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igm數值是用什麼方法進行檢測

發布時間:2023-01-16 01:09:42

1. 酶聯反應的檢測方法

根據試劑的來源和標本的情況以及檢測的具體條件,可設計出各種不同類型的檢測方法。用於臨床檢驗的ELISA主要有以下幾種類型:
2.2.1雙抗體夾心法測抗原

雙抗體夾心法是檢測抗原最常用的方法,操作步驟如下:
1) 將特異性抗體與固相載體聯結,形成固相抗體。洗滌除去未結合的抗體及雜質。
2) 加受檢標本,保溫反應。標本中的抗原與固相抗體結合,形成固相抗原抗體復合物。洗滌除去其他未結合物質。
3) 加酶標抗體,保溫反應。固相免疫復合物上的抗原與酶標抗體結合。徹底洗滌未結合的酶標抗體。此時固相載體上帶有的酶量與標本中受檢抗原的量相關。
4) 加底物顯色。固相上的酶催化底物成為有色產物。通過比色,測知標本中抗原的量。在臨床檢驗中,此法適用於檢驗各種蛋白質等大分子抗原,例如HBsAg、HBeAg、AFP、hCG等。只要獲得針對受檢抗原的異性抗體,就可用於包被固相載體和制備酶結合物而建立此法。如抗體的來源為抗血清,包被和酶標用的抗體最好分別取自不同種屬的動物。如應用單克隆抗體,一般選擇兩個針對抗原上不同決定簇的單抗,分別用於包被固相載體和制備酶結合物。這種雙位點夾心法具有很高的特異性,而且可以將受檢標本和酶標抗體一起保溫反應,作一步檢測。
在一步法測定中,當標本中受檢抗原的含量很高時,過量抗原分別和固相抗體及酶標抗體結合,而不再形成夾心復合物。類同於沉澱反應中抗原過剩的後帶現象,此時反應後顯色的吸光值(位於抗原過剩帶上)與標准曲線(位於抗體過剩帶上)某一抗原濃度的吸光值相同(參見1.3.2,圖1-4),如按常法測讀,所得結果將低於實際的含量,這種現象被稱為鉤狀效應(hook effect),因為標准曲線到達高峰後呈鉤狀彎落。鉤狀效應嚴重時,反應甚至可不顯色而出現假陰性結果。因此在使用一步法試劑測定標本中含量可異常增高的物質(例如血清中HBsAg、AFP和尿液hCG等)時,應注意可測范圍的最高值。用高親和力的單克隆抗體制備此類試劑可削弱鉤狀效應。
假使在被測分子的不同位點上含有多個相同的決定簇,例如HBsAg的a決定簇,也可用針對此決定的同一單抗分別包被固相和制備酶結合物。但在HBsAg的檢測中應注意亞型問題,HBsAg有adr、adw、ayr、ayw4個亞型,雖然每種亞型均有相同的a決定簇的反應性,這也是用單抗作夾心法應注意的問題。
雙抗體夾心法測抗原的另一注意點是類風濕因子(RF)的干擾。RF是一種自身抗體,多為IgM型,能和多種動物IgG的Fc段結合。用作雙抗體夾心法檢測的血清標本中如含有RF,它可充當抗原成份,同時與固相抗體和酶標抗體結合,表現出假陽性反應。採用F(ab')或Fab片段作酶結合物的試劑,由於去除了Fc段,從而消除RF的干擾。雙抗體夾心法ELISA試劑是否受RF的影響,已被列為這類試劑的一項考核指標(參見6.2)。
雙抗體夾心法適用於測定二價或二價以上的大分子抗原,但不適用於測定半抗原及小分子單價抗原,因其不能形成兩位點夾心。
2.2.2 雙抗原夾心法測抗體
反應模式與雙抗體夾心法類似。用特異性抗原進行包被和制備酶結合物,以檢測相應的抗體。與間接法測抗體的不同之處為以酶標抗原代替酶標抗抗體。此法中受檢標本不需稀釋,可直接用於測定,因此其敏感度相對高於間接法。乙肝標志物中抗HBs的檢測常採用本法。本法關鍵在於酶標抗原的制備,應根據抗原結構的不同,尋找合適的標記方法。
2.2.3 間接法測抗體

