1. 巨細胞病毒抗體(CMV-IgG)和巨細胞病毒抗體IgM(CMV-IgM)的檢測結果，望專業人士及團隊能幫忙解答，謝謝！
表明沒有感染病毒的IGM陰性，IgG陽性代表已經感染了艾滋病毒。因此，在懷孕前或懷孕期間，產科醫生會要求做產前檢查和產後護理檢查，以確定是否正常的指標是看IGM是陰性或陽性。巨細胞病毒IGM是陰性，表明你是不是感染了這種病毒，所以對胎兒的影響不大。咨詢產科醫生和婦科醫生的權威，她是這么說的，所以你可...以放心。通常只要提高個人體質，不要讓病毒復發。所以，你可以考慮懷孕。 ， IgM陽性，IgG抗體+：在體內抗體的早期感染;近期復發感染或潛伏在體內的病毒被激活，高風險，也可以採取其他檢測方法進一步證實，如果近期感染指標仍積極或胎兒不佳，應終止妊娠。 IgM陽性，IgG抗體：原發感染的急性期，危險性極高，臨床上非常罕見。該處理方法是相同的。 IgM抗體，IgG抗體+：早期感染，體內有抗體，有一定的免疫力，近期無感染。低風險，無需進一步處理。 IgM抗體，IgG抗體：沒有感染史，對身體有沒有抗體，沒有免疫力。考慮無風險的易感人群，應嚴格監控，有條件的人工免疫。
2. 有關巨細胞病毒的治療
孕產婦感染巨細胞病毒後的處理原則 ： 1.妊娠早期確診孕婦患巨細胞病毒感染，應立即行人工流產終止妊娠，或等待至妊娠20周時抽取羊水或臍靜脈血檢查特異性IgM，若為陽性應終止妊娠進行引產，以免分娩先天缺陷兒。2.妊娠晚期 感染巨細胞病毒或從宮頸管分離出病毒者無需特殊處理；妊娠足月臨產後，可經陰道分娩，因胎兒可能已在宮內感染巨細胞病毒。由於新生兒尿液中可能有CMV，故應使用一次性尿布，或用過的尿布做消毒處理。3.產婦乳汁中檢測出巨細胞病毒，應停止哺乳，改用人工喂養。4.抗病毒葯物對巨細胞病毒感染孕婦無實際應用價值，阿糖腺苷8～l0mg／（kg·d）靜脈滴注可能有效。大劑量干擾素能抑制病毒血症，緩解病情。概述編輯本段CMV感染在全世界分布，人是CMV的唯一宿主。不同國家及不同經濟狀況感染率不同。成人CMV感染和免疫功能有密切關系。 診斷編輯本段單靠臨床表現不能診斷CMV感染，從臨床標本中分離出病毒，同時抗體呈出4倍以上增加或持續抗體滴度升高，將有助於診斷。 一、病毒分離 最好用唾液、尿液、生殖道分泌物、乳汁和白細胞，接種到人的成纖維細胞內繁殖和分離，細胞病變效應（CPE）在1天或數周後出現，經固定和HE染色後可觀察到巨細胞，核內有內包涵體，核周暈圈及嗜酸性胞漿內包涵體，很象「貓頭鷹眼」（owl′s eye）亦可用單克隆或多克隆抗體的熒光染色等方法檢查。 二、血清抗體檢測 最常用的有補體結合試驗（CF）、間接免疫熒光試驗（IIF）、免疫酶試驗（EIA）、間接血凝試驗（IHA）和放射免疫試驗（RIA）等檢測CMV-IgG和IgM抗體。當單份血清標本已確定既往有CMV感染時，應當立即留血清標本，以及間隔2周、4周、8周再留血清標本，結合病毒分離可作原發感染診斷。 三、DNA探針 已廣泛應用於檢測CMV，其中以32P標記的探針敏感性最高，對某些標本來說，雜交方法可能比病毒分離更敏感。 四、聚合酶鏈式反應（PCR） （一）標本的採集及處理 採集的標本包括患者的血液、尿，以及腺體組織等。由全血制備的血沉棕黃層（buffy coats）可保存於-80℃；尿液標本可保存於液氮中。凍存標本應避免反復凍融。 尿液標本經2500r/min離心10min，以除去細胞碎片，收集上清液。由於尿液中含有PCR抑制劑，因此需用聚乙二醇（PEG6000）進行預處理：50μl尿上清與50μl 20%PEG6000和25μl 2mol/L NaCl混合，置冰浴中6h；15000r/min離心30min收集沉澱。再於6400r/min離心3min；盡可能吸去上清，將沉澱懸浮於蒸餾水中。該懸液可直接用於PCR擴增；擴增時應於100℃加熱10min，迅速置冰浴中冷卻。 （二）模板DNA的制備 1．由血液標本制備模板DNA 方法A：向血清中加入NaCl使最終濃度為150mmol/L；取10μl 此血清於70℃處理45s後即可直接進行PCR擴增。 方法B：由血沉棕黃層（BCP）制備： ① 用PBS洗滌BCP兩次，收取沉澱。 ② 加入500μl 6mol/L鹽酸胍，勻漿。 ③ 加入30μl 10mmol/L EDTA，10mmol/L NaCl，30μl20% Sarcosyl和5μl 蛋白酶K（10mg/ml），混合均勻，60℃反應1h。 ④ 加入1130μl 的乙醇，-20℃沉澱1～2h。 ⑤ 離心收集DNA沉澱。 ⑥ 用70%乙醇洗兩次，最後將沉澱懸浮於少量10mmol/L Tris-HCl，1mmol/L EDTA中。置4℃備用。 2.由冰凍組織標本制備模板DNA： ① 用恆冷切片機切取一塊5～10μm冰凍組織塊，置於1.5ml塑料管中。 ② 加入10%用緩沖液配製的福馬林。 ③ 10min後離心1～2min輕輕傾去上清液，沉澱用乙醇洗2次。 ④ 於室溫乾燥10～60min。 ⑤ 加入抽提緩沖液（100mmol/L Tris-HCl，4mmol/L EDTA、pH8.0,400μg/ml蛋白酶K），使剛好浸沒沉澱物（約50～100μl ）；將沉澱搗碎。福馬林固定的或石蠟包埋組織經脫蠟和乾燥後也可按此處理。 ⑥ 37℃放置過液。 ⑦ 置沸水中7min滅活蛋白酶K。 ⑧ 離心收集上清，取1～10μl 即可進行PCR擴增。 3.由尿液標本制備模板DNA： ①100μl 尿上清液與100μl 6mol/L異硫氰酸胍，7μl 2mol/L NaCl和20μl 玻璃粉懸液（DNA PREP，Asahi Glass Co，Tokyo）混合。 ② 室溫放置10min後，6400r/min離心2min，收集沉澱。 ③ 沉澱用50%乙醇，10mmo/L Tris-HCl、pH7.4, 50mmol/L NaCl洗一次，6400r/min離心1min。 ④ 同樣洗滌沉澱2次，收集沉澱。 ⑤ 加入50μl 蒸餾水，於55℃作用15min。 ⑥ 15000r/min離心2min，收集上清（含HCMV DNA），進行PCR擴增，將此懸液於100℃加熱10min，並迅速於冰浴中冷卻。 （三）引物及探針 引物及探針的設計是根據已發表的CMV的直接早期蛋白基因的啟動子區和開始的4個外顯子序列、晚期抗原gp64基因以及磷酸化蛋白pp71基因序列。常用的引物和探針列在表3中。 （四）PCR擴增步驟 1．10×反應緩沖液：100mmol/L Tris-HCl、pH8.4，500mmol/L KCl，25mmol/L MgCl2，2mg/ml明膠。 Taq DNA 聚合酶：5U/μl 。 10×dNTP：4種dNTP各2.0mmol/L。 引物：100pmol/L。 2．常規PCR擴增 10×反應混合物（50μl）反應緩沖液 5μl 10×dNTP 5μl 模板DNA 5μl Taq DNA聚合酶 0.2μl (IU) 引物 各0.5μl 蒸餾水 3.8μl 加1～2滴礦物油。 將反應混合物於94℃加熱5min；然後於95℃ 30s，55℃ 40s，72℃ 60s，擴增35～40循環。 3．套式（nested）PCR擴增： ①反應混合物的組成同（2），僅引物為IE2a和IE4b（包括了整個外顯子3，共721b），各100pmol。於94℃ 60s，52℃150s，72℃ 480s，擴增20循環。 ② 取2μl 上述擴增產物，各加100pmol的引物IE3a和IE3b補加其他試劑。然後，於94℃ 60s，52℃150s，72℃180s，擴增20循環。 （五）產物鑒定 擴增產物的分析可採用固相（濾膜）雜交和液相雜交試驗。 1． 固相雜交： ① 預雜交液為3×SSPE，5×Denhardt，0.5%SDS和25%甲醯胺.含有擴增產物的濾膜於42℃預雜交30～60min。 ② 加入標記探針（10cpm/μg，2ng/ml），雜交30～60min。 ③ 用0.2×SSPE,.01%SDS分別於室溫洗滌濾膜3次,5min/次;於60℃洗一次,10min/次;再於室溫洗一次以上,5min/次。 ④ 自顯影。 2． 液相雜交及電泳分析： ① 取1/10體積的擴增產物與0.5～1.0pmol末端記的探針混合。 ② 加入最終濃度為150mmol/L NaCl，10mmol/L磷酸鈉及1mmol/L EDTA溶液，使總體積為20μl 。 ③ 95℃ 10min，然後於56℃ 60min。 ④ 離心10s加入樣品緩沖液，於8%聚丙烯醯胺凝膠中進行電泳。 ⑤ 電泳畢，用溴化乙錠染色，然後對X線片曝光，自顯影。 HCMV DNA分子很大，其鹼基序列尚未全部搞清。雖然它的DNA的限制性內切酶片段長度具多形性，但是對其基因組的離散性還不清楚。用單一引物對進行PCR擴增，可鑒定90%的HCMV野型分離株；而採用針對不同HCMV序列的兩套以上的引物對，則可檢測幾乎所有的病毒株。因此，可根據情況使用兩對或兩對以上的位於基因組不同區域的引物進行PCR檢測。 在HCMV模板DNA制備過程中，有時會產生一些小片段DNA，在PCR反應時常導致一定水平的本底產物，從而影響對結果的判定。在這種情況下可採用套式PCR法，其基本原理就是靶DNA的擴增分為兩步：首先利用一對引物，擴增包括靶DNA在內的長片段DNA；然後取少量的擴增產物，利用只針對靶DNA的引物再進行第二次擴增。通過控制每步中的擴增循環數，即可防止由小片段DNA引起的假陽性。這種方法也可避免產生假陰性結果。 PCR檢測HCMV標本具有很高的敏感性。從HCMV感染的組織培養上清可檢測到相當於幾十個病毒的DNA分子或1～5PFU病毒的DNA序列。用非放射性寡核苷酸探針進行Southern雜交分析擴增產物，可從尿液標本中檢測到1pgHCMV DNA序列的水平；利用該系統，在4×104個細胞中只有一個病毒基因組即可檢測出，較斑點印跡雜交提高2×103倍。 PCR技術對HCMV感染的檢測具有臨床應用價值，因為體液中病毒DNA先於病毒感染的臨床症狀或血清學證據的出現，可作為HCMV感染的早期指標。由於HCMV可通過胎盤內感染、產道感染等途徑傳播，而且受感染的新生兒死亡率較高，因此利用PCR進行早期診斷及採取及時的治療措施，對優生
3. 請學生物的同學幫忙介紹一下「PCR」
PCR
一、PCR概述
1、什麼是PCR
聚合酶鏈式反應（Polymerase Chain Reaction，簡稱PCR）又稱無細胞分子克隆或特異性DNA序列體外引物定向酶促擴增技術。 由美國科學家PE（Perkin Elmer珀金-埃爾默）公司遺傳部的Dr. Mullis發明，由於PCR技術在理論和應用上的跨時代意義，因此Mullis獲得了1993年化學諾貝爾獎。
