維生素d3檢測方法

㈠ vd3是什麼

VD3是維生素D類，是類固醇衍生物，目前認為它也是一種類類固醇激素。

維生素D是一種脂溶性維生素，陪辯有五種化合物，對健康關系較密切的是維生素D2和維生素D3。它們有以下三點特性：它存在於部分天然食物中；人體皮下儲存有從膽固醇生成的7-脫氫膽固醇，受紫外線的照射後，可轉變為維生素D3。

(1)維生素d3檢測方法擴展閱讀：

維生素D（vitamin D ）為固醇類衍生物，具蘆嫌缺抗佝僂病作用，又稱抗佝僂病維生素。目前認為維生素D也是一種類固醇激素，維者虧生素D家族成員中最重要的成員是VD2（麥角鈣化醇）和VD3（膽鈣化醇)。維生素D均為不同的維生素D原經紫外照射後的衍生物。植物不含維生素D，但維生素D原在動、植物體內都存在。

維生素d（Vd）是環戊烷多氫菲類化合物，可由維生素d原（provitamind）經紫外線270~300nm激活形成。動物皮下7-脫氫膽固醇，酵母細胞中的麥角固醇都是維生素d原，經紫外線激活分別轉化為維生素d3及維生素d2量少，但人工照射者多為此型。

維生素d的最大吸收峰為265nm，比較穩定，溶解於有機溶媒中，光與酸促進異構作用，應儲存在氮氣、無光與無酸的冷環境中，油溶液加抗氧化劑後穩定，水溶液由於有溶解的氧不穩定。雙鍵系統還原也可損失其生物效用。

㈡ 想要補充維生素D3,想請問醫院可以做這方面測試嗎

你好,想要補充維生素D3可以去葯店拿葯吃的,不是處方葯。
醫院也可以測試你是否缺碧宴乏維生宏改素D3的,但是要去三甲醫院檢測。維生素D3滴劑悔絕銀一般每粒含400單位D3.以上是對想要補充維生素D3,想請問醫院可以做這方面測試嗎這個問題的建議,希望對您有幫助,祝您健康!

㈢ 檢查微量元素都查些什麼，包括維生素d3嗎

病情分析：
您好，微量元素檢查不包括維生素，檢宏咐皮查維生素D3需要血清蔽差25-羥維生素D3測定
指導意見：
微量元素檢查項目主要是鋅、鈣簡則、鎂、鐵、銅、鉀、鈉、血清磷、汞、硒等。

㈣ 維生素d檢查之前吃飯喝水嗎

維生素d檢查之前可以吃飯喝水，對檢查結果沒影響，但是不能用食用維生素D3的維生素片等，檢查時要求應放鬆心情，配合醫生做好檢查。
維生素D(vitamin D)是類固醇的衍生物，分為迅此豎維生素D2和維生素D3。檢測維生素D主要通過以下方法測定：
1、血清25-羥維生素D3測定：25-羥維生素D3是維生素D3的主要代謝產物，測定其具有早期診斷的價值。
2、血畝大液生化檢查：其改變比X線影像顯示的骨扒御骼改變早。

㈤ 奶粉中含多少d3怎麼看

40微克。維生素純升殲D2隻存在於植物體內，維生素D3則是動物體內才有，所以補充劑中一般添加的是維生素D3。維生素D2和D3都可以通過陽光中紫外線的做沖照射合成。根據《中國居民膳食營養素參考攝入量（2013年版）》的數據，0~0.5歲、0.5~1歲、1~3歲這3個年齡段的寶寶每日都應該攝入10微克，也就是400IU的維生素D。

不過，維生素D也並非越多越好，3歲以下的寶寶每日最多不可攝入超過20微克或者800IU的維生素D，否則有可能會引笑慧起中毒。

㈥ 血里維生素d3正常含量 43.2ng

指導意見：
建立HPLC法測定血中25-羥基維生素D3的含量,以評價維生素D的營養狀況。方法:血清經無水乙醇沉澱蛋白後,以10%二氯甲烷-正已烷提取,進行HPLC法分析

