㈠ 多巴胺怎麼檢查
99mTc-TRODAT-1人腦多巴姿掘飢胺轉運體顯像初步研究
中國神經精神疾病雜志 2000年第4期第26卷 論著與學術交流
作者:胡平?陳玲 張海琴 黎錦如 李為民 李春億 吳克寧
單位:中山醫科大學附屬第一醫院核醫學科510080
關鍵詞: 多巴胺轉運體;帕金森病;單光子發射型計算機斷層;放射性核素
Preliminary study of ?99mTc-TRODAT-1 DAT SPECT in human brain
Hu Ping Chen Ling Zhang Haiqin Li Jinru Li Weimin Li Chunyi Wu Kening
(Nuclear Medicine Department, The First Affiliated Hospital of Sun Yat-sen University of Medical Sciences. Guangzhou. 510080. Tel:)
【Abstract】Objective To investigate the feasibility of using ?99mTc-TRODAT-1 DAT SPECT in human brain DAT assessment, and to explore the clinical application values evaluation of ?99mTc-TRODAT-1 DAT SPECT in Parkinson?s disease(PD). Methods Using ?99mTc-TRODAT-1 as radiopharmaceuticals for DAT SPECT, we acquired SPECT images of normal control and of patients with PD.Results Normal human brain SPECT image were acquired 30 min after injection. The images was similar with regional cerebral flow (rCBF) image; 3~5 hours after injection, the basal ganglia (BG) had substantial radioactivity uptake, but there were relatively less radioactivities in cortex and cerebellum. In PD SPECT image, the radioactivity uptake of BG had decreased in accordance with the disease severity. Conclusions 99mTc-TRODAT-1 may be a good radiopharmaceuticals for human brain DAT SPECT study, the preliminary results suggest that ?99mTc-TRODAT-1 DAT SPECT has clinical application values in the diagnosis and disease severity assessment for PD.
【Key words】 TRODAT-1 dopamine transporter Parkinson?s disease Single-disease emission compute tomography Radionuclide▲
近些年來,用正電子發射跡返計算機斷層(PET)及單光子發射計算機斷層(SPECT)進行人腦中樞多巴胺轉運體(dopamine transporter, DAT)顯像,對與DAT改變相關聯的疾散飢病如帕金森病(PD)進行研究,探討DAT核素顯像的臨床應用價值,是神經核醫學研究的熱門領域之一。目前,已有許多核素顯像葯物問世,如〔11C〕CFT、〔11C〕methylphenidate〔1〕、〔123I〕β-CTT,〔123I〕IPT〔2~6〕,這些顯像葯物都表現出對DAT有高的親和性及很好的顯像特性。但由於上述顯像葯物所用的放射性核素123I,11C均需要用加速器生產,而限制了在常規臨床檢查中的應用。Kong HF, Kong MP等於1996年成功合成了99Tcm-2β-〔N,N′-雙(2-巰乙基)乙撐二胺基〕甲基,3β-(4-氯苯基)托烷(99mTc-TRODAT-1),動物實驗研究表現出了高的DAT親和性,並獲得了較理想的人腦DAT SPECT圖像〔7~9〕,使利用DAT核素顯像用於常規臨床應用研究成為可能。方平等1999年在國內首先合成了99mTc-TRODAT-1,動物實驗研究獲得了與Kong一致的結果〔10〕。本文將報道我們利用99mTc-TRODAT-1進行人腦DAT SPECT顯像研究的初步結果。
1 資料和方法
1.1 99mTc-TRODAT-1的制備 葯盒由江蘇無錫原子醫學研究所衛生部國家重點實驗室提供,每瓶含TRODAT-1 15μg,取一瓶注入新鮮99mTc 3?700 MBq(體積1~2 mL),充分搖勻,煮沸30 min,置室溫下冷卻。用方平〔10〕方法進行標記率及放化純檢測,標記率、99mTc-TRODAT-1放化純均大於90%。
