檢測自身抗體主要方法

『壹』 風濕病的免疫檢驗

風濕病的免疫檢驗

自身免疫病(AID)是指由於過度而持久的自身免疫反應導致組織器官損傷並引起相應器官病變或臨床症狀的一類疾病。風濕病是一類涉及到關節、軟骨、肌肉等結締組織的慢性疾病。下面是我為大家帶來的風濕病的免疫檢驗的知識，歡迎閱讀。

一、抗核抗體測定

(Antinuclear antibody ,ANA) ANA是抗細胞核多種成分的自身抗體，無種屬及器官特異性。ANA可分為抗DNA抗體、抗組蛋白抗體、抗非組蛋白抗體、抗核仁抗體及其他細胞成分抗體。這些抗體共同組成ANA譜。

抗核抗體(ANA)的檢查最常用於篩查全身性風濕病和自身免疫病。ANA的檢查可觀察到能與細胞核內的核酸和蛋白抗原起反應的自身抗體。細胞內可能存在對多種抗原起反應的抗體。只有某種抗體的效價很高時，IFA才能加以鑒別。

1、homogenous(均質型)

又稱彌散型，相應的抗原是雙鏈DNA和組蛋白復合物。常見於SLE，特別是腎臟受累病人。也可見於其它結締組織病，如：風濕性關節炎，MCTD，乾燥綜合征，硬皮病，慢性活動性肝炎及原發性膽汁性肝硬變。

2、Peripheral(周邊型)

相應的抗原為雙鏈DNA，多見於活動性SLE病人。

3、Speckle(斑點型)

主要是針對ENA的抗體，包括Sm，RNP，SSA，SSB，Scl-70。一般認為低效價的斑點型ANA不是結締組織病特有的，實際上不代表臨床異常。高效價的抗Sm抗體多與SLE有關。高效價的抗RNP自身抗體見於MCTD，但也見於SLE。抗SSA和抗SSB抗體，見於S.S，也可見於SLE。當病人有抗SSA抗體時，通常以皮膚表現和光過敏為主。，也存在於ANA陰性狼瘡和新生兒狼瘡。Scl-70抗體與硬皮病有關。

4、Nucleoli(核仁型)

其靶抗原是與RNA分子相關的核蛋白。多見於硬皮病。

5、Centromere(著絲點型)

抗著絲點抗體(ACA)，多見於全身性硬皮病的CREST綜合征。

常用檢測方法為IFA、ELISA、免疫印跡法、RIA、免疫斑點法、膠體金標斑點免疫滲濾法等。其中IFA是應用較廣的一種方法。一般採用鼠肝切片或Hep-2細胞為底物抗原片，當加入病人血清時，病人血清中的ANA可與細胞中相應抗原成分結合。再加入熒游標記抗人IgG，在熒光顯微鏡下可見細胞核內亮綠色熒光。

〖參考值〗 <1:10或陰性

〖臨床意義〗

ANA陽性見於多種疾病，常用於風濕病及自身免疫病的診斷。SLE患者陽性率在95%以上，且效價常在1：80以上。在其他風濕病如RA、系統性硬化症、皮肌炎、乾燥綜合征 (SS)、混合結締組織病(MCTD)等也可陽性。其他如肝病，病毒感染等也可呈低效價陽性。

〖注意事項〗

在大約1%的正常人的體內可測到低效價的非特異性抗核抗體，80歲以上老人的檢出率可高達50%。高效價的ANA一般與活動期SLE密切相關。採用Hep-2細胞檢測ANA，可見到不同的染色模型。

此外，口服避孕葯的婦女也可檢測到ANA。

二、可提取性核抗原(Extractable nuclear antigen ENA)抗體

ENA是細胞內許多小分子的RNA和多肽組成的非組蛋白的酸性核蛋白顆粒。分布在細胞質中的稱為小細胞漿核糖核蛋白(scRNPs);分布在細胞核內的稱為小細胞核核糖核蛋白(snRNPs)。目前已發現的有20餘種，其中常用的抗ENA抗體有如下幾種。

(一)抗Sm抗體

Sm是病人Smith的縮寫。Sm抗原屬於SnRNP，由5個RNA和多肽組成，抗原表位在29KD、28KD和13.5KD多肽上，抗Sm抗體是酸性糖蛋白，是SLE的標記抗體。

(二) 抗nRNP(u1RNP)抗體

u1RNP是u1RNA和蛋白質組成的，抗原表位在73KD、32KD和17.5KD多肽上，是混合結締組織病(MCTD)的重要血清標志。

(三)抗SSA抗體

SS為乾燥綜合征的縮寫。此抗體又稱抗RO抗體。SSA抗原是RNA和蛋白質復合物，抗原表位在52KD多肽上，主要見於原發性乾燥綜合征患者及SLE。

(四)抗SSB抗體

SSB抗體常伴隨SSA抗體同時出現，又稱抗La抗體，SSB抗原屬於SnRNP，是含有RNA和50KD蛋白質的復合物。抗原表位在45KD、47KD和48KD多肽上。與SSA抗體並存對診斷SS有特異性。

(五)抗Scl-70抗體

Scl-70抗原表位在86KD、70KD的片段上，是DNA拓撲異構酶I的降解產物，抗Scl-70抗體幾乎僅見於硬皮病，陽性率30%左右。

(六)抗Jo-1抗體

Jo-1抗體是組氨醯tRNA合成酶，抗原表位在55KD多肽，抗Jo-1抗體是多發性肌炎和皮肌炎的標記抗體，陽性率25-40%。

(七)抗核糖體抗體

核糖體在核仁合成，然後轉入胞漿，抗原表位在大亞基上的38KD、16KD和15KD多肽上。抗核糖體抗體陽性主要見於SLE，陽性率20-30%。

檢測以上抗體的方法主要有：對流免疫電泳法(CIE)、雙相免疫擴散法，免疫印跡試驗(IBT)，免疫斑點技術和ELISA法等。一般採用兔胸腺或牛胸腺提取物或細胞提取物作為抗原。近年來，應用分子重組抗原制備的試劑盒已投入市場。

