疑似病例檢測方法

1. 甲型H1N1流感病毒實驗室檢測技術方案的本方案旨

在為全國流感監測網路實驗室提供甲型H1N1流感病毒實驗室檢測技術方案，不用作商業活動或贏利目的。
一、標本的採集種類和要求
1、推薦採集的呼吸道標本種類
疾病發病後應盡快採集如下標本：鼻拭子、咽拭子、鼻腔吸取物、鼻腔沖洗液。氣管插管的病人也應收集氣管吸取物。標本應置於無菌病毒采樣液，並立即用冰塊或冰排保存或置於4 ℃ （冰箱），並馬上送至實驗室。（臨床樣品採集人員及實驗室檢測人員的感染控制指導請見相關文件。） 采樣同時填寫疑似人感染甲型H1N1感染病例標本采樣單。（附表1）
2、拭子的選擇
標本應使用頭部為合成纖維的拭子（例如，聚酯纖維），用鋁或塑料做柄。不推薦棉拭子和木柄。標本採集管應包含3毫升病毒采樣液（含有蛋白質穩定劑，阻止細菌和真菌生長的抗生素，緩沖液）
3、臨床標本儲存要求
保存在4℃（不能超過4天）或者-70℃或-70℃以下。有條件的實驗室均應保存在-70℃或-70℃以下。不應保存在-20℃。
4、標本的分裝處理
標本送至實驗室後，立即進行處理，避免反復凍融。將原始標本分為三份，一份用於核酸檢測，一份用於病毒分離，一份保存待復核。
5、標本的運輸
疑似人感染甲型H1N1感染病例列為 A類，用UN2814包裝運輸。填寫疑似人感染甲型H1N1感染病例標本送檢單（附表2）。
二、核酸檢測
基於PCR原理的核酸檢測方法是一種快速有效的診斷方法，在突發傳染病應急工作中發揮了巨大作用。
1、基於real-time RT-PCR的方法檢測新的甲型H1N1流感病毒（引物和探針序列為美國CDC設計）：
4月29日WHO網站上公布了美國CDC設計的針對此次甲型H1N1流感病毒的real-time RT-PCR引物和探針，此實驗用於檢測疑似甲型H1N1流感病例的呼吸道樣本, 因此，用此real-time RT-PCR的方法，建議首先篩選甲型流感病毒並排除季節性流感病毒和H5N1禽流感病毒。real-time RT-PCR方法參見附件3（中文翻譯版），附件4（英文原版）。
2、基於RT-PCR的方法檢測新的甲型H1N1流感病毒（引物序列為國家流感中心設計）：
目前國家流感中心設計了RT-PCR方法檢測新的甲型H1N1流感病毒。RT-PCR的方法參見附件5。
三、病毒分離鑒定
可採用雞胚和/或MDCK細胞進行流感病毒分離。具備相應條件的網路實驗室在收到標本後24h內進行病毒接種。具體方法參見附件6和7。
四、適用於實驗室工作人員的甲型H1N1流感病毒生物安全
（一）實驗室級別及個人防護
1、對採集自屬於感染甲型H1N1流感病毒疑似病例的患者的臨床標本進行的診斷性實驗工作，在BSL-2實驗室內進行。所有樣本操作均應在生物安全櫃（BSC）內進行。遵循生物安全三級個人防護。
2、對採集自屬於感染甲型H1N1流感病毒疑似病例的患者的臨床標本進行的病毒分離培養工作，應在BSL-3實驗室內進行，並遵循生物安全三級個人防護。
（二）健康監測
1、所有人員均應自測發熱及其他症狀。
2、感染甲型H1N1流感病毒的症狀包括咳嗽、喉嚨痛、嘔吐、腹瀉、頭痛、流鼻涕和肌肉疼痛。如有不適，應立即向上級報告。
3、如有人員在無防護情況下暴露於甲型H1N1流感確診病例的臨床標本或活病毒，應考慮在暴露後的7天時間里使用奧司他韋或扎那米韋進行抗病毒葯物預防。
五、附表和附件
附表1 疑似人感染甲型H1N1感染病例標本采樣單
附表2 疑似人感染甲型H1N1感染病例標本送檢單
附件3： real-time RT-PCR方法檢測甲型H1N1流感操作規程(2009版)（中文）
附件4： real-time RT-PCR方法檢測甲型H1N1流感操作規程(2009版)（英文）
附件5： RT-PCR方法檢測甲型流感病毒
附件6：甲型H1N1流感病毒雞胚分離方法
附件7：甲型H1N1流感病毒MDCK細胞分離方法
附表1
疑似人感染甲型H1N1流感病毒病例標本采樣單 姓名 性別 年齡 職業※ 現住址 發病日期 標本#
種類 標本量
（g或ml） 採集