2、PCR技術發展史
PCR原理是由一對引物介導，能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增，經過n個熱循環擴增，擴增產物中所含特定基因數是原始模板數的(1+E)n(0＜E＜1,擴增效率＝倍，使得檢測擴增產物中的特定基因成為可能。
聚合酶鏈式反應自從1993年到現在很快經歷了四代產品：
第一代：手動/機械手式水浴基因擴增
如上圖所示，用三個恆溫水浴箱，分別將三個水浴溫度恆定在三個溫度：PCR的高溫變性溫度（如94℃）低溫復性溫度（如58℃），適溫延伸溫度（如72℃）。再用一個裝有PCR標本試管的提籃，用手工在不同溫度的水浴箱中依次水浴，標本在每個水浴箱中恆溫的時間用秒錶計時。這樣PCR標本就能完成下述形式的熱循環：
94℃ 30S 58℃ 45S 72℃ 60S
40次循環
這種方法的特點是：實驗人員勞動強度大，容易因疲勞引起差錯；而優點是:設備簡單，投資少，與自動化基因擴增儀相比，它無須升降溫過程，實驗時間短，試驗更接近理想PCR反應條件，事實表明實驗效果還是不錯的，但由於標本試管從一個水浴箱往另一個水浴箱移動中要較短暫暴露於空氣中，因此如移動速度不夠快時也會對標本形成溫度干擾，影響結果。本方法的另外一些缺點包括只能局限三個溫階（某些PCR反應需要多於三個溫階）、液體污染以及在低氣壓地區水溫難以燒到94℃變性溫度等。
為改進提高本方法的自動化水平，有人設計了機械手裝置，替代上述手工移動標本過程，形成了機械手水浴式基因擴增儀，該改進解決了實驗人員的高強度勞動問題，但又帶來了一個機械手部件大行程頻繁相對運動而引起的高故障。這種類型的基因擴增儀在九十年代中期我國北京、上海有定型的產品銷售，應用也較廣，曾為我國的分子生物學的發展做出過積極貢獻，而後便逐步被自動化程度更高的擴增儀替代，現在很少有單位使用。
第二代：自動化控制型定性基因擴增儀
與上述水浴式擴增儀相比，也有人稱該種擴增儀為乾式基因擴增儀，它是最具代表性的擴增儀，包括後續介紹的第三代、第四代都是以第二代為基礎集成了定量檢測部分。
第三代：終點定量/半定量
第二代的定性PCR只能判斷陰性陽性，而無法評價特定核酸的濃度及定量分析，定量PCR至少能達到定性PCR無法實現的下列功能：
•潛伏期病毒濃度探測
•感染程度
•致病病原體數量變化測定
•抗病毒葯物療效評估
•恢復期病毒載量檢測
自從1996年美國ABI公司發明第一台熒光定量PCR儀以來，PCR技術和應用從定性向定量快速發展.終點定量PCR的優點是設備投資少，對於國內經濟條件還不能購買昂貴實時熒光定量PCR儀的科研單位和醫療機構，利用現有的第二代常規定性PCR儀，在添加一台專用的單孔PCR終點產物熒光定量檢測儀便可開始工作，起到定量的作用。終點定量PCR技術是從定性向實時定量過渡的一個中間產品，而PCR終點產物熒光定量儀進口產品較少，國產儀器較多，如西安天隆的TL988，上海棱光的DA620型等
第四代：實時定量PCR
實時定量QPCR儀＋實時熒光定量試劑+通用電腦+自動分析軟體，構成PCR-DNA/RNA實時熒光定量檢測系統。
見下圖：(略)
2、實時熒光定量PCR的優勢：
設備由熒光定量系統和計算機組成，用來監測循環過程的熒光。與實時設備相連的計算機收集熒光數據。數據通過開發的實時分析軟體以圖表的形式顯示。原始數據被繪製成熒光強度相對於循環數的圖表。原始數據收集後可以開始分析。實時設備的軟體能使收集到的數據進行正常化處理來彌補背景熒光的差異。正常化後可以設定域值水平，這就是分析熒光數據的水平。樣品到達域值水平所經歷的循環數稱為Ct值（限制點的循環數）。域值應設定在使指數期的擴增效率為最大，這樣可以獲得最准確，可重復性的數據。如果同時擴增的還有標有相應濃度的標准品，線性回歸分析將產生一條標准曲線，可以用來計算未知樣品的濃度。
3、實時熒光定量PCR技術原理
所謂real-time Q-PCR技術，是指在PCR反應體系中加入熒光基因，利用熒光信號累積實時監測整個PCR進程，最後通過標准曲線對未知模板進行定量分析的方法。在 real-time 技術的發展過程中，兩個重要的發現起著關鍵的作用：（1）在90年代早期，Taq DNA多聚酶的5′核酸外切酶活性的發現，它能降解特異性熒光記探針，因此使得間接的檢測PCR產物成為可能。（2）此後熒光雙標記探針的運用使在一密閉的反應管中能實時地監測反應全過程。這兩個發現的結合以及相應的儀器和試劑的商品化發展導致real-time Q-PCR方法在研究工作中的運用。
