『壹』 根據檢測原理不同,食品中抗生素殘留的檢測方法可分為哪幾種
分為四種:酶抑制率法 分光光度法 膠體金法 滴定分析法
酶抑制率法
在一定條件下,有機磷和氨基甲酸酯類農葯對膽鹼酯酶正常功能有抑製作用,其抑制率與農葯的濃度呈正相關。正常情況下,酶催化神經傳導代謝產物(乙醯膽鹼)水解,其水解產物與顯色劑反應,產生黃色物質,在412nm處測定吸光度隨時間的變化值,計算出抑制率,通過抑制率可以判斷出樣品中是否有高劑量的有機磷或氨基甲酸酯類農葯的存在。
分光光度法
不同的物質由於其分子結構不同,對不同波長光的吸收能力也不同,因此具有其特有的吸收光譜。即使是相同的物質由於其含量不同,對光的吸收程度也不同。標准曲線法就是利用這一特性來測定物質含量,先配製一系列濃度由小到大的標准溶液,分別測定出它們的A值,以A值為橫坐標,濃度為縱坐標,作標准曲線。在測定待測溶液時,操作條件應與製作標准曲線時相同,以待測液的A值從標准曲線上查出該樣品的相應濃度。
膠體金法
將特異性的抗原或抗體以條帶狀固定在膜上,膠體金標記試劑(抗體或單克隆抗體)吸附在結合墊上,當待檢樣本加到試紙條一端的樣本墊上後,通過毛細作用向前移動,溶解結合墊上的膠體金標記試劑後相互反應,再移動至固定的抗原或抗體的區域時,待檢物與金標試劑的結合物又與之發生特異性結合而被截留,聚集在檢測帶上,產生顯色反應。當光源照射到檢測帶,反射光被收集並轉化為電信號,根據信號的強弱即可判斷被測物質的陰陽性。
滴定分析法
滴定分析法是將一種已知准確濃度的試劑溶液,滴加到被測物質的溶液中,直到所加的試劑與被測物質按化學計量定量反應為止,根據試劑溶液的濃度和消耗的體積,計算被測物質的含量。
『貳』 抗生素檢測的主要方法
由於抗生素在廢水中的濃度相對較低,所以抗生素的檢測一般都是微量或是痕量分析,常採用具有高靈敏度的儀器進行檢測。各研究機構對畜禽廢水中抗生素的檢測技術主要有色譜法和其聯用技術、酶免疫分析法、毛細管電泳法等。 液相色譜法(LC)在廢水抗生素的檢測中是最常見的,LC具有分離效能好,檢測速度快且重現性好的特點。LC法所用的檢測器有紫外檢測器(UV),熒光檢測器,以及二級管陣列檢測器。
高效液相色譜-紫外檢測器
高效液相色譜-紫外檢測器聯用檢測技術是最早用於環境中抗生素的分離檢測,由於其操作簡便以及成本低,被用於畜禽廢水中抗生素的檢測。
液相色譜-熒光檢測器
液相色譜-熒光檢測器因為其檢測限低所以也被用於畜禽廢水中抗生素的檢測,通常對本身具有熒光性的抗生素液相色譜-熒光檢測器可以直接檢測出,但是對於本身不具有熒光性或熒光性差的抗生素,需要對其衍生化來提高目標物的熒光特性以便檢測。
液相色譜串聯質譜技術
色譜可以用於多組分混合物的分離和分析,可以對有機化合物進行定量分析,但是定性較困難,質譜儀能夠對單一組分提供高靈敏度和特徵的質譜圖,但對復雜化合物無分析能力。所以將色譜與質譜進行聯用(或是串聯質譜),對復雜化合物中微量和痕量組分的定性和定量分析具有重要的意義。
由於畜禽廢水中有多種類的抗生素同時存在,利用色譜和質譜的聯用技術可以提高抗生素的定性、定量分析的可靠性、准確性、靈敏度。 酶免疫分析方法具有操作簡單,前處理簡化,分析成本低、靈敏、特異性強、檢測快速,不需要昂貴的儀器等,而且可以同時測定幾個樣品,但是酶免疫分析方法對試劑的選擇性高,很難同時分析多種成分,對結構類似的化合物有一定程度的交叉,分析分子量很小的化合物和不穩定的化合物有一定的困難。
用酶免疫分析方法試劑盒檢測地表水、地下水中的四環素和泰勒菌素,檢測分別為0.05μg/L,0.1μg/L。其結果表明,該方法成本低、檢測快,可用於水中的四環素、氯四環素、泰勒菌素的初篩檢測。 經典的放射免疫測定基本原理和酶免疫分析是相同的,但所不同的是反應的放大指示系統不是酶和底物,而是放射性同位素。用於抗原或抗體標記的同位素通常是放射性較小的β放射原,最常用的是同位素是3H和14C,放射性不強、用量也極微小,比較安全。
