流感igm抗體檢測方法

① 流行性感冒要點

  最近流感爆發，疾控又開始緊張，開始各種培訓，提高大家意識，也算是記錄培訓筆記了。

流行性感冒

      (以下簡稱流感)是由流感病毒引起的一種急性呼吸道傳染病,在世界范圍內引起暴發和流行。流感起病急,雖然大多為自限性,但部分因出現肺炎等並發症可發展至重症流感,少數重症病例病情進展快,可因急性呼吸窘迫綜合征(ARDS)和/或多臟器衰竭而死亡。重症流感主要發生在老年人、年幼兒童、孕產婦或有慢性基礎疾病者等高危人群,亦可發生在一般人群。

      2017年入冬以來,我國南北方省份流感活動水平上升較快,當前處於冬季流感流行高峰水平。全國流感監測結果顯示,流感樣病例就診百分比和流感病毒檢測陽性率均顯著高於過去三年同期水平,流感活動水平仍呈現上升態勢,本次冬季流感活動強度要強於往年。

      為進一步規范和加強流感的臨床管理,減少重症流感發生、降低病死率,在《甲型H1N1流感診療方案(2009年第三版)》和《流行性感冒診斷與治療指南(2011年版)》的基礎上,結合近期國內外研究成果及我國既往流感診療經驗,制定本診療方案。

1、病原學

    流感病毒屬於正粘病毒科,為RNA病毒。根據核蛋白和基質蛋白分為甲、乙、丙、丁四型。

    目前感染人的主要是甲型流感病毒中的H1N1、H3N2亞型及乙型流感病毒中的Victoria和Yamagata系。

    流感病毒對乙醇、碘伏、碘酊等常用消毒劑敏感;對紫外線和熱敏感,56℃條件下30分鍾可滅活。

2、流行病學

(一)傳染源

    流感患者和隱性感染者是流感的主要傳染源。從潛伏期末到急性期都有傳染性。受感染動物也可成為傳染源,人感染來源動物的流感病例在近距離密切接觸可發生有限傳播。

    病毒在人呼吸道分泌物中一般持續排毒3-6天,嬰幼兒、免疫功能受損患者排毒時間可超過1周,人感染H5N1/H7N9病例排毒可達1~ 3周。

(二)傳播途徑

    流感主要通過打噴嚏和咳嗽等飛沫傳播,也可經口腔、鼻腔、眼睛等黏膜直接或間接接觸傳播。接觸被病毒污染的物品也可引起感染。人感染禽流感主要是通過直接接觸受感染的動物或受污染的環境而獲得。

(三)易感人群

    人群普遍易感。接種流感疫苗可有效預防相應亞型的流感病毒感染。

(四)重症病例的高危人群

    下列人群感染流感病毒,較易發展為重症病例,應給予高度重視,盡早(發病48小時內)給予抗病毒葯物治療,進行流感病毒核酸檢測及其他必要檢查。

1.年齡<5歲的兒童(年齡<2歲更易發生嚴重並發症);

2.年齡≥65歲的老年人;

3.伴有以下疾病或狀況者:慢性呼吸系統疾病、心血管系統疾病(高血壓除外)、腎病、肝病、血液系統疾病、神經系統及神經肌肉疾病、代謝及內分泌系統疾病、免疫功能抑制(包括應用免疫抑制劑或HIV感染等致免疫功能低下);

4.肥胖者[體重指數(body mass index,BMI)大於30,BMI=體重(kg)/身高 (m) 2];

5.妊娠期婦女。

3、發病機制及病理

(一)發病機制

    甲、乙型流感病毒通過HA結合呼吸道上皮細胞含有唾液酸受體的細胞表面啟動感染。流感病毒通過細胞內吞作用進入細胞,病毒基因組在細胞核內進行轉錄和復制。復制出大量新的子代病毒顆粒。流感病毒感染人體後,可以誘發細胞因子風暴,導致全身炎症反應,出現ARDS、休克及多臟器功能衰竭。

(二)病理改變

    病理變化主要表現為呼吸道纖毛上皮細胞呈簇狀脫落、上皮細胞化生、固有層粘膜細胞充血、水腫伴單核細胞浸潤等病理變化。重症肺炎可發生彌漫性肺泡損害。合並腦病時出現腦組織彌漫性充血、水腫、壞死。合並心臟損害時出現心肌細胞腫脹、間質出血,淋巴細胞浸潤、壞死等炎症反應。

