液相維生素檢測方法

㈠ 水果中維生素c含量的測定方法有幾種

水果中維生素c含量的測定方法有三種，分別為原子吸收分光光度法、紫外可見分光光度法、高效液相色譜法。

1、原子吸收分光光度法
利用原子吸收分光光度法問接測定維生素C的含量，是利用維生素C可以與一些金屬離子發生氧化還原反應，通過測定反應掉的金屬離子的量，進而間接計算出維生素c的含量。

2、紫外-可見分光光度法

利用紫外-可見分光光度法測定維生素C的含量是基於維生素c在紫外光區有特徵吸收，但是因為維生素C結構中具有不飽和鍵，具有還原性，不易穩定存在，直接測定誤差較大。所以在利用紫外分光光度法測定時，維生素標准溶液和待測樣的配製條件非常重要。

3、高效液相色譜法

高效液相色譜法是以液體為流動相，採用高壓輸液系統，將維生素C的溶劑裝有固定相的色譜柱，在柱內各成分被分離後，進入檢測器進行檢測，從而測量出維生素c的含量。

(1)液相維生素檢測方法擴展閱讀

維生素c含量的測定方法對比：

由於維生素C自身的不穩定，導致了很多方法測定結果誤差較大，所以對維生素C穩定存在條件的探索非常重要。高效液相色譜法因為測定較准確、靈敏度高、選擇性好，有較好的發展前景，是目前發展較快的一種方法。

㈡ 維生素K1的測定方法

方法名稱： 維生素K1的測定—高效液相色譜法
應用范圍： 本方法採用高效液相色譜法測定維生素K1的含量。
本方法適用維生素K1。
方法原理： 供試品和內標均製成流動相溶液，進入高效液相色譜儀進行色譜分離，用紫外吸收檢測器，於波長254nm處檢測維生素K1（C31H46O2）和內標鄰苯二甲酸二甲酯的吸收值，計算出其含量。
試劑： 1.石油醚
2. 正己烷
儀器設備： 1. 儀器
1.1 高效液相色譜儀
1.2 色譜柱
硅膠為填充劑，維生素K1的順、反式異構體之間及順式異構體峰與內標物質峰的分離度應符合要求。
1.3 紫外吸收檢測器
2. 色譜條件
2.1 流動相：正己烷+石油醚=2.5 2000
2.2 檢測波長：254nm
2.3 柱溫：室溫
試樣制備： 1. 稱取供試品
取本品20mg，精密稱定，置50mL量瓶中。
2. 對照品溶液的制備
精密稱取維生素K1對照品適量，與供試品同法配製。
3. 內標溶液的制備
取苯甲酸膽甾酯37.5mg，置25mL量瓶中，加流動相溶解並稀釋至刻度，即得。
4. 供試品溶液的制備
上述供試品加流動相溶解並稀釋至刻度，搖勻，精密量取上述溶液5mL與內標溶液各1mL，置10mL量瓶中，以流動相稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。
註：「精密稱取」系指稱取重量應准確至所取重量的千分之一。「精密量取」系指量取體積的准確度應符合國家標准中對該體積移液管的精度要求。
操作步驟： 分別精密吸取上述供試品溶液與對照品溶液，10μL 注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測器，於波長254nm處測定維生素K1和內標苯甲酸膽甾酯的吸收值，按內標法以峰面積計算，即得。
參考文獻： 中華人民共和國葯典，國家葯典委員會編，化學工業出版社，2005年版，二部，p676。

㈢ 維生素D3有那些方法學可以檢測出來

方法名稱：
維生素D3的測定—高效液相色譜法
應用范圍：
本方法採用高效液相色譜法測定維生素D3的含量。
本方法適芹啟用維生素D3。
方法原理：
供試品和內標均製成甲醇溶液，進入高效液相色譜儀進行色譜分離，用紫外吸收檢測器，於波長254nm處檢測維生素D3（C27H44O）和內標鄰苯二甲酸二甲酯的吸收值，計算出其含量。嫌友如
試劑：
1.異辛烷
2. 正己烷
3. 正戊醇
儀器設備：
1. 儀器
1.1 高效液相色譜儀
1.2 色譜柱
硅膠為填充劑，維生素D2峰與內標物質峰的分離度應符合要求。
1.3 紫外吸收檢測器
2. 色譜條件
2.1 流動相：正己烷+正戊醇= 997 3
2.2 檢測波長：254nm
2.3 柱溫：室溫
試樣制備：
1. 稱取供試品
精密稱取本品25mg，置100mL棕色量瓶中。
2. 對照品溶液的制備
精密稱取維生素D3對照品和維生素D3對照品25mg，置100mL棕色量瓶中，加異辛烷80mL，避免加熱，超告游聲處理1分鍾使完全溶解，並加異辛烷至刻度，搖勻，沖氮密塞，避光，0℃以下保存。
3. 內標溶液的制備
取鄰苯二甲酸二甲酯25mg，置25mL量瓶中，加正己烷溶解並稀釋至刻度，即得。
4. 供試品溶液的制備
上述供試品加三甲基戊烷80mL，避免加熱，用超聲處理1分鍾使溶解，加三甲基戊烷稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。
註：「精密稱取」系指稱取重量應准確至所取重量的千分之一。「精密量取」系指量取體積的准確度應符合國家標准中對該體積移液管的精度要求。
操作步驟：
分別精密吸取上述供試品溶液與對照品溶液，20μL 注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測器，於波長254nm處測定維生素D3和內標鄰苯二甲酸二甲酯的吸收值，按內標法以峰面積計算，即得。

