分子檢測方法學

A. 高中化學有哪些方法測定相對分子質量

端基分析法-數均
蒸氣壓滲透法-數均
冰點降低和沸點升高法-數均
滲透壓法-數均
光散射法-重均
特性粘度法-黏均
體積排除色譜-重均和數均
飛行質譜-重均和數均
核磁、紅外光譜也可測量分子量。
常用色譜和滲透壓這兩種

B. 1.寫出基因工程第四個步驟中,要從分子水平上檢測的內容及採用的檢測方法

從分子水平上檢測有DNA分子雜交技術，分子雜交技術和抗原-抗體雜交技術。
1.DNA分子雜交技術檢測的是轉基因生物的DNA是否插入了目的基因。將轉基因生物的基因組DNA提取出來，在含有目的基因的DNA片段上用放射性同位素等作標記，以此作為探針，使探針與基因組DNA雜交，如果顯出雜交帶，就表明目的基因已插入染色體DNA中。
2.分子雜交技術檢測目的基因是否轉入出了mRNA。從轉基因生物中提取出mRNA，用標記的目的基因作為探針，與mRNA雜交，如果顯出雜交帶，則表明目的基因轉入出了mRNA。
3.抗原-抗體雜交檢測目的基因是否翻譯成蛋白質。從轉基因生物中提取蛋白質，用相應的抗體進行抗原-抗體雜交，若有雜交帶出現，表明目的基因已形成蛋白質產物。

C. 高分子材料的檢測方法

各種方法，熱分析，核磁，紅外·······LZ這個太多了

D. 如何在分子水平檢測正選擇

摘要：過去的若干年見證了強有力的統計 手段在檢測適應的分子進化方面的應用。這些方法比較蛋白編碼基因的同義和非同義取代速率，並將非同義速率高於同義速率的情況作為達爾文選擇的證據。目前已 經在從病毒到人的多種生命系統中鑒定出了大量分子適應的實例。雖然此前的分析因把速率對位點和時間求均值而缺乏說服力，較新的方法針對單個位點和線系而設 計，並已取得了成功。本文中我們總結了最近的檢測分子適應的統計方法，並討論其局限和未來可能的改進。

「近來在酶分子上得到有說服力的選擇造成的改變的例子非常困難，更不必說發現適應性改變的例子了。」

雖然達爾文的關於自然選擇的進化理論在 表形特徵方面已經被廣泛認為是成功的，但是自然選擇在分子進化上的重要性長期以來一直存在爭議。中性理論認為多數可觀測的分子變異，無論種內的多態性還是 種間的差異，都是由選擇上中性的突變的隨機固定造成的。分子水平適應的比較可信的例子並不多見。已經建立了幾種針對真實數據的檢測中性的方法，雖然它們能 很充分地從大量基因中排除嚴格的中性，但是並不能為達爾文正選擇提供足夠充分地證據。

關於適應性分子進化最可靠的例子來自對蛋白編碼DNA序列上同義和非同義取代速率的比較。這為自然選擇的研究提供了很好的蛋白質分子的例子。表一列出了部分例子，參見Hughes對其中很多研究的細節描述。這里我們總結了較新的增加對分子水平適應進化的檢測能力的方法學上的進展。並且檢查了他們的優缺點，這樣他們能被用來檢測更多類型的分子適應。

用非同義／同義速率比例測量選擇

傳統來說，同義和非同意取代速率（框壹）的定義是，基於兩條DNA序列比較的背景，用ds和dn作為每個位點上同義和非同義取代的數目[5]。這樣，比值omega＝dn/ds就度量了兩種速率之間的差距，並且成為編碼取代模型的數學描述中最容易理解的一種（框貳）。如果一個氨基酸改變是中性的，它將被與同義突變相同的速率被固定，omega＝1。如果是一個有害的氨基酸改變，純化選擇（box 1）將消除它的固定速率，此時omega<1。只有當這個氨基酸改變提供了一個選擇優勢時，它才會被以高於同義突變的速度固定，omega>1。這樣，一個顯著大於1的omega比值成為可靠的分歧選擇{diversifying selection}<所謂分歧選擇和正選擇是一回事，而純化選擇則是負選擇的另一種叫法，下文會提到>的證據。