『叄』 動植物性食品抗生素殘留的來源有哪些
目前應用於食品中抗生素殘留的檢測方法依據檢測原理的不同主要有:微生物檢測法、理化檢測法和免疫分析法。
1、微生物檢測法
抗生素對微生物機能和代謝具有抑製作用,利銀昌滲用該性質可實現對樣品中抗生素殘留的定性或鋒脊定量分析,而且檢測費用較低,但是花費時間長、特異性差、靈敏度低、對微量殘留檢測易產生誤差。
2、理化檢測法
理化檢測法是一種根據抗生素的分子理化性質對其進行分離和檢測的方法,如色譜法(高效液相色譜法、氣相色譜法、質譜法等)、電泳法(毛細管電泳法等),這種方法檢測靈敏度較高、結果穩定、重復性好、精確可靠,是目前食品中抗生素殘留測定的確證檢測方法,但是為了減少背景干擾樣品前處理方法復雜,分析速度慢,分析儀器昂貴,需要專業的操作人員等缺點限制迅緩了該方法的普遍推廣應用。
『肆』 鯿魚殺死5天檢測出恩諾沙星超標怎麼回事
如果鯿迅瞎魚殺死5天後仍然測出恩諾沙星超標,說明這個魚之前在喂養時飼料里或者投畝跡空放過抗生素州如葯,這個對人體健康是有有影響的,最好不要吃。
『伍』 乳品最好的抗生素檢測方法是什麼啊,急求!!
目前,鮮奶中抗生素殘留的檢測方法大致分為三類:生物測定法、免疫法、理化分析法。下面介紹幾種常用的牛奶中抗生素檢測方法。
(1)TTC法屬生物檢測法:
如果牛奶中含有抗生素,則加入菌種(嗜熱鏈球菌)經培育2.5~3小時後,加入TTC指示劑(三苯基四氮唑)不發生還原反應,所以樣品呈無色狀態;如果牛奶中不含抗生素,則樣品呈紅色.
(2)戴爾沃檢測法:
該法也是生物測定法,是利用微生物—嗜熱芽胞菌在64℃條件下培養2.5~3小時後會產酸,酸引起指示劑BCP(溴甲酚紫)變為黃色;若牛奶樣品中不含抗生素,培養後樣品呈黃色,如樣品中含有抗生素, 指示劑將不變色.
(3)Snap法
檢測結果快速准確, 9分鍾內即可檢測出牛奶中B-內醯胺類、四環素類、磺胺類等抗生素的殘留含量,且有半定量的讀數,可監控牧場用葯的情況;檢測儀器穩定性良好,結果重現性高,整個檢測過程簡單方便;但需購置專用儀器和試劑,成本較高。
(4)高效液相色譜檢測法
它是一種理化檢測方法,一般要經過樣品的提取、脫蛋白、離心、層析柱凈化、衍生化等步驟,能檢測抗生素的具體含量,敏感性較高,但檢測程序復雜,費用較高,需購買色譜儀等檢測設備,不適合小型檢驗室。
(5)納米膠體金層析法
該方法是基於競爭法膠體金免疫層析技術,將檢測液加入試紙卡上的樣品孔,檢測液中的抗生素與金標墊上的金標抗體結合形成復合物,若抗生素在檢測液中濃度低於100ng/mL,未結合的金標抗體流到T區時,被固定在膜上的抗生素BSA偶聯物結合,逐漸凝集成一條可見的T線;若抗生素濃度高於100ng/mL,金標抗體全部形成復合物,不會再與T線處抗生素BSA偶聯物結合形成可見T線。未固定的復合物流過T區被C區的二抗捕獲並形成可見的C線。C線出現則表明免疫層析發生,即試紙有效.結果解釋
陰性:C線顯色,T線肉眼可見,無論顏色深淺均判為陰性。
陽性:C線顯色,T線不顯色,判為陽性。
無效:C線不顯色,無論T線是否顯色,該試紙均判為無效。
保存和穩定性
4-30℃陰涼乾燥處保存,不可冷凍,避免陽光直曬,生產日期起18個月內有效。
納米膠體金層析法適用於樣品的初篩,檢測時間短,出結果速度快,且能在常溫下保存18個月之久,操作簡單,無需任何專業的技術,沒有檢測環境的需求不管是奶農還是奶站工作人員還是專業的檢測人員,都可以方便使用。
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『陸』 抗生素殘留危害這23個真相你必須知道
抗生素濫用和耐葯性一直是人們擔心的話題。抗生素殘留究竟有多大危害?耐葯性又有多大風險?我們一起起來聊聊關於抗生素殘留的23個真相。
1、什麼是獸用抗菌葯?
