多糖檢測方法RID

① 靈芝多糖含量測定的方法

靈芝粗多糖是靈芝孢子最主要的有效成分。以粗多糖的檢測方法為例進行說明。 靈芝粗多糖的檢測方法如下：
1）試劑：
濃硫酸；無水乙醇；5％苯酚溶液；80％乙醇溶液
2）樣品處理
取樣品2.0g於200ml容量瓶中，加入約150ml水，沸水浴提取40min，取出，放冷，用水定容，搖勻後過濾，取濾液10ml，加入40ml無水乙醇，3000轉/分離心5min，棄去上清液，殘渣用80％乙醇洗滌，離心（重復此過程2次），用水溶解殘渣，定容為20ml。此液即為樣品處理液。
3）標准曲線
取0.2mg/ml葡萄糖標准溶液0.0, 0.10, 0.20, 0.30, 0.40, 0.50ml，用水定容為1.0ml，加入0.5ml苯酚溶液，10ml濃硫酸，混勻，放置至室溫，於L= 1ml，波長＝485nm測定吸收光度，繪制標准曲線。
4）樣品測定
取樣品處理液0.5ml於具塞比色杯中，以下同標准曲線操作。測定吸光度。
5）計算
C×200×20/10/0.5
X (mg/g) = ————————
M x 1000
式中：X：為樣品粗多糖含量(mg/g)
C：為從標准曲線上查出的含量（μg）
M：為取樣量（g）

② 北京生泰爾黃芪多糖粉檢測方法

1. 將樣品亂悄進行粉碎，老陪拆放入水中浸泡，用棉球把粉末擠出，用篩子過濾，得到懸浮侍棗液。
2. 使用高效液相色譜儀，設定波長為215nm，進行色譜檢測，計算檢測結果的總多糖含量。
3. 使用毛細管電泳儀，按照濃度梯度，以澱粉為參比，進行多糖組成分析，得到各種多糖的含量。

③ 多糖的定性與定量

鑒定多糖（參考資料）：
1.苯酚-硫酸法 需要多糖的純品和特定的酶
2.蒽酮-硫酸法 多糖在濃硫酸水合產生的高溫下迅速水解，產生單糖，單糖在強酸條件下與苯酚反應生成橙色衍生物。在波長490nm左右處和一定濃度范圍內，該衍生物的吸收值與單糖濃度呈線性關系，從而可用比色法測定其含量，所用的單糖對照品盡量採用與其多糖組成一致或為含量較高的單糖，這樣測得的值較准確。
3.3，5-二硝基水楊酸比色法（DNS法） 在鹼性條件下顯色，較准確測定還原糖與總糖的含量從而求出多糖的含量，可消除還原性雜質的干擾。

