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蛋白分子量檢測方法

發布時間:2023-01-28 23:52:55

1. 檢測核酸、蛋白質分子量的方法

一般來說是電泳法,核酸用的是瓊脂糖凝膠電泳,蛋白質用的是聚丙烯醯胺凝膠電泳,通常在樣品的旁邊,會跑一個由多種已知大小的樣品組成的marker,這樣在你的條帶跑出來之後,就可以看出其大小了,核酸最多可以精確到50bp之內。蛋白的話大概1kd左右。

當然你做實驗的時候一般都是知道你的樣品大小的,所以一般做比較看是不是出現在正確的位置就好。

希望能夠幫到你~望採納~謝謝~有不明白的歡迎追問~

2. 最常用於測定蛋白質分子量的方法是

正確答案:A
解析:SDS-聚丙烯醯胺凝膠電泳可以用來測定蛋白質分子量

3. 測定一個蛋白質分子量時,哪一種方法不常用

目前蛋白質分子量測定中最常用的幾種方法,包括粘度法、凝膠過濾層析法、凝膠滲透色譜法、sds-凝膠電泳法、滲透壓法、電噴霧離子化質譜技術、基質輔助激光解吸電離質譜技術、光散射法、超速離心沉降法。

4. 測定一個蛋白質分子量時,哪一種方法不常用 A.超速離心 B.電泳 C.層析 D.X 一光衍射

答案D
蛋白質的分子量測定的方法主要有:根據化學組成測定最低分子量,滲透壓法,沉降分析法(利用超速離心機),分子排阻層析法,SDS聚丙烯醯胺凝膠電泳.X一光衍射是用於測定化學立體結構的方法.

5. 未知蛋白質分子量范圍,如何進行測定

方法1:SDS-PAGE電泳,通過加入的蛋白Marker各條帶遷移率和未知蛋白的條帶遷移率,再用軟體可計算出來.
方法2:凝膠過濾層析:用一系列已知分子量的標准品放入同一凝膠柱內,在同一條件下層析,記錄每一分鍾成分的洗脫體積,並以洗脫體積對分子量的對數作圖,在一定分子量范圍內可得一直線,即分子量的標准曲線.測定未知物質的分子量時,可將此樣品加在測定了標准曲線的凝膠柱內洗腫後,根據物質的洗脫體積,在標准曲線上查出它的的分子量.
另外還有離心沉降等等方法,反正有不少的方法

6. 如果測定某種蛋白質的分子量,採用何種層析法最好其原理是什麼

需要測定蛋白質的分子量,可以直接用SDS聚丙烯醯胺凝膠電泳就可以了,層析法不能測定蛋白子的分子量,但是可以根據分子量的大小來分離開蛋白。

常用技術

1、沉澱,

2、電泳:蛋白質在高於或低於其等電點的溶液中是帶電的,在電場中能向電場的正極或負極移動。根據支撐物不同,有薄膜電泳、凝膠電泳等。

3、透析:利用透析袋把大分子蛋白質與小分子化合物分開的方法。

4、層析:利用蛋白質在固定相與流動相之間不同的分配比例,達到分離目的的技術。

(6)蛋白分子量檢測方法擴展閱讀

產品特點

1、處理過程為單純物理過程,無任何相變。設備操作溫度低,避免了傳統工藝的種種弊端;

2、系統採用先進的膜分離技術,工藝簡單,運行穩定可靠,處理效率高;

3、可以對生產廢水中的有用物質進行提純回用,實現經濟、環保雙贏;

4、設備投資少,運行費用低。

7. 測定蛋白質相對分子質量最准確方法是

1。根據化學組成測定最低分子量用化學分析方法測出蛋白質中某一微量元素的含量,並假設分子中只有一個這種元素的原子,就可以計算出蛋白質的最低分子量。2. 滲透壓法當蛋白質濃度不大時,可用以下公式: M=RT/lim(∏/C) 其中R是氣體常數(0.082),T是絕對溫度,∏是滲透壓(以大氣壓計),濃度單位是g/L。3. 沉降速度法: M=RTs÷D(1-Vρ) 其中s是沉降系數,D是擴散系數, ρ是溶劑的密度, V是蛋白質的偏微分比容。4. SDS-PAGE法: lgM=K1-K2μR 其中K1和K2是與試驗條件有關的常數。用已知分子量的標准蛋白作標准曲線,即可求出未知蛋白的分子量。
望採納!

