抗體檢測方法

A. HIV的檢測步驟有哪些

艾滋病檢測種類：血液試紙和唾液試紙兩大類。
目前市場上的艾滋病試紙種類主要分為兩大類，其中血液試紙主要包括雅培hiv試紙、愛康hiv試紙等。而唾液艾滋病試紙的種類就顯得比較單調，其中使用最廣泛的就是美國艾衛艾滋病檢測試紙，深受很多的高危人群及恐艾症患者的青睞。

專家指出，自從第一例艾滋病毒被確診以後，全球對於艾滋病毒的研究已經有30多年的歷史，而在這些年中也確實取得了十分重大的突破，其中艾滋病試紙研發問世，其所提倡的艾滋病自測就為艾滋病毒的預防奠定了嶄新的里程碑。據本站筆者了解得知，艾滋病試紙是一種使用膠體金免疫層析科技研發的新一代檢測試劑，可檢測血清或血漿標本中的HIV-1/2特有性抗體，從而准確的判斷出患者體內是否含有艾滋病毒，進而了解該患者是否是艾滋病毒感染者。
艾滋病檢測試紙優勢多，不同艾滋病試紙准確率達99.99%
不同的艾滋病試紙在不同的情況下使用起來具有更高的准確性和方便性。但是這幾種常見的HIV檢測試紙使用起來主要有以下幾個方面的優勢：所有操作時間15分鍾，所有的檢測操作過程簡便、出檢測結果十分迅速又准確、而且全部都是自帶質控對照，檢測過程中還不需要使用附加葯劑。值得一提的是，自己在家就能夠獨立完成所有的檢測過程，並不再像過去那樣一定要到專業的疾控中心檢測，這樣不但減輕了疑似感染者的心理折磨，而且還出檢測結果快速高效，為感染者及時治療爭取了更多有利的時間。
據悉，要想准確知道檢測結果，還需要注意的一個問題就是艾滋病檢測的最佳時間，而國際上規定以高危發生的日期開始計算，2周後即可檢測艾滋病病毒，以6周以後為准。而且如果在檢測過程中要想更加准確了解結果，最好是一次性使用多種不同品牌的艾滋病試紙，注意准確率更高，幾乎是100%。

B. 免疫學的檢測方法

免疫學檢測方法可分為體液免疫和細胞免疫。

C. HIV-抗體檢測方法的確認實驗

免疫印跡試驗（WB）、條帶免疫試驗（LIATEK HIVⅢ）、放射免疫沉澱試驗（RIPA）及免疫熒光試驗（IFA）。國內常用的確認試驗方法是WB。
(一_免疫印跡實驗(westernblot，WB)是廣泛用於許多傳染病診斷的實驗方法，就HIV的病原學診斷而言，它是首選的用以確認HIV抗體的確認實驗方法，WB的檢測結果常常被作為鑒別其他檢驗方法優劣的「金標准」。
確認試驗流程:
有HIV-1/2混合型和單一的HIV-1或HIV-2型。先用HIV-1/2混合型試劑進行檢測，如果呈陰性反應，則報告HIV抗體陰性；如果呈陽性反應，則報告HIV-1抗體陽性；如果不滿足陽性標准，則判為HIV抗體檢測結果不確定。如果出現HIV-2型的特異性指示條帶，需用HIV-2型免疫印跡試劑再做HIV-2的抗體確認試驗，呈陰性反應，報告HIV-2抗體陰性；呈陽性反應則報告HIV-2抗體血清學陽性,並將樣品送國家參比實驗室進行核酸序列分析，
WB的敏感性一般不低於初篩實驗，但它的特異性很高，這主要是基於HIV不同抗原組分的分離以及濃縮和純化，能夠檢測針對不同抗原成分的抗體，因而能夠用WB方法鑒別初篩實驗的准確性。從WB確認試驗結果看出，初篩試驗盡管選擇質量較好的試劑，如第三代ELISA，仍會有假陽性出現，必須通過確認試驗才能得出准確結果。
(二)免疫熒光實驗(IFA)
IFA法經濟、簡便、快速，曾被FDA推薦用於WB不確定樣品的診斷。但需要昂貴的熒光顯微鏡，需要受過良好訓練的技術人員、觀察和解釋結果易受主觀因素的影響，結果不宜長期保存，IFA不宜在一般的實驗室開展和應用。
HIV抗體確證試驗結果報告
HIV抗體確證試驗結果用附表3報告。
（1）符合HIV-1抗體陽性判斷標准，報告「HIV-1抗體陽性（+）」，並按規定做好檢測後咨詢、保密和疫情報告工作。符合HIV-2抗體陽性判斷標准，報告「HIV-2抗體陽性（+）」，並按規定做好檢測後咨詢、保密和疫情報告工作。
（2）符合HIV抗體陰性判斷標准，報告「HIV抗體陰性（－）」。如疑似「窗口期」感染，建議進一步做HIV核酸檢測，盡早明確診斷。
（3）符合HIV抗體不確定判斷標准，報告「HIV抗體不確定（±）」，在備注中應註明等待「4周後復檢」。