〖參考值〗陰性

〖臨床意義〗

1. 抗n RNP抗體：見於35-40%的SLE病人，在MCTD病人中陽性率可達95-100%，也可見於其他風濕性疾病。

2. 抗Sm抗體：主要見於SLE及重疊綜合征，急性期病人75%為陽性。一般SLE患者30-40%陽性率。但Sm抗體陽性者90%以上為SLE，故稱之為SLE的標記抗體。

3. 抗SSA和抗SSB抗體：見於40-45%的SS病人。抗SSA抗體也可見於25%的SLE病人及其他風濕性疾病;抗SSA抗體與新生兒狼瘡和先天性傳導阻滯有關。抗SSA抗體也可見於病毒感染等非風濕性疾病。抗SSB抗體對原發性乾燥綜合征較特異，但陽性率僅27%左右。

4. 抗Scl-70抗體：一般僅見於系統性硬化症病人，陽性率20-60%。

5.抗Jol-1抗體見於30%的多發性肌炎病人及10%的皮肌炎病人。抗Jol-1抗體與多發性肌炎病人間質性肺炎的發生率增加有關。

6.抗rRNP 抗體：主要見於SLE患者，陽性率20%左右，與中樞神經系統病變有關，多在疾病活動期出現。

〖注意事項〗

判斷試驗結果時要結合臨床表現作出評價，也應根據試驗方法來作出解釋。對流免疫電泳法和雙相擴散法敏感性低，但特異性較高;免疫印跡法、斑點免疫法及ELISA方法敏感性提高，但特異性相對減少。

三.抗雙鏈DNA抗體(Antidouble-stranded DNA ， A-dsDNA，)

A-dsDNA 對SLE有高度特異性，是針對細胞核脫氧核糖核酸的自身抗體。臨床上常用的檢測方法有：①Farr¡®s法：125I-DNA與待檢標本中的A-dsDNA形成免疫復合物，加飽和硫酸銨使復合物沉澱，以γ計數器分別測定上清中游離及沉澱物中已結合的125I-DNA含量，可計算出血清中A-dsDNA的結合活性。

②ELISA法：將小牛胸腺DNA包被在微孔板中，加入病人血清，如有A-dsDNA則結合到微孔板上，加入酶標抗人IgG，加入底物顯色後經酶標儀比色可知血清中A-dsDNA抗體的量。

③免疫熒光法：採用馬疫錐蟲或短膜蟲作為基質，加入病人血清。血清中的A-dsDNA與膜上的天然DNA結合，加入熒游標記抗人IgG。馬疫錐蟲和短膜蟲的動基體會發出綠色熒光。

④金標斑點法：雙鏈DNA包被於硝酸纖維膜上，加入病人血清，加入金標記抗人IgG，如有A-dsDNA存在，會顯示紅色斑點。

〖參考值〗依方法不同參考值也有不同。

Farr¡®s法：≤ 0.20 免疫熒光法：<1:10ELISA法：依試劑盒而定，一般<70u

金標法：陰性

〖臨床意義〗

A-dsDNA 陽性對 SLE 有較高的特異性。大約60%的活動性 SLE 病人會出現 A-dsDNA。其他風濕性疾病也會出現，但陽性率非常低，如RA、S.S。

〖注意事項〗

假陽性結果非常少見，但陰性亦不能排除SLE的診斷。

四.抗中性粒細胞胞漿抗體( Antineutrophil cytoplasmic antibody,ANCA) 測定

ANCA是針對中性粒細胞胞漿多種成分的 自身抗體，主要有髓過氧化物酶(MPO)和蛋白酶3( Proteinase 3 ，PR3)的抗體 。主要用於診斷Wegener 肉芽腫和系統性血管炎，特別是伴有腎病、呼吸疾病或其他類型血管炎引起多器官損害的患者。檢測方法有IFA、ELISA、 IBT等。

〖參考值〗 陰性。

〖臨床意義〗

免疫熒光法檢查ANCA陽性一般分為兩種熒光類型，一種是胞漿型，稱為cANCA，一種是核周型，稱為pANCA。cANCA產生彌漫性細胞漿染色，是針對PR3的抗體 ，一般見於wegener肉芽腫病(WG)，特別是腎和肺受累的病人。pANCA產生核周染色，是針對MPO的抗體 ，主要見於系統性血管炎病人。

在WG病人中，cANCA陽性率在活動期可達80%，且有較高的抗體效價。在緩解期抗體陽性率低，且效價下降，或完全消失。

〖注意事項〗

ANCA 陽性也可見於 Good-Pastare¡®s 綜合征和SLE病人。WG的診斷不能單純依賴ANCA的結果，還要結合其他臨床表現，試驗室檢查和組織病理學檢查才能確定。ANCA效價不能完全反應疾病的活動以及對治療的反應。pANCA 陽性不是特異性的抗MPO抗體，也可以是抗粒細胞胞漿中其他酶的抗體，如彈性蛋白酶，組織蛋白酶G等。ANCA檢測應注意排除其他自身抗體的交叉反應，如ANA。因其可產生假陽性應注意鑒別，並進行ANA檢測。

五、抗線粒體抗體(Antimitochondrial antibody,AMA)

AMA是以細胞漿中的線粒體為抗原的一種自身抗體，無器官和種屬特異性。一般採用大鼠腎及胃作為抗原基質，採用IFA檢測，陽性可見大鼠腎和胃的細胞漿呈現細顆粒狀熒光。

採用免疫印跡法可將與線粒體抗原的反應分為從M1到M9九種類型，高效價的M2和M9型自身抗原與原發性膽汁性肝硬變相關。目前已有檢測M2的ELISA試劑盒供應。

〖參考值〗 陰性 >1：10 為陽性

〖臨床意義〗

AMA是原發性膽汁性肝硬化的標記抗體，陽性率達90%，並且50%患者抗體效價達1：1280或更高。此外，也可見於慢性活動性肝炎、隱匿性肝硬化。肝外阻塞性黃疸患者AMA常陰性，因此可作為鑒別診斷的一個指標。正常人中陽性率<10%，且效價較低。

