1. 簡述農產品質量檢測一般方法有哪些
1.農葯殘留檢測。常見的農葯殘留檢測方法有酶抑製法、免疫分析法與無損檢測法。酶抑製法,以生物學為基礎,通過乙醯膽鹼酯酶對相關農葯的快速反應進行檢測。具有生物學的不穩定性與專一性特點,不適宜大范圍使用,但因其廉價便捷性,目前在果蔬檢測方面應用較多,採用酶抑製法進行檢測時應當注意選用高質量酶試劑。免疫分析法,多用於食品檢測方面,應用該方法可快速識別樣品的異樣狀態。無損檢測法,能夠在最大程度上保留農產品營養與外形,是如今較為先進的綜合型農葯檢測技術,具有較高的商業價值,基於該技術,應用較多的是紅外光譜與X光衍射檢測方法,採用該方法,應當注意避免損害農產品質量。
2.獸葯殘留檢測。常見的獸葯殘留檢測方法有酶聯免疫吸附試驗法(ELISA)與放射免疫檢測法。ELISA,主要通過對樣品進行定量分析的方式,檢測樣品獸葯殘留含量,具有高特異性與高度靈敏性,在檢測畜牧農產品時較為常用。應用該方法應當選用高質量試劑,也可以通過試紙條、熒光檢測儀等檢測器具進行檢測,提高檢測質量。放射免疫檢測法,主要通過同位素識別抗原抗體,具有高精準度,因此,在抗生素檢測方面效果顯著,同樣適用於獸葯微生物殘留檢測。
3.微生物殘留檢測。在農產品質量安全檢測中,對微生物殘留的檢測同樣重要,主要檢測農產品生物毒素,常見的有生物毒素確證檢測技術與快速檢測技術。生物毒素確證檢測技術,在實踐中主要應用高效液相色譜法,也可以結合應用高效液相色譜法與質譜檢測法,主要檢測農產品中的黃麴黴素、棒曲酶毒素等。快速檢測技術,常用檢測方法為熒光檢測技術、免疫層析檢測技術等,在檢測一般微生物時較為常用,同樣需要選用高質量核心試劑。
4.重金屬殘留檢測。含有鉛、汞、銅等元素的重金屬一旦殘留於農產品上,不僅威脅產品安全,被人食用後嚴重的甚至會引發中毒,因此,必須重視對農產品重金屬的檢測。目前,我國重金屬檢測技術還處於發展階段,較常應用的是熒光檢測法、電感耦合等離子質譜檢測法以及原子吸收檢測法,主要檢測農產品重金屬殘留。隨著我國社會經濟發展,重金屬殘留對農產品的危害越來越大,加強檢測技術研究力度刻不容緩。
2. 求助,請問乙醯膽鹼的提取方法有哪些,謝謝各位大神!!!!
目的研究中葯水提物對乙醯膽鹼酯酶的抑制活性。方法選取24味中葯做研究對象。應用傳統的水提的方法制備中葯提取物。使用改進了的Elman比色法檢測24種中葯的水提物對兔大腦乙醯膽鹼酯酶抑制活性。結果黃柏的水提物有顯著的乙醯膽鹼酯酶抑制活性,在50μg/ml濃度下抑制率達75.58%,IC50值為20.03μg/ml。厚朴的水提取物在50μg/ml濃度下抑制率為43.95%,其IC50值為127.17μg/ml。益智仁的水提物有較弱的乙醯膽鹼酯酶抑制活性。結論黃柏等中葯提取物對乙醯膽鹼酯酶具有很好的抑制活性。
3. 乙醯膽鹼酯酶測定方法
乙醯膽鹼酯酶 乙醯膽鹼酯酶 acetylcholine esterase 簡稱AchE(也稱真性膽鹼酯酶):活性高,選擇性水解Ach的必需酶,能使乙醯膽鹼(ACh)水解成膽鹼和乙酸。 乙醯膽鹼酯酶 acetylcholine esterase EC3.1.1.7。膽鹼酯酶中的I型(即true choli-neesterase)廢物特異性高,因為只分解以乙醯膽鹼為中心的狹窄范圍的底物,故特此這樣稱呼。 一、AchE在神經肽代謝中的作用 Chubbe等的研究證明,AchE具有羧肽酶和氨肽酶的活性。在體外,AchE能水解腦啡肽(Enk)和P物質(SP),但不能水解生長抑素(Som)和血管加壓素(VSP)等。