總有人說我們吃的肉類中有抗生素殘留。抗生素,又叫抗菌葯,包括抗生素和人工合成抗菌葯,它能夠殺死細菌或阻止細菌生長,可用於預防和治療細菌性感染。其中,用在動物身上的抗菌葯就是「獸用抗菌葯」,常使用的包括青黴素、頭孢菌素等抗生素,以及氟喹諾酮類、磺胺類、喹惡林類合成抗生素。
2、畜禽養殖中為什麼要用抗菌葯?
養殖動物使用抗菌葯的初衷和最終目的還是保護人的健康。
當養殖動物抵抗力下降時,致病微生物就會使它們生病。若不及時治療,疾病容易在養殖動物中擴散,嚴重影響動物的健康,導致產品質量下降並降低產量。有時動物生的病還可能傳染給人,例如豬鏈球菌病、豬丹毒等,這些疾病叫「人畜共患病」,對人和動物的健康都謹含賣是巨大威脅。
老派因此,及時、合理的使用抗菌葯, 既可以保障消費者健康,也可以保障產品質量,還可以避免經濟損失。抗菌葯在防治畜禽疾病方面發揮了重要作用,它是當今全球畜禽養殖業大規模、集約化發展的基石之一。
3、為什麼有時候需要同時使用多種抗菌葯?
有時動物感染了多種致病微生物,只使用一種抗菌葯就無法起效,我們就不得不使用多種葯物。實際上,有時兩種抗菌葯同時使用可以起到「互相幫助」的效果,即使用更少的量也能實現更好的抗菌效果,還能降低或避免毒副作用,最典型的例子是青黴素和鏈黴素聯用。另外,多種抗菌葯的聯合打擊還可以防止有「漏網之魚」,避免或延緩細菌耐葯性的產生。
當然,多數情況下只需用一種抗菌葯,聯合用葯僅適用於少數情況,且一般二聯即可,三聯、四聯並無必要。
4、什麼是獸葯殘留?
動物身上使用獸葯後,葯物或其代謝物有可能蓄積或留存在肉和內臟或者進入奶、蛋等畜禽產品,這些進入食品的獸葯就是獸葯殘留。
5、獸葯在動物中的殘留和消除過程是怎樣的?
獸葯在動物體內會經過吸收、分布、代謝和排泄過程。「吸收」、「分布」是葯物進入動物體內發揮作用並殘留的過程。「代謝」、「排泄」是葯物從動物體內清除的過程 。在規范使用的情況下,絕大部分葯物被代謝和排泄掉,在動物體內的殘留水祥逗平很低。
6、什麼是休葯期?
「休葯期」( Withdrawal Time, WDT )是指從動物停止用葯 到 允許上市銷售的 間隔時間。在這段時間里,動物體內的葯物殘留被逐步代謝和排出體外,其殘留水平下降到限量值以下,肉、蛋、奶等動物性食品的安全性得以保障。不同葯物在動物體內代謝的規律不同,因此不同葯物的休葯期也可能不同。
7、抗菌葯殘留是否會危害人體健康?
任何物質都需要達到一定的量才會導致健康危害 。通常情況下,食品中葯物殘留的量很低,一般不足以產生健康危害 。如果獸用抗菌葯殘留達到較高水平且長期攝入,可能帶來過敏反應、慢性毒性、破壞胃腸道菌群平衡等健康影響。
8、什麼是最高殘留限量?
最高殘留限量( Maximum Resie Limits, MRLs )指動物性食品中規定的葯物殘留最高濃度,它是基於一套嚴格且復雜的科學評估程序得出的。由於評估時留下了很大的安全系數,因此按照正常的飲食結構,只要殘留不超標,終生食用都不會對人體健康造成危害。
9、我國的獸葯殘留限量標准情況如何?
我國獸葯殘留限量標准分為四類:
1) 不需要制定最高殘留限量的獸葯 88 種;
2) 需要制定最高殘留限量的獸葯 94 種;
3) 可以用於食品動物,但不得檢出獸葯殘留的獸葯9 9 種。
4) 農業部明令禁止使用的獸葯31 種,比如瘦肉精。
10、國際上獸葯殘留標準的情況如何?
目前國際食品法典(CAC)制定了67種獸葯殘留 限量,並對12個獸葯提出了風險 管理建議。各國結合本國實際,分別制定了本國標准,例如美國已制定 95種獸葯的殘留限量,歐盟有139種。我國獸葯殘留限量標准中有98% 的可比項目已達到或超過國際標准。
11、為何我國獸葯使用量較大?