多糖的分離純化
在多糖提取物中，常會有無機鹽、蛋白質、色素及小分子物質等雜質，必須分別除去．一般是先脫除非多糖組分，再對多糖組分進行分級．
2．1 除蛋白：除蛋白質時一般選擇能使蛋白質沉澱而不使多糖沉澱的試劑來處理，如酚、三氯乙酸、鞣酸等。但必須處理時間短，溫度低，避免多糖降解。Sevage法（氯仿：戊醇/丁醇=4：1）和三氟三氯乙烷法在避免降解上有較好效果但要達到除盡游離蛋白質的目的仍需反復處理。如能加入蛋白質水解酶，使蛋白質大分子進行一定程度的降解，再用Sevage法處理，一般效果更好。
為了避免使用有機溶劑也可採用反復凍融的方法除蛋白，將多糖液濃縮後，一20℃室溫反復凍融7～8次，離心除去蛋白質。另外，蛋白質在等電點時溶解度最小，用氫氧化鈣飽和液調pH10～pH11可除去偏鹼性的蛋白質，然後再用硫酸調pH5～pH6，可除去偏酸性的蛋白質。凍融和等電點沉澱除蛋白質操作簡單，但多糖液里往往有低濃度的蛋白質殘留，應與其它方法結合使用。
2．2 脫色：植物多糖提取物中含有酚類化合物而使其顏色較深，可用吸附劑(纖維素、硅藻土、活性炭等)、離子交換柱(DEAE一纖維素)、氧化劑(H2O2)等脫除。活性炭比表面積大，吸附能力強，在進行當歸多糖的提取時只向多糖液中加入了0．1％左右的活性炭，煮沸後濾過即完成了脫色操作。此法成本低廉，適合工業化生產。
2．3 除小分子雜質
小分子雜質如低聚寡糖的殘留往往影響多糖的生物活性，需要進一步脫除，提高純度。傳統的方法是透析法，該法操作簡單、技術成熟，但周期長，往往需要2一3天，常溫下操作有可能造成多糖的霉變，必要時需加入少量防腐劑或需在低溫條件下進行。隨著膜分離技術的發展，纖維濾器透析法已經發展起來了，它利用不同孔徑的膜使大小不同的分子分級，這種方式可縮短生產周期，而且條件溫和，無疑是多糖脫除雜質的一條新途徑。
2．4 多糖的分級純化
採用一般方法提取的多糖通常是多糖的混合物，分級的方法可達到純化的目的．可按溶解性不同進行分級、按分子大小和形狀分級(如分級沉澱、超濾、分子篩、層析等)，也可按分子所帶基團的性質分級．
2．4．1按溶解性不同分離
2.4.1.1分步沉澱法
分步沉澱法是根據不同多糖在不同濃度低級醇、酮中具有不同溶解度的性質，從小到大按比例加入甲醇或乙醇或丙酮進行分步沉澱．
2.4.1.2 鹽析法
鹽析法是根據不同多糖在不同鹽濃度中溶解度不同而將其分離的一種方法。常用的鹽析劑有氯化鈉、氯化鉀、硫酸銨等，其中以硫酸銨最佳。
2.4.2 按電離性質不同分離
2.4.2.1季胺鹽沉澱法
季胺氫氧化物是一類乳化劑，能與酸性多糖形成不溶性化合物季銨絡合物，此絡合物在低離子強度的水溶液中不溶解而產生沉澱。若提高多糖液pH值或加入硼砂緩沖液，也可使中性多糖沉澱分離。常用季銨鹽有十六烷基三甲基季銨鹽的溴化物及其氫氧化物和十六烷基吡啶。
2．4．3 柱層析法
2.4.3.1凝膠柱層析法
凝膠柱層析法常用的凝膠有葡聚糖凝膠(Sephadex)和瓊脂糖凝膠(Sepharose)，以不同濃度的鹽溶液和緩沖溶液作為洗脫劑，從而使不同大小的多糖分子得到分離純化，但不適宜粘多糖的分離。
2.4.3.2纖維素陰離子交換劑柱層析法
纖維素陰離子交換劑柱層析法常用的交換劑為DEAE一纖維素和ECTEOLA一纖維素，分類硼砂型和鹼型兩種，洗脫劑可用不同濃度鹼溶液、硼砂溶液、鹽溶液，其優點可吸附雜質、純化多糖，並適用於分離各種酸性、中性多糖和粘多糖。如百合多糖、北沙參多糖、太子參多糖等。
2.4.3.3 活性炭柱層析法
活性炭吸附量大、效率高，是分離水溶性物質的常用吸附劑。柱層析時活性炭中常拌入等量的硅藻土作稀釋劑，以增加溶液的流速。糖溶液上柱後先用水洗脫無機鹽、單糖等再依次增加乙醇濃度進行洗脫。
2.4.3.4 離子交換柱層析和普通凝膠柱層析聯用法
有些植物的多糖成分復雜， 除中性多糖外，還含有糖醛酸等，因此往往兩種不同性質的色譜柱聯用才能得到單一多糖組分。
2.4.3.5 三種層析柱聯用
採用離子交換葡聚糖凝膠柱、丙烯葡聚糖凝膠柱和葡聚糖凝膠柱三者聯用，即先進行DEAE—SephadexA柱層析，用蒸餾水洗脫。水洗組分進一步用SephacrylS柱層析，得到主要組分再用SephadexG一100柱層析，有時會有較高的得率。
三、多糖的純度鑒定
經過分級純化的多糖在測定結構前須進行純度鑒定．而且多糖的純度不能用通常化合物的純度標准來衡量，因為即便是多糖純品，其微觀也並不均一，僅代表相似鏈長的多糖分子的平均分布，通常所謂的多糖純品也只是一定相對分子質量范圍的多糖的均一組分．目前常用於多糖純度的鑒定方法有：高效液相、 凝膠層析法、電泳法、色譜法、旋光度法等．