六.抗平滑肌抗體(Antismooth muscle antibody，ASMA )

ASMA是抗肝細胞膜上一種肌動球蛋白的自身抗體。這種肌動球蛋白與平滑肌有交叉抗原性，因此與平滑肌有反應。一般採用IFA法，以大鼠胃作為抗原基質，陽性可見胃壁平滑肌呈現亮綠色熒光。

〖參考值〗 陰性，>1：10為陽性

〖臨床意義〗

主要見於明顯活動期的自身免疫性肝炎患者，陽性率在80%以上，效價 在1：80以上。急性病毒性肝炎早期ASMA也可陽性，且早於 HBsAg出現。其他疾病如傳染性單核細胞增多症、SS、RA、支原體肺炎、腫瘤和病毒感染者也有不同程度的陽性率。正常人中僅有2%陽性。

七. 抗甲狀腺球蛋白抗體(ATGA)和抗甲狀腺微粒體抗體(ATMA)

ATGA 是由甲狀腺炎引起的自身抗體 ，抗原是一種糖蛋白。ATGA有器官特異性而無種屬特異性。ATMA 的抗原是甲狀腺濾泡上皮細胞胞漿內的脂蛋白。常用檢測方法有：IFA、IHA、RIA、ELISA等。

〖參考值〗

IHA： 血清效價 ≤1：32， >1：32為陽性，ATGA 和ATMA

ELISA：正常為陰性，P/N < 2.1，>2.1 為陽性, ATGA 和 ATMA

RIA：ATGA <30%;ATMA <15%

l〖臨床意義〗

主要見於橋本甲狀腺炎、甲亢、甲低患者，也可見於甲狀腺瘤、惡性貧血、重症肌無力、Edison 病和肝臟疾病等。SLE及其他自身免疫病也有一定的陽性率。

正常人也可檢出這兩種抗體 ，並且隨著年齡的增長，陽性率增加，特別是40歲以上婦女，可達18%左右。

應該注意到，有的患者ATGA陰性，但ATMA陽性，因此兩種抗體同時檢測可提高抗甲狀腺自身抗體的檢出水平。

八. HLA-B27測定

HLA-B27 抗原為人類MHC I類 抗原B位點的表達產物，可分為幾種亞型。HLA -B27的檢測方法有多種，補體依賴性微量細胞毒法(CDMA);流式細胞儀法;玫瑰花法;ELISA法;等電聚焦法等。近來應用PCR法檢測HLA-B27，敏感而特異，並且可進行B27亞型的分析。

l〖參考值〗

非洲-美洲人：3-4%;l 高家索人：6-8%;l 亞洲人：1%。

〖臨床意義〗

強直性脊柱炎(AS)患者HLA-B27陽性率為90-95%。大約42%的青年類風濕關節炎(JRA)存在HLA-B27，Reiter¡®s 綜合征患者陽性率大約79%。此外，腸病性關節炎、銀屑病性關節炎也有一定的陽性率。RA病人陽性率不高。

〖注意事項〗

在評價HLA-B27陽性結果時應結合臨床表現綜合考慮，不能單純依靠此結果作出診斷。

其他免疫指標及檢測

C反應蛋白(C-Reactive Protein，CRP )

CRP是一種急性時相蛋白，由肝細胞合成，可與肺炎球菌細胞壁C多糖發生沉澱反應，故稱CRP。在各種炎症的急性期或組織創傷時，血清CRP濃度急劇升高。CRP不僅可結合多種細菌( bacteria ),真菌(fungi)及原蟲(protozoal)體內的多糖物質，而且在鈣離子存在下，還可以結合磷脂醯膽鹼和核酸。結合後的復合體具有激活補體(complement)的作用。〖參考值〗 <8mg/L

〖臨床意義〗

血清CRP 升高多見於：急性、慢性細菌感染;組織損傷壞死;急性心肌梗死;各種炎症;外科手術;腫瘤浸潤;急性風濕熱和活動性類風濕關節炎，以及其它關節炎性疾病。但病毒性感染一般CRP不升高，因此可作為病毒性感染和細菌性感染的'鑒別指標。

〖注意事項〗

CRP測定方法不同，在判定結果時應予考慮。此外，雌激素、口服避孕葯可使CRP增高，皮質激素和抗炎葯可使CRP下降。

類風濕因子(Rheumatoid Factor，RF)

RF是一種自身抗體，可與變性的IgG發生反應，與IgG 的Fc段結合。RF可分為IgG、IgM、IgA、IgD和IgE五型。凝集試驗檢測的主要為IgM型RF。RF主要見於類風濕性關節炎(rheumatoid arthritis RA)，也可見於其他結締組織病及其他疾病。檢測方法有乳膠凝集試驗、致敏羊紅細胞凝集法、速率散射比濁法、ELISA法等。

〖參考值〗

乳膠法：陰性或<1：20 速率散射比濁法：<30IU/ml

〖臨床意義〗

RF見於90%以上的RA病人，效價常在1：160以上，含量多>80IU/ml。，一般方法所檢測的大部分是IgM-RF。

關於RF分型，臨床應用尚不廣泛。多數作者認為：IgM-RF效價高低可在一定程度上反映RA的活動性，但無明確的密切關系;IgG-RF與RA患者的滑膜炎、血管炎和關節外症狀密切相關;IgA-RF見於RA、硬皮病、Felty綜合征和系統性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus， SLE)，也是RA臨床活動性的一個指標;IgE-RF 除RA患者外，也見於Felty綜合征和青年型RA。高水平 IgM-RF陽性病人預後較差。

從早期RA患者的X線片分析，IgM-RF持續陽性的病人更易發生骨侵蝕。IgA-RF在SS病人中陽性率較高;IgE-RF在惡性關節炎病人中陽性率較高。在RA病人，高效價RF存在並伴有嚴重的關節功能受限時，常提示預後不良。