㈣ 高效液相色譜法測定維生素c的含量為什麼用棕色瓶容量瓶

1.滴定法測定維生素C
1.1測定原理
2，6一二氯靛酚法和碘量法是較常見的滴定測定維生素C的方法。還原型抗壞血酸還原染料2，6一二氯靛酚，該染料在酸性中呈紅色，被還原後紅色消失。還原型抗壞血酸還原2，6一二氯靛酚後，本身被氧化成脫氫抗壞血酸。在沒有雜質干擾時，一定量的樣品提取液還原標准2， 6-二氯靛酚的量與樣品中所含維生素C的量成正比。
碘量法的原理：維生素C包括氧化型、還原型和二酮古樂糖酸三種，當用碘滴定維生素C時，所滴定的碘被維生素C還原為碘離子，隨著滴定過程中維生素C全被氧化，所滴入的碘將以碘分子形式出現。碘分子可以使含指示劑（澱粉）的溶液產生藍色，即為滴定終點。
1.2測定操作
2，6一二氯靛酚法：取適量的樣品可食部，加入100 mL 2%草酸溶液，製成勻漿。取同一樣品勻漿10g，加入1%草酸溶液20 mL，搖勻，用濾紙過濾，取5mL過濾液於錐形瓶中，用2，6一二氯靛酚鈉鹽溶液滴定(1 mL≈0.02 mgVitC)，以淡紅色存在30 s內不褪色為滴定終點。記錄2，6-二氯酚靛酚鈉鹽溶液的消耗量，根據結果計算出樣品中維生素C含量(mg/100 g)。
碘量法：將果蔬洗凈，用紗布拭乾其外部所附著的水分，若樣品清潔可以不必洗。樣品可以先縱切為4~8等份，分別稱取20g可是用食部分，置於研缽中加入2% Hcl 15~10ml，研磨至漿狀，移於 100ml 容量瓶中，用2% HCl 加至刻度線處，混勻，過濾，記錄濾液總體積。樣品液的測定: 在50ml 燒杯中，用移液管注入10% KI 溶液0．5ml，0.5% 的澱粉溶液 2ml，樣品液 5ml，蒸餾水 2.5ml，用0.001N KIO3 液滴定，要一滴滴加入，並時時搖動燒杯，至微藍色不褪色為終點( 一分鍾不褪為止) 。記錄所用 KIO3 液毫升數，計算維生素C含量。
1.3測定方法評價
2，6-二氯酚靛酚滴定法具有簡便、快速、比較准確等優點，適用於許多不同類型樣品的分析。缺點是不能直接測定樣品中的脫氫抗壞血酸及結合抗壞血酸的含量，易受其他還原物質的干擾，如果樣品中含有色素類物質，將給滴定終點的觀察造成困難。碘酸鉀滴定法較便宜，使用碘酸鉀滴定法測定蔬菜中維生素C含量較為簡便易行，而2，6一二氯靛酚法相對復雜。總的來說，滴定法操作簡便、快速，無須特殊儀器，但在測定深色樣品時，准確度和精確度欠佳。
2.熒光法測定維生素C
2.1測定原理
Deutsch和Weeks曾經報道過一種檢測維生素C的熒光分析法(OPDA)，並被指定為維生素C的經典熒光分析法。在該方法中，維生素C先被活性炭(Norit)氧化為脫氫抗壞血酸(DHAA)，DHAA再與熒光底物鄰苯二胺(OPDA)結合生成熒光產物，通過對該熒光產物的檢測實現對維生素C的定量分析。孫振艷等[1]提出了一種新的測定維生素C的熒光分析方法。基於維生素C被Cu2+氧化為DHAA，DHAA進一步與苯甲酸及十六烷基三甲基溴化銨產生熒光協同增敏作用，通過對體系熒光強度的測定進行維生素C的定量分析。
2.2測定操作
熒光分析法(OPDA)的測定方法：稱取一定量樣品，研磨後用水浸泡，取清液加入適量1%草酸溶液，振搖約3min，加入0.2g已處理好的活性炭再充分振搖約3min後過濾，濾液加於兩個25mL比色管再加入5.0mL緩沖溶液,，其中一管加入2.0mL硼酸溶液(即空白)搖勻，放置15min後，兩管均加入鄰苯二胺溶液10mL，避光放置30min待測。樣品熒光強度減去空白熒光強度值即為樣品相對熒光強度值。
孫振艷等的熒光分析法：在25 mL比色管中依次加入0. 6 mL CuSO4溶液，2. 0 mL十六烷基三甲基溴化銨溶液，2. 0 mL苯甲酸溶液，一定體積的維生素C標准溶液，，5. 0 mLNaOH-鄰苯二甲酸氫鉀緩沖溶液，用蒸餾水定容，搖勻。在35℃恆溫水浴中加熱30 min，將溶液流水冷卻至室溫，激發波長為308 nm，在發射波長408nm處，測量熒光強度F，以不含維生素C的試劑空白為F0，計算ΔF=F-F。
