微生物的傳統檢測方法有哪些通過顯微鏡直接觀察。一般來說，在一定的培養條件下（相同的培養基、溫度以及培養時間），同種微生物表現出穩定的菌落特徵。這些特徵包括菌落的形狀、大小、隆起程度和顏色等方面。因此可以通過顯微鏡觀察菌落特徵對微生物種類進行判斷。使用選擇培養基培養微生物或人為提供有利於目的菌株生長的條件。
② 大腸桿菌與大腸菌群檢測方法
進入無菌室步驟
1． 進入無菌室前應打開紫光燈進行滅菌，時間為0。5—1小時。
2． 關燈後0•5小時後放可進入。
3． 進入更衣間更換衣服，佩帶口罩、帽子、鞋套
實驗步驟
1， 進入無菌室後，先把酒精燈點燃，然後在用酒精棉進行手部消毒。（酒精棉是用75%的酒精加入脫脂棉中製成）
2， 准備雙料管3根，單料管6根，培養皿7個。
3， 直接從原液中吸取10ml放入雙料管，（3根每根各10ml）
4， 再吸取原液1ml放入單料管中（3根每根各1ml）
5， 再吸取原液1ml放入培養皿中（2個培養皿各1ml）
6， 再吸取原液1ml放入鹽水管中製成－1梯度的樣液
7， 更換一根吸管，從－1梯度的樣液吸取1ml樣液放入單料管中（3根每根各1ml）
8， 再吸取－1梯度樣液1ml放入培養皿中（2個培養皿各1ml）
9， 再把每個培養皿中到入營養瓊脂平鋪底部搖允（注另作3個培養皿：空氣空白，把培養皿打開十分鍾倒入營養瓊脂平鋪底部搖勻。瓊脂空白，把培養皿中倒入營養瓊脂平鋪底部搖勻。鹽水空白，吸1ml生理鹽水放入培養皿中，倒入營養瓊脂平鋪底部搖勻。）
10， 把全部作好的放入培養箱中，溫度36C＋－1×C，大腸24H＋－2H，菌落48H＋－2H，（待培養皿中的瓊脂凝固後反轉過來放入培養箱中）
11， 梯度：－1梯度為1ml原液加入9ml生理鹽水配成
－2梯度為1ml－1梯度樣液加入9ml生理鹽水配成
－3梯度－4梯度配製方法和－1、－2梯度的配製方法一樣
12， 如果大腸初發酵產生氣泡，用接種筆沾一個產氣的液在伊紅美蘭平板上畫之字形然後放入培養箱中36C，24H＋－2H 。（接種筆在每次使用前必須在酒精燈上消毒。所畫之形不能劃破伊紅美蘭瓊脂表面）
13， 取出後在用接種筆在伊紅美蘭平板之字形上挑菌，放入乳糖復發酵管中 ，然後再培養36C＋－1C，24H＋＋－2H。
14， 再在伊紅美蘭平板之字形上挑菌，放到載玻片上作鏡檢。（方法見標准）
15， 只有鏡檢成紫紅色和乳糖復發酵管產氣同時成立的情況下，才能斷定這根管是不合格。
16， 清洗消毒這根試管前必須進行消毒黴菌，121C，0。5小時同時不能放氣。
③ 怎麼檢驗飲料中的大腸桿菌
大腸桿菌檢驗（包括(一)檢驗方法；(二)培養基 ）
(一)檢驗方法
1．乳糖發酵試驗。以無菌操作採取樣品，採取量及稀釋倍數，依據國家或當地衛生標准要求及樣品污染情況而定。將待檢樣品接種於乳糖膽鹽發酵管內，接種量在l m J以上者，用雙料乳糖膽鹽發酵管，lm1及1mI以下者，用單料乳糖膽鹽發酵管。每一稀釋度接種3管，置36±l℃溫箱內，培養24±2小時，如所有乳糖膽鹽發酵管都不產氣，則可報告為大腸菌群陰性；如有產氣者，則按下列程序進行。
2．分離培養。將產氣的發酵管分別轉種在伊紅美藍瓊脂平板上，置36±l℃溫箱內，培養18～24小時，然後取出，觀察菌落形態，並作革蘭氏染色和證實試驗。
3．證實試驗。在上述平板上，挑取可疑大腸菌群菌落l～2個進行革蘭氏染色，同時接種乳糖發酵管，置36±1℃ 溫箱內培養24±2小時，觀察產氣情況。凡乳糖管產氣，革