〖注意事項〗

正常人也可有4%左右的陽性率。隨年齡增加，RF的檢出率會增加。RA病人RF也可陰性，不能單純依靠RF陽性來診斷RA。RF還可見於其它多種疾病，其中最常見的是乾燥綜合征(S.S)， 發生率在90%以上，且含量一般較高。其它常見的RF陽性的疾病有： SLE、系統性硬化症、高球蛋白血症、結節病、梅毒、麻風、病毒感染、肝硬化等等。有些效價可在1：160以上，含量在80IU/ml以上，在解釋結果時應予注意。

冷球蛋白(Cryoglobulin CG，)

冷球蛋白是一種球蛋白，4℃時發生沉澱，30 ℃易聚合，37℃又溶解。CG分為三類：

1.I型(單克隆型)：大多為IgM或IgG 型，無抗補體作用。

2.II型(混合型)：兩種或兩種以上單克隆Ig混合，以IgM+IgG最常見，也可見IgA+ IgG;IgG+IgM+IgA等。有抗補體作用。

3. III型(多克隆型)： 沒有單克隆蛋白。

其檢測方法有血球壓積管法(定性)和分光光度計法(定量)。

〖參考值〗 定性法：陰性 定量法：<80μg/ml。

〖臨床意義〗

SLE 病人血清中可出現混合型CG。在血管炎、腎小球腎炎、淋巴細胞增生性疾病也可陽性。在巨球蛋白血症或多發性骨髓瘤病人伴雷諾氏現象時與I型冷球蛋白血症有關。 II型冷球蛋白血症與自身免疫病例如血管炎、腎小球腎炎、SLE、RA 和 SS 有關。在某些感染如肝炎、傳染性單核細胞增多症、巨細胞病毒感染和弓形蟲病也可出現。

小結:

胞漿抗體

Hep-2細胞具有許多胞漿抗原。如有特異性胞漿抗體存在，可出現強陽性胞漿熒光。包括抗線粒體抗體(AMA)、抗核糖體抗體、抗肌動蛋白抗體即抗平滑肌抗體(ASMA)、抗高爾基體抗體、抗絲抗體(如Vimentin)。一般最有意義的是AMA和ASMA，可是熒光染色Hep2細胞卻不能鑒定這兩種抗體，可應用鼠腎和鼠胃切片作進一步分析。

系統性風濕病活動期的評價

自身抗體檢測以診斷全身性疾病比監測該病活動更有意義。但抗dsDNA抗體效價卻與活動性有關。應定期檢測抗dsDNA抗體的效價及C3、C4的含量。以及測定循環免疫復合物(CIC)的含量。ESR和CRP在炎症反應時常常升高。RA病情加重時，CRP明顯增高。SLE活動期，CRP一般正常。

器官特異性自身免疫性疾病

組織抗體

許多自身抗體可採用IFA測定，用鼠腎和胃的切片能測出抗線粒體、平滑肌、肝腎微粒體和胃壁細胞的抗體。甲狀腺組織切片可測定抗甲狀腺自身抗體。

自身免疫性肝病

在肝臟病變中，ANA陽性率可達40-80%。抗線粒體抗體(AMA)與原發性膽汁性肝硬變有關。特別是高效價的M2和M9線粒體抗原。

約一半的自身免疫性肝炎的病人有較高效價的ASMA。此外，肝腎微粒體抗體(LKMAs)，抗可溶性肝抗原(SLA)抗體，抗肝細胞膜抗體等也可用於自身免疫性肝病診斷和監測。

其他

腎臟疾病常測定的抗體有抗dsDNA抗體，抗腎小球基底膜抗體等，還可測定CIC，以及作腎組織活檢進行熒光染色。

韋格納肉芽腫病是一種發生於上下呼吸道的壞死性血管炎，也累及腎臟，病人常死於腎和肺衰竭。檢查抗中性粒細胞胞漿抗體(ANCAs)是診斷指標之一。也可通過ELISA測定抗髓過氧化物酶抗體，抗蛋白酶3抗體，有助於診斷和鑒別診斷。

胃腸道疾病中，惡性貧血與抗胃壁自身抗體有關，與抗內因子抗體的相關性達75%。抗胰島細胞抗體(ICAs)，抗谷氨酸脫羧酶抗體(GADA)與I型糖尿病有一定關系。重症肌無力病人可出現抗骨骼肌抗體。多發性肌炎和皮肌炎可有抗Pm1和抗Jo-1抗體。抗心肌抗體常見於心肌梗死、心臟手術或心肌損傷後。

;

『貳』 抗原或抗體的體外檢測方法有哪些

抗原抗體檢測有凝集反映、沉澱反應、放免技術、熒光技術、酶聯免疫,化學發光、生物親和,固相免疫、免疫組化等技術

『叄』 過敏源篩查是怎麼進行的

引起過敏反應的物質（抗原）稱為過敏原，檢測確認過敏原是診斷與治療過敏性疾病的關鍵，以下是臨床常用的檢測方法:

1.體外血清變應原特異IgE的測定: 用於Ⅰ型變態反應體外過敏原檢測，常用的有美國的IVT系列試劑：用於食入性（速發相）、吸入性過敏原的檢測，可檢測常見的近30種過敏原。

2.體外血清變應原特異IgG 的測定: 主要用於食物遲發相的檢測。食物過敏有兩種情況：一種是在食入後數小時內出現過敏症狀，稱為速發相，由IgE介導；一種是在食入後數天後出現過敏症狀，稱為遲發相，由IgG介導，慢性的過敏多需此項檢查。

3.斑貼試驗:主要用於Ⅳ型變態反應的檢測，如接觸物的檢測：衣物染料、金屬飾品、皮革、染發劑等等，目前主要使用瑞典進口的斑貼試劑。

4.皮內注射過敏原檢測：包括皮內實驗、點刺實驗及皮膚劃痕，由於變應原注入體內，因此具有一定的風險性，應具備過敏性休克的搶救設備及搶救葯物。此方法比較古老，患者較痛苦，可供使用的試劑種類教少，其並發症有局部疼痛、暈針、局部化膿、全身反應等。

