『壹』 做大腸桿菌 沙門氏菌 葡萄球菌 巴氏桿菌的實驗檢測 一般都用什麼方法 和儀器設備 請說的詳細些
大腸埃希菌（Escherichia coli）
取供試液10ml（相當於供試品1g、1ml、10cm2），直接或處理後接種至適量（不少於100ml）的膽鹽乳糖培養基中，培養18~24小時，必要時可延長至48小時。
取上述培養物0.2ml，接種至含5mlMUG培養基的試管內，培養，於5小時，24小時在366nm紫外線下觀察，同時用未接種的MUG培養基作本底對照。若管內培養物呈現熒光，為MUG陽性；不呈現熒光，為MUG陰性。觀察後，沿培養管的管壁加入數滴靛基質試液，液面呈玫瑰紅色，為靛基質陽性；呈試劑本色，為靛基質陰性。本底對照應為MUG陰性和靛基質陰性。
如MUG陽性、靛基質陽性，判供試品檢出大腸埃希菌；如MUG陰性、靛基質陰性，判供試品未檢出大腸埃希菌；如MUG陽性、靛基質陰性，或MUG陰性、靛基質陽性，則應取膽鹽乳糖培養基的培養物劃線接種於曙紅亞甲藍瓊脂培養基或麥康凱瓊脂培養基的平板上，培養18~24小時。
若平板上無菌落生長、或生長的菌落與表1所列的菌落形態特徵不符，判供試品未檢出大腸埃希菌。若平板上生長的菌落與表1所列的菌落形態特徵相符或疑似，應進行分離、純化、染色鏡檢和適宜的生化試驗，確認是否為大腸埃希菌。
表1 大腸埃希菌菌落形態特徵
培養基 菌落形態
曙紅亞甲藍瓊脂 顯藍黑色、淺紫色、藍紫色或粉紅色，菌落中心呈深紫色或無明顯暗色中心，圓形，稍凸起，邊緣整齊，表面光滑，濕潤，常有金屬光澤
麥康凱瓊脂 鮮桃紅色或微紅色，菌落中心呈深桃紅色，圓形，扁平，邊緣整齊，表面光滑，濕潤
沙門菌（Salmonella）
取供試品10g或10ml,直接或處理後接種至適量（不少於200ml）的營養肉湯培養基中，用勻漿儀或其他適宜方法混勻，培養18~24小時。
取上述培養物1ml，接種於10ml四硫磺酸鈉亮綠培養基中，培養18~24小時後，分別劃線接種於膽鹽硫乳瓊脂（或沙門、志賀菌屬瓊脂）培養基和麥康凱瓊脂（或曙紅亞甲藍瓊脂）培養基的平板上，培養18~24小時（必要時延長至40~48小時）。若平板上無菌落生長，或生長的菌落不同於表4所列特徵，判供試品未檢出沙門菌。
若平板上生長的菌落與表4所列的菌落形態特徵相符或疑似，用接種針挑選2~3個菌落分別於三糖鐵瓊脂培養基高層斜面上進行斜面和高層穿刺接種，培養18~24小時，如斜面未見紅色、底層未見黃色；或斜面黃色、底層無黑色，判供試品未檢出沙門菌。否則，應取三糖鐵瓊脂培養基斜面的培養物進行適宜的生化試驗和血清凝集試驗，確認是否為沙門菌。
表4 沙門菌菌落形態特徵
培養基 菌落形態
膽鹽硫乳瓊脂 無色至淺橙色，半透明，菌落中心帶黑色或全部黑色或無黑色
沙門、志賀菌屬瓊脂 無色至淡紅色，半透明或不透明，菌落中心有時帶黑褐色
曙紅亞甲藍瓊脂 無色至淺橙色，透明或半透明，光滑濕潤的圓形菌落
麥康凱瓊脂 無色至淺橙色，透明或半透明，菌落中心有時為暗色。
金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）
取供試液10ml（相當於供試品1g、1ml、10cm2)，直接或處理後接種至適量（不少於100ml）的亞硫酸鈉（鉀）肉湯（或營養肉湯）培養基中，培養18~24小時，必要時可延長至48小時。取上述培養物，劃線接種於卵黃氯化鈉瓊脂培養基或甘露醇氯化鈉瓊脂培養基的平板上，培養24~72小時。若平板上無菌落生長或生長的菌落不同於表5所列特徵，判供試品未檢出金黃色葡萄球菌。
表5 金黃色葡萄球菌菌落形態特徵
培養基 菌落形態
甘露醇氧化鈉瓊脂 金黃色，圓形凸起，邊緣整齊，外圍有黃色環，菌落直徑0.7~1mm
卵黃氯化鈉瓊脂 金黃色，圓形凸起，邊緣整齊，外圍有卵磷脂分解的乳濁圈，菌落直徑1~2mm
若平板上生長的菌落與表5所列的菌落特徵相符或疑似，應挑選2~3個菌落，分別接種於營養瓊脂培養基斜面上，培養18~24小時。取營養瓊脂培養基的培養物進行革蘭染色，並接種於營養肉湯培養基中，培養18~24小時，作為漿凝固酶試驗。
血漿凝固酶試驗 取滅菌小試管3支，各加入血漿和無菌水混合液（1：1）0.5ml，再分別加入可凝固株的營養肉湯培養物（或由營養瓊脂培養基斜面培養物制備的濃菌懸液）0.5ml、金黃色葡萄球菌營養肉湯培養物（或由營養瓊脂培養基斜面培養物制備的濃菌懸液）0.5ml、營養肉湯或0.9%無菌氯化鈉溶液0.5ml，即為試驗管、陽性對照管和陰性對照管。將3管同時培養，3小時後開始觀察直至24小時。陰性對照管的血漿應流動自如，陽性對照管血漿應凝固，若試驗管血漿凝固者為血漿凝固酶試驗陽性，否則為陰性。如陽性對照管或陰性對照管不符合規定時，應另取制備血漿，重新試驗。
若上述疑似菌為非革蘭陽性球菌、血漿凝固酶試驗陰性，判供試品未檢出金黃色葡萄球菌。