PCR反應過程中產生的DNA拷貝數是呈指數方式增加的，隨著反應循環數的增加，最終PCR反應不再以指數方式生成模板，從而進入平台期。在傳統的PCR 中，常用凝膠電泳分離並用熒光染色來檢測PCR反應的最終擴增產物，因此用此終點法對PCR產物定量存在不可靠之處。在real-time Q-PCR中，對整個PCR反應擴增過程進行了實時的監測和連續地分析擴增相關的熒光信號，隨著反應時間的進行，監測到的熒光信號的變化可以繪製成一條曲 線。在PCR反應早期，產生熒光的水平不能與背景明顯地區別，而後熒光的產生進入指數期、線性期和最終的平台期，因此可以在PCR反應處於指數期的某一點 上來檢測PCR產物的量，並且由此來推斷模板最初的含量。為了便於對所檢測樣本進行比較，在real-time Q-PCR反應的指數期，首先需設定一定熒光信號的域值，一般這個域值（threshold）是以PCR反應的前15個循環的熒光信號作為熒光本底信號 （baseline），熒光域值的預設設置是3～15個循環的熒光信號的標准偏差的10倍。如果檢測到熒光信號超過域值被認為是真正的信號，它可用於定義 樣本的域值循環數（Ct）。Ct值的含義是：每個反應管內的熒光信號達到設定的域值時所經歷的循環數。研究表明，每個模板的Ct值與該模板的起始拷貝數的 對數存在線性關系，起始拷貝數越多，Ct值越小。利用已知起始拷貝數的標准品可作出標准曲線，因此只要獲得未知樣品的Ct值，即可從標准曲線上計算出該樣 品的起始拷貝數。
4、實時熒光定量PCR技術在醫療方面的應用
⑴ 病原體檢測：目前，採用熒光定量PCR檢測技術可以對淋球菌、沙眼衣原體、解脲支原體、人類乳頭瘤病毒、單純皰疹病毒、人類免疫缺陷病毒、肝炎病毒、流感病毒、結核分枝桿菌、EB病毒和巨細胞病毒等病原體進行定量測定。與傳統的檢測方法相比具有靈敏度高、取樣少、快速簡便等優點。
如：結核菌基因診斷的意義主要表現在：
a.區分TB與其它分枝桿菌；
b.檢測TB耐葯基因；
c.提高TB的陽性檢出率。
⑵ 產前診斷：到目前為止，人們對遺傳性物質改變引起的遺傳性疾病還無法治療，只能通過產前監測，減少病嬰出生，以防止各類遺傳性疾病的發生，如為減少X連鎖遺傳病患兒的出生，從孕婦的外周血中分離胎兒DNA，用實時熒光定量PCR檢測其Y性別決定區基因是一種無創傷性的方法，易為孕婦所接受。
⑶ 葯物療效考核：對乙型肝炎病毒 (HBV)、丙型肝炎病毒 (HCV) 定量分析顯示：病毒量與某些葯物的療效關系。HCV高水平表達，干擾素治療作用不敏感，而HCV低滴度，干擾素作用敏感；在拉米夫定治療過程中，HBV-DNA的血清含量曾有下降，隨後若再度上升或超出以前水平，則提示病毒發生變異。如PCR技術在HBV檢測中的應用及意義：
a.了解乙肝病毒在體內存在的數量。
b.是否復制。
c.是否傳染，傳染性有多強。
d.是否有必要服葯。
e.肝功能異常改變是否由病毒引起。
f.判斷病人是適合用哪類抗病毒葯物。
g.判斷葯物治療的療效。
⑷ 腫瘤基因檢測：盡管腫瘤發病的機理尚未清楚，但相關基因發生突變是致癌性轉變的根本原因已被廣泛接受。癌基因的表達增加和突變，在許多腫瘤早期就可以出現。實時熒光定量PCR不但能有效地檢測到基因的突變，而且可以准確檢測癌基因的表達量。目前用此方法進行過端粒酶hTERT基因、慢性粒細胞性白血病WT1基因、腫瘤ER基因、前列腺癌PSM基因、腫瘤相關的病毒基因等多種基因的表達檢測。隨著與腫瘤相關的新基因的不斷發現，熒光定量PCR技術將會在腫瘤的研究中發揮更大的作用。
(5)在優生優育中的應用:
近年來經濟發展迅猛，人民生活水平逐年提高，對自身及家人特別是下一代的身體健康愈來愈重視。另外，由於國內計劃生育工作逐步走向深化，獨生子女比較多，孩子的身體素質更成為長輩們關注的焦點。因此，怎樣提高新生兒質量改善人類遺傳素質，即優生優育已顯得非常重要。①避免有嚴重遺傳性疾病和先天性疾病的個體出生。②增進體力、智力優秀個體的繁衍。其中避免有嚴重遺傳性疾病及先天性疾病個體出生是優生優育最基本的內容。從臨床優生學角度分析具體工作包括在母親妊娠期間對母親及胎兒進行遺傳學檢查盡量排除常見的遺傳性疾病個體的出生，另外在妊娠期檢查母親是否患有某些易引起胎兒畸形的傳染性疾病如弓型蟲、風疹病毒、衣原體等感染。以往對遺傳性疾病的檢測主要使用染色體分析法，而臨床絕大部分遺傳性疾病是基因病而不是染色體病，染色體發析法不能檢出的。若使用PCR基因擴增法聯合單鏈構型多態性分析（sscp）、限制性片段長度多態性分析（RFCP）等位基因特異性寡核某酸（Aso）點雜交或差異PCR可以很方便地檢出單個基因的突變而且其准確性可達95%以上，因此使這一問題得到了較好的解決。常見的易致胎兒畸形的感染性疾病原體主要有單皰病毒（HSVⅡ）、風疹病毒（RV）、人巨細胞病毒（HCMV）、弓形體（TOX）及沙眼衣原體（CT）。以往這些病原體感染診斷比較困難，主要靠培養法進行確診，而培養法費時，代價昂貴，而且受到采樣、樣本保存及用葯等因素的影響，基本不能在臨床中推廣。PCR基因擴增法因其高敏感性、高特異性非常適合這些疾病診斷及療效跟蹤，是最值得推薦的檢驗方法。
1、PCR基因擴增法在遺傳性疾病產前診斷中的應用，遺傳病是由於遺傳物變化而引起的機體某一功能或缺陷或異常所致的疾病，其根本變化在於遺傳物質。其類型包括單基因遺傳病，染色體遺傳病及多基因遺傳病。遺傳病診斷除詢問病史，一般物理診斷，普通實驗室檢查及了解症狀、體征外有特殊性。過去常應用系譜分析，染色體及性染色色質檢驗作為遺傳病診斷的主要依據，再輔以相關的酶學分析從而作出診斷。隨著分子生物不的迅速發展及其在遺傳性病診斷中的廣泛應用，基因診斷技術誕生，基因診斷技術為遺傳病的臨床診斷起了很大的促進作用。聚合酶鏈反應（PCR）技術是基因診斷主要技術之一。這種快速、靈敏的基因體外擴增技術與多種分子生物學手段相配合可以檢出大部分已知的基因突變、基因缺失、染色體錯位等，PCR技術日益成為遺傳病診斷的最有效、最可靠的方法之一。以下舉幾個在國內有普遍意義的例子。
