，但耗時過長，靈敏度不高，僅適於含量較高凝血因子檢測。
b.箭電泳。在一定電場中，凝膠支持物內的被檢物與其相應抗體結合形成的一個個「火箭峰」，火箭峰的高度與其含量成正比，通過測定峰高並與標准比較進行定量測定。此法操作復雜，臨床應用較少。
c.雙向免疫電泳。 通過水平與垂直兩個方向進行電泳可將某些分子結構異常的凝血因子進行分離。
d.酶聯免疫吸附試驗(ELISA法)。用酶標抗原或抗體和被檢物進行抗原結合反應，經過洗滌除去未結合的抗原或抗體及標本中的干擾物質，留下固定在管壁的抗原抗體復合物，然後加入酶的底物和色原性物質，反應產生有色物質，用酶標儀進行測定，顏色深淺與被檢物濃度呈比例關系。該法靈敏度高，特異強，目前已用於許多止血、血栓成分檢測。
e.免疫比濁法。 將被檢物與其相應抗體混合形成復合物，從而產生足夠大的沉澱顆粒，通過透射比濁或散射比濁進行測定。此法操作簡便，准確性好，便於自動化。

6. 抗凝血因子活性是什麼意思如何檢測

從醫學上講就是凝血指絕因子抑制物，通俗說猛嘩就是抗體。如果使用了足量的凝血因子止枝逗行血效果不好，就應當做抗體檢測了。檢測的方法挺多的，不用擔心。應當擔心的是後期的抗體治療，方案眾多，效果沒有百分之百的把握，需要選擇對自己有效的方法。