㈦ 你的維生素D夠了嗎醫生沒告訴你的各種細節，本篇都有了

維生素D（VD）對人體的鈣吸收起著關鍵作用。VD缺乏的時候，吃下去的鈣只能被吸收10%，再怎麼補鈣也可能無濟於事。對現代城市伏案工作學習的人群來說，怎樣才能知道日照是否已經生成了足量的VD？補鈣要補VD，該通過哪些形式補？有什麼需要注意的？本文介紹了人體所需維生素D的來源、作用、如何補充以及血檢結果的解讀，希望幫到各位新手父母和需要補鈣、正在補鈣的你。

撰文|史雋

20世紀初期，研究營養缺乏症的醫生們發現了13種維生素。由於人體自身不能合成維生素，所以，從那時起，科學家們就將晌磨運維生素定義為 必須從飲食中獲取的有機化學物質 ，它們在人身體的新陳代謝中起著至關重要的作用，但僅需少量即可發揮作用。

維生素D(VD)是這13種維生素之一，是一種脂溶性維生素(總共有4種脂溶性維生素：維生素A、D、E、K)。雖然VD確實對 健康 至關重要，而且只需要少量即可，但是嚴格地從定義上講，它不應該算是維生素，因為人體是可以自身合成VD的。相反，大多數天然的食物，除了魚和蛋黃等以外，都不含VD。此外，從食物中獲取的VD，人體也必須先對其進行轉化加工，才能發揮作用。

和其他常見維生素不同，VD不是一種化學物質，而是許多化學結構類似的化學物質的總稱。常見的VD主要包括兩種類型：維生素D2(ergocalciferol)和維生素D3(cholecalciferol)。

圖1：維生素D2和維生素D3的化學結構

維生素D2主要來自真菌(例如在陽光下生長的蘑菇)和一些植物源食物。陽光中的紫外線B(UVB)會促進蘑菇中的麥角固醇(ergosterol)形成維生素D2 [1] 。人工合成維生素D2的過程也比較簡單，將植物甾醇暴露於紫外線中就可以生成維生素D2。由於維生素D2的生產成本較低，所以經常被添加在食品里。

維生素D3僅存在於動物源食物中，如多脂魚（fattyfish，指各部肌肉混合後脂肪含量高於5.0%的魚類）、魚油、肝臟、蛋黃等。人體內天然的維生素D3是由皮膚中普遍存在的7-脫氫膽固醇作為前體合成產生的。陽光是合成反應的關鍵：陽光中的紫外線B將7-脫氫膽固醇轉化為維生素D3的催化劑 [2] 。 沒有陽光中的紫外線B，體內就沒有維生素D3的生成 。人工合成維生素D3的方法於人和動物皮膚中天然產生的方法相似：從膽固醇游慧產生7-脫氫膽固醇，然後紫外線輻射將7-脫氫膽固醇轉化為D3形式。

圖2：紫外線催化維生素D2和D3的化學合成

無論是從食物里攝取的，還是人體自身合成的，維生素D2和D3都要經過人體的進一步代謝才能起作用。

肝臟會將維生素D2代謝為25-羥基維生素D2，將維生素D3代謝為25-羥基維生素D3。這兩種化合物統稱為25-羥基維生素D，也叫骨化二醇(calcifediol)。

25-羥基維生素D是VD的主要循環形式，其血液水平反映了體內VD的儲存量。因此，醫生通常通過測量血液里的25-羥基維生素D水平來估算您體內VD的量是否足夠 [3] 。

盡管25-羥基維生素D被用作檢測指標，但它還需要在腎臟里加上最後的一對氧和氫分子，成為最後的有活性的形式：1,25-二羥基維生素D，也被稱做骨化三醇(Calcitriol)。

圖3：人體內VD的代謝丨作者作圖

VD最主要的作用是增加腸道對鈣的吸收，從宴梁而調節骨骼生長、保持骨骼 健康 。當人體內有足夠的VD時，人體對飲食攝入的鈣能吸收30-40%；如果VD缺乏，就只能吸收10-15％。兒童缺乏VD會導致佝僂病(rickets)；成年人缺乏VD會引起骨軟化症(osteomalacia)和骨質疏鬆症(osteoporosis)。