（一）、PCR檢測地中海貧血；地中海貧血（Thalassemia）是一種遺傳性慢性溶血性貧血病，是世界上最常見且發病北最高的一種單基因遺傳病。在兩廣、貴州、四川等地發病率較高，在廣西等地高達15%。地中海貧血是由於基因突變造成珠蛋白的不平衡，使結構正常的肽鏈合成量減少甚至沒有合成表現為溶血性貧血。接受累基因種類分為α、β、γ等，其中以 α、β地貧為最常見，危害了最大。珠蛋白基因簇位於人6號染色短臂上，有兩個重復基因基因位於α1、α2、兩個α基因及其旁側序列有很大的同源性，易出現染色體不等交換，導致α基因缺失－α地貧。α地貧基因部分缺失有α1基因部分缺失、α2基因缺失、α1及α2基因同時缺失及非缺失型地貧。可以應用PCR技術擴增α1、α2基因從而檢測這些基因是否缺失、突變等，從而對α型地中海貧血作出診斷。β地中海貧血基因缺陷主要表現為基因序列中單一核苷酸的突變，或少數鹼基的缺失、插入，使正常β珠蛋白肽鏈合成減注或缺失。應用位點特異性寡核苷探針（Aso）進行PCR產物斑點雜交即可對其作出診斷。
（二）、苯丙酮尿症，苯西酮尿證（PKU）是一種常染色體隱性遺傳病，患者因苯丙酸羥化酶轉化為酷氨酸，使苯氨酸及其代謝物在體內大量蓄積，出現腦組損傷及不可逆性智力發育障礙。PKU患者出生時正常，新生兒一經確診為PKU停止母乳喂養採用低苯丙氨酸欽食療法8—10年，可使患者智力水平發展維持正常。由於低苯丙氨酸欽食非常昂貴，一般家庭難以承受，因此，施行產前診斷，防止患兒出生是最好的選擇。PAH只在肝細胞中表達，不能用血細胞，成纖維細胞、羊水、絨毛細胞進行酶活性分析，只能進行基因診斷。PKU的基因變化並非全部PAH基因的缺失，而是以點突變為主要表現形式，而且其突變位點很多。必須使用PCR擴增結合，ASO，SSCP或使用擴增片段長度多態性分析（AmpFLA）進行檢測，這些技術都較復雜，檢驗人員須經專業培訓。
（三）、血友病，血友病是一組最為常見的遺傳性凝血障礙，根據因子缺陷的不同分為甲、乙兩型，（Ⅷ、Ⅸ因子缺陷），也有復合型血友病，但不常見。甲型血友病發病率為1/10000，Ⅷ因子基因位於G6PD基因附近，全長186Kb，大范圍的基因重排（缺失、插入、重復）導致甲型血友病的病例很少，僅為Ⅷ因子缺陷的5%，大部分病人表現為單個或少數鹼基的突變。由於Ⅷ因子基因長度為186Kb，突變位點多，而且新生突變頻率高，從臨床角度講不能對每一個突變都檢測，可對最為常見的幾種突變類型進行檢測，主要的檢測手段是PCR結合RELP分析。乙型血友病發病率占血友病的20%，其基因變化及檢測方法與甲型血友病類似。
（四）、性別發育異常，區別雄性及雌性的物質基礎是性染色體，哺乳動物胚胎發育中，雌性表型不需要任何調節，而雄性表型則由多因素決定，位於Y染色體上的指導雄性性別分ss化的基因命名為睾丸決定因子（TDF）。現代研究表明，SRY（Sex-determining region of Y chromosome）基因是TDF基因，位於Y染以體短臂末端。SRY區缺失易導致46XY核型個體發育成女性。進行基因檢測可以檢出SRY基因組的易位及缺失，從而診斷性別發育異常，這一探索性別異常的研究非常熱門。另外還有一種46XY核型異常的病人即睾丸女性化，這是用於雄激素受體（androgen receptor,AR）基因缺欠，使雄激素的靶基因對雄激素不應答就答或不全而引起的，根據病情的不同有不同的表型，AR缺陷有很高的新生突變頻率，表現為無家族史的散發病。AR基因長90Kb，位於X染色體上，AR基因異常大部分為個別基因鹼基的突變，可以通過PCR結合ASO或SSCP檢出。
（五）、脆—X綜合征，脆—X綜合片（fragile-X Syndrome,Frax）是發病率最高的一種X-連鎖的智力低下綜合征（X-linked mental retardation XLMR）。因這種綜合征與X染色體上的脆位點連鎖而得名。大多數FRAX男性智商（IQ）低於50，並有隨著年齡增長而下降的趨勢。用人工酵母染色體（artificial yeast chromosome,YAC）克隆技術分離獲得覆蓋X-脆位點區域的YAC克隆，在這一克隆中獲得一個能在人腦中表達的基因命名為FMR-1（fragile X mentai retardation-1）,FMR-1的5『端有一個CGG（精）三核苷酸串（CGG）n,正常人群中（CGG）n中存在多態性，重復序列為6-46個，當重復超過52個時，此區域的分裂呈不穩定，導致重復序列大幅度增加，無臨床表現的攜帶者插入片段長度小於500bg，有臨床表現者，長度都大於600BP而且伴有甲基化。人們將500bp作為前突變與全突變的分界線。對Frax的診斷以前用細胞遺傳學的方法檢測脆位點，實驗條件嚴格，成功率不高。現在採用分子遺傳學方法即可診出前突變及全突變。用PCR擴增CGG重復序列，檢測擴增產物的長度。突變基因的擴增片段增大，體細胞異質性時出現多條長度不等的擴增帶甚至拖尾成一片，或者因為擴充的全突變插入片段過長超出PCR擴增能力而結果無擴增現象。
2、PCR基因擴增法在「Torsch」診斷中的應用，在妊娠早期（1-3個月），有些病原微生物的感染易導致胎兒畸形，這些病原體中最常見的有弓體（TOX）、風疹病毒（RV）、單純皰疹病毒（HSV）、沙眼衣原體（CT）、及巨細胞（HCMV），對這幾種病原體的檢測根據其英文詞首簡稱為Torsch試驗。
