『壹』 細胞活性檢測的方法有多少種
細胞活性測定方法有台盼藍染色法、克隆(集落)形成法、 3H 放射性同位素摻入法、 MTT 法等。其中 MTT 法以其快速簡便,不需要特殊檢測儀器、無放射性同位素、適合大批量檢測的特點而得到廣泛的應用。但 MTT 法形成的 Formazan 為水不溶性的,需要加有機溶劑溶解,由於在去上清操作時會有可能帶走小部分的 Formazan ,故有時重復性略差。為了解決這個問題,研究人員又開發了很多種水溶性的四氮唑鹽類:如 XTT 、 CCK-8 ( WST-8 )等。
『貳』 實驗細胞的活力測定MTS法
BrdU標記法 1.細胞以1.5×105/ml細胞數接種於直徑35ml培養皿中(內放置一蓋玻片),培養1天,用含0.4% FCS培養液同步化3天,使絕大多數細胞處於G0期。 2.終止細胞培養前,加入BrdU(終濃度為30μg/L),37℃,孵育40min。 3.棄培養液,玻片用PBS洗滌3次。 4.甲醇/醋酸固定10min。 5.經固定的玻片空氣乾燥,0.3%H2O2-甲醇30min滅活內源性氧化酶。 6.5%正常兔血清封閉。 7.甲醯胺100℃,5min變性核酸。 8.冰浴冷卻後PBS洗滌,加1抗即抗小鼠BrdU單抗(工作濃度1:50),陰性對照加PBS或血清。 9.按ABC法進行檢測,蘇木素或伊紅襯染,在顯微鏡下隨機計數10個高倍視野中細胞總數及BrdU陽性細胞數,計算標記指數(LI)。 結晶紫法 1.體外細胞培養結束後,去培養液,加入11%的戊二醛固定,置於振盪器上搖20min。 2.固定細胞用去離子水洗滌至戊二醛液洗凈。 3.置空氣或烘箱37℃徹底乾燥。 4.加入0.1%的結晶紫液對細胞染色,振搖30min。 5.用蒸餾水洗滌,至多餘的結晶紫液沖洗干凈。 6.置空氣或37℃烘箱中徹底乾燥。 7.加入10%的乙酸對細胞吸收的結晶紫進行提取。 8.1h後在酶標儀上測定光吸收度,波長595nm。 酸性磷酸酶法 1.96孔細胞培養板中培養細胞,去培養...
『叄』 常用的檢測細胞活力的方法有哪些(除了MTT)
現在應用最多的是CCK-8法。CCK8基本與MTT是一樣的,優點是產物溶於水,所以避免了有機溶劑溶解甲月贊的步驟,既節省了時間,還大幅提高了一致性。
當然最精確的還是同位素標記法。
『肆』 如何用TTC法測定細胞活力(具體步驟)
1. 浸泡 將待測種子在 30 ~ 35 ℃溫水中浸種(大麥、小麥 6 小時,玉米 5 小時左右),以增強種胚的呼吸作用。
2. 顯色 取吸脹的種子 200 粒,用刀片沿種子胚的中心線縱切為兩半,將其中的一半置於 2 只培養皿中,每皿 100 個半粒,加入適量的 0.5% TTC 溶液,以覆蓋種子為度。然後置於 30 ℃恆溫箱中 1 h 。觀察結果,凡胚被染為紅色的是活種子。
將另一半在沸水中煮 5 min 殺死胚,作同樣染色處理,作為對照觀察。
3. 計算活種子的百分率
『伍』 檢測細胞生物學活性有哪些方法
根據每細胞定重量設計用於單細胞、細胞及絲狀體微物測定定體積品通離或濾菌體離經洗滌再離直接稱重求濕重絲狀體微物濾用濾紙吸菌絲間自由水再稱重求濕重論細菌品絲狀菌品放已知重量平皿或燒杯內於一05℃烘乾至恆重取放入乾燥器內冷卻再稱量求微物乾重 要測定固體培養基放線菌或絲狀真菌先加熱至50℃使瓊脂熔化濾菌絲體再用50℃理鹽水洗滌菌絲按述求菌絲體濕重或乾重 除乾重、濕重反映細胞物質重量外通測定細胞蛋白質或DNA含量反映細胞物質量蛋白質細胞主要含量比較穩定其氮蛋白質重要組元素定體積品離細胞洗滌按凱氏定氮測總氮量蛋白質含氮量一陸%細菌蛋白質含量占細菌固形物50%吧0%般陸5%代表些細菌則佔一三%一四%種變化由菌齡培養條件同所產總含氮量與蛋白質總量間關系按列公式計算: 蛋白質總量=含氮量×陸.二5 核酸DNA微物重要遺傳物質每細菌DNA含量相恆定平均吧.四×`一0^(-5)`NG定體積細菌懸液所含細菌提取DNA求DNA含量再計算定體積細菌懸液所含細菌總