多糖的單糖組分的鑒定稱取多糖粗品8 mg，用2 mL濃度為1 mol／L硫酸100*C水解6 h。飽和Ba(OH)2中和至中性，抽濾，取濾液，濃縮，毛細管點樣，薄層層析法分析。採用硅膠G板105"(2活化2 h後使用。標准糖分別為D一半乳糖，D一葡萄糖，D一甘露糖，L一山梨糖、L一阿拉伯糖。展開劑為正丁醇一冰醋酸一水(4：1：5)(體積比)。用AgNO3一NaOH 溶液顯色。
是否可以解決您的問題？

④ 多糖純度鑒定方法有哪些

答案要點:多喊吵糖水解後進行
(1)薄層色譜法和紙色譜法鑒別;
(2)濾紙電泳、玻鄭升侍璃纖維電泳、醋酸纖維薄膜電泳和凝膠電泳等電泳方法;
(3)HPLC法鑒別;
(4)氣相色譜—質譜聯用笑宴等。

⑤ 鑒定多糖的方法

Molisch反應（α- 萘酚反應） 此方法是鑒定糖類最常用的顏色反應。它的原理是：糖類在濃酸作用下所形成的糠醛及其衍生物可以與α- 萘酚作用，形成紅紫色復合物。由於在糖溶液與濃硫酸兩液面間出現紅紫色的環，因此又稱紫環反應。α- 萘酚也可用麝香草酚或其他的苯酚化合物代替，麝香草酚溶液比較穩定，其靈敏度與α- 萘酚一樣。除了糖類之外，各種糠醛衍生物、葡萄糖醛酸、丙酮、甲酸、乳酸等都可以呈現近似的陽性反應。因此，陰性反應證明沒有糖類物質的存在；而陽性反應只能說明有糖類存在的可能。 此反應不能鑒別多聚糖如澱粉，纖維素等。 贊同0| 評論

⑥ 多糖及單糖的測定方法

苯酚-硫酸法需要多糖的純品和特定的酶。

蒽酮-硫酸法 多糖在濃硫酸水合產生的高溫下迅速水解，產生單糖，單糖在強酸條件下與苯酚反應生成橙色衍生物。

在波長490nm左右處和一定濃度范圍內，該衍生物的吸收值與單糖濃度呈線性關系，從而可用比色法測定其含量，所用的單糖對照品盡量採用與其多糖組成一致或為含量較高的單糖，這樣測得的值較准確。

(6)多糖檢測方法RID擴展閱讀：

由一種類型的單糖組成的有葡萄糖、甘露聚糖、半乳聚糖等，由二種以上的單糖組成的雜多糖（hetero polysaccharide）有氨基糖的葡糖胺葡聚糖等，在化學結構上實屬多種多樣。就分子量而論，有從0.5萬個分子組成的到超過106個的多糖。

比10個少的短鏈的稱為寡糖。不過，就糖鏈而論即使是寡糖，在寡糖上結合了蛋白質和脂類的，就整個分子而論，如果是屬於高分子。

則從廣義上來看也屬於多糖，因此特稱為復合多糖 （conjugated polysaccharide，complex poly－saccharide）或復合糖質（glycoconjugate）（糖蛋白、糖脂類、蛋白多糖）。

