❶ 獲得目的基因有幾種主要方法
獲得目的基因常用的方法有PCR法、化學合成法、cDNA法及建立基因文庫的方法來篩選
直接獲取
1.從基因文庫中獲取 這個沒什麼就是現成的基因儲存在受體菌上你用的時候提取出來就好了(基因組文庫法 就是原教材中的用限制性內切酶直接獲取。利用λ噬菌體載體構建基因組文庫的一般操作程序如下:① 選用特定限制性內切酶, DNA進行部分酶解,得到DNA限制性片段② 選用適當的限制性內切酶酶解λ噬菌體載體DNA。③ 經適當處理,將基因組DNA限制性片段與λ噬菌體載體進行體外重組。④ 利用體外包裝系統將重組體包裝成完整的顆粒。⑤ 以重組噬菌體顆粒侵染大腸桿菌,形成大量噬菌斑,從而形成含有整個DNA的重組DNA群體,即文庫。)經典解釋
2.cDNA文庫法(即原教材中提到的逆轉錄法)。cDNA文庫,是指匯集以某生物成熟mRNA為模板逆轉錄而成的cDNA序列的重組DNA群體。雖然可用基因組文庫法來獲取真核生物的目的基因,但是由於高等真核生物基因組DNA文庫比其cDNA文庫大得多,相關工作量同樣大得多。更為重要的是,在真核生物基因組中合有大量的間隔序列或內含子,但在大腸桿菌等原核生物中沒有類似序列的存在,所以大腸桿菌不能從真核生物基因的初級轉錄本中去除間隔序列,即不能表達真核生物DNA。而在真核生物成熟mRNA中已不存在間隔序列(已在拼接過程中被去除),所以可以以真核生物成熟mRNA為模板,逆轉錄而成的cDNA可被大腸桿菌表達。因此,在基因工程中,cDNA文庫法是從真核生物細胞中分離目的基因的常用方法。
3.直接分離基因最常用的方法是「鳥槍法」,又叫「散彈射擊法」。這種方法有如用獵槍發射的散彈打鳥,無論哪一顆彈粒擊中目標,都能把鳥打下來。鳥槍法的具體做法是:用限制酶(即限制性內切酶)將供體細胞中的DNA切成許多片段,將這些片段分別載入運載體,然後通過運載體分別轉入不同的受體細胞,讓供體細胞所提供的DNA(外源DNA)的所有片段分別在受體細胞中大量復制(在遺傳學中叫做擴增),從中找出含有目的基因的細胞,再用一定的方法吧帶有目的基因的DNA片段分離出來。如許多抗蟲,抗病毒的基因都可以用上述方法獲得。
用「鳥槍法」獲取目的基因的優點是操作簡便,缺點是工作量大,具有一定的盲目性。
人工合成
1.(主要是序列已知的基因)。主要是通過DNA自動合成儀,通過固相亞磷酸醯胺法合成,具體過程可以網上查詢,反正是可以按照已知序列將核苷酸一個一個連接上去成為核苷酸序列,一般適於分子較小而不易獲得的基因。對於大的基因一般是先用化學合成法合成引物,再利用引物獲得目的基因。
2.聚合酶鏈反應(Polymerase Chain Reaction ,PCR)是80年代中期發展起來的體外核酸擴增技術。它具有特異、敏感、產率高、快速、簡便、重復性好、易自動化等突出優點;能在一個試管內將所要研究 的目的基因或某一DNA片段於數小時內擴增至十萬乃至百萬倍,使肉眼能直接觀察和判斷;可從一根毛發、一滴血、甚至一個細胞中擴增出足量的DNA供分析研 究和檢測鑒定。過去幾天幾星期才能做到的事情,用PCR幾小時便可完成。PCR技術是生物醫學領域中的一項革命性創舉和里程碑
❷ 目的基因的獲取方法
1、當目的基因的序列已知時:用化學方法合成目的基因,或用聚合酶鏈式反應(PCR)擴增目的基因。
將含有某種生物的許多DNA片段,導入受體菌的群體中儲存。各個受體菌分別含有這種生物不同的基因,稱為基因文庫。當需要某一片段時,根據目的基因的有關信息來獲取目的基因。如根據基因的核苷酸序列、基因的功能、基因在染色體上的位置、基因的轉錄產物mRNA,以及基因的表達產物蛋白質等特性來獲取目的基因。
2、當目的基因序列未知時:建立一個包括目的基因在內的基因文庫,從基因文庫中提取目的基因。
3、用PCR技術擴增技術提取。已知目的基因引物的序列,將整個DNA放入合成儀。只有引物中間的目的基因被大量擴增,即被提取出來。
❸ 目的基因的獲取
選修三的1.2基因工程基本操作中的目的基因獲取主要介紹了兩種方法。
一、從基因文庫中獲取目的基因。
形象的說,就是相當於「從圖書館中找到你要的那本圖書」。基因文庫是前人已經構建好的受體菌群體,整個群體已經包括所有該物種的基因,你只需要通過目的基因的位置或轉錄產物mRNA、蛋白質等的特異性的表現,與基因文庫中的基因產物一致性找出文庫中的目的基因。
二、通過PCR擴增獲取目的基因。
關鍵是設計目的基因上游的引物,通過DNA復制,從引物開始延伸出引物後的DNA序列,從而得到你要的目的基因。
3,我最近學的還有
化學法
是知道了核苷酸序列
用人工合成的方法得到
❹ 目前獲取目的基因的主要途徑有哪些
一是從供體細胞的DNA中直接分離基因。,最常用的方法是「鳥槍法」又叫「散彈射擊法"。另一種是人工合成基因。這種方法有兩條途徑。
二是以目的基因轉錄的信使RNA為模板。反轉錄成互補的單鏈DNA。再在酶的作用下合成雙鏈DNA。即目的基因。另一條途徑是蛋白質的氨基酸序列。推測出信使RNA序列。再推測出結構基因的核苷酸序列,然後用化學的方法以單核苷酸為原料合成。
(4)獲取目地基因的簡單方法擴展閱讀:
基因計算
DNA分子類似「計算機磁碟」,擁有信息的保存、復制、改寫等功能。將人體細胞核中的23對染色體中的DNA分子連接起來拉直,其長度大約為0.7米,但若把它折疊起來,又可以縮小為直徑只有幾微米的小球。因此,DNA分子被視為超高密度、大容量的分子存儲器。
基因晶元經過改進,利用不同生物狀態表達不同的數字後還可用於製造生物計算機。基於基因晶元和基因演算法,未來的生物信息學領域,將有望出現能與當今的計算機業硬體巨頭——英特爾公司、軟體巨頭——微軟公司相匹敵的生物信息企業。