玻利維亞病毒檢測方法

A. 花卉類病毒的診斷和鑒定方法有哪些

類病毒因為不具有外殼蛋白，所以不能用血清學、電鏡等方法來診斷和檢測。類病毒常用的檢測方法有生物學檢測、雙向電泳、RT-PCR和分子雜交等方法。

1 生物學檢測

利用類病毒的特異鑒別寄主來診斷和檢測。如菊花矮化類病毒（CSVd），可以從待檢樣品中抽提低分子RNA，接種到特定的指不植物，如菊花的Mistletm品種、爪哇三七（Gynura auanyiana）、番茄（Lycopersicon esculentum）。接種緩沖液的組成是100mmolTris，10mmolEDTA，pH7.5。接種時用沾有接種原的剎須刀在菊花和爪哇三七的莖部輕輕切割5～10刀，再用棉棒塗抹。番茄可以用4～5葉期的幼苗直接用塗抹法接種。被接種植物放在30℃左右的溫室培育，觀察症狀。接種36d後，菊花上出現黃色斑點，頂葉較少，從上數第3～5葉上症狀更明顯。接種45d後，爪哇三七出現頂葉捲曲症狀。但沒有柑橘裂皮病類病毒接種時症狀明顯。接種60d後，番茄上不表現任何症狀。但回接菊花的Mistletm品種，證明CSVd在番茄上屬於潛伏侵染。

生物檢測需要嚴格的溫度條件，如果溫度條件控制不嚴格便難以得到可信的結果。此外，檢測批量樣品，還需要較大的空間。

22 雙向電泳檢測

2.1 核酸的抽提

抽提緩沖液的組成為0.13mol Tris-HCl、0.017mol EDTA、1mol LiCl、0.83%DS，5%PVP，簡稱為TESLP。1g鮮菊花葉片加2～5倍體積的TESLP緩沖液磨碎，加入等體積的水飽和酚∶氯仿（1∶1）處理，離心分離後用乙醇沉澱回收全核酸。之後用methoxy ethaml除去多糖，用CTAB回收核酸，加等體積的4mol的LiCl，離心回收2mol LiCl的可溶組分，用乙醇沉澱濃縮後溶於適當體積的TE（10mmol Tris-HCl，1mmol EDTA，pH8.0）溶液中。

2.2 正反向電泳

按照Singh等的方法進行。首先在室溫下用1倍TBE電泳緩沖液分離核酸，直到染料XC-FF達近底部的7.5%為止。然後換成加熱到沸騰的0.125倍TBE電泳緩沖液，顛倒正負極並用表面加熱器保持電泳板的溫度在80℃以上，直到染料XC-FF到達膠的上端。電泳完後用銀染色觀察核酸的有無（圖1）。

圖1 正反向電泳法檢測菊花矮化類病毒RNA示意圖

與生物接種相比，正反向電泳凝膠電泳檢測菊花矮化類病毒，可以從相當於2.8mg鮮重的菊花樣品中檢測到菊花矮化類病毒CSVd，並同時可檢測10～20個樣品材料。總之，制備用於正反向電泳的粗核酸的方法簡便，需要的鮮葉量少，可以作為該類病毒的常規檢測方法。正反向電泳凝膠電泳與雙向凝膠電泳比較，省去了第一項電泳完後割膠回收的試驗步驟，操作更為簡便。