基於編碼的分析（框貳）不能推論同義取代是被選擇驅動還是突變驅動<這里的突變是指隨機突變>，但是它不能假定同義取代是中性的。例如，較高的密碼子使用偏好既可能是選擇的作用（例如，翻譯效率[6]）也可能是突變的作用，並能極大地影響同義取代速率。然而，通過引入參數pai_j作為此模型中密碼子j的參數（框貳）。取代速率的估計將可以完整地解釋編碼使用偏好（框壹）而不必考慮其來源。因為參數omega是一個蛋白質分子上選擇壓力的度量，他把編碼傾向分析與其他基於群體遺傳假定之上的更通用的中性檢測區別開來[7,8]。這些通用的檢測通常無法決定偏離嚴格中性模型的原因，例如群體大小的改變，環境波動或不同的選擇模式。估計兩條序列的dn和ds值

兩類方法已經被建議來估計dn和ds值，在兩條編碼蛋白序列之間。第一類方法包括超過一打的直觀方法，多是1980年代初期以來開發的[5,9-15]。這些方法涉及以下步驟：統計兩條序列上的同義（S）和非同義（N）位點，統計兩條序列的同義和非同義差異，並針對同一位點的多次取代進行糾錯。S和N被定義為序列長度乘以蛋白質承受選擇前同義和非同義改變的比例。多數這類方法採取的是核苷酸取代過程的簡化假設，並引入了對數據的不可被糾正的ad hoc處理。因此，我們把這類評估dn和ds的方法稱為近似方法。Miyata和Yasunaga[5]，以及 Nei和Gojobori[9]，假設了相等的轉換速率（T－C和A－G）和顛換速率（TC－AG），以及統一的密碼子使用。由於轉換在第三位「擺動」位置上比顛換更可能是同義的，所以忽略轉/顛換速率比例會導致低估S和高估N[10]。已有很多工作努力在統計位點和差異時整合這種轉/顛換速率偏好（框壹）[10-14]。密碼子使用偏好的效果在很大程度上被忽略了。然後，極端的密碼使用偏好可以對dn和ds的估計產生毀滅性的影響[15,18]。最近，一種ad hoc方法可以同時整和轉換和密碼使用偏好的問題[15]。

第二類方法是基於明確的編碼取代模型的最大似然方法（框貳）[16,19]。模型中的參數（例如，序列分析的t參數，轉顛換速率比例的K參數，以及dn/ds 比值的omega參數）來自對數據的最大似然估計，並按照其定義用於計算dn和ds的值[15,16,20]。一個主要的特徵是這個模型的公式建立是基於同時速率水平的（其中不可能有多重改變），並且概率理論用一步就完成了所有困難的工作：估計諸如k這樣的突變參數；校正多重匹配，密碼子改變的加權，等等。

統計檢測可以檢測出是否dn是顯著高於ds的。對於近似方法來說，正態近似被應用於dn-ds。對於最大似然方法來說，可以使用似然比例檢測。在這種情況下，null模型的omega值固定為1，而備擇模型估計omega為自由參數。兩個模型間的對數似然差異的兩倍，被用一個自由度的卡方分布來比較，以此檢測是否omega不等於1。

計算模擬被用來檢查差異估計方法的好壞。其結果對真實數據的觀察值是穩定的[14,15,19]。我們在對人和猩猩alpha－2 球蛋白基因分析中，用不同估計過程證實了這一結果（表2）。在比較中，最大似然法中各種不同的假定都是關注於轉顛換速率偏好和編碼偏好的。和復雜的模型相比，僅僅只考慮轉顛速率或只考慮密碼子偏好的簡單模型都經不住似然率檢驗，因而被放棄{reject}了。這樣，根據ML法解釋這兩種偏好的估計（模型8，表2）顯然可以期望將是最可靠的了。我們作出了如下觀察：

*假設比方法更重要。在相似的假定下近似方法和ML方法得到相似的結果。如果都使用忽略轉顛換偏好和密碼使用偏好的預設模型，Nei和Gojobori的方法與ML法會得到類似的結果（模型1，表2）。而當使用考慮轉顛換偏好而忽略密碼使用偏好的模型時，Ina和Li的方法亦得到和ML法相似的結果（模型2，表2）。當同時考慮兩種偏好時，Yang和Nielsen的方法[15]與ML法得到相似的結果（模型6，表2）。然而，對親源關系較遠的序列，近似方法中的ad hoc處理會導致嚴重的偏離，即使使用了正確的假定也不能避免。