進一步的研究證明,AchE作為肽酶,其水解肽的活性部位和作為酯酶的活性部位不同。值得注意的是,神經系統許多非膽鹼能的,含大量AchE的神經元同時亦含有各種神經肽類物質。如脊髓背根節的SP能細胞即是AchE強陽性。 最近的研究顯示,高度純化的來自電鰻電器官或牛血清的AchE具有蛋白酶樣或外切酶的活生。對於血清蛋白質,AchE能發揮C端殘基的清除作用。此外,AchE的蛋白酶樣作用還得到分子生物學證據的支持,氨基酸分析顯示,AchE蛋白質分子與蛋白酶樣內切酶以及血清羧肽酶的氨基酸序列相似。在它們的C端36個殘基范圍內,有40%氨基酸序列和蛋白酶的活性片段相同。 二、AchE的電生理和行為效應 (一)AchE的樹突/胞體釋放 樹突/胞體釋放是神經分泌的一種特殊形式。黑質多巴胺神經元屬非膽鹼能,似乎很少接受膽鹼能傳入投射,但黑質細胞內含有大量AchE。研究發現,腦內的AchE可以有膜結合型和非膜結合型(可溶的)兩種形式,黑質多巴胺能神經元的樹突或胞體能夠將AchE(可溶型)分泌到細胞外液中,稱為AchE樹突釋放現象。顯然,AchE的樹突釋放現象和Ach的釋放無關。因為應用膽鹼能阻斷劑或拮抗劑並不能影響AchE的樹突釋放。同時,AchE在腦室內的分布以及腦脊液中的含量都和Ach不一致,由於電鏡觀察在黑質內沒有發現樹樹突觸的存在,所以黑質內經樹突或胞體釋放出的物質能相對自由的擴散。因此,在黑質AchE可能發揮一種非突觸性的調節作用,以調節黑質一紋狀體投射神經元的胞體對其遠端樹突傳入信號的敏感性。 (二)AchE的電生理及行為效應 研究發現細胞外AchE能改變黑質多巴胺神經元的電活性及動物的運動行為。大劑量應用時,AchE抑制黑質多巴胺能細胞的自發放電,但在生理學劑量時它能增加黑質細胞的放電頻率。Creenfield通過體外培養細胞內記錄方式發現在灌流中加入AchE能引起黑質細胞膜的顯著超極化,並伴有膜輸入電阻的降低,用不可逆性的膽鹼酯酶抑制劑蘇曼(soman)預先處理AchE,然後將其加入腦片培養液中,不能改變AchE對膜的電學性質的影響。上述實驗表明,AchE對黑質多巴胺能神經元膜有電學特性的作用與AchE水解Ach作用無關,並還具有高度結構特異性。 應用微電極直接將AchE注射到大鼠的黑質內,結果引起大鼠的運動行為改變,表現為行動遲緩和木僵狀態。一次AchE注射後大鼠的行為變化可持續相當長的時間,其機制尚不清楚。推測在生理狀態下,AchE從黑質多巴胺能細胞的樹突釋放後,能對其本身和鄰近細胞的生理活動產生一定影響,這可能是一種新的神經元之間局部聯系或自身後饋調節的方式。
4. 乙醯膽鹼酯酶法測農葯的特點
乙醯膽鹼脂酶法操作簡單,速度快,不需要昂貴儀器,適應於現場監測和對,大規模食品的篩選檢測,被廣泛用於野外農葯殘留快速檢驗。可用於農葯殘留檢測 的酶有羧酸酯酶、丁醯膽鹼酯酶及乙醯膽鹼酯酶,前兩種酶受干擾因素多,假陽性 率高,專一性低 。
5. 人體怎樣能合成乙醯膽鹼酯酶
乙醯膽鹼酯酶(Acetylcholinesterase, AChE)是一種主要存在於人類和動物中樞神經系統的乙醯膽鹼水解酶,其基本功能為催化水解神經遞質-乙醯膽鹼(Acetylcholine, ACh)導致神經沖動傳遞的終止,從而維持膽鹼能神經的正常生理功能。醫學上的神經系統疾病,例如老年痴呆症和帕金森病等多與人體內乙醯膽鹼酯酶功能受到影響有關。 有機磷農葯(Organophosphorus pesticides, OPs)與AChE結合會形成磷醯化ChE,磷醯化ChE很穩定,使酶失去催化水解ACh的能力並逐漸老化,造成ACh在體內的積累,最終導致膽鹼能神經先興奮後抑制。