常用的轉基因生物分子檢測方法

⑴ 轉基因的植株要怎樣檢測

在植物遺傳轉化中，外源基因導入植物細胞的頻率是相當低的。在數量龐大的受體細胞群體中，通常只有為數不多的一小部分細胞獲得了外源DNA，而目的整合到基因組並實現表達的轉化細胞則更少。

因此，必須採用一定的檢測方法，才能篩選和鑒定出含有目的基因的重組體。目前已發展出一系列的轉基因植物的篩選和鑒定方法。在這些鑒定和篩選方法，根據檢測的基因功能來劃分，可分為調控基因（包括啟動子終止子等）檢測、選擇標記基因檢測和目的基因直接檢測。

根據檢測的不同階段區分，有整合水平檢測和表達水平的檢測，基因整合檢測方法主要有Southern雜交、PCR、PCR-Southern雜交、原位雜交和DNA分子標記技術法，表達水平的檢測包括轉錄水平檢測和翻譯水平檢測，轉錄水平的檢測法有Northern雜交和反轉錄PCR（reverse：transcribed：PCR，RT-PCR）檢測，翻譯水平的檢測有酶聯免疫吸附法（enzyme：linked：immuno：sorbent：assay，ELISA）和Western雜交等，其中最簡便和使用廣泛的表達水平的檢測是報告基因檢測法。由於這些方法的具體操作已在其他章節（課程）介紹過，這里只側重介紹基於選擇標記基因和報告基因的篩選和鑒定方法。

⑵ 檢測dna上的目的基因是否表達常用的檢測方法是

A 對目的基因的檢測和表達檢測的方法混淆，不能准確應用。目的基因的檢測常採用DNA分子雜交技術，即將含有目的基因的DNA片段用放射性同位素作標記，以此作為探針，使探針與基因組DNA雜交，若出現雜交帶，則表明目的基因已插入到染色體中。DNA—RNA分子雜交與抗原——抗體雜交法是目的基因的表達檢測。目的基因是否轉錄出了相應的信使RNA分子，用DNA—RNA分子雜交法檢測。細胞內是否合成了由目的基因控制的蛋白質，使用抗原——抗體雜交法檢測。要准確區分目的基因的檢測和表達檢測使用的方法。顯微注射技術是目的基因導入受體細胞的方法。

⑶ 轉基因食品的檢測方法有哪些各有什麼優缺點

目前轉基因成分的檢測方法主要有ELISA（酶聯免疫吸附法）和側向流動免疫測定法、普通聚合酶鏈式反應（PCR）的優缺點、實時熒光定量PCR（qPCR）、恆溫熒光PCR檢測方法等。

ELISA（酶聯免疫吸附法）
ELISA具備了酶反應的高靈敏度和抗原抗體反應的特異性，具有簡便、快速、費用低等特點，但易出現本底過高的問題，且只能檢測目的蛋白抗原性沒有明顯變化的粗加工產品。直接法和雙抗夾心法都要制備特異的酶標抗體，制備方法較繁瑣，且一種酶標抗體只能檢測一種蛋白，而適用於間接法的酶標抗抗體已有商品出售。一種轉基因蛋白的檢測試劑盒是否能在表達相同外源蛋白的不同植物之間通用還要進行試驗。

側向流動免疫測定法：
「側流」型免疫測定是最近15年發展起來的，該方法之前主要用於醫學領域。與ELISA相似，這種測定方法也是基於三明治夾心式技術原理，但該方法是在一種固相支持物上而不是在管子里進行，標記的抗原-抗體復合物側向遷移，直至遇到在一種固定表面上的抗體。目前市場上已出現了用於側向流動免疫測定並能用於野外測試的試劑盒。與DNA為基礎的檢測方法相比，該方法的樣品處理簡單。由於目標蛋白一般是水溶的且抗體具有高度專一性，因此檢測樣品僅需要初步處理便能達到測試的要求，具有快速、簡便、適合野外操作等優點。側向流動免疫測定試紙條是一種很快速簡便的定性檢測方法，將試紙條放在待測樣品抽提物中，5～10分鍾就可得出結果，不需要特殊儀器和熟練技能。但一種試紙條只能檢測一種蛋白質，且只能檢測有無存在外源蛋白而不能區分具體的轉基因品種。側向流動免疫測定方法是定性或是半定量。按照合適的采樣步驟，可以在給定的一批樣品中以99%的置信水平檢測出少於0.15%的轉基因成分。