8. 蛋白質的分子量測定方法

http://www.musc.e/pharm/msgb.html

http://www.eng.uc.e/~gbeaucag/Classes/Characterization/MolecularWeighthtml/MolecularWeight.html

http://mrw.interscience.wiley.com/emrw/9780471140863/cp/cpps/article/ps0712/current/pdf

if you know the amino acid sequence, you can calculate:
http://www.bioinformatics.org/sms/prot_mw.html

http://www.scripps.e/~cdputnam/protcalc.html

9. =測定蛋白質分子量的主要方法有哪些簡述其原理(列舉三種)

知道蛋白質分子量、氨基酸組成計算器
http://www.proteomics.com.cn/tools/mwcal/

一般的方法:
SDS-聚丙烯醯胺凝膠電泳法測定蛋白質的分子量

[原理]

十二烷基硫酸鈉(Sodium dodecyl sulfate, 簡稱SDS)-聚丙烯醯胺凝膠電泳法測定蛋白質的分子量,是六十年代末Weber和Osborn在Shapiro等人在實驗基礎上發展起來的一項新技術。用這種方法測定蛋白質的分子量具有快速靈便,設備簡單等優點。

蛋白質的電泳遷移率在一般的電泳方法中,主要取決於它在某PH下所帶的凈電荷量、分子大小(即分子量)和形狀的差異性,而SDS-聚丙烯醯胺凝膠電泳對大多數蛋白質,主要取決於它們的分子量,與原有的電荷量和形狀無關。

SDS是一種陰離子表面活性劑,在一定的條件下,它能打開蛋白質氫鍵和疏水鍵,並按比例地結合到這些蛋白質分子上形成帶負電荷的蛋白質-SDS復合物,每克蛋白質一般結合1.4克SDS。SDS與蛋白質的定比結合使蛋白質-SDS復合物均帶上相同的負電荷,其量遠遠超過蛋白質原有的電荷量,因而掩蓋了蛋白質間原有的電荷差異。在水溶液中,蛋白質-SDS復合物具有相同的構象,近似雪茄煙形的長橢園棒(短軸均為1.8nm,長軸則隨蛋白質的分子量成正比變化),克服了蛋白質間原有的形狀差異。這樣蛋白質-SDS復合物在凝膠中的遷移率不再受原有電荷和形狀的影響,而只是蛋白質分子量的函數。蛋白質分子量與電泳遷移率間的關系可用下式表示:

lgMr = K – bm

式中 Mr為分子量;K為常數;b為斜率;m為遷移率。

因此,用本法測定蛋白質的分子量只需根據待測蛋白質在已知分子量的標准蛋白質的lgMr~遷移率的圖中的位置,就能得知分子量。

用本法測得的分子量,除單鏈蛋白質外,均不是天然蛋白質的完整分子量,而是組成這些蛋白質的亞基或肽鏈的分子量。本法對一些電荷異常,或構象異常,或帶有大輔基的蛋白質不適用,如組蛋白F1和某些糖蛋白等。對一些結構蛋白如膠原蛋白等也不適用。

SDS-聚丙烯醯胺凝膠電泳按照凝膠電泳系統中的緩沖液、pH值和凝膠孔徑的差異可分為SDS-連續系統電泳和 SDS-不連續系統電泳兩類;按照所製成的凝膠形狀和電泳方式又可以分為SDS-聚丙烯醯胺凝膠垂直管型電泳和SDS-聚丙烯醯胺凝膠垂直板型電泳兩類。

本實驗採用SDS-不連續垂直板型操作方法。通過實驗使學生掌握SDS-聚丙烯醯胺凝膠垂直板式電泳的原理及技術,包括制膠、灌膠、加樣、剝膠及固定染色等,學會用這些方法測定蛋白質分子量。

[方法與步驟]

一、加樣液的制備

1、標准蛋白質加樣液的制備 稱取細胞色素,胰凝乳蛋白酶原,胃蛋白酶,卵白蛋白,牛血清白蛋白各0.5~1mg,置小離心管(Eppendorf管)中,加入樣品溶解液1mL,充分溶解,如有不溶物應離心除去。沸水浴熱處理3min,冷卻備用。