2.3測定方法評價
熒光分析法測定維生素C具有操作簡單，精密度高，檢出限低等優點，該法可以應用於水果、蔬菜和葯物中維生素C的檢測，適於推廣。
3.光度分析法測定維生素C
3. 1測定原理
2，4-二硝基苯肼法和鉬藍比色法是常見測定維生素C的一種光度分析法。2，4-二硝基苯肼法的原理是總維生素C包括還原型、脫氫型和二酮古樂糖酸，樣品中還原型抗壞血酸經活性炭氧化為脫氫抗壞血酸，再與2，4-二硝基苯肼作用生成紅色脎，脎的含量與總抗壞血酸含量成正比，進行比色測定。鉬藍比色法是測定果蔬中還原型維生素C含量的一種常用方法，因偏磷酸和鉬酸銨反應生成的磷鉬酸銨經還原型的維生素C還原後生成亮藍色的絡合物，通過分光比色可以測定樣品中還原型維生素C的含量。
3.2測定操作
2，4-二硝基苯肼法：取適量的樣品可食部，加入100 mL 2%草酸溶液，製成勻漿。取勻漿20 g (含1~2 mg抗壞血酸)置入100 mL容量瓶中，用1%草酸溶液定容，混勻後過濾。取25 mL過濾液放入有2 g活性炭的25 mL比色管中，振搖1 min，過濾。然後取10 mL此氧化提取液，加入10 mL 2%硫脲溶液，混勻。按照GB12392-90中呈色反應方法，用分光光度計進行比色，根據結果計算出樣品中抗壞血酸含量。按下式計算樣品中Vc的含量:X=c·Vm×F×1001000。
X—樣品中總抗壞血酸含量，mg/100g；
c—由標准曲線查得或回歸方程算得「樣品氧化液」總抗壞血酸的濃度，μg/mL； V—試樣用1%草酸溶液定容的體積，mL； F—樣品氧化處理過程中稀釋倍數； m—試樣質量，g。
鉬藍比色法：准確稱取 100 g 樣品， 加入草酸－EDTA 溶液， 經搗碎後移入 100 mL 容量瓶，定容，過濾，吸取 2 mL 上清液於 50 mL 容量瓶中，加入 1 mL 的偏磷酸－醋酸溶液，5％的硫酸 2．0 mL，搖勻，加入 4 mL 鉬酸銨，以去離子水定容至 50 mL，20 min 後測定吸光度。
3.3測定方法評價
鉬藍比色法測定果蔬中還原型維生素C含量數據穩定性、准確性較好，是一種快速、准確、靈敏度高的測定方法，而且不受樣液顏色的影響。2，4-二硝基苯肼比色法測定總VitC (還原型和氧化型)，特異性較好，但操作復雜，是我國食品中VitC測定的標准方法，此方法適用於蔬菜、水果及其製品中總抗壞血酸的測定。
4.高效液相色譜法
4.1測定原理
高效液相色譜法是近年來發展起來的一種測定維生素 C 含量的方法，測定維生素 C 含量通常採用 C18柱或 C8柱，由於維生素 C 對紫外光有吸收，故檢測器常用紫外檢測器。
4.2測定操作
稱取維生素C標准樣品0.1000 g.轉移至100 ml容量瓶中，用雙蒸水定容，得到1.0mg·ml-1的維生素C標准溶液。參考Nisperos-Carriedo等的方法。准確稱取果肉1.00 g，用5 ml 0.2%偏磷酸冰浴研磨， 10000 g離心15 min，殘渣加入4 ml 0.2%偏磷酸再提取，合並上清液，定容至10 ml，經0.45μm濾膜過濾後待測。每個樣品重復5次。維生素C在240 nm波長時有最大吸收峰，故以240 nm作為檢測波長。以0.2%偏磷酸為流動相。分別吸取標准溶液1 ml、2 ml、4 ml、6 ml、8m，l各自定容至10 m，l從中分別吸取10.0μl進樣分析，以峰面積(mv)為縱坐標，標樣濃度(mg·ml-1)為橫坐標，繪制標准溶液曲線，計算線性回歸方程的回歸系數和截距。將樣品溶液分別進樣10.0μl進行液相色譜分析，測定維生素C的色譜峰面積，代入標准曲線計算出維生素C含量。
4.3測定方法評價
高效液相色譜法具有高效、快速、穩定、結構准確、操作簡便等特點。該法分離時間短，對結構不穩定的維生素C尤為適合，還特別適用於顏色較深的提取液樣品的測定，成為近年來較受歡迎的維生素C測定方法。缺點是所用儀器較為昂貴。