普通聚合酶鏈式反應（PCR）的優缺點
優點：
1)准確度較高
2)靈敏度高
3)價格低
缺點：
1)操作復雜需要一定的專業背景
2)電泳時使用的染料對人體有一定危害
3)只能檢測一個指標

實時熒光定量PCR（qPCR）的優缺點
優點
1)靈敏度高
2)准確度高
3)高通量
4)可以實現實時監控
5)可以實現定量判斷
缺點
1)價格高昂
2)操作復雜
3)配套產品少
4)維護費用高

恆溫熒光PCR檢測方法：
恆溫PCR技術的特點可以概括為比PCR更准確、快速、易於實現。因實現恆溫擴增，特殊的引物設計，使得檢測更准確；無變性、退火等環節，全過程均在進行DNA片段的復制，沒有時間損耗，使檢測更快速；無熱循環需求，設備簡單，更易於推廣應用。為PCR技術推廣應用創造了全新的空間。目前主流的實時恆溫熒光PCR儀有廣州迪澳生物Deou—308C恆溫熒光檢測儀、3M Molecular Detection System、Optigene Genie II 和 Genie III、Qiagen TuberScaner II、Envirologix DNAble等。

⑷ 常用的轉基因檢測方法有哪些

常用的轉基因方法包括農桿菌轉化法、基因槍轉化法和顯微注射法3種。

⑸ 2. 鑒定轉基因動物的方法有哪些

一、植物的遺傳轉化

20世紀70年代末80年代初，人們用野生型Ri和Ti質粒轉化煙草和馬鈴薯細胞獲得再生植株後，以Ti質粒為載體的植物遺傳轉化技術隨之被建立。近年來植物的遺傳轉化技術得到了迅速發展，建立了多種轉化系統。按照基因引入受體植物細胞的方法，植物遺傳轉化技術大體可分為兩類：以載體為媒介的基因轉移和基因或DNA的直接轉移。所謂以載體為媒介的基因轉移就是將目的基因連於某一載體DNA上，然後通過寄主感染受體植物等途徑將外源基因轉入植物細胞的技術。DNA的直接轉移是指利用植物細胞生物學特性，通過物理、化學和生物學方法將外源基因轉入植物細胞的技術。

（一）載體法轉化 農桿菌介導的轉化是最主要的一種載體轉化方法。利用經過改造的農桿菌Ti質粒為載體可以高效地轉移外源基因。所獲得的轉化植物有兩種基本方法：一種是1979年Marton等以植物原生質為受體的共培養法（ocultivation）；一種是1985年Horsch等人建立的葉盤法（leaf disc cocultivation）。

共培養法是把農桿菌與植物原生質體共同培養以實現轉化的方法。其程序包括農桿菌對初生細胞壁的原生質體的轉化、轉化細胞的篩選和誘導轉化細胞分化並再生植株。

葉盤法實際上是對共培養法加以改進後而創立的一種轉化方法。用農桿菌感染葉片外植體並短期共培養。在培養過程中，農桿菌的vir基因被誘導，它的活化可以啟動T-DNA向植物細胞的轉移。共培養後，也要進行轉化的外植體的篩選、愈傷組織的培養、誘導分化等步驟，以得到再生植株。葉盤法由於不需進行原生質體操作等，方法簡單，獲得轉化植株也更快，是用植物外植體為材料進行轉基因的一個良好途徑。

農桿菌介導的遺傳轉化是大多數雙子葉植物轉化中常採用的方法，但由於農桿菌具有宿主局限性，極少能感染單子葉植物，特別是一些重要的農作物如水稻、小麥、玉米等對農桿菌不敏感，難於應用此法進行遺傳轉化。