蘭氏染色為陰性的無芽胞桿菌，即可報告為大腸菌群陽性。
4．報告。根據證實為大腸菌群陽性的管數，查MPN檢索表，報告每l 00ml(g)大腸菌群的最可能數。
———————————————————————————
(二)培養基
①乳糖膽鹽發酵培基
成分：蛋白腖：20g
豬膽鹽(或牛，羊膽鹽)：5g
乳糖:10g
0．04％溴甲酚紫水溶液: 25m1
蒸餾水: 1 000m1
製法：將蛋白腖、膽鹽及乳糖溶於水中，校正pH，加入指示劑，分裝每管l 0ml，並放入一個小倒管，高壓滅菌115℃15分鍾。
附註：雙料乳糖膽鹽發酵培基除蒸餾水外，其他成分加倍。
用途：乳糖發酵試驗用。
原理：細菌分解糖類是依靠細菌細胞所產生的各種酶類的作用，細菌產生的分解糖類的酶，隨細菌種類不同而異，可以此來鑒別細菌。
乳糖是雙糖，細菌分解雙糖的酶大多是胞外酶。乳糖被乳糖酶水解成葡萄糖和半乳糖，葡萄糖可直接被細菌利用，而半乳糖則需在細胞內轉化為葡萄糖後再被利用。
糖發酵試驗主要是測定細菌分解糖類以後所產生的酸，以培基pH降低(指示劑變色)作為觀察結果的指標。
大腸桿菌等細菌在酸性環境中，由於甲酸脫氫酶的作用，可使甲酸分解成CO2和H2，在培基中產生大量氣體，進入倒管中，以便觀察。
註：常用於供發酵試驗的各種糖類、醇類和糖苷類(見表3-1)
②伊紅美藍瓊脂培基
成分：蛋白腖 10g
乳糖 10g
磷酸氫二鉀 2g
瓊脂 17g
2％伊紅Y溶液 20ml
0．65％美藍溶液 10ml
蒸餾水 1000ml
pH7.1
製法：將蛋l白腖、磷酸鹽和瓊脂溶解於蒸餾水中，校正pH，分裝於燒瓶內，高壓滅菌121℃15分鍾備用。臨用時加入乳糖，並加熱溶化瓊脂，冷至50一55℃，加入伊紅和美藍溶液，搖勻，傾注平板。
原理：大腸菌群細菌發酵乳糖產酸，使伊紅與美藍結合而成黑色化合物，故菌落呈黑紫色，有時還可產生金屬光澤。黑色程度與光澤產生情況與伊紅、美藍二者比倒有關。不發酵乳糖的細菌(如沙門氏菌、志賀氏菌)則為無色菌落。
③乳糖發酵培基
成分：蛋白腖 20g
乳糖 10g
O．04％溴甲酚紫水溶液 25ml
蒸餾水 1000ml
pH7．4
製法：將蛋白腖及乳糖溶於水中，校正pH，加入指示劑，按檢驗要求分裝30ml、10ml或3ml，並放入一個小倒管，高壓滅菌115℃15分鍾。
附註： 』
(1)雙料乳糖發酵管除蒸餾水外，其他成分加倍。
(2)30ml和10ml乳糖發酵管專供醬油及醬類檢驗用．3ml乳糖發酵管供大腸菌群
證實試驗用。
4．蛋白腖水
成分：蛋白腖(或胰蛋白腖) 20g
氯化鈉 5g
蒸餾水 1 000ml pH7．4
④ 測定飲用水中大腸桿菌的數目
測定飲用水中大腸桿菌的數目可取一定量的飲用水，之後按一定倍數稀釋，再用加入伊紅美藍的鑒別培養基培養，取黑色金屬光澤菌落數在20至220之間的平板進行計數．
故選：B．
⑤ 水中大腸桿菌濾膜法檢驗