㈤ 維生素D測定法簡介

目錄

• 1 拼音
• 1.1 第一法
• 1.2 第二法
• 1.3 第三法

1 拼音

wéi shēng sù D cè dìng fǎ

本法系用高效液相色譜法測定維生素D(包括維生素D<[2]>和D<[3]>,下同)及其制劑、維生素AD制劑或魚肝油中所含維生素D及前維生素D經折算成維生素D的總量，以單位表示，每單位相當於維生素D0.025μg。

測定應在半暗室中及避免氧化的情況下進行。

無維生素A醇及其他雜質干擾的供試品可用第一法測定，否則應按第二法處理後測 定；如果按第二法處理後，前維生素D峰仍受雜質干擾，僅有維生素D峰可以分離時，則應按第三法測定。

1.1 第一法

對照品貯備溶液的制備

根據各制劑中所含維生素D的成分,精密稱取相應的維生素D<[2]>或D<[3]>對照品25mg,置100ml棕色量瓶中，加異辛烷80ml，避免加熱，用超聲處理助溶1分鍾使完全溶解，加異辛烷至刻度，搖勻，充氮密塞，避光，0℃以下保存。

測定維生素D<[2]>時，應另取維生素D<[3]>對照品25mg，同法製成維生素D<[3]>對照品貯嘩數備溶液，供系統適用性試驗用。

內標溶液的制備

稱取鄰苯二甲酸二甲酯25mg，置25ml量瓶中，加正己烷至刻度，搖勻。

色譜條件與系統適用性試驗

用硅膠為填充劑，正己烷－正戊醇（997∶3）為流動相，檢測波長為254nm。量取維生素D<[3]>對照品貯備溶液5ml，置具攜轎塞玻璃容器中，通氮後密塞，置90℃水浴中加熱1小時，取出迅速冷卻，加正己烷5ml， 搖勻，置1cm具塞石英吸收池中，在2支8W主波長分別為254和365nm的紫外光燈下， 將石英吸收池斜放成45°,並距燈管5～6cm,照射5分鍾,使溶液中含有前維生素D<[3]>、反式維生素D<[3]>、維生素D<[3]>和速甾醇D<[3]>；取此溶液注入液相色譜儀，測定維生素D<[3]>的峰值，先後進樣5次,相對標准偏差應不大於2.0％；前維生素D<[3]>(與維生素D<[3]>的比保留時間約為0.5)與反式維生素D<[3]>(與維生素D<[3]>的比保留時間約為 0.6)以及維生素D<[3]>與速甾醇D<[3]>(與維生素D<[3]>的比保留時間約為1.1)的峰分離度均應大於1.0。

校正因子測定

精密量取對照品貯備溶液和內標溶液各5ml,置50ml量瓶中，加正己烷至刻度，搖勻；取一定量注入液相色譜儀，計算維生素D的校正因子f<[1]>。

另精密量取對照品貯備溶液5ml置50ml量瓶中，加入2,6－二叔丁基對甲酚結晶1粒,通氮排除空氣後，密塞，置90℃水浴中加熱1．5小時，取出迅速冷卻至室溫，精密加內標溶液5ml，加正己烷至刻度，搖勻；取一定量注入液相色譜儀，計算前維生素D折算成維生素D的校正因子f<[2]>。

f<[2]>＝(A<[s]>·m<[r]>－f<[1]>m<[s]>A<[r1]>)／A<[r2]>·m<[s]>

式中

A<[s]>為內標的峰值；

m<[r]>為加入對照品的量；

f<[1]>為維生素D的校正因子；

m<[s]>為加入內標物質的量；

A<[r1]>為維生素D的峰值；

A<[r2]>為前維生素D的峰值。

含量測定

取各該制劑項下制備的供試品溶液進行測定,按下列公式計算維生素D及前維生素D折算成維生素D的總量。

mi＝(f<[1]>·A<[i1]>＋f<[2]>A<[i2]>)·m<[s]>／A<[s]>

式中

A<[i1]>為維生素D的峰值；

A<[i2]>為前維生素D的峰值；

m<[s]>為加入內標物質的量；

A<[s]>為內標的峰值。

1.2 第二法

精密稱取供試品適量(相當於維生素D總量600單位以上，重量不超過2.0g)，置皂化瓶中，加乙醇30ml、抗壞血酸0.2g與50％(g／g)氫氧化鉀溶液3ml[若供試量為3g，則加50％(g／g)氫氧化鉀溶液4ml]，置水浴上加熱迴流30分鍾，冷卻後，自冷凝管頂端加水10ml沖洗冷凝管內壁，將皂化液移至分液漏斗中，皂化瓶用水60～100ml分數次洗滌,洗液並入分液漏斗中，用不含過氧化物的乙醚振搖提取3次，第一次60ml,以後每次40ml，合並乙醚液亂隱首，用水洗滌數次，每次約100ml，洗滌時應緩緩旋動，避免乳化,直至水層遇酚酞指示液不再顯紅色，靜置，分取乙醚提取液，加入乾燥濾紙條少許振搖除去乙醚提取液中殘留的水分，分液漏斗及濾紙條再用少量乙醚洗滌，洗液與提取液合並，置具塞圓底燒瓶中，在水浴上低溫蒸發至約5ml，再用氮氣流吹乾，迅速精密加入甲醇3ml，密塞，超聲處理助溶後，移入離心管中，離心，取上清液作為供試品溶液A。