5.自身血清皮膚實驗：過敏性疾病病因是多方面的，既有可能對外界物質過敏，又有可能存在自身免疫問題。引起過敏性疾病的自身抗體包括：甲狀腺自身抗體、抗IgE抗體、抗IgE受體的自身抗體等。自身血清實驗是篩選由自身抗體引起的疾病主要檢測方法。

6.生物共振檢測治療儀（MORA），檢測過敏原准確，提供大約35大類近千種常見過敏原樣本的快速篩查，同時可以脫敏治療，並且可以進行葯物篩選、檢測病人提供的所有疑似的過敏原樣本，選擇出對患者最有效的葯物。具有其他檢測方法所不具有的優勢。

『肆』 怎麼知道自己有沒有乙肝抗體

乙肝抗體是人體內的保護性抗體，可以有效的預防乙肝病毒的感染，一般都是通過進行乙肝疫苗的接種而獲得的。但是，由於乙肝抗體在人體內的含量，是會隨著時間的推移而逐漸減弱的，因此當乙肝抗體的滴度不足以抵抗乙肝感染時，就達不到預防乙肝的作用，需要進行乙肝疫苗加強。這里，就需要朋友們定期到醫院進行乙肝抗體的相關檢查，判斷體內是否有乙肝抗體。
乙肝五項，是檢查體內有沒有乙肝抗體的主要方法，分為乙肝五項定性檢查以及乙肝五項定量檢查。如果乙肝五項定性檢查中，乙肝表面抗體那樣為陽性，則表示有乙肝抗體，如為陰性，則表示沒有乙肝抗體。而乙肝五項定量檢測，是可以對乙肝抗體在血液中的滴度，具體判斷是否可以有效的保護人體不被乙肝感染。
因此，您想要知道自己是否有乙肝抗體的朋友們，可以進行乙肝五項定性檢查，但如果想要進一步判斷體內的乙肝抗體滴度是否能夠有效的抵抗乙肝的侵擾，就還需進行乙肝五項定量檢測，具體了解體內乙肝抗體的滴度，判斷是否需要進行乙肝疫苗的加強。

『伍』 細胞免疫功能檢測常用有哪幾種方法

細胞免疫（CMⅠ）是由多種細胞相互作用的結果。免疫細胞間相互作用導致多種細胞因子的釋放。因此細胞功能測定不僅涉及T細胞的數量和功能與包括各類因子活性測定，因此評價機體的細胞免疫功能不僅程序復雜，且很難標准化。
一、遲發型過敏反應的體外檢測方法
皮膚試驗和接觸性過敏的誘發是檢測遲發型過敏反應（DTH）的兩種常用方法。皮膚試驗中誘發對曾經使病人致敏的抗原的再次應答，而接觸性過敏是測試受者對從未接觸過的物質發生致敏的能力。
1．皮膚試驗 用皮膚試驗診斷DTH，常用的抗原有結核菌純蛋白衍生物（PPD）、腮腺炎病毒、念珠菌素等，在人類試驗時在前臂皮內注射少量可溶性抗原，24～48小後，測量紅腫硬結的大小，硬結直徑大於10mm即被看作為陽性。表明受試者對該病原菌有了一定的細胞免疫能力，若皮試無反應，可用更高濃度的抗原重復試驗，若仍無反應即為陰性，需排除皮試技術誤差，也可能受試者從未接觸過此抗原，也可能由於細胞免疫功能缺損，或由於細胞免疫功能缺損，或由於嚴重感染（麻疹、慢性播散性結核）造成的無反應性。
2．接觸性過敏常應用低分子量化合物如二硝基氯苯（DNCB）誘生接觸性過敏。化合物與皮膚蛋白質結合而導至DTH反應。在動物試驗時，初次皮膚上塗抹DNCB後間隔7～10天再激發刺激，則皮膚出現即為陽性。此試驗人類已不使用。
二、細胞免疫的體外檢測方法
體外檢測淋巴細胞的數量和功能，最易採集的是血標本，首先需分離或純化淋巴細胞，一般使用萄聚糖-泛影葡胺配成比重為1.077的淋巴細胞分層液，當將血液重疊於淋巴細胞分層液之上離心時，由於紅細胞（1.092）、多形核白細胞（1.090）、淋巴細胞（1.070）的比重不同而相互分開。淋巴細胞和單核細胞在血漿和分層液交界處形成一薄層。仔細分出這一薄層的細胞，其中淋巴細胞佔80%，單核細胞佔20%，淋巴細胞中T細胞佔80%，B細胞佔4%～10%，其作為非DT、非B細胞。
1．T細胞計數
（1）E花環法：人類T細胞表面有SRBC受體（CD2）能與SRBC結合形成玫瑰花環樣結構，將經分層液分離現的RBM懸液與SRBC在含有血清的平衡鹽水中混合，經37℃培養5～10分鍾放4℃過夜，取細胞懸計數，外周血淋巴細胞中約70%～80%淋巴細胞結成花環即為T細胞。目前此方法已用來分離T細胞，而不用做T細胞計數。
（2）用單克隆抗體計數T細胞：將人的PBM分成三等份，分別用小鼠抗人CD3、CD4和CD8的單克隆抗體作第一抗體與細胞結合，再用FITC標記的兔抗小鼠IgG抗體作第二抗體進行間接免疫熒光染色，在熒光顯微鏡下或流式細胞儀檢測結果，在PBM中被CD3抗體染上熒光的細胞稱為CD3 細胞即總T細胞。正常人在PBM中T細胞佔70%～80%。正常人的CD4 細胞和CD8 細胞之和應與CD3 細胞數一致。CD4 細胞與CD8 細胞的比值正常人約為2/1而艾滋病患者則比值小於1.7。
2．T細胞活化試驗 T細胞能被非特異的物質稱為有絲分裂原所激活而向淋巴母細胞轉化。T細胞轉化過程可伴隨有DNA、RNA、蛋白質的合成增加，最圖導致細胞分裂。在光學顯微鏡下可計數轉化後的淋巴細胞數，也可用氚標記的胸腺嘧啶核苷（3HTdR）摻入正在分裂的淋巴細胞，用液閃測定儀檢查摻入正在分裂的淋巴細胞，用液測量儀檢查摻入的3H-TdR的多少確定淋巴細胞轉化率。最近有一種不用同位素，又可用儀器測量的淋巴細胞增殖反應的檢查法，稱為MTT檢測法，MTT是一種甲氮唑鹽，它是細胞線粒體脫氫酶的底物，細胞內的酶可將MTT分解產生藍黑色甲（fromazan）產物。該產物的多少與活性細胞數正相關。結果可用酶標檢測儀（595mm）測量匯豐銀行密度，做為MTT法的檢查指標。此法的結果與3H-TdR摻入法平行，並能反應試驗中的活細胞數。
3．細胞毒試驗 TC細胞、NK細胞、LAK細胞、TIL細胞對其靶細胞有直接的細胞毒（殺傷）作用。常用的栓測細胞毒效應的方法是51Cr-Na2Cro4鹽水溶液與靶細胞胞混合，於37℃培養1小時左右，51Cr即可進入靶細胞，與胞漿蛋白結合，洗去游離的51Cr後，即可得到51Cr標記的靶細胞，將待檢細胞毒性的細胞與51Cr標記的靶細胞混合（比例約為50：1或100：1）靶細胞被殺傷越多，釋放到上清液中的液游離的51Cr越多，且不能被其他細胞吸收。用γ射線測量儀檢測上清液中的cpm值，即可計算出待檢細胞殺傷活性的高低。
細胞毒試驗檢測Tc細胞效應功能是否健全，及經IgG介導的ADCC效應，或NK細胞在抗腫瘤免疫中的作用是有意義的。
4．混合淋巴細胞的反應（MIR） 是體外研究T細胞的較好的方法，雙向MLR常被用來篩選骨髓移植的供體。來自不同供體的淋巴細胞分別與病人的淋巴細胞混合培養4～5天，在最後8小時摻入51TdR摻入法測T細胞的反應性。或用細胞毒法觀察受刺激的T細胞與活的靶細胞混合（靶細胞來自與刺激細胞相同的個體）如果T細胞受刺激後產生了細胞毒T細胞，可殺死活的細胞，根據靶細胞釋放51Cr的多少算出T細胞移動抑制因子）和LIF（白細胞移動抑制因子）來評估細胞免疫功能。近年來應用測定IL-2的免疫酶技術，操作簡單，並能定量以取代了MIF和LIF的測定。單個核細胞與分裂原一起培養24小時，然後測定清液中的IL-2活性。在細胞免疫功能缺損時，特別是AIDS病人，IL-2分泌明顯降低。而有些疾病，如多發性硬化、類風濕關節炎、移植排斥反應等病人體內血清中IL-2水平升高，表明病人T細胞活性增高。發生移植排斥反應的病人尿中IL-2也可升高。
也可用酶聯免疫吸附試驗測定各種體液中活化的T細胞脫落的IL-2受體（CD25），一般來說IL-2的水平和IL-2受體水平是平行的，IL-2和IL-2受體的檢測可用於對某些疾病的監測，如移桿排斥、自身免疫病以及接受免疫抑制治療的病人。
對體外培養的細胞進行細胞因子產生能力檢測是檢查細胞培養上清液中細胞因子的生物活性或抗原性。現已可用核酸雜交技術，即從組織中或細胞中提取RNA，與同位素或酶標記的該種細胞因子的cDNA探針作分子雜交試驗，即印跡（dot blotting）或Northern印跡，若查出有某種因子的mRNA存在，即說明該細胞在所處培養條件下有產生某種細胞因子的能力。