1. 消毒設備按照產品使用說明操作，待設備運轉正常後，取水樣進行消毒效果檢驗。消毒劑發生器按照產品使用說明書操作，待設備運轉正常後，在出口處採集樣品，按說明書規定的有效劑量稀釋後，進行消毒效果檢驗。消毒劑按產品使用說明書稀釋配製水樣。2. 細菌加標操作程序(1) 在脫氯自來水中加入大腸桿菌，實驗用菌種為大腸桿菌8099。加標量為>5×100-2×1000/100ml。(2) 將裝有加標菌水樣的三角燒瓶放入恆溫水浴箱(20℃)中，開動磁力攪拌器5min，使細菌在水中分布均勻。先取2份細菌加標的水樣，進行大腸桿菌活菌計數(陽性對照組)。(3) 待水溫恆定後按說明書規定的最小劑量加入消毒劑，迅速攪拌均勻，從加入消毒劑起計時。設定3個工作時間，說明書規定的最短作用時間為T，3個作用時間分別為0.5T，T和1.5T，作用後分別吸取水樣，注入裝有中和劑(如硫代硫酸鈉)無菌三角燒瓶中，以終止消毒作用。 對飲用水消毒處理器和消毒劑發生器應根據消毒產物的產生量及處理水最高流量進行加標采樣。(4) 將中和的水樣，分別取100ml、10ml、1ml各兩份，用濾膜法進行大腸菌活菌計數。(5) 將未接種大腸桿菌的試驗用同批培養基平板2個，置溫箱中培養(陰性對照組)。試驗重復三次。3. 上述試驗同時，測定消毒成分和劑量，記錄作用時間和水溫。4. 結果評價消毒後水中大腸菌群指標應符合《生活飲用水水質衛生規范》規定5．√－ 必需測定項目 ； △ －如含有，需測定http://szbbs.soufun.com/2810026793~-1/23633781_23633781.htm
水中大腸菌群檢驗方法的改進
晁福環;芮期義;王新為;高明;歐陽川
<正> 水中細菌,包括致病菌與指標菌,因受自然條件或水處理過程的影響可以形成生理上存在缺陷,這些細菌稱為損傷菌。損傷菌在適宜條件下仍可發育成正常菌落,可是直接暴露於含有抑制劑的選擇性培養基時就不易生長。因此,現有遠藤培養基濾膜法有可能使大腸菌檢
【作者單位】：軍事醫學科學院衛生學環境醫學研究所;軍事醫學科學院衛生學環境醫學研究所;軍事醫學科學院衛生學環境醫學研究所;軍事醫學科學院衛生學環境醫學研究所;軍事醫學科學院衛生學環境醫學研究所 300050 天津;300050 天津;300050 天津;300050 天津;300050 天津
【DOI】：cnki:ISSN:1004-8685.0.1991-01-021
【正文快照】：
水中細菌,包括致病菌與指標菌,因受自然條件或水處理過程的影響可以形成生理上存在缺陷,這些細菌稱為損傷菌.損傷菌在適宜條件下仍可發育成正常菌落,可是直接暴露於含有抑制劑的選擇性培養基時就不易生長.因此,現有遠藤培養基濾膜法有可能使大腸菌檢出菌數偏低,影響水質衛生學評價的准確性。為提高檢出率,本文在水中大腸菌損傷狀況及生長特點研究的基礎上,對現用遠膝培養基進行了改進研究. 一、天然水及經不同條件處理後水中大腸菌損傷狀況見表l、2.裹l不同條件處理後水中大腸,抓傷狀況實較條件翻傷和.。,卜飛,了氣P側價與腳腳日)『t習分鍾…
http://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTotal-ZWJZ199101021.htm
1 材料 呋喃唑酮片（地產及市售，規格0．10g／片），混合纖維素酯微孔濾膜，孔徑規格0．45μm、1．2μm、3．0μm，大腸桿菌CMCC（B）〔4〕、膽鹽乳糖增菌液（BL）、伊紅美藍瓊脂（EMB）及大腸桿菌生化反應用培養基均由中國葯品生物製品檢定所提供。
2 方法和結果 供試液先經離心，取上清液依次經過孔徑為1．2μm或3．0μm的微孔濾膜和0．45μm的微孔濾膜過濾後取0．45μm的濾膜加入BL中增菌。
