A. 細菌鑒定辦法有哪些, 常見細菌的鑒定辦法就可以~
一 澱粉水解試驗
（一）實驗原理
細菌對大分子的澱粉、蛋白質和脂肪不能直接利用,必須靠產生的胞外酶,如澱粉酶、蛋白酶和脂肪酶將大分子物質分解.胞外酶能分泌擴散到細胞外,將物質分解成小單位如糖、氨基酸、甘油與脂肪酸.這些小單位的物質能被細菌吸收和利用.水解過程可通過底物的變化來證明,如細菌水解澱粉的區域,用碘測定不再產生藍色；水解明膠可觀察到明膠被液化；脂肪水解後產生脂肪酸改變培養基的pH,其中的中性紅指示劑使培養基從淡紅色變為深紅色.
（二）實驗方法
將澱粉培養基溶化後,冷至45℃左右,以無菌操作製成平板.
取18-24h的純培養物點於平板上,每皿可點種3-5個菌株,適溫培養2-4d,形成菌落後,在平板上滴加盧戈氏碘液,以鋪滿菌落周圍為度,平板成藍色.如果菌落周圍有無色透明圈出現,說明澱粉已經被水解,實驗為陽性,否則為陰性.透明圈的大小一般說明水解澱粉的能力.
（三）實驗試劑的配製
肉湯蛋白腖瓊脂成分：蛋白腖10g,牛肉膏3g,氯化鈉5g,瓊脂17g,蒸餾水1000mL,pH7.2.
澱粉培養基製法：在肉湯蛋白腖瓊脂中添加0.2％的可溶性澱粉,校正pH值至7.6,分裝三角瓶,121℃ 20min滅菌備用.
盧戈氏(Lugol)碘液：碘片1g,碘化鉀2g,蒸餾水300ml,先將碘化鉀溶解在少量水中,再將碘片溶解在碘化鉀溶液中,混勻,定容.
二 糖發酵試驗
(一)實驗原理
單糖發酵是將葡萄糖,乳糖或麥芽糖等分別加入蛋白腖水培養基內,使其最終濃度為0.75-1％.並加入一定量酚紅指示劑及小倒管,製成單糖發酵管,接種細菌經37℃培養18-24小時,若能分解糖產酸則酚紅指示劑由紅變黃,若能分解甲酸有CO2和H2等氣體形成,小倒管內則聚集有氣泡；不分解,則指示劑不變色.
(二)實驗材料
1．菌種：大腸桿菌,傷寒桿菌18-24小時瓊脂斜面培養物.
2．培養基：葡萄糖發酵管,乳糖發酵管等.
(三)實驗方法
1．將傷寒桿菌,大腸桿菌按照液體接種方法分別接種於葡萄糖及乳糖發酵管內.
2．置37℃孵箱培養18-24小時.
3．觀察結果：由於一些細菌能分解某種糖類產酸,所以培養基中pH下降到7.0以下,在酚紅指示劑的顯示下,培養基顏色由紅變黃.產酸者以「+」表示,如果同時產生氣體,則培養基中小倒管內有氣泡出現,此乃產酸又產氣,以「♁」表示,不分解,則指示劑不變色,用「-」表示.
(四)實驗結果
傷寒桿菌 大腸桿菌
葡萄糖 + ♁
乳 糖 - ♁
(五)實驗試劑的配製
1.單糖發酵管的制備： 成分：蛋白腖水培養基 100ml ,0.2%酚紅 1ml ,所需糖（葡萄糖或乳糖）0.75-1g
製法：
（1）將上述成分溶化,混勻分裝於內含有倒置小玻璃管的小試管中,每管約2ml,加塞.
（2）小倒管排氣,滅菌（8-10磅,20-30分鍾）,貯存備用.
用途：供單糖發酵試驗用.