隨著年齡的增長，很多人(多數是女性，但也有男性)會有患骨質疏鬆症的風險。骨質疏鬆症的特徵是骨骼易碎，如果摔倒可能會骨折。

VD對維持骨骼 健康 有重要的作用，這幾乎是眾所周知的。但這個作用也是最有爭議的——盡管醫生們都同意缺乏VD會增加患骨質疏鬆症和骨折的風險，但他們對服用VD保健品的益處和最佳劑量意見有分歧。

血液中的鈣對神經、肌肉和心臟的功能至關重要，其水平是不能下降的。此時，如果體內鈣總量不足，為了應對血液對鈣的需求，身體會分泌甲狀旁腺激素，從骨骼中調動鈣補充血液里的鈣，維持血鈣水平，以使心臟和神經能夠正常工作。但這樣一來，骨骼就被犧牲了，隨著其中的鈣濃度下降，骨骼就會變得脆弱且容易骨折。

沒有足夠的VD，腸道就無法有效從食物中吸收鈣。大多數研究顯示，缺乏VD會增加骨質疏鬆症的風險以及骨折的可能性。那麼，補充多少VD保健品能降低骨折風險？有些研究只包括女性，另一些包括男性和女性；有些只包括體弱、年長或住院的人，另一些則包括 健康 的人；有些研究只補充VD，其他則同時使用VD和不同劑量的鈣；有的研究每天服用400IU的VD，其他的則每天多達800IU……研究設計五花八門，因此這個問題還沒確定的答案。

VD很重要，但不意味著如果您體內VD水平正常，也需要額外補充。2018年8月發表的一項薈萃分析得出結論：增加普通人群的VD水平不能降低 健康 人群骨折的風險 [4] 。一項對81個研究的薈萃分析發現，補充VD並不能預防骨折或跌倒或改善骨骼礦物質密度 [5] 。對於一些確認體內VD不足的人，額外補充會有 健康 益處。

有越來越多的證據表明，VD在許多其他方面對人體也很重要。人體的許多組織，例如前列腺、腸道、心臟、血管、肌肉和內分泌腺等，都會表達VD的受體(能與VD結合的蛋白質)。一些正在進行中的研究表明，當VD與這些受體結合時，可能產生有益的作用：肌肉需要它才能收縮，神經需要它在大腦和身體各部位之間傳遞信息，免疫系統需要它來抵抗入侵的細菌和病毒 [6] 。

對任何疾病的任何一組患者進行采樣，他們體內的VD含量幾乎都會低於 健康 個體。很多人據此推測，VD含量低會導致這種疾病——但其實並沒有證據證明。生病時，人的外出活動少，食慾不振，這些都會降低體內VD的水平。因此， 我們無法斷定VD的水平低是導致疾病的原因，還是生病造成的後果。

一些相關性研究表明，VD可能可以預防結腸癌 [7] ，甚至可能預防前列腺癌和乳腺癌 [8] 。但是，血液中較高的VD水平也與胰腺癌的高發病率有關 [9] 。這些研究不能確切地證明缺乏VD會導致疾病，也沒有證明服用VD保健品可以降低患這些疾病的風險。目前，要斷定低VD狀態是否會增加患癌症的風險，以及高水平VD是否會保護或者增加某些人的風險，還為時過早。

簡單來說，是否需要補充VD的原則是： 不缺 不用補，缺了才需要補充到正常水平。

如何獲得VD？

簡單的答案：陽光、食物或保健品。

VD也被稱作「陽光維生素」，因為它的合成需要紫外線/陽光做催化劑。影響體內VD水平的最大的因素是光照。

如果您大部分時間都在室內活動，常年防曬或居住在日照缺乏的地區，就很有可能缺乏足夠的光照促進自身合成所需的VD。

小知識點

在室內透過窗戶暴露在陽光下，皮膚不會產生VD。這是因為，玻璃雖然對可見光是透明的，但幾乎能夠吸收所有的紫外線B。紫外線B是可能導致曬傷的射線，因此，透過玻璃不會被曬傷。

但是，紫外線A(UVA)比紫外線B更接近可見光譜，約75％的紫外線A能夠透過普通玻璃。紫外線A會導致皮膚損傷和基因突變。後者可能導致皮膚癌。因此玻璃不能防護陽光引起的皮膚損傷。