獸葯的總使用量在很大程度上取決於養殖規模和人口規模 ,因此我國的獸葯總使用量必然比許多國家要高。我國是世界上人口 最多的國家,肉蛋奶的消費量巨大,因此動物養殖規模也十分龐大,2013年全國畜禽出欄和存欄總量已達到:1.5億頭牛、5.6 億只羊、12億頭豬、120 億只禽 。
美國的動物養殖規模世界第二,其獸葯使用量同樣遠高於其他國家。當然,我國養殖業也存在一些獸葯使用不合理或者濫用 的個別情 況,需要進一步加強監管和引導。
12、我國獸葯殘留的狀況如何?
近年來,隨著農產品質量安全監管不斷深入,處罰力度加大,獸葯濫用的情況得到一定的遏制,獸葯殘留的整體狀況較好。例如監測數據顯示,2015 年下半年的畜禽及蜂產品的獸葯殘留合格率達到 99 % 。
13、什麼是耐葯性?
大家最擔心的就是抗生素的耐葯性了。
耐葯性其實跟生物的自然選擇有點類似。隨著葯物的使用,一些細菌逐漸適應並發展出抵抗葯物作用的能力,這就是耐葯性或抗葯性。不僅細菌會產生耐葯性,病毒、寄生蟲、腫瘤細胞等等都會產生耐葯性。
14、細菌為什麼會有耐葯性?
在微生物世界裡,每個細菌都是一個生命個體。好比我們每個人都不同一樣,細菌的本事不完全相同。有些細菌天生「身體好」「本領強」,對某些抗菌葯物就是不敏感。這些細菌就在抗菌葯的威嚴下僥幸逃脫,進而發生自身遺傳改變(基因突變)產生耐葯性。也有些細菌可以向別的細菌拜師學藝,學會耐葯的本領。於是就逐漸產生耐葯性了。
15、耐葯菌的危害表現在哪些方面?
細菌獲得耐葯性後,它的致病性並不會增強,也不會產生新的感染類型。其實,耐葯菌最主要的危害是會給治療帶來困難。如果細菌對多種抗菌葯耐葯,甚至對大多數抗菌葯都耐葯,就會導致我們以前常用抗菌葯治療無效,可能造成病死率提高,顯著延長病程和治療時間,因為你又得重新開發新的治療方法和葯物,醫療成本也難免會增加。
16、有沒有辦法對付耐葯菌?
既然細菌這么容易產生耐葯性,而且耐葯性會有這么大麻煩,我們該如何對付耐葯性呢?
科學家總結認為,我們能做到主要有幾點:
(1)合理、謹慎地使用抗菌葯,避免細菌耐葯性產生,這是目前最有效、易推行的方法。
(2)尋找抗菌葯替代品或替代療法。
(3)結合耐葯性監測,採用輪換、穿梭用葯可以減少細菌耐葯性甚至恢復細菌敏感性。
(4)針對耐葯菌,研製新的抗菌葯。
17、動物身上的耐葯菌對人有無危害?
雖然細菌耐葯性的產生和傳播規律有待研究 ,但目前國際上的主流觀點認為:動物源耐葯菌的產生與傳播,會增加食品安全和公共衛生風險,但尚未對人類健康和生命構成直接威脅。威脅人類健康的耐葯菌甚至「超級細菌」主要來自人用抗生素濫用和醫院內交叉感染。
18、哪些國家使用促生長作用的抗菌葯?
抗菌葯物對養殖動物的生長有一定促進作用,曾在全球范圍廣泛應用。不過,出於抗生素耐葯性及環境考慮,一些國家和地區逐步停止這類抗菌葯的使用。但是,問題總有兩面性。停止使用後,隨之帶來飼料消耗增加、產量下降、動物死亡率上升、治療用抗生素增加等問題反而更加嚴峻。綜合考慮兩方面的權衡,目前中國、加拿大、美國、巴西、俄羅斯等畜牧業大國均允許使用促生長作用的抗菌葯。
19、獸葯使用有哪些政府監管措施?
我國農業部制定公布了禁止使用的獸葯和其他化合物目錄、飼料中允許添加的葯物飼料添加劑品種目錄、《獸用處方葯和非處方葯管理辦法》、《獸用處方葯目錄》、《獸葯停葯期規定》、《動物性食品中獸葯最高殘留限量》,以及多項獸葯殘留檢測方法標准。除此之外,農業部還制定並實施國家獸葯殘留監控計劃 ,對動物性食品中獸葯殘留進行監管。
20、環境中為什麼能檢測到抗菌葯 ?