（一）、弓形體的PCR檢測，弓形體有廣泛的自然疫原性，人體多為隱性感染，抵抗力低時可以有臨床表現。弓形體的診斷較困難，血清學方法敏感性較高但有交叉性出現假陽性而且無法確定近期感染、遠期感染或一過性感染。確診的方法是活組織檢查或動物接各，這些方法陽性率太低不能推廣。PCR檢測可以檢出樣本中1-2個病原體而且准確性高，是目前對弓形體檢測最優秀的方法。作為優生優育檢查應於妊娠前或妊娠早期取全血樣本，可以用EDTA或肝素抗凝，以EDTA抗凝效果最好，檢測外周血白細胞中是否有TOX存在。對於不孕，多次自然流產或養小動物的產期婦女，作弓形蟲檢測有更重要的臨床意義。
（二）、風疹病毒感染：風疹病毒（RV）是一種單股正極性RNA病毒，人是風診病毒的唯一宿主。RV感染可以引起胎兒的畸形，影響胎兒免疫系統的發育，因此RV檢測在優生優育工作中顯得非常重要。RV檢測可以用直接培養法及IgM抗體測試法。培養法費時很長而且常受到其它病毒的干擾，IgM測定法結果了不太准確，PCR法敏感性及特異性都很高而且簡便快速，是RV感染最優秀的測試方法之一。風疹病毒侵入體內後在上呼吸道增殖而出現症狀，面部出現丘疹，迅速遍及全身。樣本採用妊娠母親的咽部拭子、血清、產婦的絨毛或妊娠如羊水等。RV病毒是RNA病毒，PCR擴增較復雜，應注意樣本的採集時機，操作的准確性。
（三）、單純皰診病毒，單純皰疹病毒（herpes simplex virus,HSV）是一種DNA病毒，可引起多器官的炎症，可通過性接觸傳播。HSVⅡ感染復發率高，80%的感染者於12個月內復發。HSV感染後經機體免疫系統清除，少數病人終生攜帶，體弱時復發。PCR法檢測HSV敏感性高而且可以直接對HSVⅠ/Ⅱ型進行分型鑒定。
（四）、沙眼衣原體，沙眼衣原體（CT）不僅能引起沙眼而且能引起生死器感染，是一種性傳播性疾病。與淋病（NG），梅毒等經典性傳播性疾病不同，CT易經其它接觸途徑傳播，少數地區對妊娠期婦女普查結果表明此人群中發病率高達20%-30%。在歐美等國家CT的感染已超過淋病而居性傳播性疾病之首。衣原體感染常呈無症性或非特異性症狀的隱性感染，不容易診斷。以往用培養法進行確診，費時且敏感性、准確性都不足。PCR用於CT檢測時應注意不同檢測目的的取材不同，對於性傳播性疾病診斷應取生殖道分泌物（查脫落細胞），而對於早期妊娠病人應查其全血樣本，在妊娠後期或臨產時再查陰道分泌物以便指導生育時產道清理。
（五）、人巨細胞（HCMV），HCMV感染十分普遍，除少數原發性感染發生原發性單核細胞增多症外，極大多數為隱性感染。HCMV可以長期潛伏在體內，當機體免疫功能低下時，病毒會激活而造成嚴重疾病在妊娠期如果孕婦感染HCMV可以引起早產、畸形、死胎及新生兒巨細胞包涵體病等。HCMV屬皰疹病毒科，可以從唾液、尿、宮頸分泌物及乳汁排出。HCMV「金標准」的診斷試驗是用單層成纖維細胞作病毒培養，其它的實驗檢查有血清學的檢測及包涵體檢測。PCR是HCMV檢測的一種新方法，用於檢測的樣本有血，生殖道分泌物拭子等，用於優生優育檢測時應取血樣本。對於早期妊娠病人若有HCMV感染應再檢測羊水，或其它妊娠物，對病人認真及進跟蹤檢查，綜合判斷並採取相應的醫療措施。
PCR應用於優生優育有很大的優越性，使這一技術的推廣應用剛剛起步，應注意操作的准確性，盡量避免誤診。對感染性疾病首先應取孕婦血樣檢測，有可疑時或血中檢出病原體核酸時應盡早作羊水等妊娠物檢查。不管是否懷疑胎兒有嚴重遺傳病傾和中或有感染引起的畸形風險，對胎兒的去留應尊重胎兒父母親的意見。
5、實時熒光定量PCR技術在研究方面的部分應用
一、 新葯開發研究，人用葯物及其他葯物
針對一些感染性疾病的葯物，如各種病毒病、細菌病等，在新葯的開發過程中，快速了解葯物對疾病進程的影響可以為新葯開發節約大量的人力、時間和資金，與以前所用的Elisa等方法相比，實時熒光定量PCR技術可以快速、准確、定量、靈敏地測定血液或組織中病原體的含量，因此有利用分析葯物的作用效果，為比較不同的配方的療效、用葯量、用葯時間等等提供快速、定量的評價。
此方法除了用於人用葯物以外，還可以用於畜用葯物，甚至其他經濟動物及植物的葯物研究等，因此其在葯物研究方面的應用范圍是很廣的。
二、 超早期感染用葯物及療法的研究與開發
實時熒光定量PCR方法測定是血液中病毒核酸的含量，因此不必等到病人體內產生抗體，同時，由於其靈敏度與Elisa相比不可同日而語，在病毒感染的早期，即血液中病毒含量很低時就可以測定。因此就出現了一個新的領域，即在病毒或細菌含量很低時如何用葯，用什麼葯以及用葯量等進行研究，為將疾病消滅在超早期作出貢獻。
三、 葯物療效研究，人用葯物及其他葯物
對於一些已經上市的新葯或是應用了很長時間的老葯，其用葯的效果以及用葯量及用葯時間都可以進行進一步的研究，為更加合理化的應用這些葯物為人類造福進行進一步的研究。以前所用的方法由於不能准確定量，靈敏度也不夠，因此有很多需要研究的內容沒有完成。這一方面需要研究內容很多，意義也很大。
四、 新的愈後指標的研究