日期 備注 ※選項：參照傳染病報告卡。
#選項：A鼻咽拭子、 B鼻咽吸取物、C鼻腔沖洗液、D鼻腔吸取物、E氣管吸取物、F其他（如為其他，請在表格中註明）
採集人員： 採集單位（蓋章）：
附表2
疑似人感染甲型H1N1流感病毒病例標本送檢單 姓名 性別 年齡 職業※ 現住址 發病日期 標本#
種類 標本量*
（g或ml） 採集
日期 備注 ※選項：參照傳染病報告卡
#選項：A鼻咽拭子、 B鼻咽吸取物、C鼻腔沖洗液、D鼻腔吸取物、E氣管吸取物、F其他（如為其他，請在表格中註明）
*標本量：如果同一份標本有多個包裝請註明。
填表人員： 送樣時間： 單位（蓋章）：
附件3
real-time RT-PCR方法檢測甲型H1N1流感操作規程
中文翻譯版（請同時參考英文原版）
請注意：體系建立請參照所使用試劑盒供應商所提供的使用說明。本規程中的體系僅供參考。
美國CDC實時RTPCR(rRTPCR)檢測豬流感操作規程(2009版)
本規程所有權歸屬疾病控制中心，緊急狀態時授權各公共衛生實驗室使用。本規程不用作商業活動或贏利目的。
一、概 述
（一）前提
本規程基於對rRT-PCR方法的基本掌握。
（二）實驗原理
實時熒光定量RTPCR(rRTPCR)法檢測豬流感的方案是用一組寡核苷酸引物和雙重標記的TaqMan®探針，對呼吸道樣本或體外培養的豬流感病毒進行定性檢測鑒定。InfA引物和探針為檢測出甲型流感病毒而設計，swInfA引物和探針可特異性地檢測出所有的豬甲型流感病毒，swH1引物和探針可特異性檢測豬流感病毒H1亞型。本實驗用於檢測甲型流感陽性的疑似豬甲型流感感染病例的呼吸道樣本。
（三）使用條件
一步法定量RT-PCR 96孔板熱循環系統。
（四）生物安全要求
樣本處理應在相應的生物安全實驗室完成。
（五）樣本要求
1、呼吸道樣本
支氣管肺泡灌洗液，氣管抽吸物，痰，鼻咽或口咽洗液或拭子。拭子樣本所用的拭子頂端應為人造材質（如聚脂或滌綸）、柄為鋁制或塑料。不推薦使用棉頭木柄的拭子。藻酸鈣拭子采樣不可取。
2、排除標准
1）未在2－4°C (≤4 天)或-70°C及以下保存的樣本
2）以上未列的其它不當樣本
（六）核酸提取
RT-PCR擴增效能依賴於樣本模板RNA的質與量。RNA提取操作需經過檢驗核酸的純度合格之後，再用於樣本實驗。商業化的操作程序中包括QIAamp® 病毒RNA提取試劑盒，RNeasy®小試劑盒 (QIAGEN公司)，羅氏MagNA Pure Compact RNA分離試劑盒, MagNA Pure LC RNA分離試劑盒II, 和羅氏MagNA總核酸純化試劑盒，在推薦的操作程序下，可提取高純度的RNA。
（七）免責聲明：提到的廠家名僅用作舉例，並不表示疾控中心認可。
二、實驗材料
（一）試劑
1、一步法熒光定量RT-PCR探針試劑盒；
2、分子級無菌蒸餾水 (無RNA酶和DNA酶)；
3、正反向引物 (40μM)；
4、雙重標記探針(10μM)；
5、陽性對照。
（二）供給
1、實驗室標記筆；
2、微量離心管格柵，96孔0.2ml PCR反應管；
3、20μl 和 200μl 可調節移液器及濾芯槍頭；
4、0.2ml PCR 反應管盤；
5、光學反應蓋板；
6、無菌,無核酸酶的1.5 ml微量離心管；
7、一次性無粉手套。
（三）儀器設備
1. 微量離心機；
2. 漩渦振盪器；
3. 實時熒光定量PCR檢測系統，含96孔的熱循環反應板。
三、操作程序
（一）准備工作
1. 避免樣品污染
由於fluorogenic 5』核酸酶測定的敏感性，應特別注意假陽性產生。推薦以下預防污染的方法：
1）實驗准備與核酸提取使用獨立區域；
2）實驗准備與核酸提取使用專用設備（如移液器，微量離心機）和耗材（如微量離心管，吸頭）；
3）實驗開始後穿清潔工作服，並使用新的一次性無粉手套；
4）不同樣本操作之間，以及懷疑可能污染的情況下均更換手套；
5）試劑和反應管的蓋子應盡量關閉。
2、儀器准備
工作台、移液管、離心機必須清潔，用去污劑凈化，例如5%的漂白劑、「DNAzap」或者「RNase AWAY®」來減小核酸交叉污染的風險。