*忽略轉顛換速率偏好會導致S的低估，ds的高估，以及omega的低估[10]。

*在這些數據中的編碼使用偏好有相反的傾向。忽略密碼使用偏好導致高估S，低估ds和高估omega。設想這個基因有極高的GC含量在第三位密碼子上，T佔9％，C佔52％，A佔1％，G佔37％。絕大多數第三位密碼子上的改變（即發生在氨基酸水平選擇之前的改變）是C和G之間的轉換。這樣，同義位點的數目就比頻率相等情況下的期望值少一半。雖然，理論上說，這種由非平均密碼子頻率造成的偏好可能會在相反的方向上[15]，我們還沒有遇到一個真實的基因是這樣的情況。這樣，在檢測沉默位點上的GC含量和ds間關系時，密碼使用偏好就可以誤導之前所做的那些分析的結果[21]。

*因為那些分析在估計ds時忽略了密碼子使用偏好。即使對高度相似的序列，不同的方法也會產生不同的估計值。表2中使用的序列只有大約10％的沉默位點差異和小於1％的非同義位點差異。然而，對omega的估計值有三倍的差距。這是因為所有的估計過程都是把所有的位點數目區分成同義和非同義兩類，對一類的低估必然造成對另一類的高估，因而會產生omega比值的較大誤差。

E. 小分子RNA的檢測方法

實時熒光定量PCR技術是1996年由美國Applied biosystems公司推出在定性PCR技術基礎上發展起來的核酸定量技術。該技術在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程，使每一個循環變得「可見」，最後通過Ct值和標准曲線對樣品中的DNA (或cDNA) 的起始濃度進行定量的方法。實時熒光定量PCR是目前確定樣品中DNA (或cDNA)拷貝數最敏感、最准確的方法。
目前市場上miRNA qPCR檢測方法主要有以下兩種：1. 兩步法； 2.三步加尾法。兩種方法的主要差別在於qPCR之前的cDNA制備過程（如圖）。其中兩步法是通過獨特設計的莖環結構引物進行反轉錄將miRNA反轉錄成cDNA。而三步法則是給miRNA序列加polyA尾，之後再利用反轉錄過程將miRNA反轉錄成cDNA並加上獨特設計的尾部序列。

兩步法的優勢在於特異性很高，但是最新的研究報道顯示在編輯過程中，miRNA 的3』序列的多樣化現象(Heterogeneity)，這種現象的發生使得目前市場上qPCR兩步檢測法的准確性受到影響（如圖）。而三步法則不受這一現象的影響，而且隨著科學家們的不斷摸索創新，三步法的特異性如今已經可以和兩步法媲美。更重要的是低廉的價格也是三步檢測法越來越受到廣大研發人員喜愛的重要原因。

F. 分子互作檢測方法有哪些

生物分子的相互作用可通過多種檢測手段進行檢測，如熒光能量共振轉移（FRET），熒光偏振（FP），時間分辨熒光（TRF）均相時間分辨熒光（HTRF），Western-Blot等， 而這些檢測技術均可在酶標儀中實現。

G. 生物材料檢驗的傳統方法有哪些傳統的檢驗方法與新方法相比有什麼優缺點

主要有三種，兩者是互補的。
微生物傳統檢測方法主要指傳統的培養檢測方法、經典的PCR等分子檢測方法、基於抗原抗體反應的免疫學檢測方法等等，很多這些傳統的檢測方法都作為經典寫進了國標，在很多方面仍具有不可替代性。
但不可否認，很多微生物傳統檢測方法過程繁瑣、質量難控、費時費力、易發生主觀片面錯誤。
隨著科技的進步，科學家發展了很多微生物新興檢測方法，如基於物理方法——氣味指紋技術、基於化學方法——光譜指紋技術、基於代謝方法——色譜指紋技術等快速無損檢測技術，微流控晶元技術，基於CRISPR分子檢測技術。
這些新興檢測方法操作簡單、准確性好、高靈敏度、快速自動化檢測及分析，極大彌補了微生物傳統檢測方法的不足；未來微生物檢測發展方向，還是要結合傳統檢測方法與新興檢測方法的互補。

