布氏菌的血清學檢測方法

1. 如何做羊布病檢測

羊布氏桿菌病是羊的一種慢性傳染病。主要侵害生殖系統。羊感染後，以母羊發生流產和公羊發生睾丸炎為特徵。布氏桿菌病也是一種人畜共患的慢性傳染病。其特點是生殖器官和胎盤發炎，引起流產、不育和各種組織的局部病症。
人類感染檢查：
1、血像：白細胞計數正常或偏低，淋巴細胞相對增多。
2、細菌學檢查：血、骨髓、尿均可作培養，早期血、骨髓培養陽性可達70%～80%。
3、血清學檢查：
（1）血清凝集試驗。病程2周以上可陽性，效價在1∶100以上，兩次測定效價成倍上升，有助診斷。
（2）補體結合試驗。效價在1∶10以上為陽性。
（3）抗人球蛋白試驗。效價>1∶80為陽性。
（4）皮內試驗。將布氏桿菌素0.1ml注入前臂皮內，24～48小時局部腫塊超過2.5×2.5cm以上為陽性。
（5）熒光抗體測定也可應用。

2. 實驗室檢測家畜布氏桿菌病的方法主要有哪些

1．血象白細胞半數正常或輕度減少，淋巴細胞相對或絕對增多，分類可達60%以上。血沉在各期均增速。久病者有輕或中度貧血。 2．細菌學檢查患者血液、骨髓、乳汁、子宮分泌物均可做細菌培養。因牛種菌初分離困難。要求嚴格的環境，故各種標本最好採集兩份，一份用含肝浸液的肉湯做培基，在CO2孵箱中培養；另一份放一般環境中孵育，培養時間不得短於2周。急性期陽性率高，慢性期低。骨髓標本較血液標本陽性率高。有人建議慢性布魯氏菌病患者的血液接種到雞胚卵黃中可獲較高陽性率。 3．免疫學檢查 （1）血清凝集試驗（Wright試驗）試管法較靈敏。患者多在第二周出現陽性反應，1：100以上有診斷價值。病程中效價遞增4倍及以上意義更大。正常人可有低滴度的凝集素；某些傳染病的假陽性率可達30%以上，如兔熱病該凝集效價升高；注射霍亂疫苗的人90%可呈假陽性；接種布魯氏菌活菌苗者，凝集效價也增高。診斷時要注意分析。另外由於抗體IgA、IgG、IgM量的比例不同，如IgA含量高則可出現患者血清低稀釋度為陰性，高稀釋度反為陽性的所謂前帶現象。因此做該實驗時應增大患者血清稀釋范圍。 （2）補體結合試驗補體結合抗體主要為IgG，出現較遲，持續較久，一般1：16以上即為陽性。對慢性患者有較高特異性。 （3）抗人球蛋白試驗（Coombs』tist）用於測定血清中的不完全抗體。不全抗體可阻斷完全抗體與抗原的凝集反應，使凝集試驗呈假陰性。Coombs試驗是使不完全抗體與不可見抗原結合的復合物通過抗人球蛋白血清結合成塊，直接可見。故凝集試驗陰性者可作此檢查。

3. 布魯氏桿菌病

是由布氏桿菌引起的人畜共患傳染病。以母畜流產、不孕和公畜睾丸炎為特徵。OIE將其列為B類疫病。

1 病原學
布氏桿菌屬，為革蘭氏陰性小桿菌，不形成芽胞。根據其病原性、生化特性等不同，可分為6個種20個生物型，其中羊種布魯氏菌3個型、牛種布魯氏菌9個型、豬種布魯氏菌5個型，還有犬種布魯氏菌、綿羊附睾種布魯氏菌和沙林鼠種布魯氏菌。
布氏桿菌對各種物理和化學因子比較敏感。巴氏消毒法可以殺滅該菌，70℃10分鍾也可殺死，高壓消毒瞬間即亡。對寒冷的抵抗力較強，低溫下可存活1個月左右。該菌對消毒劑較敏感，2％來蘇兒3分鍾之內即可殺死。該菌在自然界的生存力受氣溫、濕度、酸鹼度影響較大，pH7.0及低溫下存活時間較長。