『陸』 如何檢測體內是否存在抗體拜託了各位 謝謝

1. HBsAg (乙肝表面抗原) 原理：採用ELISA 雙抗體夾心法。雙抗體夾心法用於檢測相對分子質量較大的蛋白質抗原。先將已知特異性抗體包被於固相載體上，加待測樣本，若 其中有相應的抗原，則抗原和抗體特異性結合洗板後加入酶標記特異性抗體，使在固相上形成包被抗原抗體復合物洗板:加酶底物及色原呈色。雙抗原夾心法則是利用包被抗原和標記抗原檢測樣本中的特異性抗體。抗原或抗 體水平與所測吸光度(A) 值呈正相關。 將純化的抗HBs包被固相載體，加入待測樣品，括其中含有HBsAg ，則與載體上的抗HBs 結合，再加入辣根過氧化物酶( HRP) 標記的抗HBs 抗體，加酶底物/色原顯色。顯色程度與 HBsAg 含量成正比。 2.HBsAb （乙肝表面抗體） 原理：採用ELISA 雙抗原夾心法。反應板上包被純化HBsAg ，待測樣品中抗HBs與之反應，再加HRP-HBsAg 形成夾心，加酶底物/色原悔液顯色。 3.HBeAg 和HbeAb 原理：檢測HBeAg 和抗HBe 分別用ELISA 雙抗體夾心法和Elisa競爭法。 4.HbcAb 原理：Elisa競爭法。用於檢測待檢樣本中未知抗原或抗體。測抗原時用已知抗體包被固相載體，然後同步加入含有待測抗原的樣本和酶標記抗原，使待測抗原與酶標記抗原競爭結合在固相載體上的抗體；洗板加酶底物及色原!讓包。待iYlIJ 悔液抗原量越多，則被結合的酶標記抗原量越少，呈色越淺。呈色深淺與待測抗原的量成反比。測未知抗體時用已知抗原包被固相載體，同步加入含有待測抗體的標本和酶標記特異抗體，二者競爭結合固相載體t 的抗原.待測抗體量越多，酶標記抗體與固相抗原結合的最就越少，呈色就越淺。待測抗體的水平與呈色程度成反比。

