① 微生物生長的幾種檢測方法
一、生長量測定法
1.1體積測量法:又稱測菌絲濃度法。
通過測定一定體積培養液中所含菌絲的量來反映微生物的生長狀況。方法是,取一定量的待測培養液(如10毫升)放在有刻度的離心管中,設定一定的離心時間(如5分鍾)和轉速(如5000rpm),離心後,倒出上清夜,測出上清夜體積為v,則菌絲濃度為(10-v)/10。菌絲濃度測定法是大規模工業發酵生產上微生物生長的一個重要監測指標。這種方法比較粗放,簡便,快速,但需要設定一致的處理條件,否則偏差很大,由於離心沉澱物中夾雜有一些固體營養物,結果會有一定偏差。
1.2稱乾重法:
可用離心或過濾法測定。一般乾重為濕重的10-20%。在離心法中,將一定體積待測培養液倒入離心管中,設定一定的離心時間和轉速,進行離心,並用清水離心洗滌1-5次,進行乾燥。乾燥可用烘箱在105℃或100℃下烘乾,或採用紅外線烘乾,也可在80℃或40℃下真空乾燥,乾燥後稱重。如用過濾法,絲狀真菌可用濾紙過濾,細菌可用醋酸纖維膜等濾膜過濾,過濾後用少量水洗滌,在40℃下進行真空乾燥。稱乾重發法較為煩瑣,通常獲取的微生物產品為菌體時,常採用這種方法,如活性乾酵母(activitydryyeast,ADY),一些以微生物菌體為活性物質的飼料和肥料。
1.3比濁法:
微生物的生長引起培養物混濁度的增高。通過紫外分光光度計測定一定波長下的吸光值,判斷微生物的生長狀況。對某一培養物內的菌體生長作定時跟蹤時,可採用一種特製的有側臂的三角燒瓶。將側臂插入光電比色計的比色座孔中,即可隨時測定其生長情況,而不必取菌液。該法主要用於發酵工業菌體生長監測。如我所使用UNICO公司的紫外-可見分光光度計,在波長600nm處用比色管定時測定發酵液的吸光光度值OD600,以此監控E.Coli的生長及誘導時間。
1.4菌絲長度測量法:
對於絲狀真菌和一些放線菌,可以在培養基上測定一定時間內菌絲生長的長度,或是利用一隻一端開口並帶有刻度的細玻璃管,到入合適的培養基,卧放,在開口的一端接種微生物,一段時間後記錄其菌絲生長長度,藉此衡量絲狀微生物的生長
二、微生物計數法
2.1血球計數板法:
血球計數板是一種有特別結構刻度和厚度的厚玻璃片,玻片上有四條溝和兩條嵴,中央有一短橫溝和兩個平台,兩嵴的表比兩平台的表面高0.1mm,每個平台上刻有不同規格的格網,中央0.1mm2面積上刻有400個小方格。通過油鏡觀察,統計一定大格內微生物的數量,即可算出1毫升菌液中所含的菌體數。這種方法簡便,直觀,快捷,但只適宜於單細胞狀態的微生物或絲狀微生物所產生的孢子進行計數,並且所得結果是包括死細胞在內的總菌數。
2.2染色計數法:
為了彌補一些微生物在油鏡下不易觀察計數,而直接用血球計數板法又無法區分死細胞和活細胞的不足,人們發明了染色計數法。藉助不同的染料對菌體進行適當的染色,可以更方便的在顯微鏡下進行活菌計數。如酵母活細胞計數可用美藍染色液,染色後在顯微鏡下觀察,活細胞為無色,而死細胞為藍色。
2.3比例計數法:
將已知顆粒(如黴菌孢子或紅細胞)濃度的液體與一待測細胞濃度的菌液按一定比例均勻混合,在顯微鏡視野中數出各自的數目,即可得未知菌液的細胞濃度。這種計數方法比較粗放。並且需要配製已知顆粒濃度的懸液做標准。
2.4液體稀釋法:
對未知菌樣做連續十倍系列稀釋,根據估計數,從最適宜的三個連續的10倍稀釋液中各取5毫升試樣,接種1毫升到3組共15隻裝培養液的試管中,經培養後記錄每個稀釋度出現生長的試管數,然後查最大或然數表MPN(mostprobablynumber)得出菌樣的含菌數,根據樣品稀釋倍數計算出活菌含量。該法常用於食品中微生物的檢測,例如飲用水和牛奶的微生物限量檢查。