B. 葡萄扇葉病毒病是怎樣檢驗與檢疫的

鑒別寄主：可通過嫁接傳染到木本指示植物或汁液摩擦接種草本鑒別寄主進行鑒定。常用的鑒別寄主及其症狀表現如下。

沙地葡萄等及其種間雜種：產生系統性黃色花葉、環狀和線紋斑及斑點，葉片和節間畸形。

莧色藜和昆諾藜：接種5～7d後，頂端葉片出現褪綠斑、明脈和系統性斑駁及葉片畸形。

黃瓜：接種葉產生淡綠色局部病斑，以後出現系統性花葉或斑駁。

菜豆品種Bountiful：接種葉局部褪綠斑，系統性褪綠或壞死花葉、斑駁或形成環斑。

千日紅：接種後1周出現局部褪綠斑，以後變為紅色斑。系統性褪綠斑，葉片扭曲。

本氏煙：系統性斑駁，葉片畸形，植株矮化。

克利夫蘭煙：系統性斑駁和植株矮化。

枯斑寄主：煙草。

體外穩定性：

①鈍化溫度。中國分離物68～70℃，日本分離物60～65℃。

②稀釋終點。中國分離物10-4，日本分離物10～10-4。

③體外存活期。20℃下中國分離物20～30d，日本分離物15～30d。

血清學檢測：血清學病毒免疫原性中等，而且容易制備無寄主蛋白的抗原。凝膠擴散試驗，抗原同抗血清反應產生一條清晰的沉澱帶。最常用的是ELISA技術，採用該技術時，葡萄的葉片、休眠枝條韌皮部組織和幼根等均可作為檢測材料。該病毒與南芥菜花葉病毒有近緣關系，二者可同時侵染葡萄，因此，採用血清學方法不能將其區分，需藉助分子生物學的方法。

分子生物學檢測：已制備出該病毒的RNA1和RNA2及衛星RNA相應的cDNA探針，可以成功用於GFLV檢測。此外，根據報道的序列設計引物採用RT-PCR和IC-RT-PCR也已廣泛用於該病毒檢測。

電鏡觀察：在葡萄根和葉肉細胞見到病毒粒子，量少，排成短行；而在草本試驗寄主（莧色藜、昆諾藜、克里夫蘭煙、矮牽牛）中，粒子極多，成平行排列，像是彼此重疊的平行管。管有膜，內含成排的粒子。粒子無包被，和胞間連絲相通，或在細胞壁的突起內，聚集的粒子靠近大內含體（泡囊—液胞型內含體），或雜在其中。內含體由核糖體、內質網束和有膜的泡囊（內含細纖維）組成（Savinoetal.，1985）。在核質內偶爾見到成行的粒子空殼。病毒在細胞質內含體中復制。內含體中的膜狀泡囊可能是復制點，在此復制RNA和裝配聚合蛋白（Pfeifferetal.，2000）。

檢疫危險性評價：我國生產上栽植的生食和釀酒葡萄，大部分是歐亞品種。近10年又從英國、法國、保加利亞、羅馬尼亞、匈牙利、捷克、斯洛伐克、阿爾巴尼亞、波蘭、前蘇聯、日本、朝鮮、泰國、加拿大、墨西哥、巴西、奈及利亞等國家和地區引進大批葡萄苗，調查中發現引進葡萄也有扇葉病發生。GFLV汁液能傳毒，種子、花粉、苗木、砧木、接穗也能傳毒。同時，還有線蟲作為介體傳毒，給該病遠距離傳毒、蔓延釀成良好的條件，對我國葡萄業潛在威脅相當嚴重。國內已有發生。根據季良進行危險性評價的標准，危險度值9分，為高危檢疫性有害生物。

地理分布：目前該病毒在世界各葡萄產區都有分布（Hewittetal.，1970；Vuittenez，1970）。

檢疫國家地區：阿爾巴尼亞、馬爾他、馬來西亞、南斯拉夫、瑞士、新加坡、澳大利亞、紐西蘭、印度尼西亞、秘魯、英國、比利時、義大利、荷蘭、葡萄牙、匈牙利、羅馬尼亞、冰島、摩洛哥、斯洛伐克、南非、東非、奈及利亞、塞內加爾、加拿大、智利、希臘、德國、瑞典、丹麥、保加利亞等。

應檢植物：葡萄繁殖材料和大豆種子。

檢疫措施：引進葡萄苗和砧木，要求附有出口國的檢疫證書，聲明產自未發病區，入境後經檢驗確證不帶扇葉病毒則可種植。

C. 六招教你檢測是否中病毒木馬介紹

六招教你如何檢測病毒木馬，趕緊來學學哦!下面由我給你做出詳細的六招教你檢測病毒介紹!希望對你有幫助!

六招教你檢測病毒木馬介紹：

六招教你檢測病毒木馬一、進程

首先排查的就是進程了， 方法 簡單，開機後，什麼都不要啟動!

第一步：直接打開任務管理器(計算機 愛好 者，學習計算機基礎， 電腦入門 ，請到本站http://www.woaidiannao.com，我站同時提供計算機基礎知識教程，計算機基礎知識試題供大家學習和使用)，，查看有沒有可疑的進程，不認識的進程可以Google或者網路一下。

PS：如果任務管理器打開後一閃就消失了，可以判定已經中毒;如果提示已經被管理員禁用，則要引起警惕!