1.2 研究對象 PD患者?10例,由我院神經科按CAPIT(core assessment program for intracerebral transplantations)標准〔11〕作出診斷,年齡60~77歲,病情(改良Hoehn-Yahr分級)Ⅱ~Ⅲ級,病程2~10年,平均4.3年。正常志願者8人,年齡28~73歲,其中男6人,女2人。
1.3 SPECT顯像方法 受試者空腹口服過氯酸鉀?400 mg,0.5~1.0小時後由肘靜脈注射99mTc-TRODAT-1 740 MBq,立即用TOSHIBA GCA-7 200 D/I SPECT,配低能高分辨扇形孔準直器(L.E.S.H.R.-(N.1)Fanbeam),進行SPECT數據採集和全身掃描,3~4小時後重復進行一次SPECT數據採集和全身掃描。採集能峰為140 Kev,窗寬20%,矩陣128×128,探頭旋轉360°,每6°採集1幀,共60幀,採集時間每幀20~30 s。圖像重建前濾波用Butterworth濾波器(Order=8,fc=0.1~0.17),重建濾波用Ramp濾波器;衰減校正採用Chang方法,衰減校正系數為0.15 cm-1;用OM線進行校正後分別重建橫、矢和冠狀三維層面。
2 結果
2.1 正常圖像 靜脈注射99mTc-TRODAT-1後立即進行SPECT數據採集、重建所得到的圖像與99mTc-ECD局部腦血流(rCBF)SPECT圖像基本一致,見圖1。提示該復合物迅速通過血腦屏障在腦內濃聚。3~4小時SPECT顯像,多巴胺轉運體含量豐富的基底節顯示出高度的放射性攝取,而腦內多巴胺轉運體含量低或不存在多巴胺轉運體的其它結構部分和小腦僅有少量或無明顯放射性濃聚;SPECT圖像顯示,雙側基底節放射性影像清晰,形態、大小對稱,放射性分布均勻;見圖2。這一結果提示,利用99mTc-TRODAT-1進行SPECT顯像能較好的顯示紋狀體多巴胺轉運體的數量及分布情況。放射性葯物注射後早期全身掃描可見肝、肺、肌肉等有較多的放射性攝取,後期腸道有大量的放射性濃聚,提示99mTc-TRODAT-1經肝臟攝取,分泌入膽道,經腸道排泄可能是其主要排泄途徑。
2.2 PD腦99mTc-TRODAT-1 DAT SPECT圖像 根據病人病情、病程不同,10例病人其基底節放射性攝取量皆有不同程度減少,病程短、病情輕(病程2~5年,病情Ⅱ級,6例),基底節放射性攝取降低為局灶性,表現為基底節變形、放射性分布不均勻;病程長、病情嚴重者(病程6~10年,病病Ⅲ級,4例),基底節放射性攝取呈彌漫性降低,甚至無明顯放射性攝取,提示DAT數量與功能受到嚴重損害;兩側基底節放射性攝取降低的程度與其病情的嚴重程度也明顯相關,病情較嚴重、病程較長的一側放射性攝取下降更明顯,見圖3、4。圖3所示病人,四肢靜止性震顫,其中左側肢體震顫3年,右側肢體震顫2年,行走活動無明顯受限,生活能自理,美多巴治療效果好;99mTc-TRODAT-1 DAT SPECT顯像可見:兩側基底節形態不規整,放射性分布不均勻,放射性攝取明顯減少,兩側比較,左側較右側異常更為顯著,提示雙側基底節DAT數量和功能受損,兩側損害的程度不一致,左側損害較右側為顯著。圖4所示病人,病程10年,運動受限,生活不能自理;99mTc-TRODAT-1 DAT SPECT顯像可見無明顯的基底節放射性影像,提示雙側基底節多巴胺轉運體數量、功能嚴重受損。上述結果提示,99mTc-TRODAT-1 DAT SPECT顯像可為帕金森病的診斷提供客觀依據,並能提供反映病情輕重的客觀指標,具有重要的臨床應用價值。
3 討論
DAT的SPECT功能顯像在臨床上多用於研究和監測多巴胺神經系統變性、衰退紊亂相關的神經精神疾病,包括運動障礙性疾病及精神分裂症等。眾所周知,PD的病因是黑質受損、進行性破壞,導致黑質-紋狀體系統的不可逆衰退。而黑質是多巴胺能神經元最密集的區域,因此,處於多巴胺能神經末梢的DAT能直接反映黑質-紋狀體的病變范圍。在DAT的SPECT顯像研究中,因黑質的DA能神經主要投射到紋狀體,其末梢上的DAT富集於紋狀體,所以一般以基底節紋狀體作為靶區,觀察其放射性數量和分布,而其它部分腦區如枕葉、小腦等處DAT含量少或無,通常作為參照區。人們在實驗中發現,實驗組(病人)的紋狀體放射性攝取率明顯低於對照組(正常人)。與此同時,PD組中,PD中晚期組又明顯低於PD早期組〔12~14〕。我們的初步結果也發現PD患者DAT SPECT圖像與正常志願者有明顯的差別。由上看到,DAT的SPECT顯像能直接反映DAT功能、數量,而且其結果與病情嚴重程度呈平行關系,可作為評價病程的一個重要指標。
DAT的SPECT顯像在運動障礙性疾病的鑒別診斷中亦有十分重要的作用。例如,臨床上很難區分多巴胺反應性肌張力障礙(DRD)和青少年期帕金森病(JPD)。因為兩者均由多巴胺水平低下而出現相似的臨床症狀,且均是青少年期發病。所不同的是兩者病因不同,L-dopa治療效果不同,預後亦不同。DRD的黑質-紋狀體系統是完好的,沒有神經元的進行性衰退及不可逆的變性,亦不存在DAT缺失。然而,JPD屬於PD范疇,是黑質內多巴胺能神經的不可逆變性、破壞致DA低下、DAT進行性缺失。1997年,Jeon BS等人,成功應用〔123I〕β-CIT的SPECT顯像,證明了DRD病人黑質-紋狀體系統中,DAT的功能及數量是正常的。他們發現,PD和JPD病人組紋狀體放射性計數及紋狀體/枕葉計數比值明顯低於正常人組和DRD組,DRD組數據結果與正常人組的幾乎相等。由此證明,SPECT能清楚地、靈敏地區分DRD與JPD、PD〔14〕。