間接法是檢測抗體常用的方法。其原理為利用酶標記的抗抗體(抗人免疫球蛋白抗體)以檢測與固相抗原結合的受檢抗體,故稱為間接法(見圖2-3)。操作步驟如下:
1)將特異性抗原與固相載體聯結,形成固相抗原。洗滌除去未結合的抗原及雜質。
2)加稀釋的受檢血清,保溫反應。血清中的特異抗體與固相抗原結合,形成固相抗原抗體復合物。經洗滌後,固相載體上只留下特異性抗體,血清中的其他成份在洗滌過程中被洗去。
3)加酶標抗抗體。可用酶標抗人Ig以檢測總抗體,但一般多用酶標抗人IgG檢測IgG抗體。固相免疫復合物中的抗體與酶標抗體抗體結合,從而間接地標記上酶。洗滌後,固相載體上的酶量與標本中受檢抗體的量正相關。
4)加底物顯色
本法主要用於對病原體抗體的檢測而進行傳染病的診斷。間接法的優點是只要變換包被抗原就可利用同一酶標抗抗體建立檢測相應抗體的方法。
間接法成功的關鍵在於抗原的純度。雖然有時用粗提抗原包被也能取得實際有效的結果,但應盡可能予以純化,以提高試驗的特異性。特別應注意除去能與一般健康人血清發生反應的雜質,例如以E.Coli為工程酶的重組抗原,如其中含有E.Coli成份,很可能與受過E.Coli感染者血甭中的抗E.Coli抗體發生反應。抗原中也不能含有與酶標抗人Ig反應的物質,例如來自人血漿或人體組織的抗原,如不將其中的Ig去除,試驗中也發生假陽性反應。另外如抗原中含有無關蛋白,也會因竟爭吸附而影響包被效果。
間接法中另一種干擾因素為正常血清中所含的高濃度的非特異性。病人血清中受檢的特異性IgG只佔總IgG中的一小部分。IgG的吸附性很強,非特異IgG可直接吸附到固相載體上,有時也可吸附到包被抗原的表面。因此在間接法中,抗原包被後一般用無關蛋白質(例如牛血清蛋白)再包被一次,以封閉(blocking)固相上的空餘間隙。另外,在檢測過程中標本須先行稀釋(1:40~1:200),以避免過高的陰性本底影響結果的判斷。
2.2.4 競爭法測抗體

當抗原材料中的干擾物質不易除去,或不易得到足夠的純化抗原時,可用此法檢測特異性抗體。其原理為標本中的抗體和一定量的酶標抗體競爭與固相抗原結合。標本中抗體量越多,結合在固相上的酶標抗體愈少,因此陽性反應呈色淺於陰性反應。如抗原為高純度的,可直接包被固相。如抗原中會有干擾物質,直接包被不易成功,可採用捕獲包被法,即先包被與固相抗原相應的抗體,然後加入抗原,形成固相抗原。洗滌除去抗原中的雜質,然後再加標本和酶標抗體進行競爭結合反應。競爭法測抗體有多種模式,可將標本和酶標抗體與固相抗原競爭結合,抗HBc ELISA一般採用此法。另一種模式為將標本與抗原一起加入到固相抗體中進行競爭結合,洗滌後再加入酶標抗體,與結合在固相上的抗原反應。抗HBe的檢測一般採用此法。
2.2.5 競爭法測抗原
小分子抗原或半抗原因缺乏可作夾心法的兩個以上的位點,因此不能用雙抗體夾心法進行測定,可以採用競爭法模式。其原理是標本中的抗原和一定量的酶標抗原競爭與固相抗體結合。標本中抗原量含量愈多,結合在固相上的酶標抗原愈少,最後的顯色也愈淺。小分子激素、葯物等ELISA測定多用此法。
2.2.6 捕獲包被法測抗體

IgM抗體的檢測用於傳染病的早期診斷中。間接法ELISA一般僅適用於檢測總抗體或IgG抗體。如用抗原包被的間接法直接測定IgM抗體,因標本中一般同時存在較高濃度的IgG抗體,後者將競爭結合固相抗原而使一部份IgM抗體不能結合到固相上。因此如用抗人IgM作為二抗,間接測定IgM抗體,必須先將標本用A蛋白或抗IgG抗體處理,以除去IgG的干擾。在臨床檢驗中測定抗體IgM時多採用捕獲包被法。先用抗人IgM抗體包被固相,以捕獲血清標本中的IgM(其中包括針對抗原的特異性IgM抗體和非特異性的IgM)。然後加入抗原,此抗原僅與特異性IgM相結合。繼而加酶標記針對抗原的特異性抗體。再與底物作用,呈色即與標本中的IgM成正相關。此法常用於病毒性感染的早期診斷。甲型肝炎病毒(HAV)抗體的檢測模式見圖2-7。
類風濕因子(RF)同樣能幹擾捕獲包被法測定IgM抗體,導致假陽性反應。因此中和IgG的間接法近來頗受青睞,用這類試劑檢測抗CMV IgGM和抗弓形蟲IgM抗體已獲成功。
2.2.7 ABS-ELISA法
ABS為親和素(avidin)生物素(biotin)系統(system)的略語。親和素是一種糖蛋白,分子量60000,每個分子由4個能和生物素結合的亞基組成。生物素為小分子化合物,分子量244。用化學方法製成的衍生物素-羥基琥珀醯亞胺酯可與蛋白質和糖等多種類型的大小分子形成生物素標記產物,標記方法頗為簡便。生物素與親和素的結合具有很強的特異性,其親和力較抗原抗體反應大得多,兩者一經結合就極為穩定。由於一個親和素可與4個生物素分子結合,因此如把ABS與ELISA法可分為酶標記親和素-生物素(LAB)法和橋聯親和素-生物素(ABC)法兩種類型。兩者均以生物素標記的抗體(或抗原)代替原ELISA系統中的酶標抗體(抗原)。在LAB中,固相生物素先與不標記的親和素反應,然後再加酶標記的生物素以進一步提高敏感度。在早期,親和素從蛋清中提取,這種卵親和素為鹼性糖蛋白,與聚苯乙烯載體的吸附性很強,用於ELISA中可使本底增高。從鏈黴菌中提取的鏈霉親和素則無此缺點,在ELISA應用中有替代前者的趨勢。由於ABS-ELISA較普通ELISA多用了兩種試劑,增加了操作步驟,在臨床檢驗中ABS-ELISA應用不多。