2.0.2%酚紅配製法
酚紅（phenol red）0.2g ,0.lmol/LNaOH 8ml ,蒸餾水 92ml
將酚紅入研缽徐徐加入0.lmol/LNaOH研磨,再補足蒸餾水即成.若需長時間保存,可高壓滅菌後貯存備用.
三 甲基紅（M.R）試驗
(一)實驗原理
某些細菌如大腸桿菌等分解葡萄糖產生丙酮酸,繼而分解為甲酸、乙酸、乳酸等,使培養基pH值降至4.5以下,加入甲基紅指示劑呈紅色,此為陽性反應；若產酸量少或產生的酸進一步轉化為醇、醛、氣體和水等,則培養基的酸鹼度仍在pH 6.2以上,加入甲基紅指示劑呈現黃色,為陰性反應.
(二)實驗材料
1. 菌種：大腸桿菌,產氣桿菌18-24h瓊脂斜面培養物.
2. 培養基：葡萄糖蛋白腖水培養基.
3. 試劑：甲基紅試劑.
(三)實驗方法
1. 分別將大腸桿菌,產氣桿菌接種於兩支葡萄糖蛋白腖水培養基中.
2. 置37℃培養2-3天取出,分別滴加甲基紅試劑2-3滴,混勻,觀察結果.
(四)實驗結果
大腸桿菌：+,產氣桿菌：-.
(五)實驗試劑的配製
1．甲基紅試劑的配製
甲基紅 0.04g, 95%酒精 60ml , 蒸餾水 40ml .
先使甲基紅溶解於酒精中,再加入蒸餾水,混合,搖勻即成.
2.葡萄糖蛋白腖水培養物
成分：蛋白腖5g 葡萄糖5g
製法：
（1）將上述成分溶解於蒸餾水中.
（2）調節pH至7.6,用濾紙過濾除渣.
（3）分裝中試管,每管約3-4ml,滅菌後備用.
用途：供甲基紅及V-P試驗用.
四 產吲哚（indole）試驗
(一)實驗原理
某些細菌如大腸桿菌,變形桿菌等具有色氨酸酶,能分解蛋白腖水培養基中的色氨酸,產生靛基質（無色吲哚）,再與歐立希試劑（對二甲基氨基苯甲醛）反應,形成紅色化合物—玫瑰吲哚,即為陽性反應.
(二)實驗材料
1. 菌種：大腸桿菌,傷寒桿菌18-24小時瓊脂斜面培養物.
2. 培養基：蛋白腖水培養基.
3. 試劑,歐立希（Ehrlich）試劑（對二甲基氨基苯甲醛）
(三)實驗方法
1. 分別將大腸桿菌,傷寒桿菌接種於兩支蛋白腖水培養基中.
2. 置37℃培養2-3天後,每管沿管壁各加歐立希試劑0.5-1ml於培養液面上,待1-2分鍾後觀察結果：在交界面出現玫瑰紅色環即為吲哚試驗陽性,無紅色環即為陰性.
(四)實驗結果
大腸桿菌：+ ；傷寒桿菌：- .
(五)實驗試劑的配製
1.蛋白腖水培養基的制備
成分：蛋白腖10g 氯化鈉5g 蒸餾水1000ml
製法：
（1）先用少量蒸餾水將蛋白腖和氯化鈉相混合溶解,再加足蒸餾水量.
（2）調節pH至7.6、用濾紙過濾.
（3）分裝中試管,每管約3-4ml,加塞滅菌後備用.
2. 歐立希（Ehrlich）試劑的配製
對位二甲基氨基苯甲醛 4g
95%酒精 380ml
濃硫酸或濃鹽酸80ml
三種成分混合即成,瓶口要嚴密,以免揮發.