3、試劑准備
注意：在試驗過程中，保持所有的試劑在冰架上保持低溫。
1）引物和探針
（1）分裝好的冰凍的引物和探針進行融化（已融的探針避光2-8℃可保存多達3個月，不要對探針反復凍融）；
（2）渦旋振盪引物和探針；
（3）瞬時離心引物和探針，之後置於冰架上。
2）Real time RT-PCR的試劑
（1）將Master Mix和酶置於冰架上；
（2）融化2×的Reaction Mix；
（3）顛倒混合2×的Reaction Mix；
（4）瞬時離心2×的Reaction Mix和酶，置於冰架上。
4、對RT-PCR的每一步過程均進行檢測
1）每個樣品的RNA提取物通過分別的引物和探針進行檢測：InfA, swFluA, Swine H1 (swH1) 和RNaseP (RP)。RNaseP引物和探針是以人的RNaseP基因為靶基因的，因此對於人的核酸可以作為內部陽性對照。
2）對於每一個過程中包括的所有引物和探針，均設立無模板對照（NTC）和陽性模板對照（PTC）。
3）人類樣本對照（HSC）提供了次級陰性對照，以便確認核酸提取過程和試劑的完整性。
5、建立反應
反應檢測混合物充分混合後加入到96孔板中。然後在適當的實驗反應和對照中，加入水和提取的核酸或者陽性模板對照（PTC）。
1）為每一個引物和探針標記一個1.5ml的微量離心管；
2）對每一個建立的反應確定反應數（N）。考慮到NTC、PTC、HSC反應和吸量誤差，制備過量的反應混合物是必要的。具體如下：
（1）如果包括對照，樣品的數量（n）為1到14，那麼N=n+1；
（2）如果包括對照，樣品的數量（n）大於15，那麼N=n+2。
3）Master Mix:計算加到每個引物/探針反應混合物中的各個試劑的量。計算如下：
* 體系建立請參照所使用試劑盒供應商所提供的使用說明。
4）加入水之後，通過上下吹打混勻反應混合物，不要渦旋振盪。
5）離心5s使混合物聚集管底，然後將管子置於冰架上；
6）准備板狀的反應管子或者96孔板，置於冰架上；
7）每一個master mix吸取20μl到每一孔中，每排按順序進行，如下圖：
實驗建立舉例：
實驗樣本舉例：
注意：在任何樣本被加入之前，應該首先加入陰性模板對照（NTC）（第1列），用來檢驗master mix中的污染。HSC應該在待測樣本之後加入（第11列），用來檢驗在樣本准備或者加入過程中的交叉污染。陽性模板對照（PTC）應該在所有樣品和陰性模板對照（NTC）之後被加入。
8）在將培養板移到核酸處理區域之前，在試驗設定區域，在反應板的第一列將NTC反應進行。如上所述。
9）吸取5μl的nuclease free water到NTC孔，將NTC孔蓋上。
10）將反應板蓋上，移到核酸處理區域。
11）將含有樣品的管子渦旋振盪5s，瞬時離心5s；
12）將提取的核酸樣本置於冰架上；
13）如上所述，樣品應該按列加入，吸取5μl的第一種樣本到所有標記這種樣品的孔中（例如，樣本「S1」如上表格所示）。不同樣本之間需更換槍頭操作。
14）加完樣本的孔要蓋住，這將會幫助防止樣品的交叉污染，並且能夠使操作人員記錄其加樣的具體進程；
15）為了避免交叉污染，必要時更換手套；
16）對剩下的樣本，重復步驟13-15；
17）加入5μl的HSC樣品加到HSC孔中（第11列）。將HSC孔蓋蓋。
18）最後，加5μl陽性模板對照RNA到所有PTC孔中，將PTC孔蓋上。
19）如果使用8個管子的條狀板子，每一條都要做標簽標記，來指明每一個樣品的位置（不要在反應管子的頂部標記！）。瞬時離心條狀管子10－15s，然後置於冰架上。如果使用培養板，4℃，500g離心30s，置於冰架上。
6、RT-PCR擴增條件
反應體系為25ul，反應條件如下：
註：在55度這一步驟中要收集熒光信號（FAM）。
* 具體擴增條件請參照所使用試劑盒供應商所提供的使用說明。
7、解釋說明/檢驗