對於感染性疾病，在葯物作用至一定程度後，就認為可以停葯了，但是應該在什麼停葯，現在大都沒有一個明確的指標，現在所用的指標由於受到檢測方法的靈敏度及准確性限制，這一指標未必合理，因此有必要對治癒的指標以及指標與復發率以及疾病轉化為其他疾病之間的關系等進行進一步的研究，從而為葯物或療法徹底治癒疾病打下堅實的理論基礎。
五、 新診斷及檢驗試劑的開發
現有的很多診斷及檢驗方法都不能同時滿足快速、靈敏、定量的要求如現有培養法、Elisa法等等，而熒光定量PCR方法以則可以做到這一點，從而可為臨床疾病、商檢、糧油檢驗、食品檢驗、血液檢驗等等開發新的試劑，從而提高檢驗的靈敏度、速度及准確性等；這類試劑的種類是非常多的，所開發的試劑的社會效益及經濟效益都是很巨大的。
六、 血液檢驗漏檢率
由於實時熒光定量PCR方法比Elisa靈敏很多，因此，血站或血液研究所一般用來研究Elisa方法的漏檢率，即分析Elisa方法測定為陰性的血樣，再用實時熒光定量PCR方法來復檢。復檢時，一般24個Elisa陰性的血樣混合成一個樣本進行檢測。上海用此方法在用於血液製品的血液中發現一例HIV，後經測定供血者，證實病人的確是HIV陽性。北京市紅十字血液中心正在測定北京血站中5萬份Elisa陰性血樣的漏檢率。由於不同地區所用的Elisa試劑、方法、批號等都不相同，因此不同地區都有必要進行這一工作。
由於熒光定量PCR方法的快速、靈敏、定量的特點，其在研究及開發方面的應用是不勝枚舉的，如研究個人基因型與葯物療效之間的關系等；研究人員也可以根據自己研究項目開發其新的用途。
二、TL988實時熒光定量PCR檢測系統產品介紹
1、如何選擇一款適合自己的PCR儀
回顧分子生物學的發展歷程，PCR技術的發明和普及無疑是最重要的篇章之一。而PCR技術在近20年的不斷發展創新中，最受矚目當屬熒光實時定量PCR技術(real-time quantitative PCR, or qPCR)。定量PCR技術真正實現了PCR從定性到定量的飛躍，通過對PCR過程的實時監控，專一、靈敏快速、可重復地精確定量起始模版濃度，已經在科研和臨床診斷領域得到了越來越廣泛的應用。我公司從熒光定量PCR的原理入手，詳細介紹熒光定量PCR儀的類型和技術，為定量PCR儀的選擇提供詳細參考。
定量PCR儀主要由兩部分組成，一個是PCR系統，一個是熒光檢測系統。從前面的原理介紹不難看出選擇定量PCR儀的關鍵--由於定量PCR必需藉助樣本和標准品之間的對比來實現定量的，對於定量PCR系統來說，重要的參數除了傳統PCR的溫控精確性、升降溫速度等等，更重要的還在於樣品孔之間的均一性，以避免微小的差別被指數級放大。至於熒光檢測系統，多色多通道檢測是當今的主流趨勢--儀器的激發通道越多，儀器適用的熒光素種類越多，儀器適用范圍就越寬；多通道指可同時檢測一個樣品中的多種熒光，儀器就可以同時檢測單管內多模版或者內標+樣品，通道越多，儀器適用范圍越寬、性能就更強大。熒光檢測系統主要包括激發光源和檢測器。激發光源有鹵鎢燈光源、氬離子激光器、發光二極體LED光源，前者可配多色濾光鏡實現不同激發波長，而單色發光二極體LED價格低、能耗少、壽命長，不過因為是單色，需要不同的LED才能更好地實現不同激發波長。監測系統有超低溫CCD成像系統和PMT光電倍增管，前者可以一次對多點成像，後者靈敏度高但一次只能掃描一個樣品，需要通過逐個掃描實現多樣品檢測，對於大量樣品來說需要較長的時間。定量PCR儀需要考慮的另外一個因素是軟體設計，這一點目前較新型號的儀器都有不錯的配套軟體可以滿足常規使用。--隨著定量PCR技術在臨床診斷、疾病
4. 感染巨細胞病毒表現是什麼
巨細胞病毒（Cytomegaoviyns，CMV）亦稱細胞包涵體病毒，是一種皰疹病毒組DNA病毒。分布廣泛，其他動物皆可遭受感染，引起以生殖泌尿系統，中樞神經系統和肝臟疾患為主的各系統感染，從輕微無症狀感染直到嚴重缺陷或死亡。 巨細胞病毒葯品唾液、尿液、子宮頸分泌液等標本離心沉澱，將脫落細胞用姬姆薩...染色鏡檢，檢查巨大細胞及核內和漿內嗜酸性包涵體，可作初步診斷。分離培養可將標本接種於人胚肺纖維母細胞中，由於CMV生長周期長，細胞病變出現慢，為了快速診斷，可將培養24小時的感染細胞固定，用DNA探針進行原位雜交，檢測CMVDNA。用ELISA檢測lgM抗體和lgG抗體，適用於早期感染和流行病學調查。IgG抗體可終身持續存在，lgM抗體與急性感染有關。不論是初次感染或復發感染，當病毒血症時，可用葡聚糖液提取外周血單個核細胞，製成塗片，加CMV單克隆抗體，採用免疫酶或熒光染色，檢測細胞內抗原。 應用免疫印跡法和分子雜交技術直接從尿液，各種分泌物中檢測CMV抗原和DNA是既迅速又敏感，准確的方法。CMV感染診斷中應注意的問題：CMV感染的診斷依據詳見CMV感染診斷方案，臨床應用中需注意以下幾方面的問題。 1．對CMV感染的診斷主要依靠實驗室檢查結果，因此實驗室操作從試劑選用至結果判定，都需保證質量。採用國際上尚未公認的新方法時，應與「金標准」病毒分離等結果對照，考核其可靠性。2．在中國小兒中，原發感染大多發生於嬰幼兒時期，此時又多呈產毒型感染狀態。以後隨著年齡增長趨向潛伏感染。但在患有其他疾病時，體內病毒又可被激活，呈現產毒型感染。如人們觀察過3歲以上的53例急性黃疸型甲型肝炎，在他們的急性期除2例(3.8%）外均伴有CMV感染，其中半數以上（64.2%）為再發感染，以後隨訪中發現又轉為潛伏感染，可以作為佐證。 