除上述以Ti質粒為載體的基因轉化外，還可以用脂質體（liposome）為載體進行遺傳轉化。脂質體是由磷脂組成的膜狀結構，因此可將DNA分子包裝在脂質體內以避免受體細胞DNase的降解，把DNA分子導入到植物的原生質體中去。

（二）基因直接轉移的方法 這是指既不依賴於農桿菌，也不依賴其他載體或媒介的一些基因轉移方法。

1．電激和電注射法 電脈沖能改變細胞膜的透性。通過高壓電脈沖的電激穿孔作用把外源DNA引入植物原生質體的方法就稱為電激法（electroporation）。這種方法現已較廣泛地應用於單子葉和雙子葉植物以及動物的基因轉移，如20世紀80年代末用此法將新黴素磷酸轉移酶（NPT Ⅱ）基因轉入玉米自交系的原生質體，已再生成植株。

通過電激技術把基因直接引入完整的植物細胞或組織的方法，稱作電注射（electroinjection）。這種方法可避免原生質體培養和再生成植株的繁雜操作與困難，因而具有巨大的應用潛力。

2．基因槍法 基因槍法又稱粒子轟擊技術（particle bombardment）。這一方法是用粒子槍把表面吸附有外源DNA的金屬微粒高速地射進植物細胞或組織。由於此法快速簡便，不受宿主范圍限制，而受體植物細胞不需去除細胞壁，轉化率又高，被轉化的細胞或組織容易再生成植株，因而頗受關注。

3．微注射法 微注射法（microinjection）是利用顯微注射儀等，通過機械的方法將外源基因或DNA直接注入細胞核或細胞質。與其他方法相比，這個方法對外源遺傳物質的導入更為直接和有效。

微注射法除用於植物細胞外，近些年還發展到用於直接注射植物子房，這樣更有利於外源遺傳物質對幼胚的轉化。這方面的工作我國於20世紀70年代即已進行了理論與實踐的探索，並已獲得抗枯萎病的棉花轉化植株抗蟲棉等。

二、轉基因動物技術及其應用

（一）轉基因動物的概念 藉助基因工程技術把外源目的基因導入生殖細胞、胚胎幹細胞和早期胚胎，並在受體染色體上穩定整合，使之經過各種發育途徑得到能把外源目的基因傳給子代的個體，即轉基因動物（transgenic animal）。轉入的目的基因稱為轉基因（transgene），這種轉移目的基因的過程稱為轉基因作用（transgenesis）。關於「轉基因」的概念，通常只限於動、植物中經基因工程技術進行的基因轉移，因此品種間不論有性或無性雜交獲得新基因的途徑都不屬此范疇。

（二）轉基因動物技術 轉基因動物技術是20世紀80年代初發展起來的一項生物技術，它克服了物種之間的生殖隔離，實現了動物物種之間遺傳物質的交換和重組。根據外源基因導入的方法和對象的不同，至今主要有3種途徑可以產生轉基因動物，即顯微注射法、反轉錄病毒法和胚胎幹細胞法。反轉錄病毒轉移基因的基本方法在前面已有簡介，這里只介紹顯微注射法和胚胎幹細胞法兩種。

1．受精卵原核顯微注射法 顯微注射技術是從動物胚胎學研究移核實驗的基礎上發展而來。20世紀80年代初期人們利用這一方法向動物生殖細胞轉移外源基因，成功地建立了轉基因小鼠。1985年轉基因綿羊和轉基因豬問世，以後轉基因大鼠、兔、雞、牛、魚等都已陸續取得成功，可見顯微注射法是迄今應用得較為普遍而又最有成效的一種獲得轉基因動物的技術。

