脂肪酶檢測的方法

⑴ 測定脂肪酶活力時一定要用橄欖油嗎

測定脂肪酶活力時一定要用橄欖油。
脂肪酶酶活力檢測標准 GB-T 23535-2009標准規定使用橄欖油(分析純)；
底物溶液：
按4%聚乙烯醇：橄欖油=3:1比例混合，用高速勻漿機處理6min（分兩次處理，間隔5min，每次處理3min）。
pH7.5磷酸緩沖液：稱取十二水磷酸氫二鈉39.62g，磷酸二氫鉀1.96g，用水溶解並定容至500mL，調節溶液的pH到7.5±0.05。
脂肪酶是一種特殊的酯鍵水解酶，它可作用於甘油三酯的酯鍵，使甘油三酯降解為甘油二酯、單甘油酯、甘油和脂肪酸。
酶是一種活性蛋白質。因此，一切對蛋白質活性有影響的因素都影響酶的活性。酶與底物作用的活性，受溫度、pH值、酶液濃度、底物濃度、酶的激活劑或抑制劑等許多因素的影響。
脂肪酶在微生物中有廣泛的分布，其產生菌主要是黴菌和細菌。已經公布的適用於甘油三酯加工的不同來源的脂肪酶有33種，其中18種來自黴菌，7種來自細菌。
脂肪酶可將甘油酯（油、脂）水解，在不同階段可釋放出脂肪酸、甘油二酯、甘油單酯及甘油。水解生成的脂肪酸，可以用標準的鹼溶液滴定，以滴定值表示酶活力。
反應式為：RCOOH+NaOH → RCOONa+H2O

⑵ 有哪位能告訴我國標怎麼查

一看就知道是企業標准。
方法：

1、粗酶液的制備

用電子天平分別稱取粗脂肪酶0.010 g、0.020 g 和0.030 g， 用蒸餾水溶解並定容至100 mL， 配成濃度分別為0.01%、0.02% 和0.03%的粗酶液。

2、實驗設計

本實驗以10 mL色拉油為底物，以酶用量、水解溫度、反應時間為因素，通過酸價的測定選定其水解的最佳條件。

3、酸價的測定

酸價是指中和1 mol游離脂肪酸所需NaOH的毫克數， 它用於衡量油脂的水解程度。實驗中用酸鹼滴定法測定水解液的酸價， 參照文獻[ 3， 4 ]中所使用的方法， 向所得的水解液滴加1 mL 95%的乙醇溶液， 搖勻， 終止反應， 並加入2滴酚酞指示劑， 迅速用0.05 mol/L的NaOH溶液滴定至溶液呈微紅色， 在30 s內不消失為終點， 記錄消耗的NaOH溶液毫升數(V ) 。用同樣的方法測定空白值， 每個試驗重復兩次， 以平均值作為測定結果。

酸價按下式計算：
X = C (V - V0 ) ×40 /M
式中: X —油脂酸價(mgNaOH /g油)
C—NaOH標准溶液的濃度(mol/L)
M —試樣的質量( g)
40—NaOH的mmol質量(mg/mmol)

4 粗脂肪酶活力的測定

在最佳水解條件下， 分別測得粗脂肪酶和標准脂肪酶水解液的酸價X1、X2 ， 根據公式U1 /U= X1 / X2求得粗脂肪酶的活力， 其中U1為粗脂肪酶活力， U為標准脂肪酶活力。

5標准脂肪酶液的配製

根據實驗最佳條件， 配製標准脂肪酶液。
答：實驗設計，本實驗以10 mL色拉油為底物，以酶用量、水解溫度、反應時間為因素，通過酸價的測定選定其水解的最佳條件。用色拉油作底物不太妥，一般是用橄欖油，化學純的。

⑶ 蘇丹三可以檢測脂肪酶的活性嗎

脂肪酶的化學本質是蛋白質，而蛋白質能與雙縮脲試劑發生紫色反應．因此，脂肪酶可以用雙縮脲試劑檢測．
故選：D．

⑷ 同樣的菌株，在不一樣得培養基上培養，鏡檢出來是不一樣的

應該是。
你可以這么想，同樣是一種細菌的菌株，一個在含有抗生素的培養基上培養，一個在正常培養基上培養。結果會一樣？

⑸ 脂肪酶是什麼脂肪酶的臨床意義

脂肪酶是一類具有多種催化能力的酶，可以催化三醯甘油酯及其他一些水不溶性酯類的水解、醇解、酯化、轉酯化及酯類的逆向合成反應，除此之外還表現出其他一些酶的活性，如磷脂酶、溶血磷脂酶、膽固醇酯酶、醯肽水解酶活性等（Hara；Schmid）。