2．1 由於呋喃唑酮幾乎不溶於水，故選用一次離心法、二次離心法和離心-濾膜法〔1，2〕以及離心-雙重濾膜法進行方法比較，結果表明只有離心-雙重濾膜結合法能確保陽性菌的檢出。
表1 不同方法陽性菌的檢出試驗結果
方法 BL增菌48h EMB平板分離 大腸桿菌
檢出結果
一次離心法 微混 未長菌落 未檢出
二次離心法 澄清 未長菌落 未檢出
離心-濾膜法 澄清 未長菌落 未檢出
離心-雙重濾膜法 混濁、產氣 典型的大腸
桿菌菌落 檢出
2．2 人工污染呋喃唑酮片大腸桿菌的檢出情況 選用8批樣品加入大腸桿菌進行人工污染5d後，採用離心-雙重濾膜法進行檢驗，結果表明8批均能檢出。
表2 人工污染大腸桿菌的陽性檢出情況
葯品
批次 BL增菌
48h EMB
平板分離 大腸桿菌
檢出結果 檢出率
％
8批 8批出現混
濁、產氣 8批呈典型菌落 8批檢出 100
註：上述EMB平板分離的典型菌落均經生化反應確認檢出大腸桿菌
3 討論
3．1 雖然呋喃唑酮在水中的溶解僅達40mg／L〔3〕，但由於呋喃唑酮在BL增菌液中的最低抑菌濃度即MIC為0．01mg／L〔4〕，採用一次離心、二次離心法均未能使BL增菌液中的濃度低於0．01mg／L，採用2次離心-濾膜法，則由於供試液經孔徑0．45μm濾膜過濾時殘留呋喃唑酮，當加入BL增菌液後，呋喃唑酮的濃度仍高於MIC，因此大腸桿菌仍無法繁殖，而本文採用的離心-雙重濾膜法，既能除去水中溶解的微量呋喃唑酮，又能把離心後上清液殘留的呋喃唑酮截留在孔徑1．2μm或3．0μm的濾膜上，最大程度地降低孔徑0．45μm濾膜上的呋喃唑酮，也降低了BL增菌液中的呋喃唑酮濃度，所以大大提高了陽性檢出率。
3．2 人工污染大腸桿菌5d仍能檢出，說明離心-雙重濾膜法檢驗過程中不影響大腸桿菌在BL增菌液中的繁殖，能有效地保證樣品的陽性檢出率。
3．3 離心-雙重濾膜法能在很大程度上解決難溶於水的抗菌劑在BL增菌液中的濃度，故對今後開展口服抗生素控制菌的檢驗具有較高的參考意義。
3．4 因埃希氏桿菌屬的菌體，直徑為0．4～0．7μm，長度為1．0～3．0μm，筆者認為採用3．0μm孔徑的濾膜比1．2μm的濾膜可使實際檢驗效果更佳。同時，筆者也認為選擇何種規格的濾膜可因樣品而異，這方面還有待進一步深入探討。http://www.wanfangdata.com.cn/qikan/periodical.articles/haixyx/haix99/haix9903/990393.htm
⑥ 做生產用水微生物的細菌總數和大腸菌群德檢測依據是什麼
一、水質微生物及指示菌
在各種水體，特別是污染水體中存在有大量的有機物質，適於各種微生物的生長，因此水體是僅次於土壤的第二種微生物天然培養基。水體中的微生物主要來源於土壤，以及人類的動物的排泄物及污染。水體中微生物的數量和種類受各種環境條件的制約。
一般認為，水中微生物以革蘭氏陰性桿菌佔有較大優勢。與其他水體相比，河水及溪水中革蘭氏陽性菌相對較多，這是因為陸地微生物沖洗污染的緣故。
水體中的致病性微生物一般並不是水中原有微生物，大部分是從外界環境污染而來，特別是人和其它溫血動物的糞便污染。水中常見的致病性細菌主要包括：志賀氏菌、沙門氏菌、大腸桿菌、小腸結炎耶爾森氏菌、霍亂弧菌、副溶血性弧菌等。
在實際控制中，對水質衛生質量的評價和控制，是無法對各種可能存在的致病微生物一一進行檢測，而一般利用對指示菌的檢測和控制，來了解水體是否受到過人畜糞便的污染，是否有腸道病原微生物存在的可能，從而評價水的質量，以保證水質的衛生安全。
