水產養殖檢測弧菌方法

❶ 霍亂弧菌的檢測方法

根據弧菌O抗原不同，分成Ⅵ個血清群，第Ⅰ群包括霍亂弧菌的兩個生物型。第Ⅰ群A、B、C三種抗原成份可將霍亂弧菌分為三個血清型：含AC者為原型（又稱稻葉型），含AB者為異型（又稱小川型），A、B、C均有者稱中間型（彥島型）。
1992年10月在印度東南部又發現了一個引起霍亂流行的新血清型菌株（0139），它引起的霍亂在臨床表現及傳播方式上與古典型霍亂完全相同，但不能被01群霍亂弧菌診斷血清所凝集，抗01群的抗血清對0139菌株無保護性免疫。在水中的存活時間較01群霍亂弧菌長，因而有可能成為引起世界性霍亂流行的新菌株，推薦使用天津生物晶元生產的霍亂弧菌診斷血清。 1,普通聚合酶鏈反應法
核酸擴增技術，即聚合酶鏈式反應（polymerase chainreaction，PCR），其基本原理是設計、合成兩條寡核苷酸，作為引物，對應於待測病原微生物某一段特異性序列的兩端，然後在體外模擬DNA體內復制的過程反復擴增，使靶序列放大上萬倍甚至上百萬倍而被檢測出來。一般選擇霍亂腸毒素(cholera enterotoxin，CT)基因ctx的保守序列作為靶基因。一些非產毒株(如環境來源的菌株)有可能通過基因水平轉移獲得毒力基因成為產毒株，若僅檢測ctx基因容易造成漏檢。因此，霍亂弧菌的其他重要基因，如毒力協同調節菌毛A基因(tcp A)、o抗原基因(rfb)、外膜蛋白基因(omp)以及毒力表達調控基因(toxR)等也被選用為PcR的靶基因，這大大提高了檢測的特異度.
2 ,多重PCR法
與常規PCR相比，多重PCR一次反應可檢測多個基因，節省了時間和成本。國內、外許多學者選用霍亂弧菌的毒素基因ctx、tcp與其他基因如ompW、rfb、hly進行組合，作為共同的靶基因，克服了由於毒力基因特異度不夠高而造成的假陽性。多重PcR同時可准確區分不同血清型的霍亂弧菌和快速鑒定其是否為產毒株，可謂一舉多得，大大提高了檢測效率。
3.熒光定量PCR法
熒光定量PCR自動化程度高、特異性強、無交叉污染，在霍亂弧菌的快速診斷中得到廣泛應用。尤其是近年來，隨著引物與探針的設計更精確、多通道熒光PCR儀的開發與廣泛使用，多重熒光定量PCR技術日臻成熟，並以其高通量、低成本、高效率等優點而廣泛應用於病毒、細菌、真菌等多種病原體的快速檢測，成為應用的熱點. 與PCR方法相比，基因晶元技術能同時獲得更多病原學、生物學方面的信息，從而更為全面地分析、掌握病原微生物的特徵。Vora等[12]運用基因晶元技術對多種致病性弧菌的毒力、毒素、耐葯基因及潛在的毒力基因進行全面分析，對掌握這些細菌的致病性及進行有效預防、控制等具有重要意義。但基因晶元成本較高，距離推廣應用尚需時間等待 。