大腸桿菌什麼方法鑒別

A. 怎麼看出大腸桿菌

用依紅-美藍培養基鑒定，依紅-美藍培養基鑒 是一種鑒別培養基，是用來鑒別大腸桿菌的，若有大腸桿菌，則培養基會變成紫色，並帶有金屬光澤。

B. 怎麼檢驗飲料中的大腸桿菌

以無菌操作取25 g樣品,放入裝有225 mL稀釋劑的滅菌均質杯內,於8000 r/min均質1～2min,製成1:10樣品勻液(也可用滅菌乳缽研磨的方法代替).
稀釋樣品勻液根據對樣品污染情況的估計,用稀釋劑將樣品勻液製成一系列十倍遞增的樣品稀釋液,如10**-2、10**-3、10**-4…….從制備樣品勻液至稀釋完畢,全過程不得超過15min.
附：這是一種9管MPN法測定方法.
LST和EC初步篩選：
對每個樣品,選擇適宜的三個連續稀釋度的樣品稀釋液.每個稀釋度接種三管月桂基硫酸鹽胰蛋白(月示)(LST)肉湯,每管接種1mL.將接種管置於36±1℃培養48±2h.
觀察試管的產氣情況：檢查倒管內是否有氣泡產生,用直徑為3mm的接種環將所有48±2h內產氣的LST肉湯管培養物移種於EC肉湯管中.將所有接種的EC肉湯管在30min內放入帶蓋44.5±0.5℃水浴箱內,培養48±2h.
EMB平板：
取其產氣管的培養物劃線接種於伊紅美藍(EMB)平板,36±1℃培養24±2h.
檢查平板上有無具黑色中心有光澤或無光澤的典型菌落.
如有典型菌落,則從每個平板上至少挑取2個典型菌落；如無典型菌落,則從每個平板上至少挑取2個可疑菌落.用接種針接觸菌落中心部位,移種到營養瓊脂斜面上,36±1℃培養18～24h.
平板劃線示例
EMB平板原理及照片
生化試驗：
將斜面培養物移種到下列培養基中進行生化試驗.
1 色氨酸肉湯：在36±1℃培養24±2h後,加Kovacs氏試劑0.0.3mL,上層出現紅色為靛基質陽性反應.
2 MR-VP培養基：在36±1℃培養48±2h.以無菌操作移取培養物1 mL至13mm×100mm試管中,加5％α-萘酚乙醇溶液0.6mL,40％氫氧化鉀溶液0.2mL和少許肌酸結晶,振搖試管後靜置2h,如出現伊紅色,為VP試驗陽性.
將MR-VP培養物的剩餘部分再培養48h滴加5 滴甲基紅溶液.如培養物變紅色,為甲基紅試驗陽性,若變黃色則為陰性反應.
3 Koser氏枸椽酸鹽肉湯：於36±1℃培養96h記錄有無生長.
4 LST肉湯：於36±1℃培養48±2h,觀察試管中是否產氣.
5 革蘭氏染色：取18h營養瓊脂斜面培養物作革蘭氏染色.大腸桿菌為革蘭氏陰性.
大腸桿菌與非大腸桿菌生化鑒別如下：
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靛 基 質┃ MR ┃ VP ┃ 枸椽酸鹽 ┃ 鑒定(型別)
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＋ ┃ ＋ ┃ － ┃ － ┃典型大腸桿菌
－ ┃ ＋ ┃ － ┃ － ┃非典型大腸桿菌
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＋ ┃ ＋ ┃ － ┃ ＋ ┃典型中間型
－ ┃ ＋ ┃ － ┃ ＋ ┃非典型中間型
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－ ┃ － ┃ ＋ ┃ ＋ ┃典型產氣腸桿菌
＋ ┃ － ┃ ＋ ┃ ＋ ┃非典型產氣腸桿菌
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如出現上表以外的生化反應類型,表明培養物可能不純,應重新劃線分離,必要時做
重復試驗.
結果報告：
大腸桿菌為革蘭氏陰性無芽孢桿菌,發酵乳糖產酸產氣,IMViC試驗為＋＋
－－或－＋－－,再根據LST肉湯陽性管數查MPN表,報告每克(毫升)樣品中大腸桿菌MPN
值.