D. 自身抗體的檢測方法有哪些

1、抗核抗體檢測

抗核抗體是一組將自身真核細胞的各種細胞核成分作為靶抗原的自身抗體的總稱，主要是IgG，其次是IgM和IgA，無器官和種屬特異性。ANA在大多數自身免疫性疾病中均可呈陽性，正常老年人也可有低滴度的ANA。ANA檢測在臨床自身免疫病診斷與鑒別診斷中是一個重要的篩查試驗。

2、類風濕因子

類風濕因子是變性lgG刺激機體產生的一種自身抗體，主要存在於類風濕關節炎患者的血清和關節液內。主要為lgM型，也有lgG、lgA、lgD和IgE型。

3、抗中性粒細胞胞漿抗體

抗中性粒細胞胞漿抗體是指與中性粒細胞及單核細胞胞漿成分發生反應的抗體。當中性粒細胞受抗原刺激後，胞漿中的α-顆粒釋放蛋白酶-3、髓過氧化物酶等物質，刺激機體而產生ANCA。

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自身抗體的產生原因：

人體的生長、發育和生存有完整的自身免疫耐受機制的維持，正常的免疫反應有保護性防禦作用，即對自身組織、成分不發生反應。—旦自身耐受的完整性遭到破壞，則機體視自身組織、成分為「異物」，而發生自身免疫反應，產生自身抗體。

正常人體血液中可以有低滴度的自身抗體，但不會發生疾病，但如果自身抗體的滴度超過某—水平，就可能對身體產生損傷，誘發疾病。自身免疫性疾病中有許多自身抗體，其中最重要的是抗核抗體。

E. 抗體效價的檢測方法

多采免疫雙向擴散法
【基本原理】
*指抗原和抗體在同一凝膠內都擴散，彼此相遇後形成特異性的沉澱線。
-將抗原與抗體分別加入同一凝膠板中兩個相隔一定間距的小孔內，使兩者進行相互擴散，當抗原抗體濃度之比相適宜時，彼此相遇形成一白色弧狀沉澱線。
*優缺點：簡便，但敏感性較低，易出現假陰性結果。
免疫雙向擴散法的操作步驟
*將玻璃板用水洗凈後用75%乙醇沖洗，晾乾後放在水平台上備用。
*將1%agar 融化後，置56℃水浴。
*在玻璃板上鋪膠，約1.5mm 厚，凝固後打孔(直徑 3rnm)，孔間距10mm。
l 抗血清(抗體預先作系列倍比稀釋即ml 抗原樣品，周圍孔內每孔加5m*中心孔加5 1:2、1:4、1:8、1:16、1:32等比例)。
*凝膠板置濕盒內，室溫擴散24h。
*觀察結果。
凝聚胺法測定孕婦血清IgG抗-A（抗-B）效價的方法待檢血清與0.2 mol/L 2?硫基乙醇(2?Me)在試管內等量混合，放入37℃水浴1 h以破壞血清中的IgM抗體，吸取處理後的血清用生理鹽水倍比稀釋，稀釋度分別為2、4、8、16、32、64、128、256、512、1 024，然後每管加入相應的3%～5%紅細胞懸液，置37℃水浴30 min，觀察是否凝集，不凝集者用生理鹽水洗滌3次，然後加入低離子鹽水介質(LIM液)，混勻，滴入2滴凝聚胺，混勻後3 000 r/min離心30 s，扣搖肉眼可見明顯的凝集(無凝集者須重做)，再加入2滴重懸液，輕搖，觀察凝集是否消失，凝集1 min內不消失者表示受檢者血清中含有IgG型抗?A(抗?B)。
抗體效價檢測的其它方法
*環狀沉澱試驗，需較多的抗血清，現已很少用；
*對流免疫電泳，比瓊脂免疫雙擴散法敏感，較簡便、實用；
*酶聯免疫吸附試驗 (ELISA)。
通常抗體效價低於1：128是沒有問題的，有些孕婦高達1：256以上，而且抗體效價最好1個月查上一次，有時候會有所變化。