凈化用色譜柱系統分離收集維生素D

精密量取上述供試品溶液A 500μl,注入以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的液相色譜柱，以甲醇－乙腈－水(50∶50∶2) 為流動相進行分離，檢測波長為254nm，從計錄儀上觀察色譜圖，要求維生素D與前維生素D為疊 峰，並能與維生素A及其他干擾含量測定的雜質分開；准確收集含有維生素D及前維生素D混合物的全部流出液，置具塞圓底燒瓶中，用氮氣流迅速吹乾,精密加入已知內標濃度的正己烷溶液適量(不少於2ml，並使每1ml中含維生素D為50～140單位,內標物質與維生素D的重量比約為4∶1)，密塞，超聲處理助溶，即為供試品溶液B。

取供試品溶液B，按第一法進行含量測定，進樣量為100～200μl。

1.3 第三法

供試品溶液的制備

取各該制劑項下制備的供試品溶液A,按上述第二法凈化用色譜柱系統分離維生素D項下的方法處理,至「用氮氣流迅速吹乾」後, 加入異辛烷2ml溶解,通氮排除空氣後，密塞，置90℃水浴中，加熱1.5小時後，立即通氮在2分鍾內吹乾，迅速精密加入正己烷2ml，溶解後，即為供試品溶液C。

對照品溶液的制備

精密量取對照品貯備溶液適量,加異辛烷定量稀釋製成每1ml中約含維生素D 50單位，精密量取2ml置具塞圓底燒瓶中，照供試品溶液制備項下的方法,自「通氮排除空氣後」起，依法操作，得對照品溶液。

含量測定

㈥ 維生素檢測用什麼分析儀器比較好

課程詳情介紹

維生素是消費者關注的營養成分之一，也是食品檢測行業的熱門項目。本課程結合維生素的類別、作用、檢測手段的發展歷史等，對目前國際國內各種維生素的測試方法及常用分析儀器進行講解。

本課程除了理論內容，我們還將安排學員進行實際操作練習，了解維生素測試的前處理過程及相關儀器分析技術。此外，我們還將給學員講解維生素測試的影響因素，並對如何消除這些因素、確保數據的准確性進行深入探討。

維生素檢測通常使用液相色譜儀。本課程根據維生素檢測所使用的液相色譜儀，詳細介紹其工作原理、結構特點和儀器維護要點，使學員掌握儀器的故障排查及日常維護方法。同時，講解液相色譜數據採集和處理方法的編輯過程，並安排練習，確保學員可以獨立操作液相色譜完成維生素日常檢測工作。
品質項目包括：

水分、含鹽量、含糖量、蛋白含量、脂肪含量、纖維含量、維生素含量、酸度等。對於這些項目的檢測，如果經費有限，都可以採用化學法分析，只需配製最簡單的烘箱、水浴、電爐、攪拌器、粉碎機、pH計等設備即可。

如果經費充足或檢驗批次較多，對應的檢測項目都有對應的專用儀器可供選購。此外，也有一些通用的儀器可供選購，如：紫外/可見分光光度計、近紅外分析儀、自動滴定儀等。檢測維生素A、E等有時還需配製熒光光度計。檢測營養元素，如，鈣、鋅、鐵等，可購置原子吸收儀-火焰檢測器。

(2)衛生項目包括：

微生物、添加劑、有害元素、農葯殘留、獸葯殘留、毒素等。對於一般食品企業，微生物檢測實驗室應該建。

（a)微生物：

建微生物實驗室要按照生物實驗室規范標准要求進行布局。必要的設備有潔凈台、培養箱、高壓滅菌鍋、電爐等，其它設備則根據具體檢測項目配置。經費少可以買國產的，經費多可以考慮買進口的，兩者的價錢相差很多。

（b)添加劑和有害元素：

有一部分項目可以用化學法，如，亞硝酸鹽、二氧化硫、重金屬含量、總砷等，但要想滿足現在國標的食品衛生要求，應該購置氣相色譜-氫火焰檢測器、液相色譜-紫外/可見光檢測器，這樣一般的防腐劑(苯甲酸、山梨酸等)、甜味劑(甜蜜素、糖精鈉等)、色素(檸檬黃、胭脂紅等)都可以檢測了。購置原子吸收儀-石墨爐檢測器，可以分別檢測鉛、鉻、鎘、銅、鎳等有害元素，還需要一台原子熒光儀，用來檢測砷和汞等。

（c)殘留農葯：

檢測殘留農葯氣相色譜必不可少，檢測有機氯農葯，需配電子俘獲ECD檢測器;檢測有機磷農葯，需配火焰光度FPD檢測器或氮磷NPD檢測器。現在，農殘檢測的項目越來越多，為提高通用性，建議配置毛細管柱分流/不分流進樣口，安裝毛細管色譜柱。與傳統填充色譜柱相比，毛細管柱分析項目多，分離度好，可以減少頻繁的更換色譜柱，提高分析效率。出口食品加工企業生產的產品在出口時需檢測的農殘項目越來越多，為了把好生產原料和產品質量關，可以配置氣相色譜-質譜儀。一般只需配製電子轟擊EI源，如果有必要可再配一個負化學NCI源，是選擇四級質譜還是離子阱質譜，個人認為都可以，兩種儀器各有優缺點。還是要看具體工作。