抗菌葯廣泛用於人類醫療、動物疾病控制和預防,以及用於種植業和工業用途。這些葯物隨生產生活進入環境是難以避免的,隨著檢測手段越來越先進,自然環境中檢出抗生素也就不奇怪了。此外,自然環境中的很多微生物也會產生抗生素,比如青黴素就是從青黴菌的代謝物中發現的。
21、哪些環境中能檢測到抗菌葯?
根據中國、美國、加拿大、澳大利亞、德國、義大利、西班牙、瑞典、日本等國家的數據,土壤和污泥、廢水、地表水、地下水、飲用水都能檢測到抗菌葯成分,這種情況在各國普遍存在。但是抗菌葯在環境中的濃度普遍很低,水體中的濃度一般在十億分之一左右。
22、環境中的抗菌葯成分能不能自然降解?
世界衛生組織的技術報告指出,水環境中絕大多數葯物的濃度均能自然降解,如吸附到沉積物上、日光降解和生物降解。飲水及廢水的處理過程也會降低抗菌葯的濃度。另外在合適的堆肥條件下,畜禽糞便堆肥過程也可以有效減少抗菌葯在糞便中的濃度,將對環境的影響降到最小。
23、飲水中微量的抗菌葯是否會危害健康?
世界衛生組織發布的 《 飲用水中的葯物殘留 》 技術調查報告指出:飲用水中檢測出的葯物濃度比最低治療劑量低若干個數量級(通常低 1000 倍以上,而且往往遠低於 1000 倍), 這些極低濃度的葯物殘留對人體健康造成危害的可能性非常低。比如某媒體報道,自來水中檢出阿莫西林8 8 納克/升,以此估算,需要每天喝5 5 噸水以上才可能有健康風險。你確定你能喝這么多水嗎?不怕撐死嗎?參考資料:中國獸葯協會(China Veterinary Drug Association(CVDA)) 《獸葯安全二十三問》
『柒』 請教檢測食物含抗生素的簡單方法(我是老師想做這方面實驗)
牛奶中抗生素殘留的幾種常用檢測方法
隨著奶牛飼養業的發展,抗生素在預防和治療奶牛疾病方面得到廣泛的應用。生鮮牛奶中抗生素的來源主要是:第一,治療泌乳期病牛時使用的抗生素會從奶牛體內移行到乳腺殘留進入牛奶中,資料表明治療後的奶牛,其擠出的牛奶5天內都有抗生素殘留;其二,為了預防奶牛疾病並提高產量,在奶牛飼料中添加抗生素也會造成牛奶中抗生素的殘留;第三,由於牧場管理不善,擠奶、儲奶沒有嚴格的衛生制度和配套的設施,人為添加或造成牛奶抗生素的污染。
牛奶中含有抗生素,不僅對人的健康造成很大的危害,而且對乳品加工企業帶來經濟損失(因無法生成酸奶和乳酪)。因此必須嚴格控制牛奶中抗生素殘留,除了要做好科學飼養、精心管理;正確擠奶和預防疾病外,還要規范抗生素的使用,按國標中有關規定,用葯後的奶牛5天後所產的牛奶才可作為原料乳,並且要檢測其殘留。世界糧農組織(FAO)、世界衛生組織(WHO)、歐盟(EC)及美國的食品和葯品管理局(FDA)等對食品中抗生素最大殘留量都有明確的規定,我國也有鮮奶中抗生素殘留量檢驗標准(GB4689.27—94)。
目前,鮮奶中抗生素殘留的檢測方法大致分為三類:生物測定法(微生物測定法、放射受體測定法)、免疫法(放射免疫法、熒光免疫法、酶聯免疫法)、理化分析法(波譜法、色譜及聯用技術)。下面介紹幾種常用的牛奶中抗生素殘留檢測方法。
TTC法
TTC法是我國鮮奶中抗生素殘留量檢驗標准(GB4689.27—94)的檢測法,屬生物檢測法。其測定原理基於抗生素對微生物的抑製作用。如果牛奶中含有抗生素,則加入菌種(嗜熱鏈球菌)經培育2.5~3小時後,加入TTC指示劑(三苯基四氮唑)不發生還原反應,所以樣品呈無色狀態;如果牛奶中不含抗生素,則樣品呈紅色.這樣實驗後樣品顏色不變的為陽性,樣品染成紅色的為陰性。
TTC法的具體操作步驟:
1.菌液制備:將單菌種(嗜熱鏈球菌)以脫脂乳為培養基,在36±1℃培養箱中培養15小時後,再以脫脂乳以至於1:1稀釋待用;
2.取待檢樣液9mL,在80℃水浴加熱5分鍾後冷卻到37℃以下,加活菌液1mL,在36℃±1℃水浴2小時,加入4%的TTC指示劑0.3mL, 36℃±1℃水浴培養30分鍾;
3.若樣液顏色不變為陽性,呈紅色為陰性;若陽性的樣液,再置於水浴中培養30分鍾,不顯色的為陽性,呈紅色為陰性.