有個研究發現，印度南部的蒂魯伯蒂人（北緯13.40°東經77.2°），每周曬兩次半小時的正午太陽，所產生的VD的量就足夠人體所需 [10] 。陽光催化的自身皮膚內合成的VD也不會過量：如果身體所需的量夠了，自身合成就會減少。

但是，在距赤道較遠的國家/地區，因為日照不夠強，可能需要更多時間才能達到相同的結果。然而，也需要注意不要長時間在沒有防曬霜的條件下接受日照。這點對膚色較淺的人尤其重要，因為過多紫外線引起的曬傷是引起皮膚癌的主要危險因素 [11] 。

知識點：防曬霜的使用

曬太陽和塗防曬霜是一個需要權衡利弊的選擇。

陽光包含兩種形式的射線：紫外線A(UVA)和紫外線B(UVB)。UVB是皮膚合成VD所需的能量。

UVA的波長更長，穿透皮膚較深，與皮膚老化有關(例如皺紋的產生)。UVB的波長較短，穿透皮膚較淺，與皮膚灼傷有關(例如皮膚曬紅)。盡管UVA和UVB射線對皮膚的影響方式不同，它們都會破壞皮膚細胞的DNA，引起基因突變，從而可能導致皮膚癌以及過早衰老。這些射線還會損傷眼睛，導致白內障和眼瞼癌等。

適當的光照對身體有好處，過量的紫外線輻射對身體有害。

為了保護自己，應該盡量避免夏季的日照，尤其是上午10點至下午2點之間。夏季大艷陽天出門的時候，要麼盡可能戴大帽檐的帽子，穿深色的長袖襯衫和長褲；要麼就應該塗抹防曬霜。

防曬霜的SPF至少應該要有15；皮膚白的人應該選擇SPF30以上的。但是，有一點要注意，SPF僅適用於UVB，挑選防曬霜的時候應該選一種也可以防止UVA的「廣譜」防曬霜。最重要的是，應該盡早塗防曬霜，並且經常補塗。

需要的光照時間還受很多其他因素的影響，例如季節、一天中的不同時間、所處地區的緯度/海拔、空氣污染程度、皮膚色素沉著、防曬霜的使用、玻璃和塑料對紫外的穿透能力及其老化程度等等，都會影響人們所需的光照時間。（詳見：紫外線的危害：知己知彼，方能立於不「黑」之地丨展卷）。舉個例子，生活在北緯37°以北或南緯37°以南的人們，除了在夏季短短的幾個月內，一年中其它季節都無法從太陽獲得足夠的UVB來產生人體所需的所有VD。另外，皮膚色素沉著可以導致皮膚中VD的產量減少90％以上，因此膚色深的人群很容易缺乏VD。

VD也可以從飲食中攝入。VD含量高的食物來源包括多脂魚(例如三文魚)、魚油、蛋黃、黃油和肝臟。

然而，VD含量高的食物資源不多，單純從飲食中獲取足夠的量不太容易。一個蛋黃只含有大約20IU(InternationalUnits,國際單位)的VD。必須吃大約10克的鮭魚、200克的大比目魚、850克的鱈魚或將近兩個230克的金槍魚罐頭才能得到400IU的VD。

除此以外，一些加工食品，例如酸奶和橙汁等，會額外添加VD(D2或者D3)。

如果檢測發現體內VD的水平確實比較低，而又無法通過生活方式的改變來改善，那麼還可以服用VD保健品來補充。

市面上的VD保健品既有維生素D2，也有維生素D3，它們的區別是很大的。

雖然維生素D2和D3被統稱為VD，但是它們對提高人體內VD水平的能力不完全相同。在攝入量相等的情況下，維生素D3比維生素D2更能有效地升高血液中骨化二醇的水平中 [12,13] 。

一項針對32位老年女性的研究發現，同等單劑量(300,000IU)的維生素D3提升骨化二醇水平的功效幾乎是維生素D2的兩倍 [14] 。

還有研究發現，粉末形式的維生素D2對溫度和濕度的波動更敏感 [15] ，因此已發現不同品牌的維生素D2的含量與瓶子上標注的含量可能有很大的差別。但是，這個研究看的只是粉末形式的維生素D2，目前還不清楚溶解在油裡面的維生素D2是否也會不穩定。