2、待測蛋白質加樣液的制備

根據待測蛋白質樣品存在的狀況而定。

(1)固體

待測蛋白樣品,如為無鹽的純蛋白質固體制劑,加樣液的制備方法同標准蛋白質加樣液的制備;如為含鹽的純蛋白質固體制劑,應先加水充分溶解,對透析緩沖液透析12~16h,然後吸取0.5mL(蛋白濃度應為0.5~1mg/mL),置Eppendorf管中,並加入等體積濃樣品溶解液,沸水浴熱處理3min,冷卻備用。

(2)液體

待測蛋白樣品,如為無鹽的純蛋白質液體制劑,則加入等體積濃樣品溶解液,然後熱處理;如為含鹽的液體制劑,則需先透析。

二、凝膠的制備

1、凝膠板的准備

(1)洗板

將洗潔精用溫水稀釋後,用它浸透海綿擦洗玻板,然後用自來水洗凈,再用酒精將板擦乾。

(2)安裝制膠板

制膠前將玻板與塑料嵌條和凹型陶瓷板的邊緣對齊,下沿用密封膠帶封口,用塑料夾子或鐵夾子將兩端夾好,注意要確保密封,安放在固定架上。

2、分離膠和濃縮膠溶液的配製

組 分
分離膠/mL
濃縮膠/mL

凝膠貯備液
2.5
0.26

分離膠緩沖液(pH8.8)
1.9


濃縮膠緩沖液(pH6.8)

0.5

10%SDS
0.075
0.02

TEMED
0.026
0.02

雙蒸水
3.05
1.22

10%過硫酸銨
0.013
0.02

總體積
7.6
2

注意:①最後加入10%過硫酸銨溶液,混合製成凝膠液,迅速灌制凝膠。

②丙烯醯胺和甲叉雙丙烯醯胺均為神經毒劑,對皮膚有刺激作用。因此必須小心操作,不得吸入和接觸皮膚,聚合完全聚丙烯醯胺凝膠無毒。

3、制分離膠

將制膠板垂直放好,插上與相應厚度的樣品梳,在梳子下緣線1cm處做標記,卸下樣品梳。將配好的分離膠溶液緩慢加入制膠板之間,直至液面達到標記處。用滴管貼近膠液界面小心而又緩慢地覆蓋厚度約0.5cm的正丁醇層,以防止溶液蒸發並保證膠面平整。

4、制濃縮膠

分離膠聚合後,倒去正丁醇,用蒸餾水沖洗分離膠膠面兩次,用濾紙吸去殘液。用滴管將濃縮膠溶液加在分離膠面上,充滿制膠板,插入樣品梳。

(三)電泳

1、安裝電泳槽

濃縮膠聚合後,除去梳子、密封膠帶以及六個鐵夾。將制膠扳、電泳糟內芯、另一對制膠板依次放入槽內。兩制膠板的凹型陶瓷板均應與電泳槽內芯接觸。然後插入楔型板以固定兩套制膠板。如果每次電泳只用一塊膠板,必須用提供的有機玻璃板代替另一套制膠板。

2、加樣

在內外水槽加註緩沖液,使內外槽的水位均超過凹形板的缺口但低於塑料板的上沿。用微量加樣器在梳井內加樣。

3、電泳

蓋好上蓋,在80V~100V的電壓下電泳約3h,至溴酚藍指示的電泳前沿到達制膠板的下緣止,關掉電源。然後拔掉楔形板,取下制膠扳。

(四)染色、脫色

用刀片或薄板將白塑料板與陶瓷板輕輕撬開,用刀片沿分離膠與濃縮膠的交接處,將分離膠切下,並在分離膠的左上角切掉一小角,以標記樣品順序。然後手戴橡膠手套將分離膠小心移入染色器皿中。在染色器皿中加入100mL考馬氏亮藍染液(含0.25%考馬氏亮藍R-250,30%乙醇,10%乙酸的水溶液),加蓋,在搖床上染色2h。

將染液倒回貯存瓶(可反復使用)。在染色皿中加入100mL脫色液(10%乙酸,30%乙醇),振盪脫色至蛋白條帶清晰。

[結果和計算]

1、凝膠脫盡底色後,色帶清晰顯出。按實樣描下或攝下電泳圖譜。

2、根據各蛋白遷移距離和染料遷移距離的比值,求出各蛋白的相對遷移率mr,然後作出lgMr~mr關系圖,從圖中找出未知蛋白mr對應的分子量。參考資料:http://jpkc.ecust.e.cn/17/experiment/exp/dy_2.htm

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