第二步：打開冰刃等軟體，先查看有沒有隱藏進程(冰刃中以紅色標出)，然後查看系統進程的路徑是否正確。

PS：如果冰刃無法正常使用，可以判定已經中毒;如果有紅色的進程，基本可以判斷已經中毒;如果有不在正常目錄的正常系統進程名的進程，也可以判斷已經中毒。

第三步：如果進程全部正常，則利用Wsyscheck等工具，查看是否有可疑的線程注入到正常進程中。

PS：Wsyscheck會用不同顏色來標注被注入的進程和正常進程，如果有進程被注入，不要著急，先確定注入的模塊是不是病毒，因為有的殺軟也會注入進程。

六招教你檢測病毒木馬二、自啟動項目

進程排查完畢，如果沒有發現異常，則開始排查啟動項。

第一步：用msconfig察看是否有可疑的服務，開始，運行，輸入“msconfig”，確定，切換到服務選項卡，勾選“隱藏所有 Microsoft 服務”復選框，然後逐一確認剩下的服務是否正常(可以憑 經驗 識別，也可以利用搜索引擎)。

PS：如果發現異常，可以判定已經中毒;如果msconfig無法啟動，或者啟動後自動關閉，也可以判定已經中毒。

第二步：用msconfig察看是否有可疑的自啟動項，切換到“啟動”選項卡，逐一排查就可以了。

第三步，用Autoruns等，查看更詳細的啟動項信息(包括服務、驅動和自啟動項、IEBHO等信息)。

PS：這個需要有一定的經驗。

六招教你檢測病毒木馬三、網路連接

ADSL用戶，在這個時候可以進行虛擬撥號，連接到Internet了。

然後直接用冰刃的網路連接查看，是否有可疑的連接，對於IP地址，可以到相關網站查詢，對應的進程和埠等信息可以到Google或網路查詢。

如果發現異常，不要著急，關掉系統中可能使用網路的程序(如迅雷等下載軟體、殺毒軟體的自動更新程序、IE瀏覽器等)，再次查看網路連接信息。

六招教你檢測病毒木馬四、安全模式

重啟，直接進入安全模式，如果無法進入，並且出現 藍屏 等現象，則應該引起警惕，可能是病毒入侵的後遺症，也可能病毒還沒有清除!

六招教你檢測病毒木馬五、映像劫持

打開注冊表編輯器，定位到HKEY_LOCAL_ NTCurrentVersionImage File Execution Options，查看有沒有可疑的映像劫持項目，如果發現可疑項，很可能已經中毒。

六招教你檢測病毒木馬六、CPU時間

如果開機以後，系統運行緩慢，還可以用CPU時間做參考，找到可疑進程，方法如下：

打開任務管理器，切換到進程選項卡，在菜單中點“查看”，“選擇列”，勾選“CPU時間”，然後確定，單擊CPU時間的標題，進行排序，尋找除了System Idle Process和SYSTEM以外，CPU時間較大的進程，這個進程需要一起一定的警惕。