『柒』 酶聯免疫法的檢測方法

雙抗體夾心法是檢測抗原最常用的方法，操作步驟如下：
一、將特異性抗體與固相載體連接，形成固相抗體：洗滌除去未結合的抗體及雜質。
二、加受檢標本：使之與固相抗體接觸反應一段時間，讓標本中的抗原與固相載體上的抗體結合，形成固相抗原復合物。洗滌除去其他未結合的物質。
三、加酶標抗體：使固相免疫復合物上的抗原與酶標抗體結合。徹底洗滌未結合的酶標抗體。此時固相載體上帶有的酶量與標本中受檢物質的量正相關。
四、加底物：夾心式復合物中的酶催化底物成為有色產物。根據顏色反應的程度進行該抗原的定性或定量。
根據同樣原理，將大分子抗原分別制備固相抗原和酶標抗原結合物，即可用雙抗原夾心法測定標本中的抗體。
在臨床檢驗中，此法適用於檢驗各種蛋白質等大分子抗原，例如HBsAg、HBeAg、AFP、hCG等。只要獲得針對受檢抗原的異性抗體，就可用於包被固相載體和制備酶結合物而建立此法。如抗體的來源為抗血清，包被和酶標用的抗體最好分別取自不同種屬的動物。如應用單克隆抗體，一般選擇兩個針對抗原上不同決定簇的單抗，分別用於包被固相載體和制備酶結合物。這種雙位點夾心法具有很高的特異性，而且可以將受檢標本和酶標抗體一起保溫反應，作一步法檢測。
在一步法測定中，當標本中受檢抗原的含量很高時，過量抗原分別和固相抗體及酶標抗體結合，而不再形成夾心復合物。類同於沉澱反應中抗原過剩的後帶現象，此時反應後顯色的吸光值（位於抗原過剩帶上）與標准曲線（位於抗體過剩帶上）某一抗原濃度的吸光值相同，如按常法測讀，所得結果將低於實際的含量，這種現象被稱為鉤狀效應（hook effect），因為標准曲線到達高峰後呈鉤狀彎落。鉤狀效應嚴重時，反應甚至可不顯色而出現假陰性結果。因此在使用一步法試劑測定標本中含量可異常增高的物質（例如血清中HBsAg、AFP和尿液hCG等）時，應注意可測范圍的最高值。用高親和力的單克隆抗體制備此類試劑可削弱鉤狀效應。
假使在被測分子的不同位點上含有多個相同的決定簇，例如HBsAg的a決定簇，也可用針對此決定的同一單抗分別包被固相和制備酶結合物。但在HBsAg的檢測中應注意亞型問題，HBsAg有adr、adw、ayr、ayw4個亞型，顯然每種亞型均有相同的a決定簇的反應性，這也是用單抗作夾心法應注意的問題。
雙抗體夾心法測抗原的另一注意點是類風濕因子（RF）的干擾。RF是一種自身抗體，多為IgM型，能和多種動物IgG的Fc段結合。用作雙抗體夾心法檢測的血清標本中如含有RF，它可充當抗原成份，同時與固相抗體和酶標抗體結合，表現出假陽性反應。採用F（ab'）或Fab片段作酶結合物的試劑，由於去除了Fc段，從而可消除RF的干擾。雙抗體夾心法ELISA試劑是否受RF的影響，已被列為這類試劑的一項考核指標（參見6.2）。
雙抗體夾心法適用於測定二價或二價以上的大分子抗原，但不適用於測定半抗原及小分子單價抗原，因其不能形成兩位點夾心。
雙抗原夾心法測抗體
反應模式與雙抗體夾心法類似。用特異性抗原進行包被和制備酶結合物，以檢測相應的抗體。與間接法測抗體的不同之處為以酶標抗原代替酶標抗抗體。此法中受檢標本不需稀釋，可直接用於測定，因此其敏感度相對高於間接法。乙肝標志物中抗HBs的檢測常採用本法。本法關鍵在於酶標抗原的制備，應根據抗原結構的不同，尋找合適的標記方法。 在雙抗體夾心法測定抗原時，如應用針對抗原分子上兩個不同抗原決定簇的單克隆抗體分別作為固相抗體和酶標抗體，則在測定時可使標本的加入和酶標抗體的加入兩步並作一步。這種雙位點一步不但簡化了操作，縮短了反應時間，如應用高親和力的單克隆抗體，測定的敏感性和特異性也顯著提高。單克隆抗體的應用使測定抗原的ELISA提高到新水平。
在一步法測定中，應注意鉤狀效應（hookeffect），類同於沉澱反應中抗原過剩的後帶現象。當標本中待測抗原濃度相當高時，過量抗原分別和固相抗體及酶標抗體結合，而不再形成夾心復合物，所得結果將低於實際含量。鉤狀效應嚴重時甚至可出現假陰性結果。 間接法是檢測抗體最常用的方法，其原理為利用酶標記的抗體以檢測已與固相結合的受檢抗體，故稱為間接法。操作步驟如下：
⑴將特異性抗原與固相載體連接，形成固相抗原：洗滌除去未結合的抗原及雜質。
⑵加稀釋的受檢血清：其中的特異抗體與抗原結合，形成固相抗原抗體復合物。經洗滌後，固相載體上只留下特異性抗體。其他抗體及血清中的雜質由於不能與固相抗原結合，在洗滌過程中被洗去。
⑶加酶標抗抗體：與固相復合物中的抗體結合，從而使該抗體間接地標記上酶。洗滌後，固相載體上的酶量就代表特異性抗體的量。例如欲測人對某種疾病的抗體，可用酶標羊抗人IgG抗體。
⑷加底物顯色：顏色深度代表標本中受檢抗體的量。
本法主要用於對病原體抗體的檢測而進行傳染病的診斷。間接法的優點是只要變換包被抗原就可利用同一酶標抗抗體建立檢測相應抗體的方法。
間接法成功的關鍵在於抗原的純度。雖然有時用粗提抗原包被也能取得實際有效的結果，但應盡可能予以純化，以提高試驗的特異性。特別應注意除去能與一般健康人血清發生反應的雜質，例如以E.Coli為工程酶的重組抗原，如其中含有E.Coli成份，很可能與受過E.Coli感染者血清中的抗E.Coli抗體發生反應。抗原中也不能含有與酶標抗人Ig反應的物質，例如來自人血漿或人體組織的抗原，如不將其中的Ig去除，試驗中也發生假陽性反應。另外如抗原中含有無關蛋白，也會因競爭吸附而影響包被效果。