高含量的OPs可導致驚厥、呼吸困難、心律不齊、缺氧等急性中毒症狀,低含量的OPs亦可經長期慢性毒害導致心臟、肝臟、腎和其他器官的損害。 乙醯膽鹼酯酶生物感測技術具有靈敏度高、分析速度快、成本低、能在復雜體系中進行在線連續監測等優點。近年來,乙醯膽鹼酯酶生物感測器已成為有關AChE及相關物質檢測研究最活躍的領域之一,建立新型的、有效的乙醯膽鹼酯酶生物感測分析技術對於健康、食品、環境監測等仍然是一個熱門而有意義的研究課題。本論文圍繞開發易於操作、價格低廉和高靈敏信號轉換的AChE生物感測方法開展了一些研究工作,主要內容如下: (1)基於尼羅紅吸附納米金的AChE熒光法檢測有機磷。納米金由於具有消光系數大、吸收光譜寬等優良的光學性質,常被用作為熒光共振能量轉移(FRET)的受體,是一種理想的熒光淬滅劑。第2章中將熒光物質尼羅紅非共價吸附在納米金的表面,利用納米金有效淬滅尼羅紅的熒光,形成一個低背景的熒光信號。當存在AChE催化體系時,AChE催化底物硫代乙醯膽鹼水解生成硫代膽鹼,後者可與尼羅紅競爭結合納米金形成強的Au-S鍵,促使尼羅紅從納米金錶面解吸附,並且產生一種比尼羅紅熒光更強的新熒光產物,體系熒光大大增強。當存在有機磷時,AChE的活性被抑制,水解產物硫代膽鹼減少,最終解吸附下的尼羅紅產物——新熒光物質相應地減少。利用納米金淬滅熒光的獨特光學性質,成功構建了一種簡單、易操作、高靈敏的AChE熒光檢測方法。 (2)信號增強型的AChE熒光法高靈敏分析檢測有機磷。信號增強型分析法是從低的背景信號開始,加入少量的待測物便能形成可檢測信號,這使其具有更高的信噪比。
6. 如何測定蔬菜中殘留農葯
一般常用兩種方法:
酶抑製法和色譜法
酶抑製法:
原理:有機磷和氨基甲酸酯類農葯能抑制昆蟲中樞和周圍神經系統中乙醯膽鹼酶的活性,造成神經傳導介質乙醯膽鹼的積累,影響正常傳導,使昆蟲中毒致死,根據這一昆蟲毒理學原理,用在對農葯殘留的檢測中。加入反應試劑後,用分光光度計測定吸光值隨時間的變化值,計算出抑制率,判斷蔬菜中含有機磷或氨基甲酸酯類農葯的殘毒情況。 乙醯膽鹼酯酶+有機磷或氨基甲酸酯類農葯——→酶活性被抑制
乙醯膽鹼酯酶+樣本提取液——→
1. 活性被抑制——→樣本中含有有機磷或氨基甲酸酯類農葯
2.活性正常 ——→樣本中不含有有機磷或氨基甲酸酯類農葯
如以乙醯硫代膽鹼(AsCh)為底物,在乙醯膽鹼酯酶(AchE)的作用下乙醯硫代膽鹼(AsCh)水解成硫代膽鹼和乙酸,硫代膽鹼和二硫雙對硝基本甲酸(DTNB)產生顯色反應,使反應液呈黃色,在分光光度計410nm處有最大吸收峰,用分光光度計可測得酶活性被抑製程度(用抑制率表示)。
速測卡用的也是這個原理,但是這個方法只能只能知道或許含有有機磷和氨基甲酸酯類農葯。而且不能定性定量的檢測,只是一個表徵。
色譜法:
前處理過程,取3KG的樣品,用食品加工機打碎,然後稱取25克,加入乙腈提取液均漿,過濾,加入食鹽,震盪,靜置分層,然後去上層有機相10毫升,到氮吹儀上吹至近干,用丙酮轉移,定容到5毫升,混勻,過膜,裝入1.5毫升的樣品瓶中,上氣相色譜儀(FPD),外標法,能檢測有機磷,講吹近乾的提取液,用正己烷烷、正己烷和丙酮的混合液轉移,過弗洛里矽柱到15毫升,再氮吹至5毫升以下,用正己烷定容到5毫升,轉移到樣品瓶,上氣象色譜儀(ECD)能檢測有機氯農葯。
其他種類的農葯,吡啶類、除草劑等就要上液相色譜儀,或者是質譜儀!