2.5平板菌落計數法:
這是一種最常用的活菌計數法。將待測菌液進行梯度稀釋,取一定
體積的稀釋菌液與合適的固體培養基在凝固前均勻混合,或將菌液塗布於已凝固的固體培養基平板上。保溫培養後,用平板上出現的菌落數乘以菌液稀釋度,即可算出原菌液的含菌數。一般以直徑9cm的平板上出現50-500個菌落為宜。但方法比較麻煩,操作者需有熟練的技術。平板菌落計數法不僅可以得出菌液中活菌的含菌數,而且同時將菌液中的細菌進行了一次分離培養,獲得了單克隆。
2.6試劑紙法:
在平板計數法的基礎上,發展了小型商品化產品以供快速計數用。形式有小型厚濾紙片,瓊脂片等。在濾紙和瓊脂片中吸有合適的培養基,其中加入活性指示劑2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC,無色)待蘸取測試菌液後置密封包裝袋中培養。短期培養後在濾紙上出現一定密度的玫瑰色微小菌落與標准紙色板上圖譜比較即可估算出樣品的含菌量。試劑紙法計數快捷准確,相比而言避免了平板計數法的人為操作誤差。
2.7膜過濾法:
用特殊的濾膜過濾一定體積的含菌樣品,經丫叮橙染色,在紫外顯微鏡下觀察細胞的熒光,活細胞會發橙色熒光,而死細胞則發綠色熒光。
2.8生理指標法:
微生物的生長伴隨著一系列生理指標發生變化,例如酸鹼度,發酵液中的含氮量,含糖量,產氣量等,與生長量相平行的'生理指標很多,它們可作為生長測定的相對值。
2.9測定含氮量:
大多數細菌的含氮量為乾重的12.5%,酵母為7.5%,黴菌為6.0%。根據含氮量×6.25,即可測定粗蛋白的含量。含氮量的測定方法有很多,如用硫酸,過氯酸,碘酸,磷酸等消化法和Dumas測N2氣法。Dumas測N2氣法是將樣品與CuO混合,在CO2氣流中加熱後產生氮氣,收集在呼吸計中,用KOH吸去CO2後即可測出N2的量。
2.10測定含碳量:
將少量(乾重0.2-2.0mg)生物材料混入1毫升水或無機緩沖液中,用2毫升2%的K2Cr2O7溶液在1000C下加熱30分鍾後冷卻。加水稀釋至5毫升,在580nm的波長下讀取吸光光度值,即可推算出生長量。需用試劑做空白對照,用標准樣品做標准曲線。
2.11還原糖測定法:
還原糖通常是指單糖或寡糖,可以被微生(轉載於:mHg)的條件下才能生長,他們有完整的呼吸鏈,以分子氧為最終氫受體,具有超氧化物歧化酶(SOD)和過氧化氫酶。
兼性厭氧菌:它是以在有氧條件下的生長為主也可兼在厭氧條件下生長的微生物,有時也稱「兼性好氧菌」。
微好氧菌:只能在嬌滴滴額氧分壓(1.33~3.Pa,正常大氣中的氧分壓為0.2bar)下才能正常生長的微生物。
耐氧菌:耐氧性厭氧菌的簡稱,是一類可在分子氧存在下進行發酵性厭氧生活的厭氧菌。
厭氧菌:有一般厭氧菌與嚴格厭氧菌(專性厭氧菌)之分。
超氧陰離子自由基:活性氧的形式之一,因有奇數電子,故帶負電荷;它既有分子性質,又有離子性質;其性質極不穩定,化學反應力極強,在細胞內可破壞各種重要生物大分子和膜結構,還可形成其他活性氧化物,故對生物體極其有害。
超氧化物歧化酶(SOD):保護好氧菌免受超氧化物陰離子自由基的毒害的酶。按SOD分子中所含金屬輔基的不同分三類:1、含Cu、Zn的SOD,存在於幾乎所有真核生物的細胞質中;2、含Fe的SOD,主要存在原核生物中;3、含Mn的SOD,主要存在於真核生物的線粒體中。SOD除可清除超氧陰離子自由基外,還發現在防治人體衰老、治療自身免疫性疾病、抗癌、防白內障、治療放射病和肺氣腫以及解除苯中毒等方面有一系列療效。