C. 大腸桿菌的檢測方法

多管發酵法。

多管發酵法是一種檢測水體中大腸桿菌的傳統方法，這種方法是在44.5℃的含有熒光底物的培養基上連續培養24h，而後能產生分解熒光底物——葡萄糖醛酸酶，從而釋放出熒光產物，進而使培養基在紫外光照射下產生特徵熒光。此方法可被用來對原樣品中的菌落數作統計學估計。

在單料或雙料乳糖膽鹽發酵管內發酵，分離培養試驗，利用伊紅美藍培養皿分離，接著是在乳糖發酵管中進行二次發酵，最後通過芽孢染色、革蘭氏染色、顯微枝兄棗鏡觀察等來完成。多管發酵法對試驗條件要求不高，成本低，但是檢測時間較長，容易受其他條件干擾，進而影響到測定結果的精確度。猛拆

(3)大腸桿菌什麼方法鑒別擴展閱讀：

注意事項：

1、檢樣時注意無菌操作。

2、稀釋時採用的稀釋液可以用磷酸鹽緩沖液或生理鹽水，接種時可採用九管法，設置三個梯度，分別為0.1g/mL、0.01g/mL、0.001g/mL，每一個稀釋度的試管應充分混勻。

3、每次實驗需要有陰性對照。

4、使用小倒管培養基配製時，為排凈氣泡，滅菌時不要把塵唯試管的蓋子蓋的太緊，滅菌後注意觀察一下倒管中的氣體是否排完全、

5、高壓滅菌後等高壓滅菌鍋的壓力表達到0，取出培養基放到冰箱冷卻，效果會比較好。

D. 大腸桿菌怎麼鑒定

大腸桿菌測定
伊紅美藍平板上典型大腸桿菌菌落接種到營養瓊脂平板，在(36土1)℃培養18h -24 h 。每個平板至少挑選2個菌落。挑取上述菌落純培養物接種3.6.3生化培養基和乳糖發酵管，(36士1)0C培養24h 後觀察結果。

大腸桿菌與非大腸桿苗鑒別試驗方法

靛基質試驗:
滴加Kovacs氏靛基質試劑0.1 m L於靛基質試驗培養基中混合，靜置，觀察結果。
出現紅色環的為反應陽性;出現黃色環的為反應陰性。

甲基 紅(MR)試驗:
滴加甲基紅指示劑0.2 m 1於MR-VP培養基中混合，觀察結果。
出現紅色為陽性反應;出現黃色為陰性反應。

維 培(VP)試驗:
滴加VP試劑甲液0. 2 mL於MR-VP培養基中混勻，再滴加VP試劑乙液0.1mL混勻，靜置，觀察結果。在15min內出現紅色的為陽性反應;無顏色變化的為陰性反應。陰性結果1h後再觀察一次出現紅 色也為陽性反應。

西蒙氏檸檬酸鹽試驗:觀察培養基顏色變化，出現藍色為陽性反應;不變色為陰性反應。

大腸桿菌鑒定結果
靛基質 MR VP 西蒙氏檸檬酸鹽 鑒定
＋
－ ＋
＋ －
－ —
－ 典型大腸艾希氏桿菌
非典型大腸艾希氏桿菌
＋
－ ＋
＋ －
－ ＋
＋ 典型檸檬酸鹽桿菌
非典型檸檬酸鹽桿菌
－
＋ －
－ －
－ ＋
＋ 典型產氣腸桿菌
非典型產氣腸桿菌

如出現表1以外的生化反應類型，表明培養物可能不純，應重新劃線分離，必要時做重復試驗。

結果報告
1M Vic 試 驗結果為++一一、一+一一和乳糖發酵管產氣者，查其EC肉湯產氣管數及其稀釋倍
數，對照附錄B(資料性附錄)中MPN檢索表報告樣品中大腸埃希氏桿菌MPN /a (mL)值

E. 如何鑒定大腸桿菌

1、發酵法

這種方法主要是在44.5℃下的培養基上進行大腸桿菌的培養，該培養基含有熒光底物，需要培養 24 h。然戚汪後對熒光底物進行釋放，需要採用葡萄糖醛酸進行，讓培養基能夠在紫外光的照射下發出熒光。

