1. 鑒定蛋白質有哪些方法
蛋白質含量的測定:
1 凱氏定氮法
根據氮在蛋白質分子中含量恆定(平均佔16%),因此測定出樣品中氮的含量後,即可求出樣品中蛋白質含量。
2 雙縮脲法
3 福林-酚試劑法
福林-酚試劑包括兩種試劑:鹼性銅試劑,磷鉬酸及磷鎢酸的混合試劑。鹼性銅試劑與蛋白質產生雙縮脲反應。這種被作用的蛋白質中的酚基(酪氨酸),在鹼性條件下易將磷鉬酸和磷鎢酸還原成藍色的鉬藍和鎢藍,所生成藍色的深淺,與蛋白質的含量成正比。在650nm和660nm波長下測定光吸收值,即可測定蛋白質含量。
4 紫外吸收法
酪氨酸,色氨酸在280nm處左右具有最大吸收。由於在各種蛋白質中這幾種氨基酸含量差別不大,所以280nm的吸收值與濃度呈正相關。可用於蛋白質濃度的測定。
2. 蛋白質的鑒定方法
1.最簡單的方法,也是人們最耳熟能詳的方法,就是對物體進行灼燒,看是否能問到燒焦的羽毛味,如果可以問到燒焦的羽毛味,那麼證明有蛋白質的存在。
2.中學的化學課上也教過我們不少的方法,比如說吧蛋白質和濃HNO3進行反應,如果能夠變性產生黃色不溶性物質,那麼該物體是蛋白質。
3.還有一種方法就是把含有蛋白質的屋子磨成漿然後過濾,取濾液進行測試,可以先在濾液中加氫氧化鈉(NaOH),然後再加入雙縮脲試劑,如果出現紫色反應,就為蛋白質。
3. 鑒別蛋白質的最簡便方法
在其中滴加硝酸銀是否有白色沉澱生成。
4. 我們可以用什麼辦法檢測食物中是否含有蛋白質
日常簡單方法可以用燒灼,因為蛋白質燒灼了以後有一股特殊的味道,就比如說頭發燒著了以後的味道就是蛋白燃燒的味道。
5. 一般採用什麼方法檢驗蛋白質即鑒定
一般用雙縮脲試劑鑒定,雙縮脲試劑可以和蛋白質發生紫色反應。
6. 如何鑒定蛋白質
1、對物體進行灼燒,看是否能聞到燒焦的羽毛味,如果可以聞到燒焦的羽毛味,那麼證明有蛋白質的存在。
2、蛋白質和濃HNO3進行反應,如果能夠變性產生黃色不溶性物質,那麼該物體是蛋白質。
3、把含有蛋白質的豆子磨成漿然後過濾,取濾液進行測試,可以先在濾液中加氫氧化鈉(NaOH),然後再加入雙縮脲試劑,如果出現紫色反應,為蛋白質。
4、通過質譜儀,它的原理主要是根據肽質量指紋圖譜與蛋白質資料庫中蛋白質的理論PMF進行比
7. 鑒別蛋白質的方法
先用雙向電泳,分離目的蛋白,然後打質譜,通過打出來前面幾個氨基酸序列,到蛋白質資料庫和蛋白組資料庫上比對,就能知道是什麼目的蛋白了。如果是新發現蛋白,可以比對est資料庫,得到該基因序列,然後再克隆出來。
8. 檢測蛋白質的方法有哪些 檢測蛋白質的方法介紹
1、凱氏定氮法
凱氏定氮法是測定化合物或混合物中總氮量的一種方法。即在有催化劑的條件下,用濃硫酸消化樣品將有機氮都轉變成無機銨鹽,然後在鹼性條件下將銨鹽轉化為氨,隨水蒸氣蒸餾出來並為過量的硼酸液吸收,再以標准鹽酸滴定,就可計算出樣品中的氮量。
由於蛋白質含氮量比較恆定,可由其氮量計算蛋白質含量,故此法是經典的蛋白質定量方法。
2、雙縮脲法
雙縮脲法是一個用於鑒定蛋白質的分析方法。雙縮脲試劑是一個鹼性的含銅試液,呈藍色,由1%氫氧化鉀、幾滴1%硫酸銅和酒石酸鉀鈉配製。
當底物中含有肽鍵時(多肽),試液中的銅與多肽配位,配合物呈紫色。可通過比色法分析濃度,在紫外可見光譜中的波長為540nm。鑒定反應的靈敏度為5-160mg/ml。鑒定反應蛋白質單位1-10mg。