PRAS培養基:用嚴格厭氧方法配置、分裝、滅菌後的厭氧菌培養基,稱為預還原無氧滅菌培養基,即PRAS培養基。
厭氧罐:培養厭氧菌的裝置。
亨蓋特滾管技術:一種集制備高純氮、以氮驅氧和全過程實現無氧操作、無氧培養、無氧檢測於一體,用於研究嚴格厭氧菌的技術和裝置。
厭氧手套箱:一種用於無氧操作和培養嚴格厭氧菌的箱形密閉裝置。
搖瓶培養:一般將三角瓶內培養液的瓶口用8層紗布包紮,以利通氣和防止雜菌污染,同時減少瓶內裝液量,把它放在往復式或旋轉式搖床上作有節奏的震盪,以達到提高溶氧量的目的。
曲:是一類用麩皮、米糠等疏鬆的固體營養料接種、培養微生物而製成的含氧活菌產品。
曲法培養:將麩皮、碎麥或豆餅等固態基質經蒸煮和自然接種後,薄薄地鋪在培養容器表面,使微生物即可獲得充足的氧氣,又有利於散發熱量,對真菌來說,還有利於產生大量孢子。
通風曲:一種機械化程度和生產效率都較高的現代大規模製曲技術,在我國醬油釀造業中廣泛應用。
污染:有害微生物通過氣流、水流、接觸和人工接種等方式,傳播到合適的基質或生物對象上而造成種種危害。
巴氏消毒法:有發過微生物學家巴斯德用於果酒消毒,故名。這是一種專用於牛奶、啤酒、果酒或醬油等不宜進行高溫滅菌的也太風味食品或調料的低溫消毒方法(一般在60-85度下處理30min至15s)。有兩種方法:1、低溫維持法;2、高溫瞬時法。
間歇滅菌法:適用於不耐熱的培養基滅菌。方法是:講帶滅菌的培養基放在80-100度下蒸煮15-60min,以殺滅其中所有的微生物營養體,然後放至室溫37度下保溫過
夜,誘使其中殘存的芽孢發芽,第二天再以同樣方法蒸煮和保溫過夜,如此重復3天即可在較低的滅菌溫度下同樣達到徹底滅菌的效果。
連續加壓蒸氣滅菌法:讓培養基在管道的流動過程中快速升溫、維持和冷卻,然後流進發酵罐。
梅拉特反應:高溫滅菌時,培養基中得氨基化合物(氨基酸、肽、蛋白質)的游離氨基與羧基化合物(糖類)的羰基間發生復雜的化學反應,導致培養基褐變同時,還降低了有關營養物成分,故應設法避免。
石炭酸系數:一定時期內,被試葯劑能殺死全部供試菌的最高稀釋度與達到同效果的石炭酸的最高稀釋度之比。
抗生素:一類有微生物或其他生物生命活動過程中合成的此生代謝產物或其人工衍生物,他們在很低濃度時就能一直或干擾他種生物的生命活力,因而可用作有兩的化學治療劑。
抗代謝葯物:一類在化學結構上與細胞內必要代謝物的結構相似,並可干擾正常代謝活動的化學物質。3種作用:1、與正常代謝物一起共同競爭酶的活性中心,從而使微生物正常代謝所需要的重要物質無法正常合成,例如磺胺類;2、「假冒」正常代謝物,使微生物合成出無法正常生理活動的假產物,如8-重氮鳥嘌呤取代鳥嘌呤而合成的核苷酸就會產生無正常功能的RNA;3、某些抗代謝葯物與某一生化合成途徑的終產物結構類似,可通過反饋調節破壞正常代謝調節機制,例如,6-巰基腺嘌呤可抑制腺嘌呤核苷酸的合成。
選擇毒力:大於病原菌具高度毒力而對其宿主基本無毒的化學物質來抑制宿主體內病源微生物的生長繁殖,藉以達到治療該宿主傳染病的一種措施。
② 純化水中的微生物檢測怎麼做 要詳細
採用濾膜法進行微生物檢測是一種國際公認的微生物標准檢驗方法,其得到AOAC、美國、歐洲和日本等國家的葯典、FDA和EPA等組織的承認,廣泛應用於環境監測、食品及飲料工業、化妝品、制葯工業品質控制和電子工業等領域.賽多利斯公司的濾膜法微生物檢測產品成功地應用於濾膜法已有20多年的歷史,實用而且方便實用,它簡化了微生物檢測程序.
