檢測綠色熒光蛋白的方法

Ⅰ GFP（綠色熒光蛋白）發現過程用到了哪些蛋白質檢測技術請闡述原理

A、可用雙縮脲試劑檢測GFP，產生紫色反應，A錯誤；
B、氨基酸脫水縮合形成蛋白質時，脫去的水中的H來自氨基和羧基，所以該肽鏈水解時，水中氫的去向是形成氨基和羧基，B錯誤；
C、該蛋白質共含有17個游離的羧基，其中有15個在R基中，說明該蛋白質含有2條肽鏈，又該蛋白質由126個氨基酸組成，所以蛋白質合成時要脫去124分子的水，C錯誤；
D、該蛋白質共含有17個游離的羧基，其中有15個在R基中，說明該蛋白質含有2條肽鏈，又游離的氨基總數是17個，所以R基上的氨基有15個，D正確．
故選：D．

Ⅱ 從個體水平考慮,如何檢測出綠色熒光蛋白基因能成功表達的轉基因鼠

使用紫外線照射小鼠，發綠色熒光的即為綠色熒光蛋白基因成功表達的轉基因鼠。

Ⅲ 緊急！！！：綠色熒光蛋白如何識別蛋白質的可溶性

你是想問怎麼檢測還是怎麼設計實驗啊？
總得看你的綠色熒光蛋白是放在什麼地方表達，與什麼蛋白相連才行啊！

看了你的補充，我覺得有可能是這樣（純粹個人猜想）：將gfp基因與目標可溶性蛋白基因連接，表達融合蛋白，如果表達出來的蛋白是可溶的話就可以與某一種底物（或者是酶）反應，從而抑制GFP發熒光或者促進GFP發熒光。而蛋白不溶的話，則不能與底物反應，與可溶性蛋白的效果相反。

我的猜想基於：有文獻指出
Yang等報道：將EGFP基因結合到特異性蛋白質表達基因上，而表達融合蛋白，將此融合蛋白做為蛋白激酶的底物，通過水解底物後熒光顏色及強度的改變的檢測，能提高蛋白激酶反應靈敏度。

摘自沙新平.報告基因系統的研究進展.國外醫學臨床生物化學與檢測分冊.2003.24（1）：26～28

希望這些信息對你有用。

Ⅳ 熒光顯微鏡怎麼看綠色熒光

綠色熒光蛋白是一類存在於包括水母、水螅和珊瑚等腔腸動物體內的生物發光蛋白，當受到紫外或藍光激發時，發射綠色熒光。

其特點在於：它產生熒光無需底物或輔因子，發色團是其蛋白質一級序列固有的來源於水母的氨基酸殘基組成。水母的綠色熒光蛋白很穩定，無種屬限制，已在多種動植物細胞中表達成功並產生熒光。GFP 的熒光受外界的影響較小，另外GFP 的檢測十分方便，而對細胞的傷害小。

細胞中有些物質，如葉綠素等，受紫外線照射後可發熒光；另有一些物質本身雖不能發熒光，但如果用熒光染料或熒光抗體染色後，經紫外線照射亦可發熒光，熒光顯微鏡就是對這類物質進行定性和定量研究的工具之一。

目前在常用的方法就是採用熒光顯微鏡觀察，熒光顯微鏡在實驗室普及，但不足的是必須採集葉片或動物切片進行觀察，對培養的標本進行破壞，無法進行活體觀察。

綠色熒光蛋白GFP的發光特性：

GFP吸收的光譜峰值為395nm（紫外），並有一個峰值為470nm的副吸收峰（藍光）；發射光譜峰值為509nm（綠光），並帶有峰值為540nm的側峰（Shouder）。雖然450～490nm只是GFP的副吸收峰，但由於該激發光對細胞的傷害小，因此通常多使用該波段光源（多為488nm）。

此外，GFP的光譜特性與熒光素異硫氰酸鹽（FITC）很相似，兩者通常共有一套濾光片。GFP熒光極其穩定，在激發光照射下，GFP抗光漂白（Photobleaching）能力比熒光素強，特別是在450～490nm藍光波長下穩定。

類似的，GFP融合蛋白的熒光靈敏度遠比熒光素標記的熒光抗體高，抗光漂白能力強，因此適用於定量測定與分析。

由於GFP熒光的產生不需要任何外源反應底物，因此GFP作為一種廣泛應用的活體報告蛋白，其作用是任何其它酶類報告蛋白無法比擬的。但因為GFP不是酶，熒光信號沒有酶學放大效果，因此GFP靈敏度可能低於某些酶類報告蛋白，比如螢火蟲熒光素酶等。

Ⅳ 還可以通過哪些方法驗證綠色熒光蛋白的表達

制備標准曲線的方法。對rAcGFP1進行系列稀釋，在微量比色杯中加入100ul的rAcGFP1稀釋後溶液，將微量比色杯插入到微量適配器中，點"Measure Fluorescence Raw."檢測，記錄檢測結果，對其他樣品重復4.2-4.3，利用熒光值（FSU）與樣品濃度做出標准曲線。

綠色熒光蛋白

是一個由約238個氨基酸組成的蛋白質，從藍光到紫外線都能使其激發，發出綠色螢光。雖然許多其他海洋生物也有類似的綠色熒光蛋白，但傳統上，綠色熒光蛋白（GFP）指首先從維多利亞多管發光水母中分離的蛋白質。

這種蛋白質最早是由下村修等人在1962年在維多利亞多管發光水母中發現。這個發光的過程中還需要冷光蛋白質水母素的幫助，且這個冷光蛋白質與鈣離子可產生交互作用。

Ⅵ 觀察植物綠色熒光蛋白，要製片，用什麼方法徒手切片還是石蠟切片

如果只想看到熒光，可以直接放在紫外燈下，就會顯熒光。
如果是觀察亞細胞定位，就用激光共聚焦顯微鏡，不需要那麼麻煩的製片過程，直接觀察，逐層掃描。如果用洋蔥表皮，用鑷子撕取，如果用煙草，切一小塊兒，然後貼在載玻片上。