五 硝酸鹽還原試驗
(一)硝酸鹽還原試驗原理：
硝酸鹽還原反應包括兩個過程：一是在合成過程中,硝酸鹽還原為亞硝酸鹽和氨,再由氨轉化為氨基酸和細胞內其他含氮化合物；二是在分解代謝過程中,硝酸鹽或亞硝酸鹽代替氧作為呼吸酶系統中的終末受氫體.能使硝酸鹽還原的細菌從硝酸鹽中獲得氧而形成亞硝酸鹽和其他還原性產物.但硝酸鹽還原的過程因細菌不同而異,有的細菌僅使硝酸鹽還原為亞硝酸鹽,如大腸埃希菌；有的細菌則可使其還原為亞硝酸鹽和離子態的銨；有的細菌能使硝酸鹽或亞硝酸鹽還原為氮,如假單胞菌等.硝酸鹽還原試驗系測定還原過程中所產生的亞硝酸鹽.
(二)培養基：
硝酸鹽培養基.
(三)試劑：
甲液（對氨基苯磺酸0.8g+5mol/L醋酸100ml）；乙液（α-奈胺0.5g + 5mol/L醋酸100ml）.
(四)方法：
被檢菌接種於硝酸鹽培養基中,於35℃培養1～4d.將甲、乙液等量混合後（約0.1ml）加入培養基內,立即觀察結果.
(五)結果：
出現紅色為陽性.若加入試劑後無顏色反應,可能是：①硝酸鹽沒有被還原,試驗陰性；②硝酸鹽被還原為氨和氮等其他產物而導致假陰性結果,這時應在試管內加入少許鋅粉,如出現紅色則表明試驗確實為陰性.若仍不產生紅色,表示試驗為假陰性.
若要檢查是否有氮氣產生,可在培養基管內加一小倒管,如有氣泡產生,表示有氮氣生成.
(六)應用：
本試驗在細菌鑒定中廣泛應用.腸桿菌科細菌均能還原硝酸鹽為亞硝酸鹽；銅綠假單胞菌、嗜麥芽窄食單胞菌等假單胞菌可產生氮氣；有些厭氧菌如韋榮球菌等試驗也為陽性.
(七)實驗試劑的配製
硝酸鹽液體培養基
蛋白腖5.0g,KNO3 0.2g, 蒸餾水1000 mL,pH7.4,每管分裝4-5mL,121℃滅菌15-20min.
六 產氨實驗（尿素分解實驗）
(一)實驗原理
某些細菌如變形桿菌,具有尿素分解酶,能分解尿素而產生氨,氨溶於水變成氫氧化銨,使培養基變鹼而呈紅色即為陽性.
(二) 實驗材料
1. 菌種：變形桿菌,傷寒桿菌18-24小時瓊脂斜面培養物.
2. 培養基：尿素培養基.
(三) 實驗方法
1. 分別以斜面接種法將變形桿菌,傷寒桿菌接種於兩支尿素斜面培養基上.
2. 置37℃培養18-24小時.
3. 取出觀察結果,培養基變為紅色,即尿素分解試驗陽性,若不變色,即為尿素分解試驗陰性.
(四) 實驗結果
變形桿菌：+ ；傷寒桿菌：- .
(五) 實驗試劑的配製
1.尿素培養基的制備
成分： 蛋白腖1g 、氯化鈉5g、葡萄糖1g、蒸餾水900ml、瓊脂15-20g 、0.1%酚紅 12ml 、20%尿素水溶液（無菌）100ml .
製法：（1）除尿素、瓊脂和酚紅外,其餘成分溶於水中,加熱溶化,矯正pH至6.8-6.9.
（2）加入瓊脂和酚紅,115℃磅滅菌10min.
（3）冷卻至60℃後加入無菌尿素溶液,搖勻.
（4）分裝中試管（無菌）,每管3-4ml,置成斜面備用.
說明：（1）尿素不耐熱,也不能久存,只能用濾器除菌.
2.無菌尿素溶液制備：稱取尿素20g,混合於100ml蒸餾水中,充分搖勻,用G6濾菌器過濾除菌,以達到無菌的目的.