以上研究結果提示DAT的SPECT顯像對研究PD具有廣闊的應用前景。但上述研究所用的顯像用放射性葯物均用放射性核素123I標記,而123I需要用加速器生產,且標記過程復雜,推廣使用困難,因此,研究開發一種理想的DAT SPECT顯像用放射性葯物(特異性高、易推廣使用)十分關鍵。放射性核素99mTc是一種理想的放射性核素,因此研究開發99mTc標記的DAT SPECT顯像葯物十分必要。99mTc-TRODAT-1是一種新的放射性葯物,Kong HF,方平等的動物實驗與正常人研究顯示了較理想的結果〔7~10〕。本文的初步研究結果提示99mTc-TRODAT-1是一種較為理想的DAT SPECT顯像用放射性葯物。
Fig.1 SPECT images with 99mTc-TRODAT-1 normal human brain acquired at 30 min.post-injection The radiocactivity distribution of 99mTc-TRODAT-1 in human brain was similar with SPECT images of regional cerebral blood flow
1 99mTc-TRODAT-1靜脈注射後30分鍾正常人腦SPECT橫斷面圖像放射性分布與局部腦血流分布一致(圖右邊色階不同顏色代表不同
放射性強度,色階從下往上放射性由弱到強,以下相同)。
Fig.2 SPECT images with 99mTc-TRODAT-1 innormal human brain acquired at 3h. post-injection The radioactivity uptake were abundant adn well-distributed in basal ganglia (BGs) There were no differences between both side of BGs .There wer less or no radioactivity uptake in teh other areas of cerebrum adn cerebellum
2 99mTc-TRODAT-1靜脈注射後 3 小時正常人腦 SPECT橫斷面圖像
基底節有大量的放射性攝取(箭頭示BG),雙側基底節對稱,放射性分布均勻;而大腦皮層、小腦等其它結構少或無明顯放射性攝取。
Fig.3 SPECT images with 99mTc-TRODAT-1 in Parkinson's disease brain acquired at 3h post-injection The radioactivity uptake were decreased adn distributed differentily in both side of BGs Teh decrease of radioactivity were more marked in teh right BGs than the left one Teh shapes of both BGs were changed adn not bilateralism
3 99mTc-TRODAT-1靜脈注射後3小時帕金病人腦SPECT橫斷面圖像
雙側基底節放射性攝取減少,右側更明顯,雙側基底節形態不規整 不對稱、放射性分布不均勻。
Fig.4 SPECT images with 99mTc-TRODAT-1in Parkinson's disease brain acpuired at 3h .post -injection There were no radioactivity uptake in BGs which were not displayed clearly
4 99mTc-TRODAT-1靜脈注射後3小時帕金?病人腦 SPECT橫斷面圖像
基底節無放射性攝取,無明確的基底節影像。
㈡ 萊克多巴胺是什麼東西
[鹽酸萊克多巴胺]
鹽酸萊克多巴胺
英文名稱:ractopamine
原料名稱:翻譯成萊克多巴胺也有人翻譯成雷托巴胺
化學名稱:1-(4-羥基苯基)-2[1-甲基-3-(4-羥基苯基)-丙氨基]-乙醇鹽酸鹽
理化性質:可溶於水,微溶於丙酮,可溶於乙醇,PH值:6~7,呈中性,熔點:159.8℃
質量標准:最低含量99%(高壓液相法)
化學分子式:C18H23NO3Cl 分 子 量:337.83
海關編碼:2922.1100
化學分類:苯基乙醇胺類
用途:鹽酸萊克多巴胺是一種醫葯原料,一種可用於治療沖血性心力衰竭症的強心葯。還可以用於治療肌肉萎縮症,增長肌肉,減少脂肪蓄積,並對胎兒和新生兒生長有益。美國FDA在 2000年批准,可以用於動物營養重新配劑,廣泛地用於畜牧業和養殖業。可以同時提高動物的日增重,提高飼料利用率,提高動物的蛋白質含量。
PAYLEAN(萊克多巴胺)對商品豬的影響和利用
商品豬生產者的目的是高效率地生產出瘦肉率高質量好的豬肉以跟其他的動物產品競爭。瘦肉胴體的定價系統導致了對瘦肉生長速度、胴體瘦肉率和飼料報酬的進一步選擇。健康、營養和設備管理策略的推行都是為了盡可能地提高瘦肉生長效率。但是鹽酸克倫特羅在全世界養豬業中的使用都是違法的,最近美國FDA批準的鹽酸萊克多巴胺在豬中使用後,美國養豬戶把使用前後是"黑夜與白天的差別"。應承認鹽酸萊克多巴胺能否在中國批准生產和使用
需大量試驗驗證和相當一段時間。以下敘述權當拋磚引玉!