3、酚試劑法
取6支試管分別標號,前5支試管分別加入不同濃度的標准蛋白溶液,最後一支試管加待測蛋白質溶液,不加標准蛋白溶液,在室溫下放置30分鍾,以未加蛋白質溶液的第一支試管作為空白對照,於650nm波長處測定各管中溶液的吸光度值。
4、紫外吸收法
大多數蛋白質在280nm波長處有特徵的最大吸收,這是由於蛋白質中有酪氨酸,色氨酸和苯丙氨酸存在,可用於測定0.1~0.5mg/mL含量的蛋白質溶液。
取9支試管分別標號,前8支試管分別加入不同濃度的標准蛋白溶液,1號試管不加標准蛋白溶液,最後一支試管加待測蛋白質溶液,而不加標准蛋白溶液,每支試管液體總量通過加入蒸餾水補足而保持一致,將液體混合均勻,在280nm波長處進行比色,記錄吸光度值。
5、考馬斯亮藍法
考馬斯亮藍顯色法的基本原理是根據蛋白質可與考馬斯亮藍G-250 定量結合。當考馬斯亮藍 G-250 與蛋白質結合後,其對可見光的最大吸收峰從 465nm 變為 595nm。
在考馬斯亮藍 G-250 過量且濃度恆定的情況下,當溶液中的蛋白質濃度不同時,就會有不同量的考馬斯亮藍 G-250 從吸收峰為 465nm 的形式轉變成吸收峰為 595nm 的形式,而且這種轉變有一定的數量關系。
一般情況,當溶液中的蛋白質濃度增加時,顯色液在 595nm 處的吸光度基本能保持線性增加,因此可以用考馬斯亮藍 G-250 顯色法來測定溶液中蛋白質的含量。
9. 如何鑒定蛋白質
鑒定蛋白質可以用雙縮脲試劑。
雙縮脲(NH2CONHCONH2)由兩個分子脲經180℃左右加熱,放出一個分子氨後得到的產物,在強鹼性溶液中,雙縮脲與CuSO4形成紫色絡合物,雙縮脲反應產生的紫色絡合物顏色的深淺與蛋白質濃度成正比,而與蛋白質分子量及氨基酸成分無關,故可用來測定蛋白質含量。
優點:雙縮脲法測定蛋白質的測定范圍是1~10mg蛋白質,操作簡單、快捷。既適合手工操作,又適合自動化分析,重復性好、線性關系好, 雙縮脲試劑可以長期保存( 若貯存瓶中有黑色沉澱出現,則需要重新配製)。
缺點:靈敏度差,測定范圍窄,樣品需要量大,不同的蛋白質產生顏色的深淺相近,因此它常用於需要快速,但並不需要十分精確的蛋白質測定。 干擾測定的物質包括有:在性質上是氨基酸或肽的緩沖液,如TrIs緩沖液,因為它們產生陽性呈色反應,銅離子也容易被還原,有時出現紅色沉澱。
蛋白質的作用:
人體內的一些生理活性物質如胺類、神經遞質、多肽類激素、抗體、酶、核蛋白以及細胞膜上、血液中起「載體」作用的蛋白都離不開蛋白質,它對調節生理功能,維持新陳代謝起著極其重要的作用。人體運動系統中肌肉的成分以及肌肉在收縮、作功、完成動作過程中的代謝無不與蛋白質有關,離開了蛋白質,體育鍛煉就無從談起。
在生物學中,蛋白質被解釋為是由氨基酸借肽鍵聯接起來形成的多肽,然後由多肽連接起來形成的物質。通俗易懂些說,它就是構成人體組織器官的支架和主要物質。蛋白質缺乏:成年人:肌肉消瘦、肌體免疫力下降、貧血,嚴重者將產生水腫。
未成年人:生長發育停滯、貧血、智力發育差,視覺差。蛋白質過量:蛋白質在體內不能貯存,多了肌體無法吸收,過量攝入蛋白質,將會因代謝障礙產生蛋白質中毒甚至於死亡。
以上內容參考網路-雙縮脲試劑
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