濾膜法微生物檢測:
將適當孔徑的濾膜放入濾器,過濾樣品,由於濾膜的作用而將微生物保留在膜的表面上.樣品中微生物生長抑制劑可在過濾後用無菌水沖洗濾器而除去.然後,將濾膜放在培養基上培養,營養物和代謝物通過濾膜的微孔進行交換,在濾膜表面上培養出的菌落可以計數,並和樣品量相關.
濾膜法的優點:
- 與直接法比較,可以檢測大量的樣品
- 濃縮效應使微生物檢測的准確度提高
- 帶有菌落的濾膜,可作為檢測的永久記錄存檔
- 可見的菌落和樣品量直接對應,得出定量結果
操作具體一點就是:薄膜過濾法檢測,一個樣過濾一份,就是200ml的純化水通過濾膜,將該濾膜浸泡在滅菌好的l生理鹽水中,再接種到平皿中,製成10級、100級、1000級稀釋倍數的細菌、黴菌和酵母菌稀釋培養皿,即可
③ 測定水中微生物(包括細菌真菌等)數量的方法
器材及培養
材料和試劑
蒸餾水,自來水,取自兒童公園的湖水,牛肉膏蛋白腖瓊脂培養基.
儀器或其他用具
滅菌三角燒瓶,滅菌帶玻璃塞瓶,滅菌培養皿,滅菌吸管,滅菌量筒.
研究方法
採用平板菌落記數技術測定水中細菌總數.
水樣的採取
自來水
先將自來水水龍頭用火焰灼燒3min滅菌,再開放水龍頭5min後,以滅菌三角燒瓶接取水樣,以待分析.
公園的湖水
應取距水面10~15cm的深層水樣,先將滅菌的帶玻璃塞瓶,瓶口向下浸入水中,然後翻過來,除去玻璃
塞,水即流入瓶中,盛滿後,將瓶塞蓋好,再從水中取出,最好立即檢查,否則需放入冰箱中保存.
細菌總數的測定
自來水
Step1用滅菌吸管吸取1mL水樣,注入滅菌培養皿中.共做兩個平皿.
Step2分別傾注約15mL已溶化並冷卻到45e左右的肉膏蛋白腖瓊脂培養基.並立即在桌上做平面
旋搖,使水樣與培養基充分混勻.
Step3另取一個空的滅菌培養皿,傾注肉膏蛋白腖瓊脂培養基15mL,作對照.
Step4培養基凝固後,倒置與37e溫箱中,培養24h,進行菌落記數.
公園的湖水
Step1稀釋水樣,取三個滅菌空試管,分別加入9mL滅菌水.取1mL水樣注入第一管9mL滅菌水
內,搖勻,再自第一管取1mL到下一管滅菌水內,如此稀釋到第三管,稀釋度分別為10-1,10-2,10-3.
Step2自最後三個稀釋度的試管中各取1mL稀釋水加入空的滅菌培養皿,每一稀釋度共做兩個培養皿.
Step3各傾注15mL已溶化並冷卻到45e左右的肉膏蛋白腖瓊脂培養基並立即在桌上搖勻.
Step4凝固後倒置於37e恆溫恆濕培養箱中培養24h.
菌落記數方法
1)計算相同稀釋度的平均菌落數.若有大片菌苔生長時,棄用;以無片菌苔生長的培養皿記數.若片狀菌
苔大小不到培養皿的一半,其餘一半分布均勻,將此一半計數@2.