所以，如果需要額外補充VD，應該考慮選擇維生素D3。由於VD是脂溶性的，VD的保健品最好與含有脂肪的食物一起服用。

1997年以前，美國建議所有成年人每天VD的攝入量是200IU。隨著越來越多的美國人被發現缺乏VD，現在建議51至70歲的人每天攝入量增加到400IU，70歲以上的人增加到600IU。這是因為隨著年齡的增長（尤其是絕經後的女性），人們合成VD和吸收鈣的效率降低。現在有許多權威機構建議每天攝入800-1000IUVD。

母乳喂養的嬰兒尤其需要注意補充VD ，因為母乳裡面含有的VD的量比較低。嬰兒出生後每天需要400IU的VD，直到他們喝添加了VD的配方奶或牛奶。

2010年11月，美國醫學會的專家委員會設定了新的VD「飲食參考攝入量」。

這個攝入量基於一個假設條件：這個人完全沒有通過日照自身合成VD，並且攝入了足夠的鈣 。美國醫學會建議從飲食或保健品中獲取的VD見表格1(注意，上限攝入量是美國醫學會的專家們認為最高安全量；1mcg=1µg=1微克):

表1：美國醫學會推薦的VD參考攝入量丨作者作圖

那麼VD是不是越多越好呢？

絕對不是，任何好東西都有過量的風險。

過多的VD會引起異常高的血鈣水平，導致惡心、便秘、食慾不振、精神錯亂、心律不齊甚至腎結石。

像其他脂溶性維生素一樣，VD存儲在人體的脂肪中。每日攝入量總會有波動，當某些天攝入過量的時候，多餘的量可以被存儲起來；當某幾天攝入量不足時，身體就可以動用自己的儲備。但這也意味著，持續攝入過量的VD，身體的存儲可能會積累到毒性水平。在這些極端情況下，過量的VD會升高血液中的鈣水平，從而引起嗜血、便秘甚至死亡。但是這種極端情況在超大量攝入的情況下才會發生。目前每天劑量≤2,000IU被認為是安全的。

另外一種情況是，身材瘦小的人(例如嬰兒和兒童)體內的脂肪量較少，那麼VD的存儲空間也較少。如果服用了大劑量的VD，過量的就會進入血液，導致鈣吸收過多，以致中毒。目前尚不清楚超過VD攝入量的上限多久後會有危險。

VD的毒性幾乎總是由保健品的過量使用而造成的。過度的陽光照射不會造成VD過量，因為人體自身合成會有精密的調控，量足夠了就不再繼續了。

國內很多VD是以魚肝油的形式補充的，主要成分是維生素A(VA)+VD。補充VA對VA缺乏的孩子有幫助。但是，大多數 健康 ，營養豐富的孩子不需要額外補充，還很容易攝入過量。例如，在美國，一項對全國3,000多個兒童進行的隨機抽樣調查發現，服用復合維生素的2歲以內的兒童，有97%攝入的VA過量。即使在不服用保健品的幼兒中，也有15％的人攝入了過多的VA [16] 。

圖4：常見的「魚肝油」

VA過量會有很嚴重的後果：虛弱，頭痛，惡心，皮膚乾燥和其他症狀。長期服用過量的維生素A會引起關節疼痛和骨骼脫鈣，導致骨質疏鬆 [17] 。

因此，如果不是VA缺乏，要補充VD應該選擇單一成分的保健品，而不是選擇這種復合形式的。

怎麼知道自己到底缺不缺VD呢？上面講到可以通過檢測血液里的25-羥基VD來衡量看體內VD的水平。

測試本身不是問題，問題在於如何解釋結果。很多專家認為，還缺乏高質量研究的數據來系統地確認到底哪個臨界值顯示VD缺乏。

1)盡管標准不盡相同，但大多數專家都認為，血液里的25-羥基VD的水平低於12ng/mL(毫微克/毫升)或是30nmol/L反映了VD明顯不足。（1nmol/L=0.4ng/mL）
2)美國醫學會認為如果在12-20ng/mL(30-50nmol/L)之間，有些人可能有VD缺乏的傾向。沒有證據表明血液里的濃度高於30ng/mL(75nmol/L)會有更多的益處，而濃度高於50ng/mL(125nmol/L)可能反而會引起不好的問題。
3)美國國立衛生研究院認為血液里25-羥基VD的水平持續超過200ng/mL(500nmol/L)就會有「潛在毒性」。