4、臨床表現和實驗室檢查

  潛伏期一般為1-7天,多為2-4天。

(一)臨床表現

    主要表現為發熱、頭痛、肌痛和全身不適起病,體溫可達39-40℃,可有畏寒、寒戰,多伴全身肌肉關節酸痛、乏力、食慾減退等全身症狀,常有咽喉痛、乾咳,可有鼻塞、流涕、胸骨後不適等。顏面潮紅,眼結膜充血。部分以嘔吐、腹痛、腹瀉為特點,常見於感染乙型流感的兒童。

    無並發症者病程呈自限性,多於發病3-4天後體溫逐漸消退,全身症狀好轉,但咳嗽、體力恢復常需1-2周。

(二)並發症

    肺炎是流感最常見的並發症,其他並發症有神經系統損傷、心臟損害、肌炎、橫紋肌溶解綜合征和膿毒性休克等。

(三)實驗室檢查

1.外周血常規:白細胞總數一般不高或降低,重症病例淋巴細胞計數明顯降低。

2.血生化:部分病例出現低鉀血症,少數病例肌酸激酶、天門冬氨酸氨基轉移酶、丙氨酸氨基轉移酶、乳酸脫氫酶、肌酐等升高。

3.病原學相關檢查:

(1)病毒核酸檢測:以RT-PCR(最好採用real-time RT-PCR)法檢測呼吸道標本(咽拭子、鼻拭子、鼻咽或氣管抽取物、痰)中的流感病毒核酸。病毒核酸檢測的特異性和敏感性最好,且能區分病毒類型和亞型。(2)病毒抗原檢測(快速診斷試劑檢測):快速抗原檢測方法可採用膠體金和免疫熒光法。由於快速抗原檢測的敏感性低於核酸檢測,因此對快速抗原檢測結果的解釋應結合患者流行病史和臨床症狀綜 合考慮。

(3)血清學檢測:檢測流感病毒特異性IgM和IgG抗體水平。動態檢測的IgG抗體水平恢復期比急性期有4倍或以上升高有回顧性診斷意義。

(4)病毒分離培養:從呼吸道標本中分離出流感病毒。在流感流行季節,流感樣病例快速抗原診斷和免疫熒光法檢測陰性的患者建議也作病毒分離。

(四)影像學表現並發肺炎者影像學檢查可見肺內斑片狀、磨玻璃影、多葉段滲出性病灶;進展迅速者,可發展為雙肺彌漫的滲出性病變或實變,個別病例可見胸腔積液。

兒童病例肺內片狀影出現較早,多發及散在分布多見,易出現過度充氣,影像學表現變化快,病情進展時病灶擴大融合,可出現氣胸、縱隔氣腫等徵象。

5、診斷

診斷主要結合流行病學史、臨床表現和病原學檢查。

(一)臨床診斷病例

出現上述流感臨床表現,有流行病學證據或流感快速抗原檢測陽性,且排除其他引起流感樣症狀的疾病。

(二)確定診斷病例

有上述流感臨床表現,具有以下一種或以上病原學檢測結果陽性:

1.流感病毒核酸檢測陽性(可採用real-time RT-PCR和RT-PCR 方法)。

2.流感病毒分離培養陽性。

3.急性期和恢復期雙份血清的流感病毒特異性IgG抗體水平呈4倍或4倍以上升高。

6、重症與危重病例

(一)出現以下情況之一者為重症病例

1.持續高熱>3天,伴有劇烈咳嗽,咳膿痰、血痰,或胸痛;

2.呼吸頻率快,呼吸困難,口唇紫紺;3.神志改變:反應遲鈍、嗜睡、躁動、驚厥等;

4.嚴重嘔吐、腹瀉,出現脫水表現;

5.合並肺炎;

6.原有基礎疾病明顯加重。

(二)出現以下情況之一者為危重病例

1.呼吸衰竭;

2.急性壞死性腦病;

3.膿毒性休克;

4.多臟器功能不全;