2)選擇平均菌落數在30~300之間的平板.只有一個符合此范圍時,以該平均菌落數@稀釋倍數.有兩
個在30~300之間時,按兩者菌落總數比值決定,比值小於2,取平均;比值大於2,取較小的菌落數.
3)若所有稀釋度的平均菌落數均大於300,則應按稀釋度最高的平均菌落數@稀釋倍數.
4)若所有稀釋度的平均菌落數均小於30,則按稀釋度的平均數@倍數.
5)若所有稀釋度的平均菌落數均不在30~300之間,則以最近30或300的平均菌落數@稀釋倍數.
微生物的含量能否反應水的營養化程度?
能
歡迎採納希望幫到你
④ 純化水中的微生物檢測怎麼做 要詳細
1檢測前的准備
1.1儀器:微生物限度檢驗儀
微生物限度培養器
1.2培養基:TGYA瓊脂培養基、R2A瓊脂培養基
上述培養基均須做培養基的促生長試驗,TGYA瓊脂培養基的促生長試驗參見微生物計數操作檢查法SOP07-QC-3-017,R2A瓊脂培養基促生長試驗中選擇的菌種是銅綠假單胞菌、大腸埃希菌、金黃色葡萄糖球菌,操作方法同微生物計數操作檢查法SOP07-QC-3-017中培養基的促生長試驗。
75%的酒精
1.3開啟凈化工作台,把微生物限度檢驗儀連接電源。
2檢測
2.1薄膜過濾法
使用孔徑大小不超過0.45μm的薄膜過濾器。
2.2在凈化工作台下,用火焰噴槍對泵頭端面和過濾片進行消毒。把微生物限度培養器固定在微生物限度檢驗儀上,打開微生物限度培養器蓋子。
2.3取50ml的純化水,倒入微生物限度培養器中,打開微生物限度檢驗儀開關,立即過濾。過濾完成後,取下過濾器,在過濾器膜的另一面中,傾注TGYA瓊脂培養基,蓋上蓋子。
2.4取50ml的純化水,倒入微生物限度培養器中,打開微生物限度檢驗儀開關,立即過濾。過濾完成後,取下過濾器,在過濾器膜的另一面中,傾注R2A瓊脂培養基,蓋上蓋子。
2.5每個樣品過濾後均做2單個培養,檢測完畢,取一微生物限度培養器固定在微生物限度檢驗儀上,注入100ml的75%酒精過濾,關閉儀器、電源。
3培養
傾注TGYA瓊脂培養基的,在30℃-35℃培養48h-72h,並計數。傾注R2A瓊脂培養基的,在20℃-25℃培養5d-7d,並計數。
分別計算和報告兩種培養基每1ml純化水中的cfu值。
⑤ 大腸桿菌檢測方法國標是用什麼方法檢測的
大腸桿菌檢測方法分為三種:
1、細菌分離鑒定法
分離培養與鑒定:糞便標本直接接種腸道桿菌選擇性培養基。血液先經肉湯增菌,然後轉種血瓊脂平板。其他標本同時接種血瓊脂平板和腸道桿菌選擇性培養基。
37℃孵育18~24小時後,觀察菌落塗片染色鏡檢。腸致病性大腸桿菌須先作血清學定型試驗。必要的時候檢定腸黴毒素。
2、衛生細菌學檢查法
大腸桿菌會不斷隨糞便排出體外,污染周圍環境水源、食品等。取樣檢查時,樣品中大腸桿菌越多,則表示樣品被糞便污染的越嚴重,表明樣品中存在腸道致病菌的可能性也就越大。
大腸菌數指數:指每立升中大腸菌群數,採用乳糖發酵法檢測。中國衛生標準是每1000ml飲水中不得超過3個大腸菌群,瓶裝汽水和果汁中每100ml大腸菌群不能超過5個。
3、全自動微生物定量分析儀(TEMPO)檢測法
全自動微生物定量分析(TEMPO)儀大腸桿菌群計數檢測有TEMPOTC和TEMPOCC兩種方法。