2. igm病毒感染是通過什麼可以檢查出來

IgM不是病毒,這是一種免疫球蛋白,這種免疫球蛋白,如果檢測為陽性提示正在受到某種病毒的感染。病毒感染多數沒有特效葯物,一般通過支持療法和抗病毒治療,加強免疫系統的功能而清除病毒。痊癒後IgM會轉為陰性。

3. 有哪些方法可以檢測梅毒

您好,專科專治,男性病建議您先去正規專業的男科醫院檢查下,根據自身的情況來分析,然後針對性的治療。平時合理的飲食,預防各種疾病的發生。祝您健康!

4. ABO血型抗體有哪兩種它們的檢測方法分別是什麼

ABO血型抗體
一般分為二類;"天然"抗體和免疫抗體,都是通過免疫產生的。

一般天然抗體是IgM,免疫抗體是IgG

ABO血型抗體為天然的IgM,不能通過胎盤。而O型血的媽媽有可能由於食物或外來物質在體內產生了抗A或B的抗體,而這個抗體是IgG,可以通過胎盤。
ABO血型鑒定
ABO
blood
groups
取靜脈血少許,放入生理鹽水中混勻,配成2%紅細胞原液
【正常參考值】
根據紅細胞膜上的A、B凝集原和血清內抗A、抗B凝集素的不同,將紅細胞血型分為O、A、B、AB四型。
【異常結果分析】
用標准血清及標准紅細胞鑒定ABO血型結果
AB型
ABO血型交叉配合試驗
ABO
blood
groups
cross-matching
靜脈血3ml
【正常參考值】
同型交叉配血主側和次側均無凝集、無溶血。
【異常結果分析】
同型配血,主側和次側均無凝集、無溶血,表示無輸血禁忌,可以輸血。否則會導致嚴重或致命的輸血反應。在此系統中還有若干種亞型,在定血型和交叉配血時應予注意。
Rh血型鑒定
Rh
blood
group
取靜脈血少許,放入生理鹽水中混勻,配成2%紅細胞原液
【正常參考值】
我國人Rh陽性>99%、Rh陰性<l%。
【異常結果分析】
Rh血型是一個比較復雜的血型系統,人類紅細胞表面的Rh抗原主要有D、C、E、c、e等,其中D抗原性最強。因此一般臨床上只做D抗原的鑒定。受檢紅細胞與抗D血清發生凝集者為陽性,反之為陰性。測定Rh血型對於溶血性輸血反應和新生兒Rh溶血症極有價值。
溶血性輸血反應:Rh陰性者接受Rh陽性者血液,則Rh陽性血液中的抗原將刺激Rh陰性人體產生Rh抗體。如果再次輸入Rh陽性血液,即可導致溶血性輸血反應。
新生兒溶血症:Rh陰性母親懷Rh陽性胎兒,第一胎時,母體受胎兒抗原致敏產生抗體,但抗體效價較低一般不易發生溶血;若懷第二胎時仍為Rh陽性胎兒,則抗體通過胎盤進入胎兒體內可導致新生兒溶血病發生。Rh陰性母親在孕前曾接受Rh陽性者血液,則第一胎時即可引起Rh陽性胎兒的新生兒溶血病。
ABO血型鑒定的原理
ABO血型鑒定的原理是根據紅細胞上有或無A抗原或/和B抗原,將血型分為A型、B型、AB型及O型四種。可利用紅細胞凝集試驗,通過正(血清試驗)反(細胞試驗)定型准確鑒定ABO血型。
所謂正定型是用已知抗A和抗B分型血清來測定紅細胞上有無相應的A抗原或/和B抗原,所謂反定型是用已知A細胞和B細胞來測定血清中有無相應的抗A或抗B。