1）探針/引物的陰性對照反應中得到的熒光增長曲線不應該超過閾值線。如果一個或者多個引物和探針的陰性反應出現了假陽性，則樣品可能已經被污染。那麼整個實驗過程是無效的，嚴格的按照步驟規則重新實驗。
2）在37個循環處或者37個循環之前，所有的臨床樣本的RP反應曲線都應該超過閾值線，這表明從人類RNase P基因擴增到足夠量的RNA，也表明了樣本質量合格。然而，可能有些樣本會由於初始臨床樣本中的細胞數量較少而無法出現陽性結果。同時，從動物/禽類體內或者經細胞培養得到的樣本，經常會RP反應沒有結果或者結果很弱。如果在所有臨床樣本中檢測RNase P都陰性，則說明：
（1）從臨床材料中對核酸的不適當的提取導致RNA的損失或者來自臨床標本的RT-PCR抑制劑的殘留污染；
（2）沒有足夠的人類細胞以備檢測；
（3）方法建立和實施不當；
（4）試劑和儀器原因。
3）在40個循環之內，HSC組中InfA，swFluA，swH1探針的熒光增長曲線不應該超過閾值線。如果任何其中任何一個流感特異性探針的增長曲線超過了閾值線，那麼有以下解釋：
（1）可能由於RNA提取試劑污染。在實驗前確保RNA提取試劑無誤。
（2）RNA提取過程或建立反應加樣過程發生交叉污染。嚴格遵照操作程序的要求進行重復實驗。
（3）在40個循環之前，PTC反應的InfA, swInfA, swH1和RP反應應出現陽性結果。如果沒產生預期的陽性結果則視為無效，應嚴格遵照操作程序進行重復實驗。確定PTC反應失敗原因，訂正並記錄錯誤原因及更改方案。不再使用沒產生預期結果的PTC試劑。
（4）當所有對照都滿足要求後，如果InfA反應增長曲線與閥值線在40個循環內有交叉時，則樣本被視為A型流感病毒陽性。如果A型流感病毒反應呈陽性，那麼Univ SW 和/或 SW H1也可能呈陽性。如果樣本InfA和特異亞型反應（swInfA和swH1）的反正增長曲線與閾值線在40個循環內有交叉，則視該樣本為豬流感病毒A/H1陽性。如果樣本只有InfA和一個亞型的反應陽性或只有InfA陽性，請聯系CDC做進一步指導。
（5）在所有對照都滿足要求的前提下，如果在40個循環內，待測樣本的所有InfA反應陰性則視該樣本為陰性。
8、限制規定
1）實驗員在實際操作之前應進行操作程序和試驗結果分析的培訓，熟練掌握後方可進行試驗。
2）當樣本量不足可能會產生假陰性結果，造成的原因可能是不當的收集，運輸或處理。
3）如果反應中存在過量的DNA / RNA模板時也可能出現假陰性。如果某樣本的RP反應被抑制，則可以將提取的RNA進行2倍或更大倍數的稀釋（例如1：10或1：100）來重復試驗。
9、備注
引物和探針參見英文版P7。
附件4
real-time RT-PCR方法檢測鑒定甲型H1N1流感操作規程
（英文版）
附件5
基於RT-PCR的方法檢測新的甲型H1N1流感病毒
一、目的
對採集的可疑病例標本進行檢測，篩選甲型H1N1流感病毒並排除季節性H1N1流感病毒。
二、引物 NIC引物 引物名稱 鹼基組成 目的片段大小 備注 FluA FluA-M-F30 TTCTAACCGAGGTCGAAACG 235bp 甲型流感病毒M基因通用檢測引物 FluA-M-R264 ACAAAGCGTCTACGCTGCAG H1HA H1 F1147 AAGAGCACACATAATGCCAT 527bp H1N1亞型檢測通用引物 H1 R1673 CCATTRGARCACATCCAG HuH1HA H1HA F768 ACTACTGGACTCTGCTGGAAC 327bp 人季節性流感病毒H1N1亞型檢測引物 H1HA R1094 CAATGAAACCGGCAATGGCTCC SWH1HA-1 SW-H1 F786 AATAACATTAGAAGCAACTGG 153bp 此次甲型H1N1亞型流感病毒引物 SW-H1 R920 AGGCTGGTGTTTATRGCACC RnaseP RnaseP F AGA TTT GGA CCT GCG AGC G 約80bp 與real-time PCR中RnaseP引物一致 RnaseP R GAG CGG CTG TCT CCA CAA GT 三、材料及儀器
