bca蛋白檢測試劑盒使用方法

❶ bca法測蛋白濃度為什麼稀釋蛋白質濃度

BCA法測定蛋白質濃度原理：

BCA與二價銅離子的硫酸銅等其他試劑組成的試劑混合一起即成為蘋果綠，即 BCA 工作試劑。在鹼性條件下，BCA 與蛋白質結合時，蛋白質將 Cu2+ 還原為 Cu+，工作試劑由原來的蘋果綠色變為紫色復合物。562 nm 下其光吸收強度與蛋白質濃度成正比。

BCA 蛋白濃度測定試劑盒，Abbkine的蛋白質定量試劑盒(BCA法)提供一個簡單，快捷，兼容去污劑的方法，准確定量總蛋白。

成分：

試劑 A，100 mL

試劑 B，2 mL

標准蛋白(BSA)1 mL×2，1 mg/mL

保存條件運輸溫度:室溫(標准蛋白 4~8 ℃ 運輸)

保存溫度:室溫(標准蛋白 -20 ℃ 保存)

有效日期:12 個月

使用方法：

方法一:96 孔板

1.配製 BCA 工作液:根據標准品和樣品數量，按 50 體積試劑 A，1 體積試劑 B 配製適量 BCA 工作液。充分混勻。

2.將蛋白標准品按 0 μL，1 μL，2 μL，4 μL，6 μL，8 μL，10 μL 加入 96 孔板的蛋白標准品孔中。加滅菌雙蒸水補足到 10 μL。取 10 μL 待測樣品加入 96 孔板的待測樣品孔中。每個測定要做 2~3 個平行。

3.向待測樣品孔和蛋白標准品孔中各加入 200 μL BCA 工作液(即樣品與工作液的體積比為 1:20)，混勻。

4.37 ℃ 溫浴 30 min。冷卻至室溫。

5.酶標儀 562 nm 波長下測定吸光度。

6.製作標准曲線。從標准曲線中求出樣品濃度。

❷ BCA蛋白濃度檢測的實驗試劑

Bicinchoninic acid (BCA )法是在世界上常用的蛋白濃度檢驗方法之一BCA法基礎上改進而成。其原理與Lowery法蛋白定量相似，即在鹼性環境下蛋白質與Cu 2+ 絡合並將Cu 2+ 還原成Cu + 。兩分子BCA與一個Cu + 螯合形成穩定的紫藍色復合物，在562 nm處有高的光吸收值並與蛋白質濃度成正比，據此可測定蛋白質濃度。
組成與儲存：
組分名稱 規格 保存
BCA Reagent 100ml 2-8℃
Cu Reagent 3.0ml 2-8℃
BSA標准液5 mg/ml 1ml -20ºC凍存
可進行500T微板(microplate)測定或50T2ml比色杯測定。

❸ BCA蛋白濃度檢測的實驗操作

繪制標准曲線：
取96孔酶標板，按下表加入試劑。
管號
1
2
3
4
5
6
7
8
標准蛋白溶液（μl）蒸餾水（μl）
BCA試劑（μl）
蛋白質濃度（mg/ml）
0
20
200
0
1
19
200
0.025
2
18
200
0.05
4
16
200
0.1
8
12
200
0.2
12
8
200
0.3
16
4
200
0.4
20
0
200
0.5
上述試劑加完後，准確吸取20μl樣品溶液於酶標孔中，加入BCA試劑200μl，輕搖，於37℃保溫30-60min，冷卻至室溫後，以空白為對照，在酶標儀上590nm處比色，以牛血清白蛋白含量為橫坐標，以吸光值為縱坐標，繪制標准曲線。以標准曲線空白為對照，根據樣品的吸光值從標准曲線上查出樣品的蛋白質含量。

❹ 蛋白質濃度測定方法

蛋白質濃度測定方法：UV法，BCA法，考馬斯亮藍法等。

3、考馬斯亮藍法。

考馬斯亮藍 (Coomassie Brilliant Blue) 法測定蛋白質濃度，是利用蛋白質―染料結合的原理，定量測定微量蛋白濃度快速、靈敏的方法。這種蛋白質測定法具有超過其他幾種方法的突出優點，因而正在得到廣泛的應用。目前，這一方法是也靈敏度最高的蛋白質測定法之一。

考馬斯亮藍G-250染料，在酸性溶液中與蛋白質結合，使染料的最大吸收峰 (lmax) 的位置，由465nm變為595nm，溶液的顏色也由棕黑色變為藍色。通過測定595nm處光吸收的增加量可知與其結合蛋白質的量。研究發現，染料主要是與蛋白質中的鹼性氨基酸（特別是精氨酸）和芳香族氨基酸殘基相結合。