5. 什麼是梅毒螺旋體IgM抗體檢測

硬下疳初起患者血液循環中抗梅毒IgM抗體水平低下,用暗視野顯微鏡檢查梅毒螺旋體是最好的方法。如果患者不規則用葯治療,則影響螺旋體檢查,可用19SIgM進行檢測,作為證實試驗。

6. 諾如感染可以查血清特異性IGM抗體嗎

目前常用的檢測方法有病毒核酸檢測和新冠肺炎特異性抗體血清檢測。核酸檢測是檢測病毒基因中某些特定核酸序列,是針對病毒的直接檢測。抗體檢測是間接檢測,是檢測人體對新冠病毒的免疫反應,當病毒侵入人體後,人體免疫系統會產生大量的免疫球蛋白,最常見的是IgM和IgG。

Q

檢測發現新冠病毒血清特異性IgM陽性能否作為確診依據?

A

不能!新冠病毒特異性抗體的血清學檢測標本易獲取,操作簡單快捷,易於基層開展,可以作為初篩手段,但確診新冠肺炎還需要結合核酸檢測或者動態觀察IgM和IgG滴度來判斷。從抗體角度來講,確診依據必須是:特異性IgM、IgG抗體雙陽性或IgG抗體由陰性轉為陽性或IgG抗體滴度恢復期較急性期4倍及以上升高。

7. 梅毒的檢測

血清檢查即可

8. 血清IgG,IgM,IgA檢測一般所用的試劑盒哪家公司的比較好其檢測方法一般採取什麼方法

血清IgG,IgM,IgA檢測一般採取生化法.北京華英生物技術研究所可以完成此類檢測.

9. 風濕病的免疫檢驗

風濕病的免疫檢驗

自身免疫病(AID)是指由於過度而持久的自身免疫反應導致組織器官損傷並引起相應器官病變或臨床症狀的一類疾病。風濕病是一類涉及到關節、軟骨、肌肉等結締組織的慢性疾病。下面是我為大家帶來的風濕病的免疫檢驗的知識,歡迎閱讀。

一、抗核抗體測定

(Antinuclear antibody ,ANA) ANA是抗細胞核多種成分的自身抗體,無種屬及器官特異性。ANA可分為抗DNA抗體、抗組蛋白抗體、抗非組蛋白抗體、抗核仁抗體及其他細胞成分抗體。這些抗體共同組成ANA譜。

抗核抗體(ANA)的檢查最常用於篩查全身性風濕病和自身免疫病。ANA的檢查可觀察到能與細胞核內的核酸和蛋白抗原起反應的自身抗體。細胞內可能存在對多種抗原起反應的抗體。只有某種抗體的效價很高時,IFA才能加以鑒別。

1、homogenous(均質型)

又稱彌散型,相應的抗原是雙鏈DNA和組蛋白復合物。常見於SLE,特別是腎臟受累病人。也可見於其它結締組織病,如:風濕性關節炎,MCTD,乾燥綜合征,硬皮病,慢性活動性肝炎及原發性膽汁性肝硬變。

2、Peripheral(周邊型)

相應的抗原為雙鏈DNA,多見於活動性SLE病人。

3、Speckle(斑點型)

主要是針對ENA的抗體,包括Sm,RNP,SSA,SSB,Scl-70。一般認為低效價的斑點型ANA不是結締組織病特有的,實際上不代表臨床異常。高效價的抗Sm抗體多與SLE有關。高效價的抗RNP自身抗體見於MCTD,但也見於SLE。抗SSA和抗SSB抗體,見於S.S,也可見於SLE。當病人有抗SSA抗體時,通常以皮膚表現和光過敏為主。,也存在於ANA陰性狼瘡和新生兒狼瘡。Scl-70抗體與硬皮病有關。

4、Nucleoli(核仁型)

其靶抗原是與RNA分子相關的核蛋白。多見於硬皮病。

5、Centromere(著絲點型)

抗著絲點抗體(ACA),多見於全身性硬皮病的CREST綜合征。

常用檢測方法為IFA、ELISA、免疫印跡法、RIA、免疫斑點法、膠體金標斑點免疫滲濾法等。其中IFA是應用較廣的一種方法。一般採用鼠肝切片或Hep-2細胞為底物抗原片,當加入病人血清時,病人血清中的ANA可與細胞中相應抗原成分結合。再加入熒游標記抗人IgG,在熒光顯微鏡下可見細胞核內亮綠色熒光。

〖參考值〗 <1:10或陰性

〖臨床意義〗

ANA陽性見於多種疾病,常用於風濕病及自身免疫病的診斷。SLE患者陽性率在95%以上,且效價常在1:80以上。在其他風濕病如RA、系統性硬化症、皮肌炎、乾燥綜合征 (SS)、混合結締組織病(MCTD)等也可陽性。其他如肝病,病毒感染等也可呈低效價陽性。