Paylean是一種飼料添加劑,是美國Elanco Lilly公司的注冊商標並被美國FDA於今年7月份批准生產僅在養豬生產中使用,它能進一步提高肌肉組織生長速度和效率。它含有萊克多巴胺的鹽酸鹽,是提高肌肉蛋白生長和飼料效率的小分子。Ractopamine是phenethanolamines成員之一。Paylean不是一種激素、類固醇、抗生素,也不是生物工程產物。它已經被證實在150~240的最後90磅體重期間的飼料中添加4.5~18克/噸,已經被美國食品葯物管理局廣泛而反復評估了其有效性和安全性。大量的試驗證明ractopamine添加量在18克/噸在商品豬上市前90磅的效果。在這些試驗中,ractopamine提高無脂瘦肉34%。Ractopamine在提高生長速度的同時降低了採食量。第10肋背膘厚降低13.7%,瘦肉量提高11%,屠宰率能從73.3%提高到 74.4%,產生增加1.5%的效果。
生長性能和胴體性能的提高受paylean添加量的影響。飼喂添加4.5克/噸的豬生長速度與飼喂添加9、18克/噸的一樣,而瘦肉率和背膘厚度的改善只有飼喂18克/噸的40~50%。飼喂9克/噸的改善介於4.5與18克/噸之間。
在上市前90磅飼喂paylean,添加20ppm的無脂瘦肉日增量能提高34%,添加 10ppm的無脂瘦肉日增量能提高23.3%。這些結果在上市體重為220~280磅的范圍測驗均是一致的。Paylean對瘦肉生長率的影響在具有不同瘦肉生長潛力的品種間試驗均為一致。包含7個具有完全不同瘦肉率的基因型的研究證實,添加20ppm paylean均對不同基因型豬產生了34%的瘦肉量的提高。所以,它能在高瘦肉率基因型品系產生反應。換句話說,paylean能在高瘦肉率基因型品系豬原來的基礎上額外提高34%的瘦肉率生長。
Paylean對不同胴體測量沒有相同的效應。它對第10肋的背膘厚有巨大的影響。對胴體的組成方面,偏離背中線的第10至最後肋的背膘厚的測定比背中線的具更准確的預測指示作用。Paylean在降低膘厚方面影響不大,但可以大大提高眼肌面積。4.5克/噸的添加水平並沒有明顯降低背膘厚,但已經提高了眼肌面積。
關於ractopamine的研究表明,在上市體重前90磅的活豬對ractopamine的反應並不是恆定的,而是先升高,後達到一個平台,然後再下降。最大的反應是在日增重達到22~26磅或添加20ppm paylean 的19-24天時。
試驗表明,低~中瘦肉率的基因型豬在150~240磅體重時,添加paylean組可以在其瘦肉生長下降時產生提高無脂瘦肉的影響。
與許多胴體改良劑一樣,paylean對無脂瘦肉生長的有利影響需要一定的氨基酸水平。日糧賴氨酸水平和每天賴氨酸攝入量都要有相應的提高。在150~240磅體重范圍可以設計2個賴氨酸水平的日糧。
Paylean 的功能是通過把營養素重分配把脂肪生長轉向瘦肉生長。採食量因商品豬生產環境、品種和季節的不同而異。低能量飼料一般限制瘦肉的生長,但paylean的添加仍可提高34%的無脂瘦肉生長。這就使得其在商業環境中推廣利用更為廣泛。
飼喂paylean的回報在2個方面。其一,提高了生長速度、飼料效率和屠宰率(表4)。所有生產者都可獲得這$3.64的回報。其二,paylean最大的優勢是能獲得額外的10.45磅的無脂瘦肉生長,這可以帶來$9~11。Ractopamine 改變了瘦肉的分布,提高了後腿瘦肉的比率。當然評估瘦肉增量仍有不少困難。因為它才使最後肋的背膘厚降低0.03inches 。即使光學測量儀和標准胴體也只能預測paylean的一半反應。