7. 求教各位關於乙醯膽鹼酯酶的提取和純化
石杉鹼甲
1、從中草葯千層塔中提取石杉鹼甲的方法
2、石杉鹼甲及其衍生物或其鹽的注射用緩釋微球及其制備方法
3、石杉鹼甲衍生物,其制備方法和用途
4、乙醯膽鹼酯酶抑制劑石杉鹼甲的提取方法
我公司與中國農業大學的專家合作,歷時3年研製開發的農葯殘毒快速檢測儀,以及與其配套的試劑乙醯膽鹼酯酶和酶片、顯色片日前獲國家專利。
這種農葯殘毒快速檢測儀,採用酶抑製法檢測有機磷及氨基甲酸酯類農葯殘留。運用固態可變光及樣液脫色去雜技術,使檢測誤差大大降低,所用酶源是山東京蓬生物葯業股份有限公司獨自從敏感家蠅頭部提取的乙醯膽鹼酯酶,檢測成本較進口酶低50%以上,儀器採用文字和語音雙重提示操作,使用簡便;四個檢測通道均能獨立檢測,互不影響,單獨檢測一個樣品只需10分鍾,如果連續檢測時間不超過2分鍾,農葯殘毒快速檢測儀,電源為3節一號干電池,打破了一般儀器不能用於田間地頭的情況。
檢測使用試劑(酶片、顯色片)採用了一系列新處理技術,使之常溫下即可儲存,使用起來也非常方便(用時剪下一片即可)。酶片中的乙醯膽鹼酯酶為我公司獨自從敏感家蠅中提取製做的(註:本公司為中國大陸唯一一家生產乙醯膽鹼酯酶的廠家),其敏感性和穩定性皆優於進口酶源
8. 請問 有機磷農葯的檢測有哪些方法,哪些又是最新的方法
在檢測技術方面,方法有很多,主要有酶抑製法、酶聯免疫法、光度法、色譜法及質譜法等。目前國際上已普遍採用多殘留檢測技術。這些方面的建立得益於氣質聯用(GC-MS)、液質聯用(LC-MS)技術的應用以及常規使用的氣相色譜儀(GC)、液相色譜儀(LC)技術上新的突破,並提高農葯定性定量、多農殘檢測、快速檢測等方面發揮著巨大的作用,色譜法以成為目前檢測的主流儀器。
2.1 酶抑製法
酶抑製法是利用殺蟲劑可以抑制乙醯膽鹼酯酶或是羧酸酯酶的活性的原理而建立的,即乙醯膽鹼酯酶或羧酸酯酶與樣品反應,若酶的活性受到抑制,則表示該類殺蟲劑的存在。因為酶的活性與殺蟲劑的含量有關,測定酶活性的抑制率,即可得殺蟲劑的殘留量。應用抑制原理快速測定法只能判斷是否有過高的有機磷和氨基甲酸酯農葯,而不能判斷超標的具體農葯品種和殘留量,因此只能作為快速測定方法。
2.2 酶聯免疫測試法
酶聯免疫檢測法是利用化學葯物在動物體中有促進其產生免疫抗體的原理,將某種農葯與大分子化合物的復合體注入實驗動物體內,使其對該種農葯產生抗體,然後將抗體的抽取物與蔬菜樣品農葯殘留抽取物進行離體試驗,以比色的方式確認農葯的殘留量。這種結果精確、靈敏度高、特異性強,可採用試劑盒檢測。但是,在實際應用中,農葯種類繁多,制備抗體的難度較大,具有一定的盲目性。
2.3 氣相色譜及其聯用技術
氣相色譜是一種簡易、快速、高效和靈敏的現代分離分析技術,是農葯殘留測定不可或缺的手段,由於農葯的種類很多,不同類型的農葯,結構差異很大,而每一種檢測器僅能對一類或幾類原子和官能團進行響應,因而不同類型的農葯常常需要採用不同類型的檢測器,加上農葯的殘留一般都比較低,所以檢測器的選擇十分關鍵,如分析有機氯和擬除蟲菊酯類農葯採用電子捕獲檢測器(ECD)、分析有機磷農葯採用火焰光度檢測器(FPD)、分析含氮農葯和氨基甲酸酯類農葯採用氮磷檢測器(NPD)。高靈敏的檢測器可以檢出1×10-10~1×10-12g的組分,適合農葯微量和痕量分析。
