❶ DNA檢測的方法都有哪些
DNA檢測
技術有很多,主要分為定性和定量方法。給你舉幾個:1,分子雜交技術,(包括southern雜交,northern雜交,基因晶元等)分子雜交分析的基本原理是基於DNA探針檢測變性而且固定在硝酸纖維素膜上的宿主細胞DNA。這些探針可以不依賴宿主細胞DNA來制備,例如用隨機引物制備探針。探針上標記酶﹑生物素﹑放射性同位素﹑地高辛(Dig)等。由於地高辛標記核酸探針,操作方便、靈敏度高,已標記的探針在4℃貯存可達兩年之久,方便隨時應用,所以現在常採用地高辛標記核酸探針,用游標記法將光敏Dig標記到探針上,製成光敏-Dig-核酸探針,再與固定在硝酸膜上的靶核酸進行靶DNA分子雜交,使之與抗Dig-鹼性磷酸酶結合,最後可用不同的檢測方式進行檢測,
發光檢測
和顯色檢測均可,靈敏度可達10pg以下2,基於DNA結合蛋白的方法Threshold®
Immunoassay分析系統是基於兩種DNA序列非特異性蛋白,單鏈DNA(ssDNA)結合蛋白(SSB)和抗ssDNA
的單抗。檢測的基本過程是當生物素—DNA單鏈結合蛋白和尿素酶—抗ssDNA
的單抗與變性的宿主細胞DNA結合最終形成復合物,通過親合素將此復合物連接到生物素—硝酸纖維素膜,在通過洗滌所有非特異性的被洗脫掉,最後放於有
尿素溶液
的讀數儀,尿素酶催化尿素分解成NH3和CO2
導致PH值發生變化,讀數儀根據PH值的變化換算成DNA的量,從而達到檢測殘余DNA含量的目的。3,PCR法,其中以實時定量PCR法最為突出熒光定量
PCR是基於PCR擴增時,在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針,產物的增加可以通過熒光信號指示,通過實時監控PCR體系中的熒光信號,對樣本中初始模板進行定量分析。定量PCR可實時檢測產物量,通過加入已知濃度的
標准樣品
繪制標准曲線,然後根據待測樣品在標准曲線中的位置推算初始模板的濃度,從而達到檢測殘余DNA含量的目的。此外,對DNA的定量技術也有很多,可以看下這篇文章《核酸定量技術及其在生物檢測中的應用》
❷ 測定DNA含量用什麼方法
紫外分光光度計 OD260/280比值,如果濃度夠大的話可以適當稀釋,是OD260在0.1到1之間最好,OD260值為1時 雙鏈DNA一般為50ng/ul.單鏈DNA一般為40ng/ul,需要具體測的話還是用熒光定量DNA檢測試劑盒,用多功能酶標儀檢測,還有一種就是跑電泳,根據已知濃度條帶的亮度對比你提的DNA亮度,這個需要分析軟體,肉眼是無法正確比較的。
❸ 測定DNA含量可以用什麼方法
外分光光度計 OD260/280比值,如果濃度夠大的話可以適當稀釋,是OD260在0.1到1之間最好。
OD260值為1時,雙鏈DNA一般為50ng/ul.單鏈DNA一般為40ng/ul,需要具體測的話還是用熒光定量DNA檢測試劑盒,用多功能酶標儀檢測。
還有一種就是跑電泳,根據已知濃度條帶的亮度對比你提的DNA亮度,這個需要分析軟體,肉眼是無法正確比較的。
❹ DNA質量檢測相關方法,及效果
對於基因組DNA質量檢測主要包括:基因組DNA片段大小的確定,基因組DNA濃度的測定,基因組DNA純度的測定三方面。
用到的技術方法有:瓊脂糖凝膠電泳(確定片段大小),使用紫外分光光度計測定基因組DNA溶液的OD值(濃度和純度的測定,OD260/OD280應該在1.8左右,高了表明有RNA污染,低了表明有蛋白質污染)
❺ DNA損傷有什麼檢測方法
DNA損傷修復-檢測方法
大部分DNA損傷修復都依賴於DNA的修復合成,所以對修復合成的測定常用來作為DNA修復的檢測方法。常用的有以下幾種:
放射自顯影法
在細胞培養物中加入氚標記的胸腺嘧啶核苷等放射源,用放射自顯影方法計數銀顆粒數來測定修復合成過程中參入到DNA分子中的量。
液體閃爍計數法
用液體閃爍計數器測定培養物中的放射源因修復合成而參入到DNA分子中的量。這一方法適用於大批量樣本。
超速離心法
一種應用比較廣泛的方法,可應用於切除修復、復制後修復及鏈斷裂修復方式的檢測。一般是用氚標記溴脫氧尿嘧啶核苷等參入到修復合成的DNA分子中去以改變DNA分子的重量(BrdU的分子量比尿嘧啶核苷大),通過超速離心可以從沉降系數不同的各組分中收集修復合成中參入量不同的DNA片斷,然後分別測定其放射性的強度來判斷修復合成的多少。
病毒宿主細胞復活法
以SV40病毒、腺病毒、皰疹病毒、噬菌體等感染培養的人體細胞或細菌,然後以紫外線等處理以造成病毒DNA分子的損傷,因為病毒DNA分子損傷的修復是靠宿主細胞的修復酶系統,所以受損傷的病毒能否繼續生存繁殖可間接地反映宿主細胞的修復功能。
姐妹染色單體互換(SCE)法
姐妹染色單體互換率的檢測也能反映一部分DNA修復功能。人類中的某些先天性DNA修復缺陷疾病如布盧姆氏綜合征患者的自發SCE顯著增高;另一些如著色性干皮病則誘發SCE增高。這是由於DNA修復功能的缺陷導致染色體穩定性減弱所致。
❻ 檢測DNA 有那些方法
甲基綠 或者 二苯胺試劑 DNA探針
❼ DNA怎麼檢測的
可以的,通過DNA分子雜交技術檢測的,利用的原理是鹼基互補配對原則 完全可以相信 只要沒被動過手腳哦
❽ 檢測DNA和RNA檢測方法有什麼區別
您好!檢測DNA的方法有:1.光密度測定。2.瓊脂糖電泳凝膠檢測法。3。二苯胺法。
檢測RNA的方法有:1.光密度測定。2.苔黒酚法。
主要的嘧啶和嘌呤具有共軛雙鍵,使鹼基,核苷,核苷酸和核酸在240-290nm的紫外波段有一段強烈的吸收峰,因此核酸具有紫外吸收特性,在260nm,處是最大的紫外光吸收值,根據朗波-比爾光吸收定律來計算出核酸含量。
❾ DNA檢測的原理、方法和手段。
要看你是要測DNA的序列還是僅僅檢測有沒有DNA。如果要檢測DNA的存在就用二苯胺試劑在水浴加熱的條件下觀察到藍色現象(原理是DNA遇二苯胺試劑在水浴加熱的條件呈藍色),如果要檢測DNA的序列就通過DNA分子雜交技術對從生物細胞內提取的DNA分子進行測序(原理是DNA的鹼基互補配對原則),如果是檢測DNA在細胞中的位置就用甲基綠吡羅紅滴一滴在顯微鏡下觀察觀察到細胞核呈綠色,細胞核外有部分點為紅色(原理是甲基綠好吡羅紅對DNA和RNA的親和力不同,甲基綠對DNA親和力強吡羅紅對RNA的親和力強)