TEMPOTC的開發是為獲得NF ISO4832標准相當性能水平。
TEMPOCC法是TEMPO儀器上根據BAM方法專門用於24h計數食品中大腸桿菌群方法。
(5)汽水微生物檢測方法擴展閱讀:
大腸桿菌在生物技術中的應用
這些菌株由於失去了細胞壁等重要組分,所以在自然條件下已無法生長。甚至普通的清潔劑都可以輕易地殺滅這類菌株。即便由於操作不慎導致活菌從實驗室流出,也不易導致生化危機。
生物工程用的菌株基因組都被優化過,使之帶有不同基因型(例如β半乳糖苷酶缺陷型),可以更好的用於分子克隆實驗。
真核基因在大腸桿菌中表達,必須有合適的表達載體(Vector),常用載體:pBV220,pET系統。
目的基因在大腸桿菌中表達的情況:
大腸桿菌更適合原核基因的表達,外源基因表達產量與單位體積產量是正相相關的,外源基因拷貝數和表達 產物產量之間存在動態平衡,單個細胞的產量又與外源基因拷貝數,基因表達效率,表達產物的穩定性和細胞代謝負荷等因素有關。
⑥ 怎麼檢測飲料中二氧化碳的含量
先稱量整瓶的飲料質量,然後用力輪喚桐擺,大家都知道會有氣泡冒出..然後等到氣泡冒完之後,稱質量...後者質量減前者,大概就是鏈坦CO2含臘坦量的近似值吧
⑦ 如何檢測水中的細菌
如果水中細菌密度較小,就該應用無菌技術將待測水樣通過專門過濾細菌的濾紙,這樣細菌就都留在濾紙上了,再將濾紙鋪到倒好平板的培養基中培養,長出菌落後數菌落數,數量除以過濾水的體積,就得出單位水樣里的細菌數
⑧ 飲料瓶蓋微生物怎麼檢測
你說的是指微生物限度檢測吧。
1、細菌、黴菌及酵母菌檢查:取5個瓶蓋,每個瓶蓋謹歷各用一支無菌棉簽沾取無菌0.9%生理鹽水,塗擦內壁後,剪斷,將簽頭放入30ml無菌氯化鈉-蛋白腖緩沖液中,充分振搖1分鍾,即得供試液,抽取桐備1ml分別用相應培養基培養。
2、控局晌毀制菌檢查:取5個瓶蓋,每個瓶蓋各用一支無菌棉簽沾取無菌0.9%生理鹽水,塗擦內壁後,剪斷,將簽頭放入30ml無菌氯化鈉-蛋白腖緩沖液中,充分振搖1分鍾,即得供試液,從每瓶供試液中抽取2ml,混合,合共10ml,放入放入相應的增菌培養基中,按葯典的規定培養,檢查金葡和銅綠。
⑨ 微生物的傳統檢測方法有哪些
傳統檢測有三種方法
1、直接顯微鏡觀察,正常情況,在一定的培養條件下(相同的培養基、溫度以及培養時間),同種微生物表現出穩定的菌落特徵。可以通過顯微鏡觀察菌落特徵對微生物種類進行判斷。
2、選擇培養基培養微生物或人為提供有利於目的菌株生長的條件,選擇培養基,其作用是允許特定種類的微生物生長,同時抑制或阻止其他微生物生長。選擇培養一般是通過觀察微生物的同化作用類型或某一特徵進行間接判斷,得到的微生物往往並不只有一種,但是能夠大致確定這些微生物存在的共有特徵從而對其分類。
3、鑒別培養基,根據微生物的代謝特點,在培養基中加入某種指示劑或化學葯品。與選擇培養相比,鑒別培養基的鑒別所得結果的范圍比較小,一般可直接測定某微生物的種類。
⑩ 怎麼檢驗飲料中的大腸桿菌
大腸桿菌檢驗(包括(一)檢驗方法;(二)培養基 )
(一)檢驗方法
1.乳糖發酵試驗。以無菌操作採取樣品,採取量及稀釋倍數,依據國家或當地衛生標准要求及樣品污染情況而定。將待檢樣品接種於乳糖膽鹽發酵管內,接種量在l m J以上者,用雙料乳糖膽鹽發酵管,lm1及1mI以下者,用單料乳糖膽鹽發酵管。每一稀釋度接種3管,置36±l℃溫箱內,培養24±2小時,如所有乳糖膽鹽發酵管都不產氣,則可報告為大腸菌群陰性;如有產氣者,則按下列程序進行。