Ractopamine的最適用量和銷售策略將由添加ractopamine通過不同質量的胴體定價系統,為養豬生產者帶來的額外收益決定,當瘦肉比肥肉的價格高得多時,paylean 的用量和使用期就可以增加。飼料成本、市場價格和豬肉加工定價系統均影響paylean的最佳添加量。已經證實Paylean 對豬肉品質有很小的影響,Ractopamine 在提高肌肉中的蛋白質含量時也提高了後腿的可加工比例。豬肉風味鑒定小組發現paylean的與對照組的多汁性、風味和嫩度均無區別,有2個試驗表明添加後能使豬肉產生略高的剪切力。就瘦肉生長速度、瘦肉飼料轉化率和胴體瘦肉率而言,Paylean的最適添加量和添加時機取決於胴體瘦肉的定價,主要是因添加Paylean而獲得的額外瘦肉的報酬來決定。
萊克多巴胺的含量檢測
一、液相方法
試劑和溶液
乙腈和甲醇:色譜純;
甲醇、二氯甲烷、正已烷:分析純;
2%冰乙酸:取5ml 冰乙酸,用水定容到250ml。
提取液:取900ml甲醇,用水定容到1000ml,再加2ml濃鹽酸,混勻。
流動相:取320ml乙腈,用水定容到1000ml,再加20ml冰乙酸和0.87g戊烷磺酸鈉,混勻。
萊克多巴胺標准貯備液:准確稱取萊克多巴胺(純度≥99%)0.1000g,置於100ml容量瓶中,用甲醇溶解,定容,其濃度1000μg/ml的貯備液,置4℃冰箱中保存。
萊克多巴胺標准工作溶液:分別准確吸取一定量的標准貯備液,置於10ml容量瓶中,用2%冰醋酸稀釋、定容,配製成濃度為0.01μg/ml、0.1μg/ml、0.2μg/ml、0.5μg/ml、1.0μg/ml、2.0μg/ml的標准溶液,分別進HPLC檢測。
儀器和設備
高效液相色譜儀:配熒光檢測器;
離心機;
振盪器;
微孔濾膜(0.45μm)。
HPLC色譜條件
色譜柱:C18柱,250×4.6mm(i.d),粒徑5μm;
柱溫:室溫;
動相:320ml乙腈+680ml超純水+20ml冰乙酸+0.87g戊烷磺酸鈉;
激發波長:226nm
發射波長:305nm。
㈢ 萊克多巴胺檢測卡快速檢測獸葯的檢測原理
萊克多巴胺檢測卡快速檢測獸葯的野斗檢測原理:樣品溶液滴入樣品孔後,樣品溶液中的萊克多巴胺與金標抗體相結合,阻止金標抗體與纖維素膜上萊克多巴胺偶聯物結合。當樣品溶液中的萊克多巴胺含量大於檢測限時檢測頌數磨線不顯色,畢橡結果為陽性。當樣品溶液中萊克多巴胺含量小於檢測限時檢測線顯紫紅色,結果為陰性。萊克多巴胺快速檢測卡用於檢測尿液、組織、飼料中萊克多巴胺殘留。
㈣ 多巴胺的含量測定
對照品溶液的制備:取鹽酸多巴胺對照品約0.1g,精鎮沖密稱定,置於100ml 量瓶中,用硫酸溶液(1→350)溶解並稀釋至刻度,搖勻,即得。
供試品溶液的制備:精密量取該品10ml,置100ml 量瓶中,用硫酸溶液(1→350)稀伏基釋至刻度,搖勻,即得。
測定法:精密量取對照品溶液與供試品溶液各5ml ,分別置100ml 量瓶中,各加新制的硫酸亞鐵-酒石酸鹽溶液(取硫酸亞鐵1g,加酒石酸鉀鈉2g與亞硫酸氫鈉0.1g,用水稀釋至1000ml)5ml ,再加緩沖液(取醋酸銨50g ,溶於20%乙醇御廳殲1000ml中,並以氨試液調節pH值至8.5 )稀釋至刻度,搖勻,照分光光度法(附錄Ⅳ B),在520nm 的波長處分別測定吸收度,計算,即得。
㈤ 求助一份萊克多巴胺試劑盒說明書
萊克多巴胺(Ractopamine)快速檢測試劑盒說明書
本試劑盒採用間接競爭ELISA方法檢測豬尿和豬肝等樣本中的萊克多巴胺,在微孔條上預包被上偶聯抗原,樣本中的萊克多巴胺將和微孔條上預包被偶聯抗原競爭抗萊克多巴胺抗體,加入酶標二抗後,用TMB底物顯色,樣本吸光值與其所含萊克多巴胺量成負相關,與標准曲線比較即可得出萊克多巴胺含量。
一、概要簡介