TTC法測定各種抗生素的靈敏度為:青黴素:4ppb,鏈黴素:500ppb,慶大黴素:400ppb,卡那黴素:5000ppb.它具有費用低,易開展的優點;缺點是耗時長,要求操作人員需有一定專業知識且實驗過程中菌液的制備、水浴過程式控制制都要求嚴格遵守操作規程,否則易出現假陽性,以致出現檢驗結果的不穩定性。
Delvotest? sp法(戴爾沃檢測法)
該法最早在香港傳到廣東的,其使用是基於20世紀80年代初香港要求廣東出口的生奶必須「無抗」且要求採用Delvotest法檢測。該方法也是生物測定法,其試劑是由荷蘭DSM公司生產並由AOAC認證。原理是利用微生物—嗜熱芽胞菌在64℃條件下培養2.5~3小時後會產酸,酸引起指示劑BCP(溴甲酚紫)變為黃色;若牛奶樣品中不含抗生素,培養後樣品呈黃色,如樣品中含有抗生素, 嗜熱芽胞菌生長受到抑制而無法產酸,指示劑將不變色.
Delvotest? sp 法的操作步驟:
1.以無菌操作將一片營養葯片夾放入小試管內;
2.用微量移液管將0.1mL牛奶樣品注入小試管內;
3.把小試管放入已預熱至64℃的水浴箱或恆溫器中培養;
4).定時3小時取出觀察顏色變化.如果底部2/3的固體介質是黃色,則為陰性, 如果底部2/3的固體介質是紫色,則為陽性.
Delvotest? sp 法具有廣譜性,可檢測到?-內醯胺類抗生素在內的更多抗生素,如磺胺類、四環素類、大環內酯類、氨基糖苷類、氯黴素等,其中對青黴素和磺胺類抗生素特別靈敏. 其靈敏度為:青黴素:3ppb,鏈黴素:300ppb,慶大黴素:400ppb,卡那黴素:2500ppb。Delvotest? sp 法集操作方便,嚴格實用,容易判斷,結果可靠,費用適中等優點;但也易出現假陽性,實驗證明:當牛奶樣品中添加微生物防腐劑(如乳酸鏈球菌素—Nisn)或樣品中有足夠的洗滌劑殘留時,便可影響嗜熱芽胞菌生長而使實驗為陽性。
Snap?法
該方法是酶聯免疫法,由美國IDEXX公司生產其檢測分析儀及其試劑盒,均獲得AOAC認證,它利用了竟爭酶聯免疫技術。其基本原理是用特異性抗體將固相載體激活,加入含待測抗原的溶液和一定量的酶標記抗原在45℃±5℃共同保溫,使樣品內的抗生素與內置抗生素標志物竟爭與固定的抗體結合,然後進行洗滌和顯色,內置抗生素標志物與固定的抗體結合形成的復合體,通過酶的作用分解可形成有色物質,通過測定色度並與參照物對照,就可以確定結果是陽性或陰性。
Snap?法操作步驟:
1.加入乳樣於樣品管中,搖勻,加熱樣品和檢測板5分鍾;
2.加入乳樣於樣品孔中,當激活圓環開始退卻時,按Snap鍵;
3.反應4分鍾,由Snap?讀數儀讀取並列印結果.檢測讀數小於1.05時判為陰性,大於1.05時判為陽性.