本方法是在顯微鏡下，用直徑約為1μm的玻璃管直接插入受精卵的雄原核內，將毛細管內所帶有的外源基因的DNA注入原核，然後將其移植到假孕母體輸卵管或子宮內並發育成子代個體。為了解轉基因的整合情況，可酌情應用斑點雜交、多聚酶鏈式反應或Southern印跡雜交等方法對子代個體DNA進行檢測。

顯微注射法的優點是導入的外源基因片段可長達50 kb，且無需載體，外源基因在宿主染色體上的整合率相對較高。其不足之處是外源基因的整合是隨機的，因而難以控制其整合率；再者，對外源基因能否穩定整合於受體基因組的檢測，必須等到子一代個體出生後經過選擇才能確定，不利於在生育期長、產仔少的大家畜中應用。

2．胚胎幹細胞介導法 胚胎幹細胞（embryonic stem cell，ES）是指從哺乳動物胚胎囊胚期內的細胞團中分離出來的尚未分化的胚胎細胞，這種細胞具有發育的多能性，能夠分化出各種組織。20世紀80年代中期人們開始研究利用ES細胞獲得轉基因動物的方法。這個途徑是將外源基因直接導入ES細胞，經體外培養篩選後再注入到受體囊胚腔中，與其中的囊胚細胞聚集在一起，成為受體胚胎的一部分，參與其分化。由這種胚胎發育而成嵌合體的轉基因動物，即其中有一部分組織來源於整合有外源基因的供體ES細胞。在嵌合過程中，被轉化的ES細胞分化而成的生殖細胞可通過雜交將引入的外源基因傳遞下去。

在以胚胎幹細胞為媒介獲得轉基因動物的技術中，既可以用多種方法將外源基因導入ES細胞，且細胞的鑒定、篩選比較方便，又可預先在細胞水平上測定外源基因的拷貝數、定位和表達的水平以及插入的穩定性等，而且將ES細胞注入囊胚的操作較易進行，整合率相對較高。只是建立ES細胞系本身就是一項難度極高的工作，目前小鼠ES細胞系雖已建立，但在豬、羊中還未能得到真正穩定的ES細胞株。

（三）轉基因動物的應用 轉基因動物的研究內容非常廣泛，20世紀80～90年代以來從基礎理論到應用技術在深度和廣度上都有了很大發展，並已日漸由實驗室走向生產實踐。

1．在基因表達調控研究方面的應用 利用轉基因動物可作為在體內研究外源基因表達調控的「反應器」，下面僅就DNA順式調控元件和基因在發育中的時空調節為例予以介紹。

（1）順式調控元件的研究 異常的脂蛋白水平與動脈粥樣硬化等疾病有關。人類有5種脂蛋白，各自含有不同的載脂蛋白。現已發現約有17種載脂蛋白，它們的編碼基因已測序，是用於研究心血管疾病的候選基因。把載脂蛋白基因轉入小鼠，可用來研究人脂蛋白代謝、調控以及動脈粥樣硬化。在研究載脂蛋白基因組織特異性表達的順式調控元件時，發現有兩簇載脂蛋白基因凋節的組織特異性表達（圖19-15）。一簇包括A－Ⅰ、C-Ⅲ和 A-Ⅳ基因，定位於人11號染色體長臂2區3帶（11q23），是按A－Ⅰ、C－Ⅲ、A－Ⅳ的順序組成。C－Ⅲ的轉錄方向與其他兩個基因相反。 A-Ⅰ和C-Ⅲ主要在肝和小腸中表達，A-Ⅳ主要在小腸表達。在 C-Ⅲ基因的-0.2～-1.4bp之間是調節 A－Ⅰ基因在小腸中表達的區域。這個區域也是 C－Ⅲ和A－Ⅳ基因在小腸表達的凋控元件，表明這一元件可以調節整個載脂蛋白基因簇在小腸的表達。另一基因簇定位於19號染色體長臂1區3帶（19q13），包含有E、C－Ⅰ和C-Ⅱ基因，它們按E、C－Ⅰ、C－Ⅱ順序排列。E基因主要在肝臟和大部分身體組織中表達，但表達水平低。以後發現在C－Ⅰ基因和C－Ⅱ基因之間有一調控區可使E基因在肝臟內高水平表達，該區長約154 bp。此外，還證實這個調控區也調節該座位其他兩個載脂蛋白基因 C－Ⅰ和 C－Ⅱ在肝臟的表達。的表達。