萊克多巴胺(Ractopamine)屬於beta興奮劑, β-興奮劑是營養重分配劑一種,是一類結構和功能類似腎上腺素和去甲腎上 腺素的苯乙醇胺類衍生物,它可以加快畜禽生長速度,降低酮體脂肪含量,提高瘦肉率。在歐盟β-興奮劑已被禁止用於家禽的生長促進劑,我國在《禁止在飼料和動物飲用水中使用的葯物品種目錄》中也有明文規定, 但由於萊克多巴胺屬於非處方葯,且價格遠低於克侖特羅,因此其非法應用者不斷增多。我公司研製的萊克多巴胺ELISA快速檢測試劑盒可用於動物組織、飼料、尿液中萊克多巴胺的殘留檢測。
試劑盒特性:
試劑盒靈敏度 0.5ppb
樣本回收率:
尿樣…………………………… 80%±10%
肌肉肝臟……………………… 75%±10%
飼料…………………………… 60%——120%
交叉反應率:
萊克多巴丁胺 ………………………22.3%
二、試劑盒組成
1、 96孔板酶標板 X 1塊
2、 標准液X6瓶,800l/瓶,為Ractopamine水溶液 : 0ng/ml, 0.5ng/ml,1.5ng/ml, 4.5ng/ml,13.5ng/ml,40.5ng/ml
3、酶標記物12ml ………………………………紅色帽
4、Ractopamine抗體 7ml…………………………綠色帽
5、底物液 A液 7ml………………………………白色帽
6、底物液 B液 7ml………………………………紅色帽
7、終止液 7ml………………………………黃色帽
8、20倍濃縮洗滌液 40ml…………………………透明帽
9、4倍濃縮復溶液50ml …………………………透明帽
三、操作步驟
樣本處理
檢測室須具備的儀器:
——均質器
——振盪器
——離心機
——20l,50l,100l,200l微量加樣器
試劑
——甲醇
——乙醇
——二氯甲烷
配液:
buffer 1:
無水Na2CO3 48g
NaCL 15g
去離子水 100ml
1 尿樣本處理
尿樣不用處理,清亮尿樣,用試劑盒提供的緩沖液以1:10倍稀釋後,取50l進行測定,暫不使用的樣品應冷凍保存。
註:樣本被稀釋了10倍,尿液中檢測下限為10ppb(因部份樣本存在一定的雜質干擾)
2 組織樣本
1)稱取組織3g±0.1g ,加入無水乙晴9ml, 充分振盪10min。
2) 3000g ,15℃以上離心10min 。取上清夜3ml.在氮氣流下吹乾。
3)加入(buffer 1) 1ml混合後,加入3ml異丁醇振盪萃取5min,3000g ,15℃以上離心5min,取出上層有機相,再加入3ml異丁醇振盪萃取5min 。合並兩次萃取的有機相,氮氣流下吹乾。
4)用2ml 已稀釋了的復溶液溶解,取50l進行分析。
註:樣本被稀釋了2倍,檢測下限為1ppb
3 飼料樣本
1)准確稱取2.0±0.1g飼料於40ml離心管中。
2)加入10ml甲醇:乙醇(1:1;V/V),充分振盪10min, 4000rpm離心10min。
3)取上清2ml,氮氣吹乾。
4)加入1ml二氯甲烷,溶解殘留物,再加入1ml 復溶液,充分混合5min,10000rpm離心10min,取上層液用試劑盒提供的緩沖液根據飼料的種類來進行不同倍數的稀釋。
配合料按1:10倍稀釋,濃縮料、預混料按1:30倍進行稀釋,然後取50l用於ELISA分析。
註: 配合料被稀釋了50倍。檢測下限為25ppb
濃縮料、預混料被稀釋了150倍.檢測下限75ppb
四、酶標免疫分析程序
1、將試劑盒從冷藏環境中取出並將所需試劑從盒中取出,置於室溫(20-24℃)平衡30min以上, 注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
2、配液:將40ml濃縮洗滌液(20倍濃縮)用蒸餾水或去離子水稀釋至800ml備用。(按需量稀釋)
