① 檢驗目的基因是否轉錄用什麼方法
應用分子雜交進行檢測。
分子雜交技術:不同的DNA
片段之間,DNA
片段與RNA
片段之間,如果彼此間的核苷酸排列順序互補也可以復性,形成新的雙螺旋結構。這種按照互補鹼基配對而使不完全互補的兩條多核苷酸相互結合的過程稱為分子雜交。檢測目的基因是否進行轉錄,即有無互補RNA產生,可以使用分子雜交技術。
② 設計一個檢測某一基因是否轉錄的檢測方法的實驗,簡述其過程與原理。
原理:轉錄是以一條DNA鏈為模板,合成出一條mRNA的過程。所以,檢測某一基因在特定條件下是否轉錄,可以提取樣品的mRNA,反轉錄成cDNA,然後用擴增該基因的PCR引物擴增,如果有條帶就是說明轉錄,沒有條帶就是不轉錄。
過程:
1.提取樣品mRNA;
2.反轉錄合成cDNA;
3.設計該基因特異的PCR引物;
4.進行PCR擴增,電泳,檢測結果。
③ 檢測轉基因生物是否轉錄出mRNA,應通過何種分子雜交方法實現
檢測目的基因是否導入用的是DNA-DNA分子雜交,檢測是否轉錄用DNA-RNA分子雜交,檢測是否翻譯用抗原-抗體雜交。
前兩者都是通過一條被標記的DNA單鏈作為基因探針來實現的。這個探針具體的做法就是:用目的基因轉錄出的mRNA為模板,以被放射性同位素標記的脫氧核苷酸為原料,用逆轉錄的方法合成一條被標記的DNA,然後把模板的mRNA給水解掉,這樣就得到一條被標記的DNA單鏈,這就是探針。它的特點就是可以和目的基因轉錄的mRNA互補配對(即能形成雜交帶),所以把探針放在受體細胞中如果發現有雜交帶產生,就說明目的基因轉錄了。
另外,這個探針也可以用來做DNA-DNA分子雜交,即檢測目的基因是否導入,方法:先取出受體細胞中DNA然後高溫變性成單鏈,把探針放進去,然後降溫復性,如果形成雜交帶說明,這些DNA中有能和探針互補的DNA片段,即目的基因。因為這個探針本身就是由mRNA逆轉錄來的,它的鹼基序列與目的基因的一條鏈完全相同,當然就可以和另外一條鏈剛好互補了。
這樣可以嗎?
④ 分子雜交如何檢測轉錄
檢測目的基因是否導入用的是dna-dna分子雜交,檢測是否轉錄用dna-rna分子雜交,檢測是否翻譯用抗原-抗體雜交。
前兩者都是通過一條被標記的dna單鏈作為基因探針來實現的。這個探針具體的做法就是:用目的基因轉錄出的mrna為模板,以被放射性同位素標記的脫氧核苷酸為原料,用逆轉錄的方法合成一條被標記的dna,然後把模板的mrna給水解掉,這樣就得到一條被標記的dna單鏈,這就是探針。它的特點就是可以和目的基因轉錄的mrna互補配對(即能形成雜交帶),所以把探針放在受體細胞中如果發現有雜交帶產生,就說明目的基因轉錄了。
另外,這個探針也可以用來做dna-dna分子雜交,即檢測目的基因是否導入,方法:先取出受體細胞中dna然後高溫變性成單鏈,把探針放進去,然後降溫復性,如果形成雜交帶說明,這些dna中有能和探針互補的dna片段,即目的基因。因為這個探針本身就是由mrna逆轉錄來的,它的鹼基序列與目的基因的一條鏈完全相同,當然就可以和另外一條鏈剛好互補了。
這樣可以嗎?
⑤ 檢驗目的基因是否轉錄用什麼方法
應用分子雜交進行檢測。
分子雜交技術:不同的DNA 片段之間,DNA 片段與RNA 片段之間,如果彼此間的核苷酸排列順序互補也可以復性,形成新的雙螺旋結構。這種按照互補鹼基配對而使不完全互補的兩條多核苷酸相互結合的過程稱為分子雜交。檢測目的基因是否進行轉錄,即有無互補RNA產生,可以使用分子雜交技術。