2 流行病學

布氏桿菌病廣泛地分布於世界各地，能侵害多種家畜、野生動物和人類。家畜的感染總體上可分為兩種類型：單一感染型和交差感染型。前者指家畜感染本種布氏桿菌，後者指由於牛、羊群共同放牧，通過相互間的接觸造成羊群既感染羊種布氏桿菌又感染牛種菌，或牛群既感染牛種菌又感染羊種菌等。山羊和綿羊對羊種布氏桿菌最易感。牛對牛種菌易感，也可感染羊種菌和豬種菌。豬對豬種菌和羊種菌均易感。馬和犬對羊、牛、豬三種布氏桿菌都有易感性，鹿對牛種菌和羊種菌易感。人類可以感染布氏桿菌。
病畜和帶菌動物，特別是流產母畜是最危險的傳染源。病菌存在於流產的胎兒、胎衣、羊水及陰道分泌物中。病畜乳汁或精液中也有病菌存在。
本病主要經消化道感染，也可經傷口、皮膚和呼吸道、眼結膜和生殖器黏膜感染。因配種致使生殖系統黏膜感染尤為常見。
本病一年四季均可發生，但有明顯的季節性。羊種布氏桿菌病春季開始，夏季達高峰，秋季下降；牛種布氏桿菌病以夏秋季節發病率較高。

3 臨床症狀

本病潛伏期長短不一，牛布氏桿菌病一般在14～120天之間。潛伏期的長短，視病原菌的毒力、感染量及感染時母牛的妊娠期而定。
母牛主要表現流產，可發生於妊娠的任何時期，多見於6～8個月。多見胎盤滯留，失去生育能力。公牛出現睾丸炎及附睾炎。有些牛發生關節炎、黏液囊炎和跛行。
綿羊和山羊常見流產和乳房炎。懷孕母羊易感染，常發生胎盤炎，引起流產和死胎。流產發生於妊娠後的3～4月。母山羊常常連續發生2～3次流產。公山羊生殖道感染則發生睾丸炎。有的病羊出現跛行、咳嗽。綿羊副睾種布魯氏菌感染其症狀局限於副睾，常引起附睾腫大和硬結。非懷孕母羊也可感染，但一般是一過性的。
豬的明顯症狀也是流產。出現暫時性或永久性不育、睾丸炎、跛行、後肢麻痹、脊椎炎，偶爾發生子宮炎、後肢或其他部位出現潰瘍。
犬可感染牛種、羊種和豬種布魯氏菌，但多為隱性感染，呈散發性，少數出現發熱。感染犬種布魯氏菌的母犬，妊娠40～50天發生流產，產死胎和出現不育症，淋巴結腫大。公犬常發生副睾炎、前列腺炎和菌血症。
馬可感染布氏桿菌的各個種，尤其對牛種和豬種菌最易感。多呈隱性感染，有的發生化膿性滑液囊炎，尤其在頭部和肩部，常見「馬肩瘺管」或「馬頸背瘡」。

4 病理變化

布氏桿菌最適宜在胎盤、胎衣組織中生長繁殖，其次是乳腺組織、淋巴結、骨髓、關節、腱鞘、滑液囊以及睾丸、附睾、精囊等。
特徵病變是胎膜水腫，嚴重充血或有出血點。子宮黏膜出現卡他性或化膿性炎症及膿腫病變。常見有輸卵管炎、卵巢炎或乳房炎。公畜精囊中常有出血和壞死病灶，睾丸和附睾腫大，出現膿性和壞死病灶。

5 診斷

5．1 根據臨床症狀和病理變化可做出初步診斷，確診需進一步做實驗室診斷。
5．2 實驗室診斷
在國際貿易中，指定診斷方法為緩沖布氏桿菌抗原試驗(BBAT)、補體結合試驗和酶聯免疫吸附試驗。替代診斷方法為熒光偏振測定法(FPA)。
病原檢查：抹片鏡檢(取病畜胎盤絨毛膜表面及水腫區邊緣觸片染色鏡檢)、分離培養、動物試驗。
血清學檢查：緩沖布氏桿菌抗原試驗(虎紅平板凝集試驗、緩沖布氏桿菌平板凝集試驗)、補體結合試驗(特異性高，但操作繁瑣)、間接酶聯免疫吸附試驗、競爭酶聯免疫吸附試驗、全乳環狀試驗(可用於篩選病畜群)、血清凝集試驗、布氏桿菌素試驗(適用於流行病學調查，由於其敏感性低，不能單獨作為正式的診斷試驗)。
病料採集：通常採取流產胎兒、胎盤、陰道分泌物或乳汁。
5．3 鑒別診斷
應與彎桿菌病、沙門氏菌病、鉤端螺旋體病、乙型腦炎、衣原體病和弓形蟲病等有流產症狀的疫病鑒別。