表2：各路專家對VD含量危害性的看法丨作者作圖

根據這個指標，有些人缺乏VD，幾乎沒有人的VD量過高。一般而言，年輕人的血液中25-羥基VD的水平高於老年人，男性的水平高於女性。
可能缺乏VD的人群包括：

1)母乳喂養的嬰兒。

2)老年人，因為他們的皮膚在陽光照射下不能像年輕時一樣有效地產生VD，而且腎臟也不能很好地將VD轉化為活性形式。

3)膚色較黑的人，因為他們的皮膚從陽光中產生VD的能力較低。

4)患有克羅恩氏病或乳糜瀉等疾病的患者無法正常代謝脂肪，而VD需要通過脂肪被吸收。

5)肥胖的人，因為他們的體內脂肪會與VD結合，阻止其進入血液循環。

類固醇葯物如潑尼松(prednisone)會干擾VD的代謝。如果定期服用類固醇葯物，需要與醫生討論VD。

減肥葯orlistat(商標名稱包括Xenical和Alli)可能會影響VD的吸收。降膽固醇葯cholestyramine（商標名稱包括Questran、LoCholest和Prevalite）也是如此。服用這些葯物的人應與醫生討論VD的攝入量。

治癲癇葯物苯巴比妥(Phenobarbital)和地蘭汀（Dilantin，phenytoin）會影響VD的代謝並影響鈣的吸收。結核葯也是如此。

另一方面，降膽固醇的他汀類葯物和噻嗪類利尿劑會增加VD的水平。

以前，只要曬成「 健康 」的棕褐色，身體就會自然生產人體所需的所有VD。然而，現代人常在室內辦公，為防皮膚癌使用防曬霜，這個傳統經驗已經不再對所有人適用了。如今保證攝入足量VD的方案是：吃魚、雞蛋，喝添加了VD的牛奶和果汁，服用適當劑量的VD保健品。

關於到底什麼人需要補充VD和應該補充多少的辯論仍在繼續，但波士頓哈佛醫學院附屬的BrighamandWomen』sHospital的研究人員正在進行一項期待已久的隨機試驗（名為VIital），他們使用了25,000名成年人作為試驗對象，旨在研究補充VD和歐米茄-3脂肪酸對癌症、中風和心臟病的影響。結果可能會在今年年底公布。

參考文獻

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17.M.Rutkowski,K.Grzegorczyk,.,105-121(2012).

㈧ 液相色譜怎麼判斷維生素d3的保留時間

保留時間的概念是從樣品進入儀器中，到出峰的時間。若你的樣品只有維生素D3，那麼就很好判斷了，儀器會直接出來數據，像保留時間，峰高，峰面積之類的。若你的樣品還含有其他物質，你就需要查文獻，這種常見物質的出峰時間文獻上都有，你再對照你的結果就可以知道了。

㈨ 飼料中維生素D3測定為什麼要乘以1.25

1.25是迴流皂化時生成維生素D3原的校正因子
其他：標准維生素D3結晶純品與試樣同樣皂化處理滑穗後，所得標准橘肢溶液注入高效液相色譜分析柱以維信伍卜生素D3峰面積計算時可不乘1.25