3、取出需要數量的微孔板及框架,將不用的微孔板放入自封袋,保存於2-8℃不要冷凍。
4、編號:將樣品和標准品對應微孔按序編號,每個樣品和標准品均需做2孔。
5、用加樣器每孔加標准品或樣本50l 後,每孔再加50l抗體溶液。
6、用蓋板膜蓋板後置於25℃環境反應1h。
7、小心揭開蓋板膜,將孔內液體甩干,用洗滌液每孔250l充分洗滌4-5次,每次間隔15-30秒,用吸水紙拍干。
8、加酶標記物:每孔加入100l。用蓋板膜蓋板後置25℃
環境反應30min,取出重復第7步。
9、顯色:每孔加入底物液A液50l,再加底物液B液50l,輕輕振盪混勻25℃環境避光顯色30min。
10、測定:每孔加入終止液50l,輕輕振盪混勻,設定酶標儀於450nm處(建議用雙波長450/630nm檢測),測定每孔OD值。
四、結果
結果判定有兩種方法,粗略判定可用第1種方法,定量判定用第2種方法。注意樣本吸光值與其所含萊克多巴胺量成負相關。
1、用樣品的平均吸光度值與標准值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設樣品1的吸光度值為0.301, 樣品2的吸光度值為0.812, 標准品吸光度值分別是:0ng/ml為1.500;0.5ng/ml為1.280;1.5ng/ml為1.080; 4.5ng/ml為0.710; 13.5ng/ml為0.405;40.5ng/ml為0.250。則樣品1的濃度范圍是13.5ng/ml-40.5ng/ml; 樣品2的濃度范圍是1.5ng/ml-4.5ng/ml。
2、所獲得的每個濃度標准溶液和樣本吸光度值的平均值(B)除以第一個標准(0標准)的吸光度值(B0)再乘以100%,即百分吸光度值。
B
百分吸光度值(%)= — ×100%
B0
B—標准溶液或樣本溶液的平均吸光度值
B0—0µg/L標准溶液的平均吸光度值
以萊克多巴胺濃度(µg/L)的自然對數值為X軸,百分吸光度值為Y軸,繪制標准曲線圖。相對應每一個樣品的濃度(µg/L)可以從標准曲線上讀出。也可以用回歸方程法,計算出樣本溶液濃度。利用計算機專業軟體,更便於大量樣品的快速分析。
五、注意事項
1、室溫低於20℃或試劑及標本沒有回到室溫(20-24度)會導致所有標準的OD值偏低(非常關鍵)。
2、在洗板過程中如果出現板孔乾燥的情況,則會出現標准曲線不成線性,重復性不好的現象。所以洗板拍干後應立即進行下一步操作。(非常重要)
3、混合要均勻,洗板要徹底,在EIA分析中的再現性,很大程度上取決於洗板的一致性(非常重要)。
4、反應終止液為2M硫酸,避免接觸皮膚。
5、不要使用過了有效日期的試劑盒,稀釋或攙雜使用會引起靈敏度的降低。不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。
6、儲存條件
保存試劑盒於2-8℃,不要冷凍,將不用的微孔板放進自封袋重新密封。標准物質和無色的發色劑對光敏感,因此要避免直接暴露在光線下。
7、試劑變質的跡象
發色試劑有任何顏色表明發色劑變質,應當棄之。
0標準的吸光度 (450/630nm)值小於0.5個單位(A450nm<0.5 )時,表示試劑可能變質。
㈥ 多巴胺的各種性質(如物理、化學、作用機理)