6 防治

堅持自繁自養。必須引進種畜時，要嚴格檢疫2次，確認健康者才能混群。
在疫區，每年定期以凝集反應檢疫2次，清凈群每年至少檢疫1次，檢出病畜應撲殺並做無害化處理。陰性反應畜可預防接種菌苗進行預防。
被污染的畜舍、運動場、飼槽、水槽等用10％石灰乳或5％熱火鹼水嚴格消毒；病畜分泌物、排泄物等應做無害化處理或消毒深埋。
獸醫、病畜管理人員、接羔員、屠宰加工人員，要嚴守衛生防護制度，特別在產仔季節更要注意。最好在從事這些工作前1個月進行預防接種，且需年年進行。

4. 豬病常用的血清學診斷方法有哪些

抗原和相應的抗體在動物體內或體外都能發生特異性結合反應，這種反應稱為抗原抗體反應，習慣上把體內的抗原抗體反應稱為免疫反應，體外的抗原抗體反應稱為血清學反應，因為抗體主要存在於血清中。

血清學反應可以用已知的抗體檢查未知的抗原，也可用已知抗原測定未知的抗體。人們根據抗體能與相應抗原發生反應並出現可見的抗原—抗體復合物的原理，設計了許多血清學診斷方法，不僅可以檢測動物體內乃至體外的病原微生物，或其抗原性成分，而且還可以測定動物機體對病原微生物的侵襲或對其抗原成分的免疫反應。在抗原—抗體復合物成不可見狀態時，可以通過瓊脂擴散、凝集實驗以及酶標記等指示系統，使其變為可見或可測狀態。

目前已知的血清學診斷方法很多，現僅介紹幾種在目前條件下規模化豬場通過學習都能做到的診斷方法：

（1）凝集試驗豬病診斷過程中常用的操作方法有以下幾種：

①全血平板凝集試驗實踐中主要用於細菌性疾病的抗體檢測和抗原（經分離培養後）的鑒定。現舉例用已知豬丹毒抗原（丹毒桿菌的純培養液）測定被檢豬血清中的抗體。其操作步驟如下：

a.材料豬丹毒凝集抗原，玻片，9號針頭，酒精棉球，酒精燈，鉑耳（取血環）等。b.操作用鉑耳取已知抗原1滴，置於玻片上。用酒精棉球擦拭針頭，鉑耳在酒精燈上灼燒消毒。用針頭刺破被檢豬的耳靜脈，以鉑耳取血與玻片上的抗原等量混合，在2～3分鍾內觀察結果。c.結果判定出現顆粒狀的凝集，為陽性反應。否則為陰性。

②試管凝集試驗是一種定量法，用於測定被檢血清或其他體液中有否某種抗體及其效價，可做臨床的輔助診斷，或用於流行病學監測。在豬場中，本法常用於豬布氏桿菌病的診斷。

A.材料布氏桿菌病試管凝集抗原（1∶20倍稀釋），布氏桿菌病陽性血清、陰性血清（1∶25倍稀釋），稀釋液（0.5 %石炭酸生理鹽水），滅菌小試管，1毫升吸管，試管架，待檢血清等。B.操作取試管7支置於試管架上，設陽性和陰性血清及抗原對照各1支，測定管4支，以後每增加1個樣品，只需增加4支測定管。

按表10示意稀釋血清，加抗原，完成後每支試管內應含1毫升液體。

5. 詳細描述布氏桿菌的微生物學診斷方法

（一）分離培養
急性期採集血液，慢性期採取骨髓，接種於雙相肝浸液培養基（一半斜面，一半液體）置37℃10%CO2環境中培養，每隔2天檢查一次，如無細菌生長則搖盪培養基，使液體浸過斜面上，有細菌生長，可依鑒定項目確定是否為布氏桿菌。經一月培養無細菌生長，可報告陰性。
（二）血清學檢查
通常作凝集試驗，判定凝集效價1：50可疑，1：100以上為陽性。效價增高4倍以上時，更有診斷價值。

6. 牛布氏桿菌病的診斷及防治方法

牛布氏桿菌病是人畜共患的慢性傳染病。主要侵害生殖系統，以母牛發生流產和不孕，公牛發生睾丸炎和不育為特徵，故又稱傳染性流產。本病病原體是牛布氏桿菌。

該病臨床症狀主要表現為妊娠母牛流產。流產後多數伴發胎衣不下或子宮內膜炎。

公牛發生睾丸炎和副睾炎，失去配種能力。

對牛布氏桿菌病的診斷可採取3種實驗室檢查方法。

（1）細菌學檢查。取母牛陰道分泌物、胎衣、胎兒胃內容物塗片，將塗片在酒精燈上加溫固定後，滴加2%沙黃水溶液，在火焰上方微微加熱0.5～1分鍾至出現蒸氣，水洗後用1%孔雀綠復染1～2分鍾，水洗吸干、鏡檢。若看到紅色的球桿菌便可確診。其他雜菌成綠色。