5.出現其他需進行監護治療的嚴重臨床情況。

7、鑒別診斷

(一)普通感冒

流感的全身症狀比普通感冒重;追蹤流行病學史有助於鑒別;普 通感冒的流感病原學檢測陰性,或可找到相應的感染病原證據。

(二)其他類型上呼吸道感染

包括急性咽炎、扁桃體炎、鼻炎和鼻竇炎。感染與症狀主要限於相應部位。局部分泌物流感病原學檢查陰性。

(三)其他下呼吸道感染

流感有咳嗽症狀或合並氣管-支氣管炎時需與急性氣管-支氣管炎相鑒別;合並肺炎時需要與其他肺炎,包括細菌性肺炎、衣原體肺炎、支原體肺炎、病毒性肺炎、真菌性肺炎、肺結核等相鑒別。根據臨床特徵可作出初步判斷,病原學檢查可資確診。

8、治療

(一)基本原則

1.對臨床診斷病例和確診病例應盡早隔離治療。

2.住院治療標准(滿足下列標准1條或1條以上):

(1)妊娠中晚期婦女。

(2)基礎疾病明顯加重,如:慢性阻塞性肺疾病、糖尿病、慢性心功能不全、慢性腎功能不全、肝硬化等。

(3)符合重症或危重流感診斷標准。

(4)伴有器官功能障礙。

3.非住院患者居家隔離,保持房間通風。充分休息,多飲水,飲食應當易於消化和富有營養。密切觀察病情變化,尤其是兒童和老年患者。

4.流感病毒感染高危人群容易引發重症流感,盡早抗病毒治療可 減輕流感症狀,縮短流感病程,降低重症流感的病死率。

5.避免盲目或不恰當使用抗菌葯物。僅在流感繼發細菌性肺炎、中耳炎和鼻竇炎等時才有使用抗生素的指征。

6.兒童忌用阿司匹林或含阿司匹林葯物以及其他水楊酸制劑。

(二)對症治療

高熱者可進行物理降溫,或應用解熱葯物。咳嗽咳痰嚴重者給予止咳祛痰葯物。根據缺氧程度可採用鼻導管、開放面罩及儲氧面罩進行氧療。

(三)抗病毒治療

抗流感病毒治療時機

發病48h內進行抗病毒治療可減少流感並發症、降低住院患者的病死率、縮短住院時間,發病時間超過48h的重症患者依然能從抗病毒治療中獲益。

重症流感高危人群及重症患者,應盡早(發病48h內)給予抗流感病毒治療,不必等待病毒檢測結果;如果發病時間超過48h,症狀無改善或呈惡化傾向時也應進行抗流感病毒治療。無重症流感高危因素的患者,發病時間不足48h,為縮短病程、減少並發症也可以抗病毒治療。

2.抗流感病毒葯物

神經氨酸酶抑制劑(NAI)對甲型、乙型流感均有效。

(1)奧司他韋:成人劑量每次75mg,每日2次,療程5天,重症病例劑量可加倍,療程可延長。腎功能不全者要根據腎功能調整劑 量。1歲及以上年齡的兒童應根據體重給葯:體重不足15Kg者,予30mg每日2次;體重15~23Kg者,予45mg每日2次;體重23~40Kg 者,予60mg每日2次;體重大於40Kg者,予75mg每日2次。對於吞咽膠囊有困難的兒童,可選用奧司他韋顆粒劑。對用葯過程中無效或病情加重的患者,要注意是否出現耐葯。

(2)扎那米韋:適用於於成人及7歲以上青少年,用法:每日2次,間隔12小時;每次10mg(分兩次吸入)。但吸入劑不建議用於重症或有並發症的患者。

(3)帕拉米韋:成人用量為300~600mg,小於30d新生兒6mg/kg, 31-90d嬰兒8mg/kg,91d-17歲兒童10mg/kg,靜脈滴注,每日1次, 1~5天,重症病例療程可適當延長。目前臨床應用數據有限,應嚴密觀察不良反應。