（d)殘留獸葯：

若進行殘留獸葯的檢測，項目不多且批次多，可以考慮配製酶聯免疫儀，該儀器一次投入不大，操作簡便，檢測靈敏度高。採用ELISA也有一些缺點，一是試劑盒為長期的消耗品，若檢測的批次少，成本會較高，二是特異性不好，可能會有假陽性，三是如果在相對長的一段時間內檢測項目較多，成本甚至比儀器分析還高。對於有一定規模的出口食品企業，為適應當前歐盟、美國、日本等發達國家檢測限量要求，最好配製一台液相色譜-串聯質譜儀。第一台儀器建議配置三重四級質譜儀，靈敏度高、重現性好。儀器不一定要追求高配置，夠用就行，但靈敏度、穩定性、抗污染等性能要好。最好買用戶較多的型號，有一個與自己檢測項目相近的用戶群，首先說明該型號儀器檢測擬檢的項目沒有問題，其次，也便於今後技術交流。

㈦ 維生素A和維生素E的化學檢驗方法

第一篇高效液相色譜法
2原理
樣品中的維生素A及維生素E經皂化提取處理後，將其從不可皂化部分提取至有機溶劑中。用高效液相色譜法C18反相柱將維生素A和維生素E分離，經紫外檢測器檢測，並用內標法定量測定。最小檢出量分別為VA：0.8ng；α－E：91.8ng；γ－E：36.6ng；δ－E：20.6ng。
3試劑
實驗用水為蒸餾水。試劑不加說明為分析純。
3.1無水乙醚：不含有過氧化物。
3.1.1過氧化物檢查方法：用5mL乙醚加1mL 10%碘化鉀溶液，振搖1min，如有過氧化物則放出遊離碘，水層呈黃色或加4滴0.5%澱粉液，水層呈藍色。該乙醚需處理後使用。
3.1.2去除過氧化物的方法：重蒸乙醚時，瓶中放入純鐵絲或鐵末少許。棄去10%初餾液和10%殘餾液。
3.2無水乙醇：不得含有醛類物質。
3.2.1檢查方法：取2mL銀氨溶液於試管中，加入少量乙醇，搖勻，再加入10%氫氧化鈉溶液，加熱，放置冷卻後，若有銀鏡反應則表示乙醇中有醛。
3.2.2脫醛方法：取2g硝酸銀溶於少量水中。取4g氫氧化鈉溶於溫乙醇中。將兩者傾入1L乙醇中，振搖後，放置暗處兩天(不時搖動，促進反應)，經過濾，置蒸餾瓶中蒸餾，棄去初蒸出的50mL。當乙醇中含醛較多時，硝酸銀用量適當增加。
3.3無水硫酸鈉。
3.4甲醇：重蒸後使用。
3.5重蒸水：水中加少量高錳酸鉀，臨用前蒸餾。
3.610%抗壞血酸溶液(m/V)：臨用前配製。
3.71∶1氫氧化鉀溶液。
3.810%氫氧化鈉溶液(m/V)。
3.95%硝酸銀溶液(m/V)。
3.10銀氨溶液：加氨水至5%硝酸銀溶液中，直至生成的沉澱重新溶解為止，再加10%氫氧化鈉溶液數滴，如發生沉澱，再加氨水直至溶解。
3.11維生素A標准液：視黃醇(純度85%)或視黃醇乙酸酯(純度90%)經皂化處理後使用。用脫醛乙醇溶解維生素A標准品，使其濃度大約為1mL相當於1mg視黃醇。臨用前用紫外分光光度法標定其准確濃度。
3.12維生素E標准液：α－生育酚(純度95%)，γ－生育酚(純度95%)，δ－生育酚(純度95%)。用脫醛乙醇分別溶解以上三種維生素E標准品，使其濃度大約為1mL相當於1mg。臨用前用紫外分光光度法分別標定此三種維生素E的准確濃度。
3.13內標溶液：稱取苯並〔e〕芘(純度98%)，用脫醛乙醇配製成每1mL相當於10μg苯並〔e〕芘的內標溶液。
3.14pH1～14試紙。
4儀器和設備
4.1實驗室常用設備。
4.2高壓液相色譜儀帶紫外分光檢測器。
4.3旋轉蒸發器。
4.4高速離心機
4.4.1小離心管：具塑料蓋1.5～3.0mL塑料離心管(與高速離心機配套)。
4.5高純氮氣。
4.6恆溫水浴鍋。
4.7紫外分光光度計。
5操作步驟
5.1樣品處理
5.1.1皂化
稱取1～10g樣品(含維生素A約3μg，維生素E各異構體約為40μg)於皂化瓶中，加30mL無水乙醇，進行攪拌，直到顆粒物分散均勻為止。加5mL 10%抗壞血酸，苯並〔e〕芘標准液2.00mL，混勻。加10mL1：1氫氧化鉀，混勻。於沸水浴上迴流30min使皂化完全。皂化後立即放入冰水中冷卻。
5.1.2提取
5.1.2.1將皂化後的樣品移入分液漏斗中，用50mL水分2～3次洗皂化瓶，洗液並入分液漏斗中。用約100mL乙醚分兩次洗皂化瓶及其殘渣，乙醚液並入分液漏斗中。如有殘渣，可將此液通過有少許脫脂棉的漏斗濾入分液漏斗。輕輕振搖分液漏斗2min，靜置分層，棄去水層。
5.1.3洗滌
5.1.3.1用約50mL水洗分液漏斗中的乙醚層，用pH試紙檢驗直至水層不顯鹼性(最初水洗輕搖，逐次振搖強度可增加)。
5.1.4濃縮
5.1.4.1將乙醚提取液經過無水硫酸鈉(約5g)濾入與旋轉蒸發器配套的250～300mL球形蒸發瓶內，用約10mL乙醚沖洗分液漏斗及無水硫酸鈉3次，並入蒸發瓶內，並將其接至旋轉蒸發器上，於55℃水浴中減壓蒸餾並回收乙醚，待瓶中剩下約2mL乙醚時，取下蒸發瓶，立即用氮氣吹掉乙醚。立即加入2.00mL乙醇，充分混合，溶解提取物。
5.1.5將乙醇液移入一小塑料離心管中(4.4.1)，離心5min(5000rpm)。上清液供色譜分析。如果樣品中維生素含量過少，可用氮氣將乙醇液吹乾後，再用乙醇重新定容。並記下體積比。
5.2標准曲線的制備
5.2.1維生素A和維生素E標准濃度的標定方法
取維生素A和各維生素E標准液若干微升，分別稀釋至3.00mL乙醇中，並分別按給定波長測定各維生素的吸光值。用比吸光系數計算出該維生素的濃度。測定條件如下表所示。
表1
標 准 加入標準的量
s，μl 比吸光系數
波 長
λ，nm
視 黃 醇
γ－生育酚
δ－生育酚
α－生育酚 10.00
100.0
100.0
100.0 1835
71
92.8
91.2 325
294
298
298