Snap?法是一種將酶化學反應的敏感性和抗原抗體免疫反應的特異性相結合的方法,其敏感性和特異性好,檢測的靈敏度以普遍使用的?-內醯胺類計:青黴素:5ppb,阿莫西林:10ppb,氨苄西林:10ppb,頭孢西林:8ppb.其他抗生素如四環素等的檢測,則需購買相應的試劑來檢測. Snap?法檢測結果快速准確, 9分鍾內即可檢測出牛奶中?-內醯胺類、四環素類、磺胺類等抗生素的殘留含量,且有半定量的讀數,可監控牧場用葯的情況;檢測儀器穩定性良好,結果重現性高,整個檢測過程簡單方便;但需購置專用儀器和試劑,成本較高。
高效液相色譜檢測法
它是一種理化檢測方法,是利用抗生素分子中的基團所具有的特殊反應來測定其含量.檢測的過程採用了氣相色譜理論,通過高壓液相和高靈敏度的檢測器,分離速度快、效率高和操作自動化。一般要經過樣品的提取、脫蛋白、離心、層析柱凈化、衍生化等步驟,能檢測抗生素的具體含量,敏感性較高,但檢測程序復雜,費用較高,需購買色譜儀等檢測設備,不適合小型檢驗室。
傳統的抗生素檢測方法不少,有的操作煩瑣,有的實驗條件要求高,有的檢驗時間太長;這些不僅會給乳製品生產企業造成經濟上和時間上的損失,而且檢測結果常常會被原輔材料和人為操作等因素所影響.鑒於牛奶中抗生素殘留是涉及人類健康的公共衛生問題,乳品企業及牧場應重視和加強檢測工作,應用一些簡單、快速和准確性高的方法來監控產品的質量,保證消費者的健康。
http://szddi.com/foodonline/newsdetail.asp?id=15933
反應原理
本產品主要是利用抗原與抗體的特異性免疫化學反應的基本原理來進行的。在整個反應當中,樣品中氯黴素含量越多,反應呈色就越淡。反之,樣品中氯黴素含量越少,則呈色越深。
試劑盒組成
1、微量測試孔:每條8孔,每板12條
2、氯黴素標准溶液:
0ppb、0.05ppb、0.15ppb、0.45ppb、1.35 ppb、4.05 ppb,1.5ml/瓶
3、10倍濃縮萃取稀釋液:一瓶,30ml/瓶
4、10倍濃縮洗滌液:一瓶,30 ml /瓶
5、氯黴素酶標記物: 一瓶,8 ml/瓶
6、底物溶液:一瓶,12 ml/瓶
7、反應終止液:一瓶,13 ml/瓶
使用說明
A、注意事項
1、使用前先將氯黴素標准溶液6瓶,濃縮萃取稀釋液,濃縮洗滌液,酶標記物,底物溶液及微量測試孔條置於室溫下,回溫30分鍾。
2、原倍萃取稀釋液及洗滌液配製
用蒸餾水將10倍濃縮萃取稀釋液及濃縮洗滌液分別以1: 9的比例稀釋(即1mL濃縮液+9mL蒸餾水),即可作為樣品萃取稀釋液與微孔板清洗液。
3、回溫後,取出所需微量測試孔條,將剩餘板條立即放回鋁箔袋中用膠帶封好,置於4oC保存。
B、樣品制備
1.待測物為生乳,則依以下方法進行處理 (5倍稀釋)
取100ul待測生乳加入400ul萃取稀釋液,振盪混合後備用。
2.待測物為蜂蜜,則依以下方法進行處理
a.取2g蜂蜜、4ml蒸餾水與2ml 乙酸乙酯置入離心管中,震盪約5分鍾,使其充分混合均勻。
b.離心10分鍾(3000rpm),取0.5ml上清液(乙酸乙酯)至玻璃管中,於50℃下氮氣吹乾(溫度請勿超過50oC)。
c.加入0.5ml萃取稀釋液,震盪約10秒鍾後備用。
3. 待測物為血清、則依以下方法進行處理
a.抽取待檢動物血液,離心或靜置取其較透明之上層液(血清層)使用,注意不要有溶血。
b.將3ml血清加入離心管中,再加入6ml乙酸乙酯,震盪混合約30秒。
c.離心10分鍾(3000rpm),取2ml上層液(乙酸乙酯)至玻璃管中,於50oC下氮氣吹乾。
d.於此玻璃管中加入正己烷2ml,先將殘余物完全溶解後,再加入1 ml萃取稀釋液,震盪約30秒鍾。
e. 離心10分鍾(3000 rpm),用吸管吸去上層液(正己烷) 及中間乳化層部分,棄掉。再吸取下層液(水層)備用。
f.若有乳化現象,請先將大部分上層液(正己烷)取出後,再將玻璃管置入80oC水中,隔水加熱約5~10分鍾,可改善乳化情形。
4. 待測物為雞肉或魚、蝦,則依以下方法進行處理
a.將3克樣品剪碎後放入50 ml離心管中,再加入6ml乙酸乙酯,並以均質機均質約1分鍾,再震盪約30秒。
b.離心10分鍾(3000rpm),取2ml上清液(乙酸乙酯)至玻璃管中,於50oC下氮氣吹乾。
c.於此玻璃管中加入正己烷2 ml,先將殘余物完全溶解後(若未能完全溶解,可能會導致回收率降低),再加入1 ml萃取稀釋液,震盪約30秒鍾。
d.離心10分鍾(3000 rpm),用吸管吸去上層液(正己烷) 及中間乳化層部分,棄掉。再吸取下層液(水層)備用。