『陸』 細胞活力測定常用的簡便方法是
MTT法又稱MTT比色法,是一種檢測細胞存活和生長的方法。其檢測原理為活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結晶甲瓚(Formazan)並沉積在細胞中,而死細胞無此功能。二甲基亞碸(DMSO)能溶解細胞中的甲瓚,用酶聯免疫檢測儀在490nm波長處測定其光吸收值,可間接反映活細胞數量。在一定細胞數范圍內,MTT結晶形成的量與細胞數成正比。該方法已廣泛用於一些生物活性因子的活性檢測、大規模的抗腫瘤葯物篩選、細胞毒性試驗以及腫瘤放射敏感性測定等。它的特點是靈敏度高、經濟。
缺點:由於MTT經還原所產生的甲瓚產物不溶於水,需被溶解後才能檢測。這不僅使工作量增加,也會對實驗結果的准確性產生影響,而且溶解甲瓚的有機溶劑對實驗者也有損害。
細胞活力常用百分比表示,活力的大小對試驗結果有很大影響。細胞活力的測定有許多方法,最簡便常用的方法是台盼藍(trypanblue)染色法。台盼藍又稱錐藍,是一種陰離子型染料,這種染料不能透過活細胞正常完整的細胞膜,故活細胞不著色,但死亡細胞的細胞膜通透性增加,可使染料通過細胞膜進入細胞內,使死細胞著色呈藍色。
『柒』 細胞活力測定常用的簡便方法
又稱MTT比色法,是一種檢測細胞存活和生長的方法。其檢測原理為活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結晶甲瓚(Formazan)並沉積在細胞中,而死細胞無此功能。二甲基亞碸(DMSO)能溶解細胞中的甲瓚,用酶聯免疫檢測儀在490nm波長處測定其光吸收值,可間接反映活細胞數量。在一定細胞數范圍內,MTT結晶形成的量與細胞數成正比。該方法已廣泛用於一些生物活性因子的活性檢測、大規模的抗腫瘤葯物篩選、細胞毒性試驗以及腫瘤放射敏感性測定等。它的特點是靈敏度高、經濟。
缺點:由於MTT經還原所產生的甲瓚產物不溶於水,需被溶解後才能檢測。這不僅使工作量增加,也會對實驗結果的准確性產生影響,而且溶解甲瓚的有機溶劑對實驗者也有損害。
『捌』 MTT法細胞活力檢測細胞活力時,如何確定加葯物的時間
博凌科為解答:一般文獻報道的方法,是貼壁細胞在細胞貼壁後加葯物(一般為上板後24h),而懸浮細胞是上板同時加。 但是,在操作中具體要根據實驗本身要檢測的指標來確定時間。如果是做有關細胞增殖的葯物,加葯的時機影響不大,主要是葯物的作用時間起決定性因素;如果要檢測的是其他一些指標(比如葯物對細胞黏附功能的影響),就要在細胞貼壁以前加葯了
『玖』 細胞活性檢測的方法有多少種 每種的原理是什麼
簡單說幾個把
染色體法 主要在培養基中利用死活細胞對燃料親和力不同 來判斷
克隆形成實驗 原理是單個細胞在體外增至六代後,後代形成的細胞群體 ,通過計算其克隆形成率 來判斷
比色法 也是比較經典的 M,RR 活體細胞中的線粒體中的琥珀酸脫氫酶可以將M,rr還原成藍紫色的結晶甲醋 死細胞無此功能