⑦ 大家是如何測定多糖的

季宇彬.《中葯多糖的化學與葯理》.
北京:人民衛生出版社.2005.5多糖含量測定(1)顯色試劑硫酸法:根據單糖、多糖及其衍生物在硫酸作用下水解、脫水生成糖醛類化合物，與酚類、芳胺類等縮合成有色化合物。苯酚硫酸法生成橙黃色溶液，在490nm處有特徵吸收;蒽酮硫酸法生成亮綠色溶液，在630nm處有特徵吸收;咔哇硫酸法用於測定糠醛酸(伯醇基氧化:形成糠醛酸，譽塵拆斐林(Fehling)試劑可定量。苯酚-硫酸試劑可與游離的寡糖、多糖中的己糖、糠醛酸起顯色反應，己糖在490nm處(戊糖及糠醛酸在480nm處)有最大吸收，吸收值與糖含量呈線性關系)。顯色試劑硫兄答酸法方便簡單，但需嚴格控制水解條件。(2)DNS法:一個能消除還原性雜質干擾的方法(在氫氧化鈉和丙三醇的存在下，還原糖能使DNS還原生成3-氨基-5-硝基水楊酸，在沸水浴中顯色2~5min，此化合物在過量的氫氧化鈉鹼性溶液中呈橘紅色，波長在540nm下有最大吸收峰，並且吸光度與還原糖含量有線性關系。試驗過程中諸多因素如吸收慶棗光譜、顯色劑用量、顯色時間等均對測定結果有直接影響)。利用3,5-二硝基水楊酸與多糖水解產物還原糖共熱後還原成棕紅色氨基化合物，於540nm處有特徵吸收。(主要參考文獻:董文慧,等.雲芝肝泰中雲芝多糖的工業分析方法.中成葯,1990,12(2):33.齊香君,等.3,5-二硝基水楊酸比色法測定溶液中還原糖的研究.
纖維素科學與技術.2004,12(3):17~19)(3)滴定法:有斐林氏滴定法，間接碘量滴定法。(4)氣相色譜法:可定性、定量分析多糖的組分及含量，常採用衍生物法以增加其揮發性。一般是將多糖酸水解物或甲醇解(用鹽酸-甲醇)物，用三甲基硅烷基化(TMS)或三氟乙醯化(TFA)轉化為硅烷化產物或二醯化產物進行氣相色譜分析。但乙醯化之前，糖先用KBO4或NaBH4作還原成開鏈的糖醇化合物較好。多糖用甲醇解方式把半縮醛甲基化，形成甲基糖苷後再TMS化，異構物減少，有利於分辨。常以甘露醇或肌醇為內標，用已知的各種單糖作標准。(5)高效液相色譜法:選用TSK、SW凝膠排斥色譜柱為分離柱，樣品經簡單預處理，在示差折光檢測器中進行檢測，以不同分子量的標准右旋糖酐作標准，同時測定樣品中多糖的分子量分布情況及其含量。換算因子F的測定參見附件還陽參多糖的定性分析及含量測定.pdf|||常見的方法有:GPC測定多糖分子量及其分布瓊脂糖電泳法HPLC方法測定多糖。不同的方法會有些差異。

⑧ 多糖包括哪些種類，它們用什麼試劑來測定

多糖主要有澱粉，纖維素，糖原

1、澱粉的鑒定：最簡單的方法是加碘液後變藍
澱粉具有遇並沒碘變藍的特性，這是由澱粉本身的結構特點決定的。澱粉是白色無定形的粉末，通常由10％～30％的直鏈澱粉和70％～90％的支鏈澱粉組成。溶於水的直鏈澱粉藉助分子內的氫鍵捲曲成螺旋狀。如果加入游蠢碘酒，碘酒中的碘分子便嵌入到螺旋結構的空隙處，並且藉助范得華力與直鏈澱粉聯系在一起，形成了一種分子量較大的絡合物，這種絡合物能夠比較均勻地吸收除了藍光以外的其他可見光，因此使澱粉呈現出藍色來。

2、纖維素鑒定：纖維素（cellulose）為β－葡萄糖殘基組成的多糖，在酸性條件下加熱能分解成β－葡萄糖。β－葡萄糖在強酸作用下，可脫水生成β－糠醛類化合物。β－糠醛類化合物與蒽酮脫水縮合，生成黃色的糠醛衍生物。顏色的深淺可間接定量測定纖維素含量。