脂肪酶不同活性的發揮依賴於反應體系的特點，如在油水界面促進酯水解，而在有機相中可以酶促合成和酯交換。

臨床意義：

1、急性胰腺炎：血清脂肪酶活性測定可用於胰腺疾病診斷，特別是急性胰腺炎時，發病4-8h內血清脂肪酶活性升高，24h達高峰，持續8-14天。脂肪酶活性升高多與澱粉酶並行，可能升高時間更早、持續時間更長、升高幅度更大。因而，疾病後期測定更有意義。

2、急腹症：血清脂肪酶升高可見於急腹症。

3、慢性腎病：血清脂肪酶升高可見於慢性腎病等。

4、作為腮腺炎和巨澱粉酶血症時鑒別診斷指標：腮腺炎和巨澱粉酶血症時血清脂肪酶不升高，此點與澱粉酶不同，可用於鑒別。

(5)脂肪酶檢測的方法擴展閱讀

脂肪酶廣泛的存在於動植物和微生物中。植物中含脂肪酶較多的是油料作物的種子，如蓖麻籽、油菜籽，當油料種子發芽時，脂肪酶能與其他的酶協同發揮作用催化分解油脂類物質生成糖類，提供種子生根發芽所必需的養料和能量；

動物體內含脂肪酶較多的是高等動物的胰臟和脂肪組織，在腸液中含有少量的脂肪酶，用於補充胰脂肪酶對脂肪消化的不足，在肉食動物的胃液中含有少量的丁酸甘油酯酶。

在動物體內，各類脂肪酶控制著消化、吸收、脂肪重建和脂蛋白代謝等過程；細菌、真菌和酵母中的脂肪酶含量更為豐富（Pandey等）。

⑹ 什麼是酶活力測定的終點法此法有何優缺點

酶活力測定常用的方法有終點法和動力學方法兩類。
終點法
測定完成一定量反應所需的時間，如α-澱粉酶的活力測定。因為碘對澱粉呈現藍色反應，當澱粉溶液中加入澱粉酶後，碘的藍色反應消失而呈現紅棕色；碘對澱粉顏色反應消失的時間可表示澱粉酶活力的大小。碘對澱粉顏色反應消失花的時間越短，表示酶的活力越高。
動力學方法
測定一定時間內所起的化學反應量。
①比色法 如果酶反應的產物可與特定的化學試劑反應而生成穩定的有色溶液，且生成顏色的深淺與產物的濃度在一定的范圍內有線性關系可用此法。如蛋白酶的活力測定：蛋白酶可水解酪蛋白，產生的酪氨酸可與福林試劑反應生成穩定的藍色化合物，在一定的濃度范圍內，所生成藍色化合物顏色的深淺與酪氨酸的量之間有線性關系，可用於定量測定。
②量氣法 主要用於有氣體產生的酶促反應。如氨基酸脫羧酶、脲酶的活力測定。產生的二氧化碳量可用特製的儀器如瓦氏呼吸儀測定之。根據氣體變化和時間的關系，即可求得酶反應的速度。
③滴定法 如果產物之一是自由的酸性物質可用此法。如脂肪酶催化脂肪水解，脂肪酸的增加量代表脂肪酶的活力。
④分光光度法 利用底物和產物光吸收性質的不同，可直接測定反應混合物中底物的減少量或產物的增加量。幾乎所有的氧化還原酶都使用該法測定。如還原型輔酶Ⅰ(NADH2)和輔酶Ⅱ(NADPH2)在340nm有吸收，而NAD和NADP在該波長下無吸收，脫氫酶類可用該法測定。該法測定迅速簡便，自動掃描分光光度計的使用對酶活力的快速准確的測定提供的極大的方便。
⑤放射測量法 是酶活力測定中較常用的一種方法。一般用放射性同位素標記底物，在反應進行到一定程度時，分離帶放射性同位素標記的產物並進行測定，就可測知反應進行的速度。常用的同位素有3H，14C，32P，35S，131I等。如脲酶，將底物尿素用14C標記，產生的帶放射性的CO2氣體可用標准計數法進行測定。
⑥酶偶聯分析 某些酶本身沒有合適的測定方法，但可偶聯另一個酶反應進行測定。其基本方法為：應用某一高度專一性的工具酶使被測酶反應能繼續進行到某一可直接連續且簡便准確測定階段的方法。如：被測E1反應的產物B是某一脫氫酶(E2)的底物，向反應體系中加入足量的脫氫酶和NAD+或NADPH+，使反應由A經B繼續進行到C，然後測定NADH或NADPH的特徵吸收光譜的變化，即可間接地測定E1的活力大小。如己糖激酶的活力測定即應用這一方法。注意：使用該法要求指示酶必須很純，且具有高度的專一性，以免干擾反應而給測定帶來麻煩。