（2）全乳環狀反應。取剛擠出的全乳1毫升放於反應管內，加入抗原（染成藍色或紅色）0.1毫升，充分振盪混合，靜置於37℃溫箱中，1小時後取出立即判定。用藍色抗原時，若在乳脂層出現比乳柱深的藍色環狀帶即判為陽性。

（3）平板凝集反應。此法比較簡單實用。

採取被檢牛血液，待凝固後，分離血清作被檢材料。先用蠟筆在玻璃板上劃成2厘米×2厘米的方格，每一方格中放置一份被檢血清0.02毫升，用0.2毫升吸管吸取充分攪勻的抗原，分別在每一血清樣品旁加入0.03毫升抗原，每格各用一根火柴棒或牙簽攪拌血清和抗原，使其均勻混合，若室內溫度偏低，可將玻板在酒精燈上方微微加溫，於4分鍾內出現凝集現象者為陽性。

本病公牛無治療價值。母牛流產後繼發予宮內膜炎或胎衣不下時可用0.02%呋喃西林，0.1%高錳酸鉀液或生理鹽水沖洗子宮，排除沖洗液後向子宮內灌入抗生素葯物。胎衣不下時可採取手術剝離或肌內注射垂體後葉素50～100單位，以加速胎衣排除。本病防疫主要是加強檢疫，不到疫區引種。必須買牛時一定隔離30天以上，並作二次檢疫，確認健康才能入群。

對同群牛堅持每年定期預防注射布氏桿菌菌苗，被污染的場所及用具有3%～5%來蘇兒消毒。

7. 布魯氏菌病的檢查

1.周圍血象
白細胞計數正常或稍偏低，淋巴細胞相對或絕對增多。血沉在急性期增速，慢性期亦偏高。貧血不清，僅見於嚴重患者或有延徒性病灶者。
2.細菌培養
需時較長，4周後仍無生長方可放棄。骨髓培養的陽性率高於血液，慢性期尤然。急性期羊型患者的血培養陽性率可達60%～80%。
3.免疫學試驗
（1）血清凝集試驗 試管法乃直接檢測脂多糖抗原的抗體，效價≥1:160為陽性，但注射需亂菌苗後也可呈陽性，故應檢查雙份血清，若效價有4倍或以上增長，乃提示近期布氏桿菌感染。
（2）酶聯免疫吸附試驗（ELISA） 該法的陽性率高於凝集試驗，且檢測IgM及IgG的敏感性相似。因慢性患者的抗體屬IgG型，故本法可同時用於急、慢性病人的診斷。近來有採用親和素酶聯試驗，較ELISA更敏感。
（3）2-巰基乙醇（2-ME）試驗 本法可檢測IgG，用於鑒別自然感染與菌菌免疫。自然感染達1個月後，體內凝集即以IgG型為主（初為IgM型），該IgG對2-ME有耐受性；而菌菌免疫後3個月內的凝集素均以IgM為主，可為2-ME所破壞。
（4）補結試驗 補結抗體亦屬IgG，病程第3周的效介可超過1:16。本試驗的陽性率高於凝集試驗，特異性亦高，但出現時間晚於凝集試驗。
（5）人球蛋白試驗 病人尚可產生一種不完全抗體，後者雖可與抗原結合，但肉眼不可見。當將抗人球蛋白免疫血清加入抗原-不完全抗體復合物中，即出現直接可見的反應。不完全抗體出現早而消失晚，故可用於急、慢性期病人的診斷。鑒於本法操作復雜，只適用凝集試驗陰性的可疑病人，效價>1:80為陽性。
（6）皮內試驗 布魯菌素皮試乃為一種延遲超敏反應，24～48小時觀察結果。僅有局部紅暈而無腫塊者為陰性，局部紅腫和硬快的直徑達2～6cm者為陽性。皮試在病程6個月內的陽性率很低，慢性期患者幾近100%呈陽性或強陽性反應。
（7）其他免疫試驗 有反向被動血凝試驗、放射免疫、間接免疫熒光試驗等，因操作復雜，不適於普遍採用。
4.其他檢查
腦脊液檢查適用於腦膜炎患者，腦脊液細胞增多（淋巴細胞為主），蛋白質增高，其餘均正常。心電力產可示P-R新時期處長、心肌損害、低電壓等。骨、關節的X線檢查可見軟組織鈣化、骨質修復反應強而破壞性小，椎間盤和椎間隙變窄等。肝功能及腦電圖的改變的均屬非物異性。