2.分離培養。將產氣的發酵管分別轉種在伊紅美藍瓊脂平板上,置36±l℃溫箱內,培養18~24小時,然後取出,觀察菌落形態,並作革蘭氏染色和證實試驗。
3.證實試驗。在上述平板上,挑取可疑大腸菌群菌落l~2個進行革蘭氏染色,同時接種乳糖發酵管,置36±1℃ 溫箱內培養24±2小時,觀察產氣情況。凡乳糖管產氣,革
蘭氏染色為陰性的無芽胞桿菌,即可報告為大腸菌群陽性。
4.報告。根據證實為大腸菌群陽性的管數,查MPN檢索表,報告每l 00ml(g)大腸菌群的最可能數。
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(二)培養基
①乳糖膽鹽發酵培基
成分:蛋白腖:20g
豬膽鹽(或牛,羊膽鹽):5g
乳糖:10g
0.04%溴甲酚紫水溶液: 25m1
蒸餾水: 1 000m1
製法:將蛋白腖、膽鹽及乳糖溶於水中,校正pH,加入指示劑,分裝每管l 0ml,並放入一個小倒管,高壓滅菌115℃15分鍾。
附註:雙料乳糖膽鹽發酵培基除蒸餾水外,其他成分加倍。
用途:乳糖發酵試驗用。
原理:細菌分解糖類是依靠細菌細胞所產生的各種酶類的作用,細菌產生的分解糖類的酶,隨細菌種類不同而異,可以此來鑒別細菌。
乳糖是雙糖,細菌分解雙糖的酶大多是胞外酶。乳糖被乳糖酶水解成葡萄糖和半乳糖,葡萄糖可直接被細菌利用,而半乳糖則需在細胞內轉化為葡萄糖後再被利用。
糖發酵試驗主要是測定細菌分解糖類以後所產生的酸,以培基pH降低(指示劑變色)作為觀察結果的指標。
大腸桿菌等細菌在酸性環境中,由於甲酸脫氫酶的作用,可使甲酸分解成CO2和H2,在培基中產生大量氣體,進入倒管中,以便觀察。
註:常用於供發酵試驗的各種糖類、醇類和糖苷類(見表3-1)
②伊紅美藍瓊脂培基
成分:蛋白腖 10g
乳糖 10g
磷酸氫二鉀 2g
瓊脂 17g
2%伊紅Y溶液 20ml
0.65%美藍溶液 10ml
蒸餾水 1000ml
pH7.1
製法:將蛋l白腖、磷酸鹽和瓊脂溶解於蒸餾水中,校正pH,分裝於燒瓶內,高壓滅菌121℃15分鍾備用。臨用時加入乳糖,並加熱溶化瓊脂,冷至50一55℃,加入伊紅和美藍溶液,搖勻,傾注平板。
原理:大腸菌群細菌發酵乳糖產酸,使伊紅與美藍結合而成黑色化合物,故菌落呈黑紫色,有時還可產生金屬光澤。黑色程度與光澤產生情況與伊紅、美藍二者比倒有關。不發酵乳糖的細菌(如沙門氏菌、志賀氏菌)則為無色菌落。
③乳糖發酵培基
成分:蛋白腖 20g
乳糖 10g
O.04%溴甲酚紫水溶液 25ml
蒸餾水 1000ml
pH7.4
製法:將蛋白腖及乳糖溶於水中,校正pH,加入指示劑,按檢驗要求分裝30ml、10ml或3ml,並放入一個小倒管,高壓滅菌115℃15分鍾。
附註: 』
(1)雙料乳糖發酵管除蒸餾水外,其他成分加倍。
(2)30ml和10ml乳糖發酵管專供醬油及醬類檢驗用.3ml乳糖發酵管供大腸菌群
證實試驗用。
4.蛋白腖水
成分:蛋白腖(或胰蛋白腖) 20g
氯化鈉 5g
蒸餾水 1 000ml pH7.4