F. 抗體效價測定的方法內容

1．取小試管10支，分別標明1-10號，各管加生理鹽水0.2ml，用刻度吸管吸取被檢者血清0.2ml加入到第1管充分混勻，再用同一吸管從第1試管中吸出0.2ml加入到第2管，充分混勻後再吸取0.2ml加入第3管，以此倍量稀釋。取第10管的0.2ml稀釋液棄去。使成 1:2、1:4……。
2．然後各管再加等量含相應抗原的5%紅細胞鹽水懸液，振搖試管架使之混勻，置 37℃水浴中放置1h，以3000r/min離心15s，觀察凝集結果並記錄；對凝集強度為「1+」以下及不凝集者，用生理鹽水洗滌3遍，末次吸幹上清液；各加生理鹽水2滴，取出每管加抗人球蛋白試劑2滴，以3000r/min離心15s，觀察凝集結果並記錄。出現凝集的最高稀釋度的倒數為效價。例如右圖表抗A血清效價測定結果為256。

G. HIV-抗體檢測方法的快速試劑

(一)人類免疫缺陷病毒(HIV)1+2型抗體診斷試劑(膠體硒法)
雅培人類免疫缺陷病毒抗體診斷試劑(膠體硒法)是用於體外，肉眼觀察，定性的免疫分析，檢測血清或血漿中的HIV-1和HIV-2抗體，用於幫助受感染個體的HIV-1和HIV-2抗體。本品僅用於無償獻血員現場初篩及臨床緊急情況的使用，本品檢測陽性者，需進行進一步篩查確認。
(二)InstantCHEKTM-HIVl+2金標快速診斷試劑
InstantCHEKTM-HIV1+2是一種快速、簡單、靈敏的檢驗方法， 用以檢測艾滋病病毒(HIV-1和HIV-2)的抗體。該方法適用於初篩檢測，凡由該試劑測定為陽性者，需用另一種方法檢測如ELISA或用蛋白印記法確定。

H. 抗體滴度的檢測方法

檢測方法同前[11].A450處測定光吸收值.將抗體滴度定義為:實驗組和陰性對照組光吸收比值≥2.0時最大的血清稀釋倍數
源自: 佐劑DDA和MPL對提高結核桿菌組合D... 《生物化學與生物物理進展》 2005年 余大海,蔡宏,朱玉賢

I. 如何檢測體內是否存在抗體

用人們俗稱的「兩對半」檢查， HBsAg (表面抗原)，HBsAb （表面抗體），HBeAg （e抗原），HbeAb（e抗體） ，HbcAb （核心抗原）。這種檢查方法較准確，誤診的機率很小，要是沒記錯的話HBsAg ，HbcAb ，HbeAb這三種指標都為陽性就是「大三陽」了，有較強的傳染性，其他指標陽性有可能是「小三陽」或是有抗體，感染後又好了的標志。