採用這樣的方式方法，還可以進行統計學估計原來樣品中的菌落。盯罩主要步驟包括發酵、分離培養、二次發酵、顯微鏡觀察等 。

2、濾膜法

該方法主要過程：加入 10 mL 左右的無菌水於濾器中，然後摻入一些無菌水進行清潔濾器的內壁，再進行過濾，將濾凱仔鬧膜放在 M-FC 培養基中，兩者之間不能夠有氣泡，然後進行密封，存放溫度為 44.5℃，存放時間約 24 h，直到大腸桿菌的菌群變成藍色或藍綠色。

然後記錄數據，估算每一單位的水溶液菌群數量，然後進行大腸桿菌量值的換算 。

(5)大腸桿菌什麼方法鑒別擴展閱讀：

大腸桿菌是短桿菌，兩端呈鈍圓形，革蘭陰性。有時因環境不同，個別菌體出現近似球桿狀或長絲狀 ；大腸桿菌多是單一或兩個存在，但不會排列呈長鏈形狀。

大多數的大腸桿菌菌株具有莢膜或微莢膜結構，但是不能形成芽孢；多數大腸桿菌菌株生長有菌毛，其中一些菌毛是針對宿主及其他的一些組織或細胞具有黏附作用的宿主特異性菌毛 。

生化特性

大腸桿菌在常用的生化特性檢測項目中，甲基紅試驗呈陽性，吲哚產生和乳糖發酵是陽性（個別菌株表現陰性），維-培試驗是陰性，尿素酶和檸檬酸鹽利用呈陰性（極個別菌株表現陽性），硝酸鹽還原試驗表現陽性，氧化酶表現陰性，氧化-發酵試驗表現為F型

F. 大腸桿菌檢測方法國標是用什麼方法檢測的

大腸桿菌檢測方法分為三種：

1、細菌分離鑒定法

分離培養與鑒定：糞便標本直接接種腸道桿菌選擇性培養基。血液先經肉湯增菌，然後轉種血瓊脂平板。其他標本同時接種血瓊脂平板和腸道桿菌選擇性培養基。

37℃孵育18～24小時後，觀察菌落塗片染色鏡檢。腸致病性大腸桿菌須先作血清學定型試驗。必要的時候檢定腸黴毒素。

2、衛生細菌學檢查法

大腸桿菌會不斷隨糞便排出體外，污染周圍環境水源、食品等。取樣檢查時，樣品中大腸桿菌越多，則表示樣品被糞便污染的越嚴重，表明樣品中存在腸道致病菌的可能性也就越大。

大腸菌數指數：指每立升中大腸菌群數，採用乳糖發酵法檢測。中國衛生標準是每1000ml飲水中不得超過3個大腸菌群，瓶裝汽水和果汁中每100ml大腸菌群不能超過5個。

3、全自動微生物定量分析儀（TEMPO）檢測法

全自動微生物定量分析（TEMPO）儀大腸桿菌群計數檢測有TEMPOTC和TEMPOCC兩種方法。

TEMPOTC的開發是為獲得NF ISO4832標准相當性能水平。

TEMPOCC法是TEMPO儀器上根據BAM方法專門用於24h計數食品中大腸桿菌群方法。

(6)大腸桿菌什麼方法鑒別擴展閱讀：

大腸桿菌在生物技術中的應用

這些菌株由於失去了細胞壁等重要組分，所以在自然條件下已無法生長。甚至普通的清潔劑都可以輕易地殺滅這類菌株。即便由於操作不慎導致活菌從實驗室流出，也不易導致生化危機。

生物工程用的菌株基因組都被優化過，使之帶有不同基因型（例如β半乳糖苷酶缺陷型），可以更好的用於分子克隆實驗。

真核基因在大腸桿菌中表達，必須有合適的表達載體(Vector),常用載體：pBV220,pET系統。

目的基因在大腸桿菌中表達的情況：

大腸桿菌更適合原核基因的表達，外源基因表達產量與單位體積產量是正相相關的，外源基因拷貝數和表達 產物產量之間存在動態平衡，單個細胞的產量又與外源基因拷貝數，基因表達效率，表達產物的穩定性和細胞代謝負荷等因素有關。