七 檸檬酸鹽利用試驗
(一)實驗原理
本試驗用於檢測細菌利用檸檬酸的能力.細菌利用檸檬酸鹽的能力不同,如各種腸細菌可利用檸檬酸為碳源,而大腸埃希氏菌則不利用檸檬酸鹽.因此,能否利用檸檬酸鹽是一項鑒別性特徵.培養基中含有檸檬酸鈉時,如將檸檬酸分解為CO2,則培養基中由於有游離鈉離子呈鹼性,使培養基中酚紅指示劑（pH6.8-8.4,黃→紅）由淡粉紅色變為玫瑰紅色以識別之.
(二)材料
檸檬酸鈉 2g、K2HPO4 1g、NH3H2PO4 1g、NaCl 5g、MgSO4 0.2g、瓊脂 1.5 2g、1%溴麝香草酚藍(酒精溶液)或0.04%苯酚紅 10ml、水 1000ml
將上述各成分加熱溶解後,調PH6.8,然後加入酚紅指示劑,搖勻,用脫脂棉過濾.製成後為黃綠色,分裝試管.121℃滅菌20min後製成斜面.
(三) 實驗內容
1.將試驗菌在斜面上劃線接種,適溫培養3-5天.
2.若該菌能利用檸檬酸鹽,則可在此斜面上生長並將培養基由原來的淡粉紅色變為玫瑰紅色,此為陽性；顏色不變者為陰性.
八 油脂水解試驗
(一)原理
某些細菌能夠分泌脂肪酶（胞外酶）,能將培養基中的脂肪水解為甘油和脂肪酸.所產生的脂肪酸,可通過預先加入油脂培養基中的中性紅加以指示[指示範圍pH6.8（紅）～pH8.0（黃）].當細菌分解脂肪產生脂肪酸時,培養基中出現紅色斑點.
(二)實驗內容
1.將裝有油脂培養基的錐形瓶置於沸水浴中融化,取出並充分振盪（使油脂均勻分布）,再傾入培養皿中,待凝固後製成平板.
2.翻轉平板使底皿背面向上,用記號筆在其背面玻璃上劃成兩半.一半用於接種金黃色葡萄球菌作為陽性對照菌,另一半用於接種實驗菌大腸桿菌或產氣腸桿菌.接種時用接種環取少量菌在平板兩邊各劃線接種.
3.將接種完的平板倒置於37℃恆溫箱中,培養24h.
4.觀察結果時,注意觀察平板上長菌的地方,如出現紅色斑點,即說明脂肪已被水解,此為陽性反應.
（三）培養基配製
油脂培養基：蛋白腖10g,牛肉膏5g,氯化鈉5g,香油或花生油10g,中性紅（1.6%水溶液）約0.1ml,瓊脂15-20g,蒸餾水1000mL,pH7.2,121℃滅菌20min.
九 接觸酶試驗
(一)實驗原理
本試驗用於檢測細菌是否具有接觸酶活性.接觸酶又稱為過氧化氫酶,是一種以正鐵血紅素作為輔基的酶,能將過氧化氫分解為水和氧.一般好氧細菌與兼性厭氧細菌（除某些鏈球菌、乳酸桿菌等外）都能產生接觸酶,而厭氧細菌不產生接觸酶,這是用以區別好氧和厭氧菌的方法之一.
(二)材料
牛肉膏、蛋白腖瓊脂培養基,3%過氧化氫.
牛肉膏、蛋白腖瓊脂培養基：牛肉膏 0.3g、蛋白腖 1g、氯化鈉 0.5g、瓊脂 2g、自來水 100mL、pH 7.0～7.2 、滅菌.
(三)實驗內容
1.接種試驗菌,適溫下培養18-24小時.
2.將3%的過氧化氫滴於斜面菌苔上（或塗有菌苔的載玻片上）,靜置1-3分鍾後,如有氣泡產生即為陽性.不產生氣泡者為陰性.