〖注意事項〗

在大約1%的正常人的體內可測到低效價的非特異性抗核抗體,80歲以上老人的檢出率可高達50%。高效價的ANA一般與活動期SLE密切相關。採用Hep-2細胞檢測ANA,可見到不同的染色模型。

此外,口服避孕葯的婦女也可檢測到ANA。

二、可提取性核抗原(Extractable nuclear antigen ENA)抗體

ENA是細胞內許多小分子的RNA和多肽組成的非組蛋白的酸性核蛋白顆粒。分布在細胞質中的稱為小細胞漿核糖核蛋白(scRNPs);分布在細胞核內的稱為小細胞核核糖核蛋白(snRNPs)。目前已發現的有20餘種,其中常用的抗ENA抗體有如下幾種。

(一)抗Sm抗體

Sm是病人Smith的縮寫。Sm抗原屬於SnRNP,由5個RNA和多肽組成,抗原表位在29KD、28KD和13.5KD多肽上,抗Sm抗體是酸性糖蛋白,是SLE的標記抗體。

(二) 抗nRNP(u1RNP)抗體

u1RNP是u1RNA和蛋白質組成的,抗原表位在73KD、32KD和17.5KD多肽上,是混合結締組織病(MCTD)的重要血清標志。

(三)抗SSA抗體

SS為乾燥綜合征的縮寫。此抗體又稱抗RO抗體。SSA抗原是RNA和蛋白質復合物,抗原表位在52KD多肽上,主要見於原發性乾燥綜合征患者及SLE。

(四)抗SSB抗體

SSB抗體常伴隨SSA抗體同時出現,又稱抗La抗體,SSB抗原屬於SnRNP,是含有RNA和50KD蛋白質的復合物。抗原表位在45KD、47KD和48KD多肽上。與SSA抗體並存對診斷SS有特異性。

(五)抗Scl-70抗體

Scl-70抗原表位在86KD、70KD的片段上,是DNA拓撲異構酶I的降解產物,抗Scl-70抗體幾乎僅見於硬皮病,陽性率30%左右。

(六)抗Jo-1抗體

Jo-1抗體是組氨醯tRNA合成酶,抗原表位在55KD多肽,抗Jo-1抗體是多發性肌炎和皮肌炎的標記抗體,陽性率25-40%。

(七)抗核糖體抗體

核糖體在核仁合成,然後轉入胞漿,抗原表位在大亞基上的38KD、16KD和15KD多肽上。抗核糖體抗體陽性主要見於SLE,陽性率20-30%。

檢測以上抗體的方法主要有:對流免疫電泳法(CIE)、雙相免疫擴散法,免疫印跡試驗(IBT),免疫斑點技術和ELISA法等。一般採用兔胸腺或牛胸腺提取物或細胞提取物作為抗原。近年來,應用分子重組抗原制備的試劑盒已投入市場。

〖參考值〗陰性

〖臨床意義〗

1. 抗n RNP抗體:見於35-40%的SLE病人,在MCTD病人中陽性率可達95-100%,也可見於其他風濕性疾病。

2. 抗Sm抗體:主要見於SLE及重疊綜合征,急性期病人75%為陽性。一般SLE患者30-40%陽性率。但Sm抗體陽性者90%以上為SLE,故稱之為SLE的標記抗體。

3. 抗SSA和抗SSB抗體:見於40-45%的SS病人。抗SSA抗體也可見於25%的SLE病人及其他風濕性疾病;抗SSA抗體與新生兒狼瘡和先天性傳導阻滯有關。抗SSA抗體也可見於病毒感染等非風濕性疾病。抗SSB抗體對原發性乾燥綜合征較特異,但陽性率僅27%左右。

4. 抗Scl-70抗體:一般僅見於系統性硬化症病人,陽性率20-60%。

5.抗Jol-1抗體見於30%的多發性肌炎病人及10%的皮肌炎病人。抗Jol-1抗體與多發性肌炎病人間質性肺炎的發生率增加有關。

6.抗rRNP 抗體:主要見於SLE患者,陽性率20%左右,與中樞神經系統病變有關,多在疾病活動期出現。

〖注意事項〗

判斷試驗結果時要結合臨床表現作出評價,也應根據試驗方法來作出解釋。對流免疫電泳法和雙相擴散法敏感性低,但特異性較高;免疫印跡法、斑點免疫法及ELISA方法敏感性提高,但特異性相對減少。

三.抗雙鏈DNA抗體(Antidouble-stranded DNA , A-dsDNA,)

A-dsDNA 對SLE有高度特異性,是針對細胞核脫氧核糖核酸的自身抗體。臨床上常用的檢測方法有:①Farr¡®s法:125I-DNA與待檢標本中的A-dsDNA形成免疫復合物,加飽和硫酸銨使復合物沉澱,以γ計數器分別測定上清中游離及沉澱物中已結合的125I-DNA含量,可計算出血清中A-dsDNA的結合活性。