（2）與發育相關基因的表達與調控 用轉基因動物可研究基因在發育中的時空調控。珠蛋白基因是研究發育調控的最好例子。人類珠蛋白基因分為α、β兩簇，分別定位於16號和11號染色體，各長30kb和60kb。據1993年的報道，為分析完整的β-珠蛋白基因中人的珠蛋白基因的開關調控，Peterson等把一個含有248 kb長的人β-珠蛋白基因簇的酵母人工染色體（YAC）轉入小鼠。對轉基因小鼠中此基因簇的表達分析表明，在成年的轉基因動物中只有人β-珠蛋白表達；在子一代和子二代動物中證實YAC β座位有β樣珠蛋白基因的發育開關調控，即在卵黃囊中有ε-和γ-珠蛋白基因表達，在14天的肝臟中有少量γ和大量β表達，而在成年動物中則僅有β珠蛋白基因的mRNA表達。採用先在酵母細胞內通過同源重組的方式使YAC發生突變，然後把這種突變的YAC導入小鼠，就可以詳細研究整個座位上基因的調控機制，如珠蛋白基因在發育與分化中的基因表達、定點誘變的β基因對發育凋節的影響等等。

除前述有關基因表達凋控的研究外，把轉基因動物用於遺傳病動物模型的研製近年來發展也很快，如把pro-αⅠ膠原突變基因導入小鼠基因組，可產生類似人的骨發育不全症的轉基因小鼠，這對了解人類遺傳病的發病機理意義重大。

2．用於基因產品的制備

在轉基因動物中，導入的目的基因表達，人們就可以從該動物的乳汁和血液里獲得目的基因產物，因此，可把轉基因動物看作是一種個體表達系統（whole animal expression system），以制備某種基因產物。這樣的轉基因動物常被稱作動物生物反應器（animal bioreactor）。

1982年Palmiter把大鼠生長激素基因轉入小鼠，成功地獲得高效表達生長激素的小鼠，其體積明顯增加，證實了用轉基因動物生產外源基因產品的可行性。近年來的報道已證實在轉基因家畜（如豬）的乳腺中可高效合成自身不含有的異源蛋白，如乳清蛋白等。目前，英國正在研究通過羊β-乳球蛋白啟動子和乳清蛋白啟動子的控制，在轉基因羊體內表達人α1抗胰蛋白酶和凝血因子Ⅸ；在美國已有在轉基因小鼠、乳羊和乳牛乳汁中分別表達產生tPA和促性腺素的研究報道。我國利用轉基因動物為反應器生產基因製品的工作也在展開，最近有關單位已從轉基因羊乳汁中獲得促紅細胞生成素。

3．動物品種的培育與改良

把具有優良性狀的基因或抗病基因導入畜禽以培育新的品種，這是轉基因動物研究中的一個極重要的方面。如已培育出抗雞白細胞組織增生病毒的轉基因雞新品種。為增強魚類的抗凍性，已有抗凍蛋白基因在轉基因鮭魚中表達的報道。1985年我國學者朱作岩在國際上首次將小鼠MT／hGH融合基因注入金魚受精卵中，獲得轉基因金魚，其F1比轉基因魚的同代大兩倍。以後該類實驗中還陸續獲得其他鯽、鯉等幾種轉入生長激素基因的魚。

三、轉基因技術研究進展

（一）基因分離技術的發展 真核生物基因組非常大，巨遺傳背景常不清楚，要從這樣龐大的DNA中分離目的基因實非易事。但是由於生物化學、酶學、分子生物學等學科的迅速發展，為基因的分離提供了有效手段，如今已發展了一些新的分離目的基因的技術，如PCR、轉座子標簽法與基因組消減技術等。