(四) 應用
革蘭陽性球菌中,葡萄球菌和微球菌均產生過氧化氫酶,而鏈球菌屬為陰性,故此試驗常用於革蘭陽性球菌的初步分群.
十 革蘭氏染色
(一)實驗原理
革蘭氏染色法是細菌學中廣泛使用的一種鑒別染色法.通過結晶紫初染和碘液媒染後,在細胞壁內形成了不溶於水的結晶紫與碘的復合物,革蘭氏陽性菌由於其細胞壁較厚、肽聚糖網層次較多且交聯緻密,故遇乙醇或丙酮脫色處理時,因失水反而使網孔縮小,再加上它不含類脂,故乙醇處理不會出現縫隙,因此能把結晶紫與碘復合物牢牢留在壁內,使其仍呈紫色；而革蘭氏陰性菌因其細胞壁薄、外膜層類脂含量高、肽聚糖層薄且交聯度差,在遇脫色劑後,以類脂為主的外膜迅速溶解,薄而鬆散的肽聚糖網不能阻擋結晶紫與碘復合物的溶出,因此通過乙醇脫色後仍呈無色,再經沙黃等紅色染料復染,就使革蘭氏陰性菌呈紅色.
(二)實驗方法
革蘭氏染色法一般包括初染、媒染、脫色、復染等四個步驟,具體操作方法是：
1.塗片固定.
2.草酸銨結晶紫染1分鍾.
3.自來水沖洗.
4.加碘液覆蓋塗面染約1分鍾.
5.水洗,用吸水紙吸去水分.
6.加95%酒精數滴,並輕輕搖動進行脫色,20秒後水洗,吸去水分.
7.蕃紅梁色液（稀）染2分鍾後,自來水沖洗.乾燥,鏡檢.
[染色的結果]：革蘭氏正反應菌體都呈紫色,負反應菌體都呈紅色.
(三)應用
其重要的臨床意義在於：1.鑒別細菌 2.選擇葯物 3.與致病性有關：：革蘭氏陽性菌能產生外毒素,革蘭氏陰性菌能產生內毒素,兩者的致病作用不同.
B. 鑒別腸桿菌科細菌與假單胞菌的試驗是
正確答案:E
解析：脂酶試驗主要用於厭氧菌的鑒別；膽汁溶菌試驗主要用於肺炎鏈球菌與甲型鏈球菌的鑒別；
O/129抑菌試驗主要用於弧菌科的屬間鑒別；桿菌肽試驗主要用於A群鏈球菌與非A群鏈球菌的鑒別，氧化酶試驗主要用於腸桿菌科細菌與假單胞菌的鑒別
。
C. 腸桿菌科細菌和弧菌科非發酵菌鑒別主要依靠什麼實驗
氧化酶試驗主要用於腸桿菌科細菌與弧菌科細菌的鑒別，前者為陰性，後者為陽性 。葡萄糖氧化-發酵試驗（O/F試驗）主要用於腸桿菌科細菌與非發酵菌的鑒別，前者均為發酵型，而後者通常為氧化型或產鹼型
D. 如何區分腸桿菌科,非發酵菌與弧菌科的細菌
首先可以通過OF試驗區分長桿菌科的細菌和非發酵菌。腸桿菌科的細菌都是會發酵的，非發酵菌，顧名思義不會發酵。
然後可以通過氧化酶區別腸桿菌科細菌與弧菌科的細菌。腸桿菌科的細菌氧化酶都是陰性的，而弧菌中除了麥氏弧菌氧化酶是陰性，其他弧菌都是氧化酶陽性。
E. 形態染色相似的腸桿菌科細菌通過什麼手段進行鑒別和區別
這個問題要回來答內容很長,腸桿菌科細菌鑒定專著早已經有了,看看這本書問題就解決了,你只給5分,我要化個把鍾頭打字不值,你懸賞50分,我明晚來詳細講給你聽.