②ELISA法:將小牛胸腺DNA包被在微孔板中,加入病人血清,如有A-dsDNA則結合到微孔板上,加入酶標抗人IgG,加入底物顯色後經酶標儀比色可知血清中A-dsDNA抗體的量。

③免疫熒光法:採用馬疫錐蟲或短膜蟲作為基質,加入病人血清。血清中的A-dsDNA與膜上的天然DNA結合,加入熒游標記抗人IgG。馬疫錐蟲和短膜蟲的動基體會發出綠色熒光。

④金標斑點法:雙鏈DNA包被於硝酸纖維膜上,加入病人血清,加入金標記抗人IgG,如有A-dsDNA存在,會顯示紅色斑點。

〖參考值〗依方法不同參考值也有不同。

Farr¡®s法:≤ 0.20 免疫熒光法:<1:10ELISA法:依試劑盒而定,一般<70u

金標法:陰性

〖臨床意義〗

A-dsDNA 陽性對 SLE 有較高的特異性。大約60%的活動性 SLE 病人會出現 A-dsDNA。其他風濕性疾病也會出現,但陽性率非常低,如RA、S.S。

〖注意事項〗

假陽性結果非常少見,但陰性亦不能排除SLE的診斷。

四.抗中性粒細胞胞漿抗體( Antineutrophil cytoplasmic antibody,ANCA) 測定

ANCA是針對中性粒細胞胞漿多種成分的 自身抗體,主要有髓過氧化物酶(MPO)和蛋白酶3( Proteinase 3 ,PR3)的抗體 。主要用於診斷Wegener 肉芽腫和系統性血管炎,特別是伴有腎病、呼吸疾病或其他類型血管炎引起多器官損害的患者。檢測方法有IFA、ELISA、 IBT等。

〖參考值〗 陰性。

〖臨床意義〗

免疫熒光法檢查ANCA陽性一般分為兩種熒光類型,一種是胞漿型,稱為cANCA,一種是核周型,稱為pANCA。cANCA產生彌漫性細胞漿染色,是針對PR3的抗體 ,一般見於wegener肉芽腫病(WG),特別是腎和肺受累的病人。pANCA產生核周染色,是針對MPO的抗體 ,主要見於系統性血管炎病人。

在WG病人中,cANCA陽性率在活動期可達80%,且有較高的抗體效價。在緩解期抗體陽性率低,且效價下降,或完全消失。

〖注意事項〗

ANCA 陽性也可見於 Good-Pastare¡®s 綜合征和SLE病人。WG的診斷不能單純依賴ANCA的結果,還要結合其他臨床表現,試驗室檢查和組織病理學檢查才能確定。ANCA效價不能完全反應疾病的活動以及對治療的反應。pANCA 陽性不是特異性的抗MPO抗體,也可以是抗粒細胞胞漿中其他酶的抗體,如彈性蛋白酶,組織蛋白酶G等。ANCA檢測應注意排除其他自身抗體的交叉反應,如ANA。因其可產生假陽性應注意鑒別,並進行ANA檢測。

五、抗線粒體抗體(Antimitochondrial antibody,AMA)

AMA是以細胞漿中的線粒體為抗原的一種自身抗體,無器官和種屬特異性。一般採用大鼠腎及胃作為抗原基質,採用IFA檢測,陽性可見大鼠腎和胃的細胞漿呈現細顆粒狀熒光。

採用免疫印跡法可將與線粒體抗原的反應分為從M1到M9九種類型,高效價的M2和M9型自身抗原與原發性膽汁性肝硬變相關。目前已有檢測M2的ELISA試劑盒供應。

〖參考值〗 陰性 >1:10 為陽性

〖臨床意義〗

AMA是原發性膽汁性肝硬化的標記抗體,陽性率達90%,並且50%患者抗體效價達1:1280或更高。此外,也可見於慢性活動性肝炎、隱匿性肝硬化。肝外阻塞性黃疸患者AMA常陰性,因此可作為鑒別診斷的一個指標。正常人中陽性率<10%,且效價較低。

六.抗平滑肌抗體(Antismooth muscle antibody,ASMA )

ASMA是抗肝細胞膜上一種肌動球蛋白的自身抗體。這種肌動球蛋白與平滑肌有交叉抗原性,因此與平滑肌有反應。一般採用IFA法,以大鼠胃作為抗原基質,陽性可見胃壁平滑肌呈現亮綠色熒光。

〖參考值〗 陰性,>1:10為陽性

〖臨床意義〗

主要見於明顯活動期的自身免疫性肝炎患者,陽性率在80%以上,效價 在1:80以上。急性病毒性肝炎早期ASMA也可陽性,且早於 HBsAg出現。其他疾病如傳染性單核細胞增多症、SS、RA、支原體肺炎、腫瘤和病毒感染者也有不同程度的陽性率。正常人中僅有2%陽性。