D. 貓杯狀病毒症狀會傳染人嗎

一、貓杯狀病毒的症狀

貓杯狀病毒屬於貓咪呼吸道的傳染病。

貓咪得貓杯狀病毒時會有打噴嚏，流膿鼻涕，眼睛會分泌出很多眼屎，而且貓咪會發燒。嚴重一點還有可以引發其他疾病，比如說貓咪結膜炎和口腔潰瘍等等。

當貓咪沒有及時得到治療，會因為引發肺炎而導致貓咪呼吸困難，還有其他並發症，這樣貓咪死亡的幾率會很高。

二、貓咪得貓杯狀病毒的原因

1.傳染源：本來家裡的貓咪是健康的，但是不小心接觸到病毒，所以貓咪就生病了。傳染源很大可能就是外出的主人摸了已經有貓杯狀病毒的貓咪帶回家的。

2.傳播途徑：貓杯狀病毒是通過貓咪本身和貓咪的排泄物和分泌物傳染給貓咪的。所以要保持貓咪自身和家裡的衛生。

3.易感動物：貓咪身體抵抗力，疫苗失效，年齡大了都有可能導致貓咪得這種病的。而且成年的貓咪比幼貓得貓杯狀病毒的幾率要高很多。

三、判斷貓咪得貓杯狀病毒的方法

從症狀上判斷貓咪是否得了貓杯狀病毒還是不夠准確，所以需要主人帶貓咪去醫院做檢查。

貓杯狀病毒的檢查方法

1.抗體檢測

2.病毒抗原或者基因檢測：醫生會用試紙板，PCR等給貓咪檢測。試紙板可以在寵物店買到，也可以現在家裡測試一下。

四、貓杯狀病毒的治療方法

1.保持體液寄電解質平衡：可以給貓咪注射補充液，補充鉀離子；

2.抗生素：貓咪抗生素必須在醫生的指導下才能進行，不然給貓咪補充太多抗生素，會形成抗體；

3.打疫苗：等貓咪痊癒後，需要給貓咪補打疫苗；

4.退燒葯：貓杯狀病毒最嚴重最危險的情況就是貓咪高燒不退，所以在給貓咪治療時，先給貓咪退燒。

貓杯狀病毒的治療需要找到原因再對症下葯，這樣貓咪痊癒的速度會快很多。

五、貓杯狀病毒的預防方法

1.打疫苗：給貓咪打疫苗是預防疾病最好的方法了，所以在接貓咪回家時，要給貓咪打夠疫苗。

2.定時清潔消毒：當家裡貓咪確診是貓杯狀病毒了，要及時給家裡清潔消毒。平時也要多給貓窩，貓咪的玩具清潔消毒，曬太陽。

3.外出回家後要消毒：家裡干凈衛生，貓咪接觸貓杯狀病毒的幾率很低，但是貓杯狀病毒有可能被外出的主人帶回家，所以主人在外面接觸了其他貓咪，回家要先消毒在和家裡的貓咪玩耍。

貓杯狀病毒的死亡率雖然高，但是給貓咪做好預防，貓咪得杯狀病毒的幾率會降低的。

溫馨提示：點擊《貓杯狀病毒的症狀與治療》可以了解更多關於貓咪杯狀病毒的知識。

E. 番木瓜花葉病毒病是怎樣檢驗與檢疫的

鑒別寄主：

番木瓜：溫室培養的幼苗接種約5d後葉片出現系統明脈，葉片下卷，15～20d後產生斑駁或花葉症狀。

千日紅：接種後4d內產生非系統性局部褪綠斑，很快形成周邊紅色的壞死。

莧色藜：接種7～10d內產生非系統性局部褪綠斑。

望江南：接種3～4d內非系統性局部褪綠斑。

枯斑寄主：千日紅。

體外穩定性：

①鈍化溫度。73～76℃（在番木瓜病株汁液中）。

②稀釋終點。10-4。

③體外存活期。180d。

血清學檢測：病毒的免疫原性很強。它與抗血清混合後反應靈敏度很高，能產生絮狀沉澱。一般將受侵染的植株直接研磨得到的粗汁液與抗血清進行瓊脂擴散試驗即能獲得陽性反應，無須通過其他的血清學方法檢測。與苜蓿黃花葉病毒外殼血清學遠源相關，而與馬鈴薯X病毒外殼無血清學關系。

電鏡觀察：在寄主植株中含量很高，在任何部位的細胞質中都能發現病毒粒子。受侵染的細胞中含有內含體。富集病毒粒子的帶狀結構綁扎在一起形成內含體。用AzureA染色後，在光學顯微鏡下觀察，內含體能作為馬鈴薯X病毒屬病毒的檢測依據。

檢疫危險性評價：本病的病原體木瓜花葉病毒，可經木瓜繁殖材料進行遠距離傳播，但無傳毒介體，可影響木瓜的產量和品質。國內尚未發生。季良進行危險性評價時，危險度值7分，為中危檢疫性有害生物。

地理分布：玻利維亞、秘魯、美國、委內瑞拉、義大利、印度、坦尚尼亞、阿根廷、多明尼加、聖文森及格瑞那丁西島國、特立尼達和多巴哥島國、關島等。美國主要分布在佛羅里達州與維吉尼亞兩個州，但其造成的經濟損失並不大。

檢疫國家地區：馬來西亞、新加坡、澳大利亞、印度尼西亞、秘魯、阿爾及利亞、冰島、摩洛哥、斯洛伐克、荷蘭等。

應檢植物：木瓜繁殖材料。

檢疫措施：進口木瓜繁殖材料時須經國家檢疫機構特許審批，限量進口，並要求附有出口國《檢疫證書》，保證不帶此類病毒。入境後須經指定的隔離檢疫站進行一年以上生育期檢驗，確認無病後在隔離條件下繁殖無病毒種苗，才允許用於生產種植。