氣相色譜—質譜聯用技術發揮氣相色譜的高分離能力,又可發揮質譜法的高高鑒別能力,適用於多組分混合物中未知組分的定性鑒定,簡化了多農殘檢測的分析步驟,而採用SIM模式僅對待測組分的定性離子進行採集,減少了雜質峰的干擾,提高了靈敏度。
2.4 液相色譜及其聯用技術
相對於GC,液相色譜的適用性更廣,可分析高沸點、熱不穩定、非揮發性化合物。液相色譜質譜聯用(LC-MS)對分析技術和儀器的要求高,具有檢測靈敏度高、選擇性好、定性定量同時進行、結果可靠等優點。但液相色譜與質譜之間的介面技術比較復雜,因此LC-MS在檢測農葯殘留方面落後於GC-MS。由於目前LC-MS介面技術還沒有真正地實現標准化,加之LC-MS對操作者的水平和儀器要求比較高,因此它在農殘檢測方面沒有GC-MS普及。但LC-MS的飛速發展已成為發達國家在各種基質中微量極性農葯檢測手段。在多農殘殘留分析中,LC-MS技術使用最多的是四極質量分析器。由於質譜儀通用性,LC-MS在多種類多成分的農葯殘留檢測中越來越廣泛,如我國標准GB/T 20776-2006建立的糧谷中372種農葯殘留的LC-MS方法和國外環境樣品中多農殘分析。
3.CTI華測檢測農葯殘留測試服務
CTI華測檢測作為食品檢測領域權威第三方檢測機構,在諸多農殘檢測技術具有國際先進檢測技術,同時獲得中國合格評定國家認可委員會(CNAS)和國家計量(CMA)資質認可。華測檢測可提供各國標準的農葯殘留檢測服務,助您的產品通往日本、歐美順利通關。根據企業的不同需求,華測檢測農葯殘留測試服務如下:水胺硫磷、氧化樂果、克百威等約500種農葯殘留掃描,多農殘檢測324項(應對日本「肯定列表制度」),應對日本通過檢測項目248項,日本厚生省57項有機磷農葯列表測試服務,中國與歐盟常見農葯185項,l 34項高毒農葯一齊分析
9. 蔬菜水果中有機磷農葯的殘留如何檢測
攜帶型農葯殘留速測儀及卡片的檢測原理和使用方法攜帶型農葯殘留速測儀是根據國家標准方法GB/T5009.199 — 2003 )速測卡法(紙片法)而專門設計的儀器.主要用於果,蔬,茶,糧食,水及土壤中有機磷和氨基甲酸酯類農葯的快速檢測,特別適用於農產品質量檢測站的快速檢測,果蔬生產基地和專業戶採摘前田間地頭檢測,農貿批發銷售市場現場檢測,酒樓,食堂,家庭果蔬茶加工前安全檢測. 檢測原理: 儀器的檢測原理是利用速測卡中的膽鹼酯酶(卡②)可催化靛酚乙酸酯(卡①)水解為乙酸和靛酚,由於有機磷和氨基甲酸酯類農葯對膽鹼酯酶的活性有強烈的抑製作用,因此,根據顯色的不同,即可判斷樣品中含有機磷或氨基甲酸酯類農葯的殘留情況.①② 使用方法:(1)開機 按住面板上的"開 / 關"鍵約2秒鍾,儀器開機(開機後再次按次鍵可關機):按[模式]鍵切換至"溫度",當溫達到40℃時,儀器發出一聲提示音,預熱完成,可以開始測試.