七. 抗甲狀腺球蛋白抗體(ATGA)和抗甲狀腺微粒體抗體(ATMA)

ATGA 是由甲狀腺炎引起的自身抗體 ,抗原是一種糖蛋白。ATGA有器官特異性而無種屬特異性。ATMA 的抗原是甲狀腺濾泡上皮細胞胞漿內的脂蛋白。常用檢測方法有:IFA、IHA、RIA、ELISA等。

〖參考值〗

IHA: 血清效價 ≤1:32, >1:32為陽性,ATGA 和ATMA

ELISA:正常為陰性,P/N < 2.1,>2.1 為陽性, ATGA 和 ATMA

RIA:ATGA <30%;ATMA <15%

l〖臨床意義〗

主要見於橋本甲狀腺炎、甲亢、甲低患者,也可見於甲狀腺瘤、惡性貧血、重症肌無力、Edison 病和肝臟疾病等。SLE及其他自身免疫病也有一定的陽性率。

正常人也可檢出這兩種抗體 ,並且隨著年齡的增長,陽性率增加,特別是40歲以上婦女,可達18%左右。

應該注意到,有的患者ATGA陰性,但ATMA陽性,因此兩種抗體同時檢測可提高抗甲狀腺自身抗體的檢出水平。

八. HLA-B27測定

HLA-B27 抗原為人類MHC I類 抗原B位點的表達產物,可分為幾種亞型。HLA -B27的檢測方法有多種,補體依賴性微量細胞毒法(CDMA);流式細胞儀法;玫瑰花法;ELISA法;等電聚焦法等。近來應用PCR法檢測HLA-B27,敏感而特異,並且可進行B27亞型的分析。

l〖參考值〗

非洲-美洲人:3-4%;l 高家索人:6-8%;l 亞洲人:1%。

〖臨床意義〗

強直性脊柱炎(AS)患者HLA-B27陽性率為90-95%。大約42%的青年類風濕關節炎(JRA)存在HLA-B27,Reiter¡®s 綜合征患者陽性率大約79%。此外,腸病性關節炎、銀屑病性關節炎也有一定的陽性率。RA病人陽性率不高。

〖注意事項〗

在評價HLA-B27陽性結果時應結合臨床表現綜合考慮,不能單純依靠此結果作出診斷。

其他免疫指標及檢測

C反應蛋白(C-Reactive Protein,CRP )

CRP是一種急性時相蛋白,由肝細胞合成,可與肺炎球菌細胞壁C多糖發生沉澱反應,故稱CRP。在各種炎症的急性期或組織創傷時,血清CRP濃度急劇升高。CRP不僅可結合多種細菌( bacteria ),真菌(fungi)及原蟲(protozoal)體內的多糖物質,而且在鈣離子存在下,還可以結合磷脂醯膽鹼和核酸。結合後的復合體具有激活補體(complement)的作用。〖參考值〗 <8mg/L

〖臨床意義〗

血清CRP 升高多見於:急性、慢性細菌感染;組織損傷壞死;急性心肌梗死;各種炎症;外科手術;腫瘤浸潤;急性風濕熱和活動性類風濕關節炎,以及其它關節炎性疾病。但病毒性感染一般CRP不升高,因此可作為病毒性感染和細菌性感染的'鑒別指標。

〖注意事項〗

CRP測定方法不同,在判定結果時應予考慮。此外,雌激素、口服避孕葯可使CRP增高,皮質激素和抗炎葯可使CRP下降。

類風濕因子(Rheumatoid Factor,RF)

RF是一種自身抗體,可與變性的IgG發生反應,與IgG 的Fc段結合。RF可分為IgG、IgM、IgA、IgD和IgE五型。凝集試驗檢測的主要為IgM型RF。RF主要見於類風濕性關節炎(rheumatoid arthritis RA),也可見於其他結締組織病及其他疾病。檢測方法有乳膠凝集試驗、致敏羊紅細胞凝集法、速率散射比濁法、ELISA法等。

〖參考值〗

乳膠法:陰性或<1:20 速率散射比濁法:<30IU/ml

〖臨床意義〗

RF見於90%以上的RA病人,效價常在1:160以上,含量多>80IU/ml。,一般方法所檢測的大部分是IgM-RF。

關於RF分型,臨床應用尚不廣泛。多數作者認為:IgM-RF效價高低可在一定程度上反映RA的活動性,但無明確的密切關系;IgG-RF與RA患者的滑膜炎、血管炎和關節外症狀密切相關;IgA-RF見於RA、硬皮病、Felty綜合征和系統性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus, SLE),也是RA臨床活動性的一個指標;IgE-RF 除RA患者外,也見於Felty綜合征和青年型RA。高水平 IgM-RF陽性病人預後較差。