㈩ 食品中維生素d 測定

簡要描述： 高效液相色譜法 1. 原理 樣品中脂溶性維生素在皂化過程中與脂肪分離，以石油醚萃取後，用正相色譜柱提取富集，用反相色譜柱，紫外檢測器定量測定。 2. 適用范圍 ...高效液相色譜法
1. 原理
樣品中脂溶性維生素在皂化過程中與脂肪分離，以石油醚萃取後，用正相色譜柱提取富集，用反相色譜柱，紫外檢測器定量測定。
2. 適用范圍
本方法來源於GB/T 5413.9-1997。適用於嬰幼兒配方食品和乳粉維生素A、維生素D、維生素E的測定；也適用於食品或強經食品及飼料中的維生素D含量的測定。
3. 主要儀器
1) 高壓液相色譜儀，具有可變波長的紫外檢測器，數據處理系統或記錄儀。
2) 旋轉蒸發器。
3) 平底燒瓶：250mL。
4) 分液漏斗：500mL。
4. 試劑
所有試劑，如未註明規格，均指分析純，所實驗用水均指蒸餾水。
1) 異丙醇：色譜純。
2) 2％焦性沒食子酸乙醇溶液：取2g焦性沒食子酸溶液於100mL無水乙醇中。
3) 75％氫氧化鉀溶液：取75g氫氧化鉀溶於100mL水中。
4) 石油醚：沸程30～60℃。
5) 甲醇：色譜純。
6) 正己烷：色譜純。
7) 環己烷:色譜醇。
8) 維生素D標准溶液
A. 維生素D2標准貯備液：含維生素D2100mg/ml的甲醇溶液。稱取10mg的維生素D2，用甲醇定容於100mL容量瓶中。
B. 維生素D3的標准貯備液：含維生素D3100mg/ml的甲醇溶液。稱取10mg的維生素D3，用甲醇定容於100mL容量瓶中。
5. 操作步驟
5.1樣品處理：准確稱取10g樣品，於250mL平底燒瓶中，加30mL蒸餾水。
5.2測定液的制備：
1) 於上述樣品溶液中加入100mL的20％沒食子酸乙醇溶液，充分混勻後加50mL75％氫氧化鉀溶液，在蒸汽浴上邊續迴流30min後，立刻冷卻到室溫。
2) 將皂化液轉入一500mL分液漏斗中，用100mL水分幾次沖平底燒瓶。洗滌液並入分液漏斗中。
3) 於上述分液漏斗中，加入100mL石油醚，蓋好瓶塞，倒置分液漏斗並劇烈振搖1 min.在振搖過程中，注意釋放瓶內壓力。靜置分層，將水相放入另一500mL分液漏斗中，重復上棕萃取過程2次，合並醚液到第一個分液漏斗中。用蒸餾水洗該醚液至中性，通過無水硫酸鈉過濾乾燥，在40℃和氮氣流下，於旋轉蒸發器上蒸至近於（絕不允許蒸干）後，用石油醚轉移至10mL容量瓶中，定容。
4) 從上述容量瓶中取7mL放入一試管中，用氮氣將石油醚吹乾，於試管中加1mL正己烷。
5.3測定：
1) 測定液的制備：
A) 儀器條件：
色譜柱：30cm×40cm，硅膠柱。
流動相：正己烷與環己烷按體積比1：1混合，並按體積分數0.8％加入異丙醇。
流速：1mL/min。
波長：265nm。
柱溫：20℃。
靈敏度：0.005AU/MV。
注射體積：200mL。
B) 注射50mL維生素D標樣和200mL樣品溶液，根據維生素D標樣保留時間收集維生素D於試管中，將試管用氮氣吹乾，准確加入0.2mL甲醇溶解。
2) 測定步驟：
A) 儀器條件：
色譜柱：4.6mm×25cm，C18或具同等性能的色譜柱。
流動相：甲醇。
流速：1mL/min。
波長：265nm。
柱溫：20℃。
靈敏度：0.005AU/MV。
注射體積：50mL。
B) 注射50mL維生素D標准溶液，注射50mL樣品溶液，得到標樣和樣品溶液中維生素D峰面積或峰高。
6. 計算
ρs×10∕7×40×100
X =
m
As
ρs= ---×ρsd
Asd
式中： X--樣品維生素D的量，mg/100g；
m--稱樣量，含量，IU∕100g；
ρs --進樣液中維生素D有濃度，mg/mL；
A s --進樣液中維生素D有峰高（或峰面積）；
A s d --標樣液中維生素D有峰高（或峰面積）；
ρsd --標樣中維生素D的濃度；
計算結果精確至小數點後一位。
7. 注意事項
1) 允許誤差及最小檢出量：同一樣品的2次測定值之差不得超過2次測定平均值的10％；最小檢出量為0.1國標單位。
2) 試劑焦性沒食子酸容易變性，應購習近期生產的試劑。
3) 如果皂化不完全，可適當增加氫氧化鉀的加入量。