先經SS瓊脂分離，種克氏雙糖鐵，18-24h後做OF和氧化酶試驗，
發酵葡萄糖，氧化酶陰性的為腸桿菌科細菌
氧化葡萄糖，氧化酶陽性的為非發酵菌
發酵葡萄糖，氧化酶陽性的為孤菌科細
菌腸桿菌科細菌的鑒定方法：
1，取雙糖斜面上的腸桿菌做玻片凝集試驗，
A－G群沙門氏菌O多價診斷血清鑒別沙門氏菌．陽性者用沙門氏菌因子血清分型。
四種志賀氏多價和鮑氏多價診斷血清鑒別志賀氏並用志賀氏分型血清分型。
2生化反應分屬：進行下述生化反應：
靛基質，甲基紅，V－P，枸椽酸鹽，流化氫，尿素酶，KCN，動力，明膠液化，賴氨酸脫羧酶，精氨酸雙水解酶，鳥氨酸脫羧酶，苯丙氨脫氨酶，丙二酸鈉，葡萄糖產氣，乳糖，蕉糖，甘露醇，衛矛醇
水楊苷，側金盞花醇，肌醇，山梨醇，阿拉佰糖，棉子糖，鼠李糖，
椐以上反應可將腸桿菌科的細菌分為14個屬。
這14個屬的細菌是
艾希氏菌屬
志賀氏菌屬
沙門氏菌屬
枸椽酸鹽桿菌菌屬
克雷佰氏菌屬
腸桿菌菌屬
哈夫尼亞菌屬
沙雷氏菌屬
歐文氏菌屬
愛德華氏菌屬
變形桿菌菌屬
摩根氏菌屬
普羅菲登氏菌屬
耶爾森氏菌屬
各菌屬中的細菌再按種的特性鑒別到種。
沙門氏菌的生化反應：
H2S 靛基質 Ph7.2尿素 KCN 賴氨酸脫羧酶 結果判定
+..... — .....—....... — .........+.......傷寒沙門氏
+.....—..... — ........—..........+ ..亞利桑那,沙門氏菌
—... — ..... — .......— ........ +.. 甲型副傷沙門氏菌
志賀氏菌屬的生化特性
動力 H2S 苯丙氨酸 賴氨酸脫羧酶 枸椽酸鹽 葡銨
..—..—..... — ........— ..........— ........—
符合上述反應時再作群生化反應：
分群 ...........5%乳糖 甘露醇 棉子糖 3%甘油 靛基質
A群痢疾志賀氏菌...—........ —........— .....—......—
B群福氏志賀氏菌 . —....... +........ + ..... — ....+/—
C群鮑氏志賀氏菌 . —.......+......... — .....+ ....+/—
D群宋內氏志賀氏菌 + ........+ ........ + .....D .....—
傷寒副傷寒沙門氏菌的抗原結構
副傷寒甲沙門氏菌 O：2 ， 12 H：a；1、5
副傷寒沙乙門氏菌 O：4[5]，12 H：b；1、2
副傷寒沙丙門氏菌 O：6，7 H：c；1、5
傷寒沙門氏菌 O：9，12[VI] H：d；/
實在沒辦法打表格,還是自己去查書本吧!習慣的腸道致病菌從含鐵雙糖培養基上結合OF,氧化酶,賴氨酸脫羧酶, 尿素,枸椽酸鹽,半固體等把非發酵菌和孤菌排除後,作沙門氏 菌\志賀氏菌\大腸艾希氏菌\變形桿菌\克雷佰氏菌等作出初步鑒別後,用編碼法作出診斷.請你購腸道菌編碼培養基,附有方法說明書,用起來很方便.我在疾控中心工作,現在我們購進法國生產的全自動化細菌鑒定儀分離到純培養後,把菌液滴入培養管內4-8小時就出結果,20餘種主要生化反應通過電腦軟體給你打出,如果有疑問還會提醒再作幾個生化,把補充結果或血清試驗結果輸入後就准確列印出細菌名稱。