⑺ 採用什麼方法可以定量測定酶活性

肯定是分光光度法噻~~~
根據酪氨酸和色氨酸殘基的苯環含有共軛雙鍵，所以蛋白質溶液在280nm有一個吸收紫外吸收高峰！~在一定濃度范圍內，蛋白質溶液在最大吸收波長處的吸光度與其濃度成正比~~~然後有專門的蛋白質量和酶活力的換算公式，但是這種方法的准確性不是很好，試驗中存在很多影響因素！！！！這種方法用於很多酶和蛋白質的測定，還可以用於某些dna和rna的定量測定哦~~~
熒光法一般用於體內酶促反應的酶和抗體的測定，通過酶等和底物的反應，把底物用熒光物標記起來，反應後在紫外線的激發下觀察熒光的強弱，從而判斷酶活力的大小，不過用於定性的測定為多~~~
酸鹼滴定似乎沒注意過，好像看到過測定脂肪酶的活性吧~~~通過用酸鹼滴定法測定水解液的酸價，依靠指示劑的變化判斷，而且有酸鹼滴定操作肯定很麻煩~~~~
測壓發法也沒聽到說過，不知道是怎麼回事~~~
碘量法肯定用於澱粉酶的測定嘛~~~~~澱粉酶能水解澱粉，不會和碘反應產生藍色的噻~~
然後還有什麼質譜分析，hplc（高效液相色譜）等等，反正還有很多高科技的測定方法的~~~
最常用的就是分光光度法啦~~~~