(2)裝片 將速測卡撕去上蓋膜對折後再展開,插入壓紙條下的各通道加熱板上(注意卡①一端在上方,卡②一端在下方),檢查速測卡放置位置是否正確,速測卡中間的虛線應與壓條對齊,不要歪斜.(3)取樣 選擇有代表性的蔬菜或瓜果皮 ,擦去表面泥土,剪成一平方厘米左右碎片,取5克放入帶蓋瓶中,加入10毫升純凈水或緩沖溶液震盪50次(有條件擁護可配備超聲波清洗器攪拌),靜置2分鍾以上,每批最好做9個檢樣,同時做一個純凈水或緩沖液的空白對照,每剪完一個樣品,尖刀要洗凈後方可處.理另一個樣品,以免交駐污染.用移液搶取80微升樣品液加到白色葯片上. 如果檢測是在采樣現場或條件簡陋的情況下進行,可直接在待檢蔬菜葉尖部位滴2-3滴洗脫液,用另一片菜葉尖部在滴液處輕輕摩擦,使蔬菜表面的殘留農葯充分溶入洗液中.然後滴一滴在(卡②)上.(4)測試 按〈啟動〉鍵,反應開始倒計時10分鍾("反應"指示符亮)當聽到儀器發出急促的蜂鳴提示音時關閉上蓋,顯色開始倒計時3分鍾("顯色"指示符亮):待儀器出緩和的蜂鳴提示音時,打開儀器上蓋,進行結果判定.結果判定與空白對照卡比較,若(卡②)不變色或略有淡黃色均為陽性結果,不變黃為強陽性結果,說明農葯殘留量較高,顯黃色色為弱陽性結果,說明農葯殘留量機對較低.(卡②)變為橘黃色或與空白對照卡相同,為陰性結果.附加說明本方法是生物化學反應,應盡可能避免一些物理和化學因素對酶活性的影響.反應最適酸鹼度為PH7.5左右,檢樣偏酸或偏鹼時應改用磷酸緩沖液浸提處理. 反應中,葯片表面應保持濕潤,最好將每一批樣品處理好後統一加樣,以免是過長蒸發干. 蔥,蒜,蘿卜,芹菜,茭白,蘑菇及番茄汁液中含有對酶活性有影響的植物次生物質,容易產生假陽性.處理這類樣品時,不宣剪切過碎,浸提時間不宜過長,以免液汁過多釋放影響檢測檢測結果.必要時可採用整株(體)蔬菜浸提的方法進行測定.農葯速測卡在常溫條件下有效期為壹年,貯存時要求放在陰涼,乾燥和避光處,有條件者放於4℃冰箱中最佳.農葯速測卡開封後最好在三天內用完,如一次用不完可存放在乾燥器中.農葯速測卡果蔬農葯殘留快速檢測卡是用對農葯高度敏感的膽鹼酯酶和顯色劑做成的酶試紙,可以快速檢測蔬菜中有機磷和氨基甲酸酯這兩大類用量較大,毒性較高的殺蟲劑的殘留情況,選用的酶對甲胺磷敏感,抗干擾性強,操作簡便,不需要配製試劑,不需要專業的技術培訓,可以不需要任何儀器設備單獨使用,也可配套農葯殘留快速檢測儀使用,提高檢測效率.產品容易貯存,攜帶方便,是現場檢測的最佳方法.
10. 乙醯膽鹼顯色反應
[摘要]目的:研究膽鹼酯酶測定兩種方法對檢測有機磷農葯中毒的影響.方法:分別用丁醯膽鹼(以下稱丁法)和乙醯膽鹼(以下稱乙法)作底物,檢測丁醯膽鹼酯酶和乙醯膽鹼酯酶.並對300例結果進行了分析,結果:異常率(少於參考值)丁法為2.3%;乙法為1.6%40經χ2檢驗,兩者無明顯差異結論:兩種方法均可作為有機磷農葯中毒指標.≯關鍵詞]有機磷中毒;乙醯膽鹼酯酶;丁醯膽鹼酯酶有機磷中毒在基層比較常見c有機磷化合物是膽鹼酯酶的強烈抑制劑,使其活性降低,故臨床檢測膽鹼酯酶是診斷有機磷中毒的重要手段......