目前，世界各國一般認為大腸菌群是指示水質受糞便污染較好的指示菌。
我國水質控制也採用大腸菌群作為指示菌，GB5749-85《中華人民共和國國家標准
生活飲用水衛生標准》規定，生活飲用水中大腸菌群每升不得超過3個。
在某些情況下，水體中的細菌總數也可指示水體受糞便等污染物污染的情況。這里的細菌總數其實是指營養瓊脂培養後形成的菌落總數。目前世界各國對於控制飲用水的衛生質量，除採用大腸菌群等指標外，一般還採用細菌總數這個指標。我國GB5749-85《中華人民共和國國家標准
生活飲用水衛生標准》中規定生活飲用水細菌總數每毫升不得超過100個。
二、水質微生物檢驗方法
GB5750-85《中華人民共和國國家標准 生活飲用水標准檢驗法》提供了水質中細菌總數和總大腸菌群的檢測方法。
（一）細菌總數的檢測：
國家標准中，細菌總數是指1ml水樣在營養瓊脂培養基中，於37℃經24h培養後，所生長的細菌菌落的總數。
對生活飲用水，直接吸取1ml水樣於平皿中，加入營養瓊脂後混勻，37℃培養24h，進行計數。
對水源水，根據情況對樣品進行10倍梯度稀釋，選擇適宜稀釋液1ml，加註平皿，營養瓊脂混勻，37℃培養24h，進行計數。
按照規定格式報告每毫升水中細菌總數。
（二）總大腸菌群的檢測：
國家標准中，利用總大腸菌群作為糞便污染的指標。總大腸菌群是指一群需氧及兼性厭氧的，37℃生長時能使乳糖發酵，在24h內產酸產氣的革蘭氏陰性無芽胞桿菌。水樣中總大腸菌群數的含量，表明水被糞便污染的程度，而且間接地表明有腸道致病菌存在的可能。
國家標准提供了多管發酵法及濾膜法檢測總大腸菌群的方法。
多管發酵法檢測總大腸菌群，分為三步：初發酵試驗，平板分離，復發酵證實試驗。初發酵試驗，採用乳糖蛋白腖培養液37℃培養24h，觀察產酸產氣情況。對陽性管培養物，接種於品紅亞硫酸鈉培養基或伊紅美藍培養基，觀察菌落特徵，並進行革蘭氏染色和鏡檢。對典型和可疑菌落，接種於乳糖蛋白腖培養液，進行復發酵證實試驗，並根據標准所附檢數表報告結果。
其中，對生活飲用水，初發酵試驗接種水樣總量300ml，即100ml接種2管，10ml接種10管，採用兩個稀釋度，12支發酵管。對水源水，初發酵試驗接種水樣總量55.5ml，即10ml接種5管，1ml接種5管，0.1ml接種10管，共採用三個稀釋度，15支發酵管。兩種接種方法，所用的檢數表是不同的。
濾膜法檢測總大腸菌群，就是利用微孔濾膜，過濾一定量水樣，將水樣中含有的細菌截留在濾膜上，然後將濾膜帖放在選擇性培養基上（如品紅亞硫酸鈉培養基），經培養和證實試驗後，直接計數濾膜上生長的典型大腸菌群菌落，並計算出每升水樣中含有的總大腸菌群數。
三、說明：
1．菌落總數測定中，應選擇合適的稀釋度進行。生活飲用水，國家標准規定每毫升不得超過100個，因此可以直接吸取1毫升到平板進行培養。
2．培養時間。與食品中菌落計數不同，測定水中細菌總數，培養時間採用24h。
3．總大腸菌群的測定方法，由於飲用水和水源水可能的污染程度不同，因此採用不同的接種量，檢數表也不相同。
4．當接種量超過1毫升時，一般採用多倍濃度培養液。如配製3倍濃縮乳糖蛋白腖培養液50mL，加入100mL水樣後，總體積為150mL，培養液恢復到正常濃度。
5．濾膜法檢測總大腸菌群，一般在檢測較大量低濁度水樣時採用，大量水樣濾過濾膜後，水中所含有的所有細菌均截留在濾膜上。