從早期RA患者的X線片分析,IgM-RF持續陽性的病人更易發生骨侵蝕。IgA-RF在SS病人中陽性率較高;IgE-RF在惡性關節炎病人中陽性率較高。在RA病人,高效價RF存在並伴有嚴重的關節功能受限時,常提示預後不良。

〖注意事項〗

正常人也可有4%左右的陽性率。隨年齡增加,RF的檢出率會增加。RA病人RF也可陰性,不能單純依靠RF陽性來診斷RA。RF還可見於其它多種疾病,其中最常見的是乾燥綜合征(S.S), 發生率在90%以上,且含量一般較高。其它常見的RF陽性的疾病有: SLE、系統性硬化症、高球蛋白血症、結節病、梅毒、麻風、病毒感染、肝硬化等等。有些效價可在1:160以上,含量在80IU/ml以上,在解釋結果時應予注意。

冷球蛋白(Cryoglobulin CG,)

冷球蛋白是一種球蛋白,4℃時發生沉澱,30 ℃易聚合,37℃又溶解。CG分為三類:

1.I型(單克隆型):大多為IgM或IgG 型,無抗補體作用。

2.II型(混合型):兩種或兩種以上單克隆Ig混合,以IgM+IgG最常見,也可見IgA+ IgG;IgG+IgM+IgA等。有抗補體作用。

3. III型(多克隆型): 沒有單克隆蛋白。

其檢測方法有血球壓積管法(定性)和分光光度計法(定量)。

〖參考值〗 定性法:陰性 定量法:<80μg/ml。

〖臨床意義〗

SLE 病人血清中可出現混合型CG。在血管炎、腎小球腎炎、淋巴細胞增生性疾病也可陽性。在巨球蛋白血症或多發性骨髓瘤病人伴雷諾氏現象時與I型冷球蛋白血症有關。 II型冷球蛋白血症與自身免疫病例如血管炎、腎小球腎炎、SLE、RA 和 SS 有關。在某些感染如肝炎、傳染性單核細胞增多症、巨細胞病毒感染和弓形蟲病也可出現。

小結:

胞漿抗體

Hep-2細胞具有許多胞漿抗原。如有特異性胞漿抗體存在,可出現強陽性胞漿熒光。包括抗線粒體抗體(AMA)、抗核糖體抗體、抗肌動蛋白抗體即抗平滑肌抗體(ASMA)、抗高爾基體抗體、抗絲抗體(如Vimentin)。一般最有意義的是AMA和ASMA,可是熒光染色Hep2細胞卻不能鑒定這兩種抗體,可應用鼠腎和鼠胃切片作進一步分析。

系統性風濕病活動期的評價

自身抗體檢測以診斷全身性疾病比監測該病活動更有意義。但抗dsDNA抗體效價卻與活動性有關。應定期檢測抗dsDNA抗體的效價及C3、C4的含量。以及測定循環免疫復合物(CIC)的含量。ESR和CRP在炎症反應時常常升高。RA病情加重時,CRP明顯增高。SLE活動期,CRP一般正常。

器官特異性自身免疫性疾病

組織抗體

許多自身抗體可採用IFA測定,用鼠腎和胃的切片能測出抗線粒體、平滑肌、肝腎微粒體和胃壁細胞的抗體。甲狀腺組織切片可測定抗甲狀腺自身抗體。

自身免疫性肝病

在肝臟病變中,ANA陽性率可達40-80%。抗線粒體抗體(AMA)與原發性膽汁性肝硬變有關。特別是高效價的M2和M9線粒體抗原。

約一半的自身免疫性肝炎的病人有較高效價的ASMA。此外,肝腎微粒體抗體(LKMAs),抗可溶性肝抗原(SLA)抗體,抗肝細胞膜抗體等也可用於自身免疫性肝病診斷和監測。

其他

腎臟疾病常測定的抗體有抗dsDNA抗體,抗腎小球基底膜抗體等,還可測定CIC,以及作腎組織活檢進行熒光染色。

韋格納肉芽腫病是一種發生於上下呼吸道的壞死性血管炎,也累及腎臟,病人常死於腎和肺衰竭。檢查抗中性粒細胞胞漿抗體(ANCAs)是診斷指標之一。也可通過ELISA測定抗髓過氧化物酶抗體,抗蛋白酶3抗體,有助於診斷和鑒別診斷。

胃腸道疾病中,惡性貧血與抗胃壁自身抗體有關,與抗內因子抗體的相關性達75%。抗胰島細胞抗體(ICAs),抗谷氨酸脫羧酶抗體(GADA)與I型糖尿病有一定關系。重症肌無力病人可出現抗骨骼肌抗體。多發性肌炎和皮肌炎可有抗Pm1和抗Jo-1抗體。抗心肌抗體常見於心肌梗死、心臟手術或心肌損傷後。

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