濃度計算：


5.2.2標准曲線的制備
本方法採用內標法定量。把一定量的維生素A、γ－生育酚、α－生育酚、δ－生育酚及內標苯並〔e〕芘液混合均勻。選擇合適靈敏度，使上述物質的各峰高約為滿量程70%，為高濃度點。高濃度的1/2為低濃度點(其內標苯並〔e〕芘的濃度值不變)，用此二種濃度的混合標准進行色譜分析，結果見色譜圖。維生素標准曲線繪制是以維生素峰面積與內標物峰面積之比為縱坐標，維生素濃度為橫坐標繪制，或計算直線回歸方程。如有微處理機裝置，則按儀器說明用二點內標法進行定量。
本方法不能將β－E和γ－E分開，故γ－E峰中包含有β－E峰。
5.3高效液相色譜分析
5.3.1色譜條件(推薦條件)
5.3.1.1預柱：ultrasphere ODS 10μm，4mm×4.5cm。
5.3.1.2分析柱：ultrasphere ODS 5μm，4.6mm×25cm。
5.3.1.3流動相：甲醇∶水＝98∶2。混勻。於臨用前脫氣。
5.3.1.4紫外檢測器波長：300nm。量程0.02。
5.3.1.5進樣量：20μL。
5.3.1.6流速：1.7mL/min。
5.4樣品分析
取樣品濃縮液20μL，待繪制出色譜圖及色譜參數後，再進行定性和定量。
5.4.1定性：用標准物色譜峰的保留時間定性。
5.4.2定量：根據色譜圖求出某種維生素峰面積與內標物峰面積的比值，以此值在標准曲線上查到其含量。或用回歸方程求出其含量。
6計算