⑻ 甘油三酯的測定方法

血清甘油三酯/三醯甘油（TG）是一項重要的臨床血脂常規測定指標，特別是隨著對其致動脈粥樣硬化（AS）作用研究的深入，TG作為冠心病的一項獨立的危險因素日益受到重視。但是血清TG測定及其臨床應用尚存在很多問題，如生物學變異、游離甘油對測定的影響、測定的標准化系統不完善等等。本文僅對TG的生物化學、測定方法與標准化、臨床意義等方面的近況作一簡述。 血清TG測定方法一般可分為化學法、酶法和色譜法3大類。早期測定方法是以總脂質與膽固醇和磷脂之差估算。化學法用有機溶劑抽提標本中的TG，去除抽提液中磷脂等干擾物後，用鹼水解（皂化）TG，以過碘酸氧化甘油生成甲醛，然後用顯色反應測甲醛。比較准確的是二氯甲烷-硅酸-變色酸法（Van Handel-Caslson法），此法抽提完全、能去除磷脂及甘油干擾、變色酸顯色靈敏度高、顯色穩定，至今還是美國疾病控制與預防中心（CDC）的內部參考方法。但因操作步驟繁多、技術要求高而不適於常規工作應用。核素稀釋/氣相色譜/質譜技術（ID/GC/MS）主要用作參考系統中決定性方法的建立及參考物質的制備與定值，此法費用昂貴，樣品處理復雜，難以推廣應用。
所有的臨床實驗室都用酶法檢測血清TG水平，雖然方法各異，但一般都包括3個基本步驟[3,5～7]：用最合適的LPL水解TG生成甘油和FFA；接著是轉化，該步驟一般只用一種酶，例如甘油激酶，將甘油磷酸化以進行下一步反應，或者生成中間待測物；最後是有色染料（常為醌亞胺等）或者紫外吸收物質的形成，再通過分光光度法計算相應的TG濃度。如脂蛋白脂肪酶-甘油磷酸氧化酶- 過氧化物酶-4-氨基安替比林和酚法（GPO-PAP 法）等。此法具有簡便快速、微量、精密度高的優點，且特異性強，易於達到終點，線性范圍寬。用一步法測定的是血清總甘油酯（定義為TG和FG及少量甘油二酯、甘油一酯之和，習慣統稱為TG）。為了消除FG的干擾，中華醫學會檢驗分會曾推薦GPO-PAP 法的兩步酶法作為血清TG常規測定方法[7]，該法不增加試劑成本和工作量，適合自動化分析，由於試劑分成兩部分加入，對正確設置分析測定參數有較高要求。對此法能否去凈游離甘油方面有人提出質疑。針對這一情況，中華醫學會檢驗分會在《關於臨床血脂測定的建議》文件中建議酶法如GPO-PAP 法作為臨床實驗室測定血清TG的常規方法。普通臨床常規實驗室可採用一步GPO-PAP法，有條件的實驗室（如三級以上醫院）應考慮開展游離甘油的測定。
血清FG對TG測定結果的影響一直是臨床十分關注的問題。國外資料顯示，正常人體血清FG含量為0.06～0.22mmol/L，約占總TG的6%～14%[3]。國內的研究結果與此相近，中國正常人血清FG 水平平均約為0.08mmol/L（0.02～ 0.33mmol/L），約占總TG7.19%（0.81% ～21.64%）。雖然臨床標本中FG顯著升高者很少見，但有些異常或病理情況下如應激反應（腎上腺素激活LPL促進體內脂肪水解），劇烈運動，服用含甘油的葯物如硝酸甘油，靜脈輸入含甘油的營養液，肝素治療，某些嚴重的糖尿病、肝病與腎病，取血器材或試管塞上帶有甘油等時，可見血清FG顯著升高，並給臨床決策帶來誤導[3]。因此，可採取測定「真」TG的方法減少其影響：一種是同時測定總甘油和FG，兩個結果的差值反應了真TG濃度（外空白法），另一種是用上文所述的兩步酶法直接測定TG（內空白法）。前者國內外應用較少，後者國外（如日本）使用較多，已有許多臨床實驗室開展。
對於FG空白的設置建議採取如下措施：
⑴臨床實驗室應備有可以做FG空白的檢測系統，在任何情況下都可以做FG空白；
⑵TG報告單中應標明是否為FG空白結果，實驗室應告知臨床醫生FG空白的意義；
⑶臨床及基礎研究、參加CDC脂質標准化計劃的實驗室都要做FG空白；
⑷住院病人中內源性甘油過高群體的標本都應做FG空白；
⑸體檢及門診患者可以不做FG空白，但糖尿病或其他特殊門診例外；
⑹FG>2.3mmol/L者最好做FG空白；
⑺對某些可疑情況，如TG高而血清不混濁應排除高FG的可能。
此外，一些物質如抗氧化物質（維生素C等）、黃疸、溶血、脂血等對酶法測定TG有干擾，可採用設置血清空白予以消除。