1．轉座子標簽技術 基因發生轉座最重要的遺傳效應是引起插入突變，也就是使插入位置的基因失活並誘導產生突變型，或在插入位置上出現新基因。因此，可用轉座子作探針克隆出該突變基因，再用突變基因作探針，從野生型個體中分離並克隆出野生型基因。這種用轉座子來分離基因的技術稱為轉座子標簽技術（transposon tagging）（圖19－16）。這種技術的一個顯著特點是可以用來分離預先不清楚表達產物的基因。目前已可利用在分子水平上研究得較為清楚的轉座子系統如玉米的Ac／Ds、金魚草的Tam3等來分離異源植物的基因。

利用轉座子分離植物基因時，首先要構建含轉座子與質粒載體，因為已分離得到的轉座子與選擇標記需整合到適當的質粒基因組中才能用於目標植物的遺傳轉化。當前用於構建轉座子載體的質粒主要是根癌農桿菌的Ti質粒和pBR322等。其次是目標植物的遺傳轉化，現常用帶有載體系統的根癌農桿菌進行轉化。第三是轉座及拷貝數的檢測。最後是轉座子插入突變的檢測及分離。而對分離得到的突變體，還要證明其突變確系轉座子的插入所引起的。

近幾年，一些用傳統生化方法難以分離的基因已用轉座子標簽法分離出來，如金魚草中控制花瓣及雄蕊發育的基因，與花的發生、發育有關的基因，亞麻的抗銹基因等。美國、荷蘭等國也分別利用轉座子分離擬南芥菜種子中脂肪酸合成的基因和研究植物病原體的抗性。

2．基因組消減技術 基因組消減（genomic subtraction）技術是最近幾年在PCR基礎上發展起來的根據表型變異進行目的基因分離和鑒定的又一種方法，已被應用於動、植物中分離遺傳背景不十分清楚的基因，如在醫學研究中已將該技術用於分離和鑒定腫瘤缺失和重排基因、制備多態位點探針、分離遺傳性疾病基因和基因治療等領域。

運用消減雜交技術分離缺失序列的概念最早是由Buatz提出的，他利用T4噬菌體缺失突變株的DNA來分離相應缺失區域的mRNA並獲得成功。以後被許多實驗室引用並加以改進。1989年D．Stuars和L．Wieland分別將PCR技術引入消減雜交方法中，使基因組消減雜交技術得以推廣應用。這一技術的基本原理是先用γ射線等引起機體大片段DNA的缺失突變，然後用此突變體DNA與野生型DNA雜交，用以去除野生型中突變體的DNA。如此反復幾次，在反應體系中突變體DNA所缺失的那段親本DNA序列便被保留下來。採用生物素-親和素-磁珠系統或HAT結合生物素-親和素層析系統富集缺失這種序列並用PCR技術擴增。擴增的序列再用來與野生型基因文庫雜交，從而克隆到對應缺失性狀的基因（圖19-17）。

用基因組消減雜交技術目前已從擬南芥中成功地克隆到包含赤黴素GA1位點的基因。在醫學研究中也有通過基因組消減雜交技術克隆人染色體特異的基因探針的報道，如杜興式肌營養不良（chenne muscular dystrophy，DMD）和脈絡膜缺損（choroideremia）座位的探針。

（二）基因剔除技術 基因剔除（gene knock-out）技術又稱基因打靶技術（gene trageting），是20世紀80年代末發展起來的。這是利用同源重組的方法以建立基因定點滅活細胞系或獲得基因定點滅活動物。這一技術近年來應用於生物學的諸多研究領域，已獲得數百種基因定位缺陷小鼠。

基因剔除技術的原理首先是用基因重組方法在目的基因片段中插入一外源基因作為篩選標記基因並使目的基因失活（定點突變），再將此（滅活）基因轉入胚胎多能幹細胞（ES細胞）中，通過細胞內的基因同源重組使滅活基因取代染色體上原有的目的基因。經篩選和基因型鑒定後，把定點突變後的ES細胞注入宿主囊胚腔內，然後將胚胎植入假孕母體子宮，使其發育成目的基因缺陷（突變）的嵌合體，經子代自交後篩選出目的基因缺陷的純合子即基因剔除動物。