式中：X2——某種維生素的含量，mg/100g；
C——由標准曲線上查到某種維生素含量，μg/mL；
V——樣品濃縮定容體積，mL；
m——樣品質量， g。
用微處理機二點內標法進行計算時，按其計算公式計算或由微機直接給出結果。
7結果的允許差
同一實驗室，同時測定或重復測定結果相對偏差絕對值≤10%。
第二篇比色法
8原理
維生素A在三氯甲烷中與三氯化銻相互作用，產生藍色物質，其深淺與溶液中所含維生素A的含量成正比。該藍色物質雖不穩定，但在一定時間內可用分光光度計於620nm波長處測定其吸光度。
9試劑
本實驗用水均為蒸餾水。
9.1無水硫酸鈉：同3.3。
9.2乙酸酐。
9.3乙醚：同3.1。
9.4無水乙醇：同3.2。
9.5三氯甲烷：應不含分解物，否則會破壞維生素A。
9.5.1檢查方法
三氯甲烷不穩定，放置後易受空氣中氧的作用生成氯化氫和光氣。檢查時可取少量三氯甲烷置試管中加水少許搖振，使氯化氫溶到水層。加入幾滴硝酸銀液，如有白色沉澱即說明三氯甲烷中有分解產物。
9.5.2處理方法
試劑應先測驗是否含有分解產物，如有，則應於分液漏斗中加水洗數次，加無水硫酸鈉或氯化鈣使之脫水，然後蒸餾。
9.625%三氯化銻－三氯甲烷溶液：用三氯甲烷配製25%三氯化銻溶液，儲於棕色瓶中(注意勿使吸收水分)。
9.71∶1氫氧化鉀溶液。
9.8維生素A或視黃醇乙酸酯標准液：同3.11。其標定方法同5.2.1。
9.9酚酞指示劑：用95%乙醇配製1%溶液。
10儀器和設備
10.1實驗室常用設備。
10.2分光光度計。
10.3迴流冷凝裝置。
11操作步驟
維生素A極易被光破壞，實驗操作應在微弱光線下進行，或用棕色玻璃儀器。
11.1樣品處理：根據樣品性質，可採用皂化法或研磨法。
11.1.1皂化法：適用於維生素A含量不高的樣品，可減少脂溶性物質的干擾，但全部試驗過程費時，且易導致維生素A損失。
11.1.1.1皂化：根據樣品中維生素A含量的不同，稱取0.5～5g樣品於三角瓶中，加入10mL 1∶1氫氧化鉀及20～40mL乙醇，於電熱板上迴流30min至皂化完全為止。
11.1.1.2提取：將皂化瓶內混合物移至分液漏斗中，以30mL水洗皂化瓶，洗液並入分液漏斗。如有渣子，可用脫脂棉漏斗濾入分液漏斗內。用50mL乙醚分二次洗皂化瓶，洗液並入分液漏斗中。振搖並注意放氣，靜置分層後，水層放入第二個分液漏斗內。皂化瓶再用約30mL乙醚分二次沖洗，洗液傾入第二個分液漏斗中。振搖後，靜置分層，水層放入三角瓶中，醚層與第一個分液漏鬥合並。重復至水液中無維生素A為止。
11.1.1.3洗滌：用約30mL水加入第一個分液漏斗中，輕輕振搖，靜置片刻後，放去水層。加15～20mL 0.5mol/L氫氧化鉀液於分液漏斗中，輕輕振搖後，棄去下層鹼液，除去醚溶性酸皂。繼續用水洗滌，每次用水約30mL，直至洗滌液與酚酞指示劑呈無色為止(大約3次)。醚層液靜置10～20min，小心放出析出的水。
11.1.1.4濃縮：將醚層液經過無水硫酸鈉濾入三角瓶中，再用約25mL乙醚沖洗分液漏斗和硫酸鈉兩次，洗液並入三角瓶內。置水浴上蒸餾，收回乙醚。待瓶中剩約5mL乙醚時取下，用減壓抽氣法至於，立即加入一定量的三氯甲烷使溶液中維生素A含量在適宜濃度范圍內。
11.1.2研磨法：適用於每克樣品維生素A含量大於5～10μg樣品的測定，如肝的分析。步驟簡單，省時，結果准確。
11.1.2.1研磨：精確稱2～5g樣品，放入盛有3～5倍樣品重量的無水硫酸鈉研缽中，研磨至樣品中水分完全被吸收，並均質化。
11.1.2.2提取：小心她將全部均質化樣品移入帶蓋的三角瓶內，准確加入50～100mL乙醚。緊壓蓋子，用力振搖2min，使樣品中維生素A溶於乙醚中。使其自行澄清(大約需1～2h)，或離心澄清(因乙醚易揮發，氣溫高時應在冷水浴中操作。裝乙醚的試劑瓶也應事先放入冷水浴中)。
11.1.2.3濃縮：取澄清提取乙醚液2～5mL，放入比色管中，在70～80℃水浴上抽氣蒸干。立即加入1mL三氯甲烷溶解殘渣。
12測定步驟
12.1標准曲線的制備
准確取一定量的維生素A標准液於4～5個容量瓶中，以三氯甲烷配製標准系列。再取相同數量比色管順次取1mL三氯甲烷和標准系列使用液1mL，各管加入乙酸酐1滴，製成標准比色列。於620nm波長處，以三氯甲烷調節吸光度至零點，將其標准比色列按順序移入光路前，迅速加入9mL三氯化銻－三氯甲烷溶液。於6s內測定吸光度，將吸光度為縱坐標，以維生素A含量為橫坐標繪制標准曲線圖。
12.2樣品測定
於一比色管中加入10mL三氯甲烷，加入1滴乙酸酐為空白液。另一比色管中加入1mL三氯甲烷，其餘比色管中分別加入1mL樣品溶液及1滴乙酸酐。其餘步驟同標准曲線的制備。
13計算


式中：X——樣品中含維生素A的量，mg/100g(如按國際單位，每1國際單位＝0.3μg維生素A)；
c——由標准曲線上查得樣品中含維生素A的含量，μg/mL；
m——樣品質量，g；
V——提取後加三氯甲烷定量之體積，mL；
100——以每百克樣品計。