3．CMV感染小兒多表現為無症狀性感染，只有少數為症狀性感染，且又多發生於先天性和圍生期感染患兒。在嚴重免疫缺陷時，可出現肺炎、肝炎等全身疾患。 4．CMV感染可累及宿主機體各個器官和系統，但產生嚴重病變的機會不多，靶器官的損害又與患兒的年齡有關。中樞神經系統損害（如小頭畸形、智能障礙等）和先天畸形主要見於先天性感染；肝炎、肺炎還可見於嬰幼兒時期感染。因此，在生後感染患兒身上發現有中樞神經損害和先天畸形，將其歸為CMV感染所致是不科學的。 5．新生兒在娩出時，往往會在其體內混入微量母親血液，臍帶血更甚。故從臍帶血或初生新生兒血中用PCR法查得CMVDNA，以示新生兒感染也是不可靠的。應該再次對新生兒復查或作其他病毒學檢查核實。 6．對症狀性CMV感染如肺炎、肝炎的診斷，僅僅依賴血清學或尿、血中病毒學檢查陽性結果也欠妥當。因為這些檢測結果只能表現體內有CMV存在或復制，卻無定位意義。如從病變肺、肝組織中原位檢測陽性則就可靠，但是實施困難。因此，應該採取肺炎患兒的下呼吸道分泌物替代或排除能夠引起同樣病症的其他病因和病原，力求診斷可靠。 建議您，到權威醫院檢查，及時治療。
5. 嬰兒感染巨細胞病毒的症狀
巨細胞病毒 【巨細胞病毒(Cytomegalovirus,CMV)】:是一種皰疹病毒組DNA病毒。分布廣泛,有與其他動物皆可遭受感染，引起以生殖泌尿系統，中樞神經系統和肝臟疾患為主的各系統感染，從輕微無症狀感染直到嚴重缺陷或死亡。 巨細胞病毒(Cytomegalovirus CMV)亦稱細胞包涵體病...毒，由於感染的細胞腫大，並具有巨大的核內包涵體，故名。 一、生物學性狀 CMV具有典型的皰疹病毒形態，其DNA結構也與HSV相似，但比HSV大5%。本病毒對宿主或培養細胞有高度的種特異性，人巨細胞病毒(HCMV)只能感染人，及在人纖維細胞中增殖。病毒在細胞培養中增殖緩慢，復制周期長，初次分離培養需30～40天才出現細胞病變，其特點是細胞腫大變園，核變大，核內出現周圍繞有一輪「暈」的大型嗜酸性包涵體。 二、致病性 CMV在人群中感染非常廣泛，我國成人感染率達95%以上，通常呈隱性感染，多數感染者無臨床症狀，但在一定條件下侵襲多個器官和系統可產生嚴重疾病。病毒可侵入肺、肝、腎、唾液腺、乳腺其他腺體，以及多核白細胞和淋巴細胞，可長期或間隙地自唾液、乳汗血液、尿液、精液、子宮分泌物多處排出病毒。通常口腔，生殖道，胎盤，輸血或器官移植等多途徑傳播。 (一)先天性感染 妊娠母體CMV感染可通過胎盤侵襲胎兒引起先天性感染，少數造成早產、流產、死產或生後死亡。患兒可發生黃疸，肝脾腫大，血小板減少性紫斑及溶血性貧血。存活兒童常遺留永久必性智力低下，神經肌肉運動障礙，耳聾和脈絡視網膜炎等。 (二)圍產期感染 產婦泌尿道和宮頸排出CMV，則分娩時嬰兒經產道可被感染，多數和症狀輕微或無臨床症狀的亞臨床床感染，有的有輕微呼吸道障礙或肝功能損傷。 (三)兒童及成人感染 通過吸乳、接吻、性接觸、輸血等感染、通常為亞臨床型，有的也能導致嗜異性抗體陰性單核細胞增多症。由於妊娠，接受免疫抑制治療，器官移植，腫瘤等因素激活潛伏在單核細胞、淋巴細胞中病毒，引起單核細胞增多症、肝炎、間質性肺炎、視網膜炎、腦炎等。 (四)細胞轉化和可能致癌作用 經紫外線滅活的CMV可轉化嚙齒類動物胚胎纖椎母細胞。在某些腫瘤如宮頸癌、結腸癌、前列腺癌、Kaposis肉瘤中CMV DNA檢出率高，CMV抗體滴度亦高於正常人，在上述腫瘤建立的細胞株中還發現病毒顆粒，提示CMV與其皰疹病毒一樣，具有潛在致癌的可能性。 四、免疫性 機體的細胞免疫功能對CMV感染的發生和發展起重要作用，細胞免疫缺陷者，可導致嚴重的和長期的CMV感染，並使機體的細胞免疫進一步受到抑制，如殺傷性T細胞活力下降，NK細胞功能減低等。 機體原發感染CMV後能產生特異性抗體和殺傷性T淋巴細胞，激活NM細胞。抗體有限CMV復制能力，對相同毒株再感染有一定抵抗力，但不能抵抗內源性潛伏病毒的活化，及CMV其他不同毒株的外源性感染。而通過特異性殺性T淋巴細胞和抗體依賴細胞毒性細胞能發揮最大的抗病毒作用。 五、微生物學診斷 唾液、尿液、子宮頸分泌液等標本離心沉澱，將脫落細胞用姬姆薩染色鏡檢，檢查巨大細胞及核內和漿內嗜酸性包涵體，可作初步診斷。 分離培養可將標本接種於人胚肺纖維母細胞中，由於CMV生長周期長，細胞病變出現慢，為了快速診斷，可將培養24小時的感染細胞固定，用DNA探針進行原位雜交，檢測CMV DNA。 用ELISA檢測lgM抗體和lgG抗體，適用於早期感染和流行病學調查。LgG抗體可終身持續存在，lgM抗體與急性感染有關。 不論是初次感染或復發感染，當病毒血症時，可用葡聚糖液提取外周血單個核細胞，製成塗片，加CMV單克隆抗體，採用免疫酶或熒光染色，檢測細胞內抗原。 近年應用免疫印跡法和分子雜交技術直接從尿液，各種分泌物中檢測CMV抗原和DNA是既迅速又敏感，准確的方法。 六、防治原則 丙氧鳥苷(ganciclovir DHPG)有防止CMV擴散作用。如與高滴度抗CMV免疫球蛋白合用，可降低骨髓移植的CMV肺炎並發症死亡率，如果耐丙氧鳥苷的CMV感染可選用磷甲酸鈉，雖能持久地減少CMV擴散，但效果比前者差。國外研製CMV病毒活疫苗，能誘導產生抗體，但排除疫苗的致癌潛能，有待解決