間接法中另一種干擾因素為正常血清中所含的高濃度的非特異性抗體。病人血清中受檢的特異性IgG只佔總IgG中的一小部分。IgG的吸附性很強，非特異IgG可直接吸附到固相載體上，有時也可吸附到包被抗原的表面。因此在間接法中，抗原包被後一般用無關蛋白質（例如牛血清蛋白）再包被一次，以封閉（blocking）固相上的空餘間隙。另外，在檢測過程中標本須先行稀釋（1:40~1:200），以避免過高的陰性本底影響結果的判斷。 競爭法可用於測定抗原，也可用於測定抗體。以測定抗原為例，受檢抗原和酶標抗原競爭與固相抗體結合，因此結合於固相的酶標抗原量與受檢抗原的量呈反比。操作步驟如下：
⑴將特異抗體與固相載體連接，形成固相抗體。洗滌。
⑵待測管中加受檢標本和一定量酶標抗原的混合溶液，使之與固相抗體反應。如受檢標本中無抗原，則酶標抗原能順利地與固相抗體結合。如受檢標本中含有抗原，則與酶標抗原以同樣的機會與固相抗體結合，競爭性地佔去了酶標抗原與固相載體結合的機會，使酶標抗原與固相載體的結合量減少。參考管中只加酶標抗原，保溫後，酶標抗原與固相抗體的結合可達最充分的量。洗滌。
⑶加底物顯色：參考管中由於結合的酶標抗原最多，故顏色最深。參考管顏色深度與待測管顏色深度之差，代表受檢標本抗原的量。待測管顏色越淡，表示標本中抗原含量越多。一般情況，是通過方波伏安法，檢測培養體系的峰電流，通過峰電流與抗原抗體的線性關系來最終確定體系的最終檢測目標的濃度。
當抗原材料中的干擾物質不易除去，或不易得到足夠的純化抗原時，可用此法檢測特異性抗體。其原理為標本中的抗體和一定量的酶標抗體競爭與固相抗原結合。標本中抗體量越多，結合在固相上的酶標抗體愈少，因此陽性反應呈色淺於陰性反應。如抗原為高純度的，可直接包被固相。如抗原中會有干擾物質，直接包被不易成功，可採用捕獲包被法，即先包被與固相抗原相應的抗體，然後加入抗原，形成固相抗原。洗滌除去抗原中的雜質，然後再加標本和酶標抗體進行競爭結合反應。競爭法測抗體有多種模式，可將標本和酶標抗體與固相抗原競爭結合，抗HBc ELISA一般採用此法。另一種模式為將標本與抗原一起加入到固相抗體中進行競爭結合，洗滌後再加入酶標抗體，與結合在固相上的抗原反應。抗HBe的檢測一般採用此法。 血清中針對某些抗原的特異性IgM常和特異性IgG同時存在，後者會干擾IgM抗體的測定。因此測定IgM抗體多用捕獲法，先將所有血清IgM（包括異性IgM和非特異性IgM）固定在固相上，在去除IgG後再測定特異性IgM。操作步驟如下：
⑴將抗人IgM抗體連接在固相載體上，形成固相抗人IgM。洗滌。
⑵加入稀釋的血清標本：保溫反應後血清中的IgM抗體被固相抗體捕獲。洗滌除去其他免疫球蛋白和血清中的雜質成分。
⑶加入特異性抗原試劑：它只與固相上的特異性IgM結合。洗滌。
⑷加入針對特異性的酶標抗體：使之與結合在固相上的抗原反應結合。洗滌。
⑸加底物顯色：如有顏色顯示，則表示血清標本中的特異性IgM抗體存在，是為陽性反應。 親和素是一種糖蛋白，可由蛋清中提取。分子量60kD，每個分子由4個亞基組成，可以和4個生物素分子親密結合。維生素H，分子量244.31，存在於蛋黃中。用化學方法製成的衍生物，生物素－羥基琥珀亞胺酯（biotin-hydroxysuccinimide，BNHS）可與蛋白質、糖類和酶等多種類型的大小分子形成生物素化的產物。親和素與生物素的結合，雖不屬免疫反應，但特異性強，親和力大，兩者一經結合就極為穩定。由於1個親和素分子有4個生物素分子的結合位置，可以連接更多的生物素化的分子，形成一種類似晶格的復合體。因此把親和素和生物素與ELISA偶聯起來，就可大提高ELISA的敏感度。
親和素－生物素系統在ELISA中的應用有多種形式，可用於間接包被，亦可用於終反應放大。可以在固相上先預包被親和素，原用吸附法包被固相的抗體或抗原與生物素結合，通過親和素－生物素反應而使生物素化的抗體或抗在相化。這種包被法不僅可增加吸附的抗體或抗原量，而且使其結合點充分暴露。另外，在常規ELISA中的酶標抗體也可用生物素化的抗體替代，然後連接親和素－酶結合物，以放大反應信號。 在臨床檢驗中一般採用商品試劑盒進行測定。ELISA中有三個必要的試劑：免疫吸附劑、結合物和酶的底物等。完整的ELISA試劑盒包含以下各組分：
⑴已包被抗原或抗體的固相載體（免疫吸附劑）；⑵酶標記的抗原或抗體（結合物）；
⑶酶的底物；
⑷陰性對照品和陽性對照品（定性測定中），參考標准品和控制血清（定量測定中）；
⑸酶聯物（結合物）及標本的稀釋液；
⑹洗滌液；
⑺酶反應終止液。

『捌』 普通老百姓如何檢測自身是否被新型冠狀病毒感染

專家不建議普通老百姓進行抗原檢測，這究竟是為何？目前不提倡自測，主要還是因為現有自我檢測的准確率還不夠高吧。

7.在保持國家主導抗疫方針的前提下，政府應科學地通過法制化、市場化、經濟性等綜合手段，鼓勵企業主動履行抗疫的集體責任，引導群眾自覺履行抗疫的個體責任。