多巴胺是一種神經傳導物質,用來幫助細胞傳送脈沖的化學物質。這種腦內分泌主要負責大腦的情慾,感覺,將興奮及開心的信息傳遞,也與上癮有關。多巴胺(dopamine)是NA的前體物質,是下丘腦和腦垂體腺中的一種關鍵神經遞質適用於心肌梗死、創傷、內毒素敗血症、心臟手術、腎功能衰竭、充血性心力衰竭等引起的休克綜合症常用其鹽酸鹽,為白色或類白色有光澤的結晶;無臭,味微苦;露置空氣該品為體內合成去甲腎上腺素的前體,具有β受體激動作用,也有一定的α受坦裂體激動作用。能增強心肌收縮力,增加排血量,加快心率殲數作用較輕微(不如異丙腎上腺素明顯);對周圍血管有輕度收縮作用,升高動脈壓,對內臟血管(腎、腸系膜、冠狀動脈)則讓改閉使之擴張,增加血流量;使腎血流量及腎小球濾過率均增加,從而促使尿量及鈉排泄量增多。用於各種類型休克,包括中毒性休克丶心源性休克、出血性休克、中樞性休克、特別對伴有腎功能不全、心排出量降低、周圍血管阻力較低並且已補足血容量的病人更有意義。DARPP-32基因有三種變體:TT TC CC,這些變體決定大腦中多巴胺的水平。中及遇光色漸變深。在水中易溶,在無水乙醇中微溶,在氯仿或乙醚中極微溶解。熔點128℃(分解)。
㈦ 多巴胺的化學性質是什麼
多巴胺(Dopamine) (C6H3(OH)2-CH2-CH2-NH2) 是一種腦內分泌,可影響一個人的情緒。 它正式的化學名稱為4-(2-乙胺基)苯-1,2-二醇,簡稱「DA」。Arvid Carlsson確定多巴胺為腦內信息傳遞者的角色使他贏得了2000年諾貝爾醫學獎。多巴胺是一種神經傳導物質,用來幫助細胞傳送脈沖的化學物質。這種腦內分泌主要負責大腦的情慾,感覺,將興奮及開心的信息傳遞,也與上癮有關。愛情其實就是腦里產生大量多巴胺作用的結果。所以,吸煙和吸毒都可以增加多巴胺的分泌,使上癮者感到開心及興奮。根據研究所得,多巴胺能夠治療抑鬱症;而多巴胺不足則會令人者或旦失去控制肌肉的能力,嚴重會令病人的手腳不自主地震動或導致帕金森氏症。最近,有科學家研究出多巴胺可以有助進一步醫治柏金遜症。治療方法在於恢復腦內多巴胺的水準及控制病情。
常用其鹽酸鹽,為白色或類白色有光澤的結晶;無臭,味微苦;露置空氣中及遇光色漸變深。在水中易溶,在無水乙醇中微溶,在團租氯仿或乙醚中極微溶解。熔點243℃-249℃(分解)。首擾
㈧ 多巴胺分子中羥基處於苯環上不同位置時的同分異構體共有幾種
多巴胺編輯 鎖定
多巴胺是一種神經傳導物質,用來幫助細胞傳送脈沖的化學物質。這種腦內分泌物和人的情慾、感覺有關,它傳遞興奮及開心的信息。另外,多巴胺也與各種上癮行為有關。Arvid Carlsson確定多巴胺為腦內信息傳遞者的角色,使他贏得了2000年諾貝爾醫學獎。2012年有科學家研究出多巴胺可以有助進一步醫治帕金森症。治療方法在於恢復腦內多滾告巴胺的水準及控制病情。德國研究人員稱,多巴胺有助於提高記憶力,這一發現或有助於阿爾茨海默氏症的治療[1] 。中文名4-(2-乙胺基)苯-1,2-二酚英文名Dopamine別稱多巴胺化學式C8H11O2N分子量153.18CAS登錄號51-61-6熔點128°C水溶性易溶外語縮寫DA漢語拼音ō bā àn㈨ 萊克多巴胺是什麼東西
萊克多巴胺是一種人工合成的β-腎上腺受體激動劑(俗稱β-興奮劑)類化合物,是由美國制葯公司研究出的毒性小、代謝快的克倫特羅替代品,屬於第二代瘦肉精。
因其具有調節蛋白質合成的作用,國外也稱為蛋白質再分配劑(Repartitioner),在臨床上主要用於治療支氣管哮喘、充血性心力衰竭症和肌肉萎縮症等。
(9)多巴胺的性質檢測方法擴展閱讀
萊克多巴胺的毒性遠低於具有相同功能的其它瘦肉精添加物。常規劑量的瘦肉精類葯物可在機體內被代謝並排出體外,不會對機體造成傷害,
但過量攝入萊克多巴胺,人體會出現不同程度的中毒反應,其症狀與動物中毒症狀相似,表現為肌肉震顫、四肢麻痹、心動過速、心律失常、腹痛、肌肉疼痛、惡心眩暈等症狀,重者可引發高血壓、心臟病甚至死亡。
當萊克多巴胺的使用量為臨床使用量的5~10倍時,可以增加胴體蛋白質含量、減少脂肪組織,有效提高瘦肉率和飼料利用率。
參考資料來源:中國淮濱-關於「萊克多巴胺」的科學解讀