e.若有乳化現象,請先將大部分上層液(正己烷)取出後,再將玻璃管置入80oC水中,隔水加熱約5~10分鍾,可改善乳化情形。待測物為血清、則依以下方法進行處理
5.待測物為內臟(肝、心等),則依以下方法進行處理(5倍稀釋)
同上述步驟a~d,但下層液吸出後,再以萃取稀釋液稀釋5倍(即下層液50ul加萃取稀釋液200ml)。
6.待測物為飼料,則依以下方法進行處理(10倍稀釋)
同上述步驟a~d,但下層液吸出後,再以萃取稀釋液稀釋10倍(即下層液30ul加萃取稀釋液270ml)。
C、操作步驟
本產品的酶標記物與氯黴素標准溶液均直接使用,無需再稀釋。
1、於適當微孔中分別加入100mL標准溶液(0,0.05,0.15,0.45,1.35和4.05ppb)。
2、在另外的微孔中加入100mL 已完成前處理的樣品溶液。
3、再於每一微孔中另再加入50mL酶標記物。
4、輕敲盤子四周,使其充分混合後於室溫下避光靜置溫育1小時。
5、將微孔中的反應液甩掉,再將洗液加滿每一微孔後甩掉,重復洗3次。
6、最後一次甩掉後,在吸水紙上拍干。
7、於每一微孔中加入底物溶液100mL後,輕敲盤子四周,使其充分混合。
8、於室溫下避光靜置溫育20分鍾。
9、於每一微孔中加入100mL反應終止液。
10、用酶標儀於波長450nm下判讀。
D、判定
1. 計算B/B0值。用樣品或標准液吸光度值(B)除以零標准吸光度值(B0)再乘以100%。
2. 以B/B0值為縱坐標,以標樣濃度的對數值為橫坐標,做標准半對數曲線。
3. 根據每個樣品的B/B0值就可從曲線上讀出相對應樣品的濃度。
4. 由於樣品經過了預先稀釋,因此根據標准曲線所得出的樣品濃度一定要再乘以其稀釋倍數。
E、標准曲線
F、靈敏度
氯黴素試劑檢測盒的平均檢測下限為 0.05ppb,此濃度之吸光值與陰性標准溶液(0ppb)之吸光值有明顯的差異。
G、 特異性
針對以下抗生素進行交叉反應之測試,結果如下:
Chloramphenicol =100%
Chloramphenicol(free base) <0.1%
Gentamycin <0.1%
Tetracycline <0.1%
Penicillin G <0.1%
Sulfamethazine <0.1%
H、再現性
針對氯黴素檢測試劑盒精密度測試,重復6次,所得不同濃度標准溶液的吸光值變異系數(%CV)如圖2所示,顯示氯黴素試劑盒有很高的再現性:
I、回收率
生乳(添加1.0ppb)104~117%
蜂蜜(添加0.3ppb)90~110%
蝦及魚肉(添加0.5ppb)95~110%
雞肉(添加0.5ppb) 90~120%
血清(添加0.5ppb)100~120%
內臟(添加1.0ppb) 100~120%
飼料(添加2.0ppb)80~110%
氯黴素檢測試劑盒
簡介
氯黴素(Chloramphenicol)是一種廣譜抗生素。由於其具有效果好以及價格低廉等優點,目前已被普遍應用於各類家禽、家畜、水產品及蜂製品的各種傳染性疾病的治療。然而氯黴素有其嚴重的副作用,它會抑制人體骨髓的造血功能,從而引起再生障礙性貧血和粒細胞缺乏症。目前,我國已禁止其使用。
我公司採用國內外先進的工藝與技術,研發出氯黴素ELISA檢測試劑盒,簡化了樣品處理方式,使用簡便,省時省力省錢,整個操作過程不到90分鍾。本產品檢測范圍廣(雞肉、魚、蝦、蟹、牛奶、血清、肌肉、組織、飼料與蜂蜜等),回收率為80%-120%,靈敏度可達到0.05ppb,是各類企業及各級政府檢測機構的理想產品。
簡單
1. 樣品提取方便快捷。
2. 90分鍾得到結果。
3. 只需基本的實驗室設備。
4. 操作人員只需最基本的實驗知識。
准確
1. 結果重現性高。
2. 精確至0.05ppb。
3. 與其它抗體的交叉反應率極低。
技術支持
我們為用戶提供最方便、快捷、周到的服務。
產品規格
包裝:每包96孔
靈敏度: 0.05ppb
測試區間:0.05ppb-4.05ppb
檢測時間:80分鍾(提取後)
儲存條件:2-8℃
http://www.practical-bio.com.cn/htm/procts_05.htm
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這些限值指標要求是強制性要求,不論是明示執行相應國家標准、行業標准、地方標准、團體標准或者企業標準的肥料,還是未標明執行標準的進口肥料,只要明示用於農田,都必須達到的限值要求。