H. sne是什麼分子生物學檢測方法

分子生物學（molecular biology ）：從分子水平上研究生命現象物質基礎的學科。研究細胞成分的物理、化學的性質和變化以及這些性質和變化與生命現象的關系，如遺傳信息的傳遞，基因的結構、復制、轉錄、翻譯、表達調控和表達產物的生理功能，以及細胞信號的轉導等。

分子生物學中最基本的技術是蛋白質的表達和純化。首先是編碼目的蛋白的DNA序列被克隆（用PCR技術和限制性內切酶）到作為表達載體的質粒中。隨後構建好的質粒被引入到宿主細胞。編碼序列在質粒上的特殊的啟動子元件的驅動下，被宿主細胞的表達系統所表達。質粒上通常還帶有抗生素抗性標簽以便於質粒篩選。

質粒可以被插入到細菌或動物細胞。外源DNA被引入細菌被稱為轉化，可以通過電穿孔法、微注射法、正吸收和融合來實現；外源DNA被引入真核細胞，如動物細胞，被稱為轉染，轉染技術包括磷酸鈣法、脂質體法和一些有專利權的商用轉染試劑。DNA也可以以病毒或病原菌為載體被帶入宿主細胞；應用這種病毒或病菌的轉染技術於細胞時，用術語來說就是「對細胞進行轉導（transce）」。

多聚酶鏈式反應(PCR)是一項用於體外復制DNA的極為通用的技術。簡而言之，PCR技術可以使單鏈DNA被復制數百萬次，也允許用事先確定好的方式對被復制的DNA序列進行改動。例如，PCR技術可以用於引入限制性酶切位點，或者對特定的DNA鹼基進行突變（改變）。PCR技術還可以用於從cDNA文庫獲得特定的DNA片斷，或者從另一個角度，用於判斷一個cDNA文庫中是否含有特定的DNA片斷。

凝膠電泳是分子生物學最主要的一項技術。其基本原理是：DNA、RNA和蛋白質可以用電場來進行分離。在瓊脂糖凝膠電泳中，DNA和RNA可以被瓊脂糖凝膠按其分子大小進行分離。同樣，蛋白質可以被SDS－聚丙烯醯胺凝膠電泳（SDS-PAGE）按分子量大小分離；此外，蛋白質還可以由於所帶電荷的不同被等電聚焦電泳分離。

I. 鄰氯苯甲醯氯檢測方法

鄰氯苯甲醯氯檢測方法是分子檢測。
苯甲酸中的羥基被氯原子取代而生成的醯鹵，分子式。
具有刺激性氣味的無色液體。
沸點197.2℃，相對密度1.2120（20/4℃）。
蒸氣具有催淚性。
苯甲醯氯可由α,α,α-三氯甲苯部分水解製得，也可由苯甲醯直接氯化製得。
實驗室中可由苯甲酸與五氯化磷反應製得。
苯甲醯氯主要用於製造過氧化苯甲醯，它是重要的自由基引發劑。

J. 高分子測分子量的方法都有哪些

分子測分子量的方法：

高聚物的分子量及分子量分布，是研究聚合物及高分子材料性能的最基本數據之一。它涉及到高分子材料及其製品的力學性能，高聚物的流變性質，聚合物加工性能和加工條件的選擇。也是在高分子化學、高分子物理領域對具體聚合反應，具體聚合物的結構研究所需的基本數據之一。

分子量檢測方法：GPC 凝膠滲透色譜，飛行質譜法(Maldi-tof)

分子量測定儀器參數

GPC 流動相 ：THF(四氫呋喃)，H2O(水相)，DMF( N,N-二甲基甲醯胺), 二氯甲烷，TCB(三氯苯)

檢測方法：端基滴定法 冰點降低法 蒸汽壓下降法（VPO） 膜滲透壓法 。

檢測儀器：核磁共振 流動分析儀/流動注射分析儀(FIA SFA CFA)

電容水分測定儀 電阻水分測定儀

紅外水分測定儀 紫外可見分光光度計

紅外光譜(IR、傅立葉) 氣相分子吸收光譜儀（GMA）