在應用自動生化分析儀進行臨床常規TG測定時，還要特別注意交叉污染和基質效應。最易對TG測定產生交叉污染的是總蛋白和鐵試劑，因其還原物質濃度可影響Trinder反應。如果接著TG測定直接膽紅素，也會因表面活性劑的導入產生誤差。鐵測定對TG的影響與亞鐵氰化鉀的量有關。此外，還要注意常規酶法測定TG對制備物的基質效應。Halani等用24份新鮮血清為對照，對5份CAP制備的凍干血清及9份CDC冰凍混合血清進行了評價。以3種商品TG酶試劑測定，以CDC參考方法為對比方法，校正游離甘油後，2種商品試劑對CAP及CDC血清均無基質效應，另一種商品試劑對4份CAP血清有基質效應。也有資料表明，各種質控血清中FG佔TG的12%～85%。我們的研究也發現，臨床使用的各種TG檢測試劑盒、不同的測定/校準系統、質控血清之間存在明顯的基質效應，因此對於不同方法/試劑的選擇，如選用兩步酶法試劑和質控物時要注意其反應的通用性與適用性。 TG測定的結果受取樣時個體生物學變異（CVb）和分析不精密度（CVa）的影響[3]。一般情況下，CVa相對較小（約為3%），而CVb占總變異的90%多[6]。即使嚴格按美國膽固醇教育計劃（NCEP）要求控制的個體，在2周內2次所測的TG結果差異百分比約為膽固醇的5倍，75%以上的個體在兩周內的變異大於10%。李健齋等[9]研究發現，中國人群血清TG個體間變異為28%，居所有血脂項目之首。國外資料表明，空腹2.5月的人群TG變異約25%，非空腹狀態的變異更大，日間約為6.3%～65%，月內為12.9%～34.8%，一年為12.9% ～39.9%，以上數據均為正常個體穩定飲食狀態的結果，某些病理狀態下的波動會更大。
為減少上述變異對TG測定的影響，NCEP建議受試者在兩月內分次測定，兩次間至少間隔一周，測定結果取均值。但當血脂水平遠離醫學決定水平時，則無需多次取樣。標本採集要求受檢者在前三周內不改變飲食習慣，采血前至少12h不進食，72h不飲酒。抽血後應盡快檢測，某些含有高活性LPL的標本，如用肝素治療的病人標本，TG常會過度水解。標本最好放在冰浴中，2h內分離血清。室溫放置1天TG下降達34%。Eberly等研究發現非空腹高TG血症的發生明顯多於空腹，而兩種狀態高TG血症所致冠心病的危險基本相同，因此測非空腹TG更有利於冠心病危險預測。
臨床上常見到肉眼脂血標本，這常與一些潛在的錯誤有關。其中之一是LPL水解TG時產生的「清除效應」。在用血清而非試劑作空白時，大顆粒TRL散射引起假性高基線吸收。隨著反應的進行，TG被水解，脂蛋白顆粒變小，濁度也減小，總的效應是在吸光度上升（產生NADH）的反應中，結果輕微偏低。這種誤差所佔比率較小，且只發生於高濃度TG標本中，其誤差通常是可接受的。另外，肉眼脂血標本特別是CM含量過高者，由於CM漂到樣品杯上層使標本成為多相。因此對於肉眼脂血標本，應充分混勻且盡快檢測。TG水解產生大量脂肪酸，特別是脂血標本，由於其濁度和產物的抑製作用，對分析也有影響。在反應的緩沖液中加入牛血清白蛋白或α-環式糊精可以避免上述情況。 美國的TG測定的參考系統較為完善，其推薦的決定性方法是由美國國家標准與技術研究所（NIST）建立的ID/GC/MS法，以13C3甘油三軟脂酸酯為內標，可測總甘油酯和「凈」TG，一級參考物質為NIST的SRM1595（三軟脂酸甘油酯）；參考方法為CDC的二氯甲烷-硅酸-變色酸法，一直被用作美國CDC-NHLBI血脂標准化計劃中的參考方法，該法用Supelco的三油酸酯和NIST的三軟脂酸甘油酯標准物質SRM 1595的2：1混合物作標准，測定值不僅是TG，還包括（或部分包括）甘油二酯和甘油一酯。二級參考物質有NIST的SRM1951a、CAP RM026及CDC的多種冰凍血清。此法此參考方法步驟繁瑣，實驗室間進行方法學轉移比較困難，CDC擬對其進行改進，以期在膽固醇參考方法實驗室網路（CRMLN）建立一個結合提取、水解步驟的酶法作為「指定參考方法」。
國內陳文祥等建立了高效液相色譜（HPLC）測定總甘油和游離甘油的方法，測定總甘油酯的相對不精密度小於2%，游離甘油小於4%，總甘油平均回收率100.0%，游離甘油99.7%，與ID/GC/MS法相對偏差不大於±2%。此法擬推薦為中國TG測定的參考方法。
血脂測定標准化並非要求統一測定方法，而是要求實驗室測定結果達到所制定的技術目標。對於TG測定，國內外要求不精密度（用CV表示）應不大於5%，不準確度（用偏差表示）應不大於±5%，總誤差應不大於15%。總誤差=偏差%+1.96CV（與參考血清的靶值比較）。特別值得一提的是衛生部北京老年醫學研究所血脂實驗室已於2002年3月被接納CDC的CRMLN成員（全球共12家），在血脂測定的標准化方面積累了豐富的經驗，中國TG測定的參考系統正在建立之中。

⑼ 脂肪酶檢測喝水後能檢測嗎

脂肪肝病人檢查首先需要對血脂、血糖以及肝功能等進行檢測，若是吃過飯進行檢查則會影響檢測結果，導致無法正確診斷是否患有脂肪肝，這是最基礎的一項檢查排除內容。而且接下來還需要進行B超檢查，若不是處於空腹狀態，則會影響超聲的衰減程度，從而導致結果出現偏差。因此，脂肪肝檢查要空腹。