離子通道M2阻滯劑金剛烷胺和金剛乙胺僅對甲型流感病毒有效,但目前監測資料顯示甲型流感病毒對其耐葯,不建議使用。

(四)重症病例的治療

治療原則:積極治療原發病,防治並發症,並進行有效的器官功能支持。

1.如出現低氧血症或呼吸衰竭,應及時給予相應的治療措施,包括氧療或機械通氣等。

2.合並休克時給予相應抗休克治療。

3.出現其他臟器功能損害時,給予相應支持治療。

4.出現繼發感染時,給予相應抗感染治療。

② 流行性感冒的診斷

根據病因、臨床表現及實驗室檢查即可做出診斷。病原學相關檢查：主要包括病毒分離、病毒抗原、核酸和抗體檢測。病毒分離為實驗室檢測的「金標准」；病毒的抗原和核酸檢測可以用於早期診斷；抗體檢測可以用於回顧性調查，但對病例的早期診斷意義不大。1.病毒核酸檢測以RT-PCR（最好採用real-timeRT-PCR）法檢測呼吸道標本（咽拭子、鼻拭子、鼻咽或氣管抽取物、痰）中的流感病毒核酸。病毒核酸檢測的特異性和敏感性最好，且能快速區分病毒類型和亞型，一般能在4-6小時內獲得結果。2.病毒分離培養從呼吸道標本中分離出流感病毒。在流感流行季節，流感樣病例快速抗原診斷和免疫熒光法檢測陰性的患者建議也作病毒分離。3.病毒抗原檢測（快速診斷試劑檢測）快速抗原檢測方法可採用免疫熒光的方法，檢測呼吸道標本（咽拭子、鼻拭子、鼻咽或氣管抽取物中的黏膜上皮細胞），使用單克隆抗體來區分甲、乙型流感，一般可在數小時以內獲得結果。其他還有膠體金試驗，一般能在10～30分鍾獲得結果。對快速檢測結果的解釋應結合患者的流行病史和臨床症狀綜合考慮：在非流行期，陽性篩查結果有可能是假陽性；在流行期，陰性的篩選檢測結果可能是假陰性；這兩種情況均應考慮使用RT-PCR或病毒分離培養作進一步確認。4.血清學診斷檢測流感病毒特異性IgM和IgG抗體水平。動態檢測的IgG抗體水平恢復期比急性期有4倍或以上升高有回顧性診斷意義。

③ 病毒鑒定常用方法有哪些

寨卡病毒病的檢測方法包括病毒核酸檢測、IgM抗體檢測、中和抗體檢測和病毒分離等。寨卡病毒與黃病毒屬其他病毒具有較強的血清學交叉反應，目前主要採用病毒核酸檢測。
開展蚊媒寨卡病毒檢測時，對捕獲的伊蚊成蚊或幼蟲進行病毒核酸檢測。
開展寨卡病毒實驗室檢測時，應同時考慮登革病毒和基孔肯亞病毒感染可能。登革病毒和基孔肯亞病毒實驗室檢測應按照相應的技術指南開展。
（一）臨床標本檢測。
1．病原學檢測
病原學檢測主要適用於急性期血液標本，一般認為發病7天內檢測陽性率高。
（1）核酸檢測：採用熒光定量RT-PCR方法，是目前早期診斷寨卡病毒病的主要檢測手段。
（2）病毒分離：將標本接種於蚊源細胞（C6/36）或哺乳動物細胞（BHK21、Vero）進行分離培養，出現病變以後，用檢測核酸的方法鑒定病毒。也可使用乳鼠腦內接種進行病毒分離。
2．血清學檢測
（1）血清特異性IgM抗體：發病3天後可檢出病毒特異性IgM抗體，但發病7天後檢出率高。可採用ELISA、免疫熒光等方法檢測。IgM抗體陽性，提示患者可能新近感染寨卡病毒，但寨卡病毒IgM抗體與登革病毒、黃熱病毒和西尼羅病毒等黃病毒有較強的交叉反應，易於產生假陽性。
（2）中和抗體：採用空斑減少中和試驗方法檢測。患者恢復期血清中和抗體陽轉或滴度較急性期呈4倍及以上升高，且排除登革、乙腦等其他常見黃病毒感染，可以確診。
（二）媒介標本檢測。
1．標本處理
將分類後的伊蚊成蚊或幼蟲，按照採集地點，每10～20隻為一份進行研磨處理。
2．病毒核酸檢測
用RT-PCR的方法進行寨卡病毒核酸檢測
3．病毒分離
病毒核酸陽性的標本進行病毒分離。

④ 包被抗人igg是間接法還是捕獲法

- 一般來說測血清中IgM抗體有兩種方法即間接法和捕獲法,間接法就是包被抗原,然後用酶標記的抗人IgM抗體檢測血清中IgM,同間接法檢測IgG方法相同。