基因剔除的具體實驗步驟是：首先要進行同源重組載體的設計與構建，即選擇具有一定長度（5～7kb以上）與目的基因功能區域同源的序列，並插入選擇性標記基因（如新黴素抗性基因neo等），以便於篩選。在此同源序列的一端或兩端還可以連接上負篩選標志基因（如單純皰疹病毒胸苷激酶基因等）。用電轉染等方法將此同源重組載體轉染靶細胞。通過葯物抗性來篩選重組細胞克隆，並用PCR和Southern雜交等方法對重組細胞進行基因型鑒定，這時得到的就是單個等位基因被剔除的雜合子細胞。為建立等位基因雙剔除的細胞系，則還要將單個等位基因剔除的細胞大量傳代培養，然後在更高濃度的選擇性培養基中多次重復篩選，並對最終得到的陽性克隆進行基因型鑒定。

在應用上，通過探討目的基因突變在基因剔除動物個體發育中的時空效應以及分析體內單基因缺陷所產生的表型異常，可以研究基因功能和調控，建立疾病的動物模型和基因治療等。因此，在細胞水平進行基因剔除研究有非常重要的意義。如近幾年國外已報道建立了用於研究心血管疾病的載脂蛋白E（apoE）、低密度脂蛋白受體的基因剔除動物。

基因剔除細胞系的建立有可能直接發現特定基因剔除後的影響，闡明基因功能，制備基因缺失的細胞模型，用於發病機理或基因治療的研究。體細胞與ES細胞同源重組有所不同，後者一般只需將同源染色體等位基因之一滅活，就能在嵌合體後代中最終獲得純合的基因剔除動物。而在體細胞水平滅活特定基因就必須把一對等位基因都滅活，否則無法研究其功能。目前採用兩種方法都可成功地達到這一目的：一是用兩種帶有不同標記基因的同源重組載體分別對靶細胞進行兩次同源重組；另一是把單個等位基因滅活的細胞系傳代培養，提高標記基因產物抗葯物的濃度，利用標記基因表達的累加效應，篩選出細胞系中自然發生的雙等位基因被剔除的細胞克隆。

⑹ 轉基因生物檢測技術有哪些

以DNA為基礎的PCR和分子雜交
以蛋白質為基礎的免疫學方法
基因晶元檢測方法
等等

⑺ 轉基因檢測方法有哪些

目前世界上常用的轉基因檢測方法主要有兩種 一是檢測有無來自其他生物成分即以外源結構基因表達出的蛋白質為目的蛋白質檢測方法 另一種是檢測非轉基因植物所不擁有的啟動子 終止子 標記基因的DNA檢測方法 由於蛋白質檢測方法對含量低及深加工的轉基因產品無法檢測 故DNA檢測方法應用范圍相對要廣

⑻ 1.寫出基因工程第四個步驟中,要從分子水平上檢測的內容及採用的檢測方法

從分子水平上檢測有DNA分子雜交技術，分子雜交技術和抗原-抗體雜交技術。
1.DNA分子雜交技術檢測的是轉基因生物的DNA是否插入了目的基因。將轉基因生物的基因組DNA提取出來，在含有目的基因的DNA片段上用放射性同位素等作標記，以此作為探針，使探針與基因組DNA雜交，如果顯出雜交帶，就表明目的基因已插入染色體DNA中。
2.分子雜交技術檢測目的基因是否轉入出了mRNA。從轉基因生物中提取出mRNA，用標記的目的基因作為探針，與mRNA雜交，如果顯出雜交帶，則表明目的基因轉入出了mRNA。
3.抗原-抗體雜交檢測目的基因是否翻譯成蛋白質。從轉基因生物中提取蛋白質，用相應的抗體進行抗原-抗體雜交，若有雜交帶出現，表明目的基因已形成蛋白質產物。