3、糖原的鑒定：（1）濃H2SO4使糖原脫水生成糠醛衍生物，後者再和蒽酮作用形成藍色化神蔽陪合物
（2）糖原水溶液遇碘呈紅棕色，所以也可用碘液鑒定

⑨ 多糖類的分析方法

下面將簡單介紹化學方法和物理分析方法。⑴化學方法測定多糖結構還是目前最常用的方法，測定的手段很多，其中經典而有效的是甲基化分析、高碘酸氧化和Smith降解、部分酸水解以及乙醯解和甲醇解等。① 乙醯解：多糖的乙醯解反應是在由乙酸酐、乙酸和硫酸組成的混合液中加熱進行的，在一定的糖苷鍵處裂解。研究表明，相同糖苷鍵在酸水解和乙醯解中的速度是不同的。乙醯解是酸水解的一種有用的補充，多糖可從這兩種不同的方法中獲得不同的片段，從不同的角度獲得多糖的結構信息。甲醇解：多糖在80-100℃條件下與無水甲醇氯化氫反應能將多糖變成組成單糖的甲基糖苷，這些甲基糖苷能轉化為三甲基硅醚衍生物或乙醯基衍生物，然後進行GC分析並與標准單糖對照，可得到組成多糖的各單糖的定量數據。⑵物理分析法 ①IR法：IR在多糖結構分析上主要是確定吡喃糖的苷鍵構型，以及常規觀察其他官能團。一般主要觀察730-960cm-1的范圍，如對於α-吡喃糖，δC1-H在 845 cm-1，而β-吡喃糖，δC1-H在890cm-1有最大吸收峰。②MS、GC-MS：GC分析多糖雖受樣品揮發性和熱穩定性的限制，但GC-MS是多糖結構分析不可缺少的工具，特別是對水解單糖、甲基化單糖及甲基化寡糖的分析，而且能鑒別出糖的異構體。MS在多糖結構分析中不僅在鑒別各種甲基衍生物的碎片，確定各種單糖殘基的連接位置時必不可少，而且由於FAB-MS、ESI-MS和 MALDI-MS等技術的出現，利用質譜還可以測定多糖的分子量及一級結構。③NMR：用NMR技術研究多糖結構的一個特點是不破壞樣品，對多糖的結構特徵可通過化學位移、偶合常數、積分面積、NOE及馳豫時間等參數來表達。一維、二維圖譜 NMR在分析糖的構型、相互連接的位置及順序等方面具有廣闊的應用前景。2、分子量及分子量分布多糖具有分子大小不均一的特點，近年來發現這些生物大分子的某一分子量范圍成分具有葯理活性，而另一分子量范圍的成分不具有葯理活性或具有一定的毒副作用，因此分子量及其分布既是這類葯物的有效性控制的指標又是安全性控制的指標，質量標准中制訂該項檢查十分必要，這也是近年來大分子聚合物葯物質量標准發展的一個明顯的特點。多糖分子量只是代表相似鏈長的平均配布，不同方法所測得的分子量不同，即使是同一多糖，其重均分子量與數均分子量也相差較大，通常採用凝膠色譜法控制這類葯物的分子量及其分布，應經研究選用與供試品分子大小相適應的色譜柱填充劑；使用的流動相通常為水或緩沖液，其pH值不應超過填充劑的耐受范圍，可加入適量的有機溶劑，但濃度不應超過30%，流速以 0.5-1.0ml/min為宜，因這類分子多無紫外吸收，一般採用示差折光檢測器，選用對照品的分子量范圍及顆粒形狀應與供試品匹配，測定數據經適宜的GPC軟體處理求得相關參數。3、含量測定一般來講，多糖不含蛋白和氨基酸，蛋白或氨基酸檢測應呈陰性或符合限度檢查要求，如為糖蛋白或糖肽，應提供其證據，以保證產品不是多糖與蛋白的混合物；並提供其氨基酸構成及蛋白含量范圍，以保證質量穩定可控。對從天然植物中得到的多糖，在結構研究中尤其對糖組成分析，確定其中是否含有糖醛酸殘基具有很重要的意義。糖醛酸的含量測定目前較常用的是硫酸咔唑法，但容易受中性糖殘基的干擾。為了消除測定的干擾，可先測定樣品中中性糖的吸收度，然後從樣品的吸收度減去中性糖的吸收度，即為樣品中糖醛酸的吸收度值。間羥基聯苯法也是一種常用的多糖中糖醛酸含量測定方法，該法較硫酸咔唑法受中性糖殘基的干擾更小。多糖的含量測定可分為兩大類：一類是直接測定多糖本身，如高效液相色譜法和酶法；另一類是利用組成多糖的單糖縮合反應而建立的方法，如苯酚-硫酸法、蒽酮-硫酸法等。前者需要多糖的純品和特定的酶，後者測定時方法學干擾較大，現有的比色重現性差，受影響因素多。但由於目前國內的實驗條件，多糖的含量仍然主要採用這種方法，其原理為：多糖在濃硫酸水合產生的高溫下迅速水解，產生單糖，單糖在強酸條件下與苯酚反應生成橙色衍生物。在波長490nm左右處和一定濃度范圍內，該衍生物的吸收值與單糖濃度呈線性關系，從而可用比色法測定其含量，所用的單糖對照品盡量採用與其多糖組成一致或為含量較高的單糖，這樣測得的值較准確。需要強調的是，這種方法所測定的是總糖的含量而不是總多糖的含量，因此首先應測定樣品中游離的單糖含量，然後將總糖的含量減去游離單糖的含量，即為總多糖的含量。另外還可以採用3，5-二硝基水楊酸比色法（DNS法），它是在鹼性條件下顯色，較准確測定還原糖與總糖的含量從而求出多糖的含量，可消除還原性雜質的干擾。