1、 RNA 提取試劑盒QIAGen RNeasy Mini Kit （catalog #74104）
2、β－巰基乙醇（SIGMA β-Mercaptoethanol Lot 062K0115）
3、70%乙醇
4、RT-PCR Kit：QIAGEN One step RT-PCR Kit（catalog #210212）
5、RNasin Ribonuclease Inhibitor （Promega catalog #N2111）
6、檢測引物
7、Axygen 1.5mL離心管，貨號：MCT-150-C
8、Axygen 0.2mL PCR管，貨號：PCR-02-C
9、Axygen 10μL，100μL，200μL，1000μL帶濾芯槍頭
10、10μL，100μL，200μL，1000μL加樣器
11、可調轉速14K離心機：
12、旋渦混合器：
13、生物安全櫃：二級生物安全櫃
14、PCR儀：
15、瓊脂糖：Biowest Agarose Distributed by Gene Tech（Shanghai）Company Limited Lot No. 101685
16、核酸染料：
17、電泳液：5×TBE電泳緩沖液 cat No. 9009032718．電泳槽、電泳儀
四、實驗步驟
（一）RNA提取
1、根據標本數量分裝RLT液：從Kit中取出RLT液，用1.5mL離心管分裝，每管500μL（在體系配製區操作）。
2、在生物安全櫃內將采樣液（鼻拭子、咽拭子、胸水等）或病毒培養物（雞胚尿囊液或細胞培養液）取100μL加入RLT液管中，充分混勻。
3、每管分別加入5μL β-巰基乙醇，混勻後依次加入600μL 70%的乙醇，充分混勻。
4、從Kit中取出帶濾柱的2mL收集管，打開包裝將其做好標記。取步驟（3）中的混合液600μL加入濾柱中，12000rpm，離心15s，棄收集管中的離心液。
5、濾柱仍放回收集管上，將步驟（3）剩餘的混合液全部吸入濾柱中，12000rpm，離心15s，棄離心液。
6、於濾柱中加入700μL Wash Buffer RW1液，12000rpm，離心15s。
7、從QIAGEN RNeasy Mini Kit中取一支幹凈的2mL收集管，將離心後的濾柱移到新的收集管上，於濾柱中加入500μL Wash Buffer RPE液，12000rpm，離心15s。
8、棄收集管中的離心液，再於濾柱中加入500μL Wash Buffer RPE液，13000~14000rpm，離心2min。
9、將濾柱移到一個干凈的1.5mL eppendorf管上，向濾柱中加入30~50μL的Rnase-free Water，室溫靜置1~3min。
10、12000rpm，離心1min，收集離心液即為提取的病毒RNA，立即做實驗或-20℃以下保存。
注意：Buffer RPE使用之間加44mL無水乙醇。
（二）反應體系配製
1、實驗設計：
檢測標本RNA
質控參數：
陰性對照：無菌水（標本RNA提取時，跟標本同時提取無菌水。）
陽性對照：已知病毒RNA
2、PCR反應體系配製（在體系配製區配反應液）
1）按下表加入試劑：
PCR反應體系 組 分 體 積（μL） RNase Free Water
5×RT-PCR Buffer 11.9×n
5×n 10mM dNTP Mixture 1×n Enzyme Mix 1×n RNase Inhibitor 0.1×n 上游引物 0.5×n 下游引物 0.5×n Total 20×n 對每一個建立的反應確定反應數（n=擬進行的PCR管數，包括陰性，陽性對）。考慮到陰性無模板對照，陽性對照，誤差，制備過量的反應混合物是必要的。具體如下：
（1）如果包括對照，樣品的數量（n）為1到14，那麼N=n+1；
（2）如果包括對照，樣品的數量（n）大於15，那麼N=n+2。
2）將上述反應液混勻，分裝到0.2mL PCR小管中，每管20μL，分別做好標記。
3）加RNA模板（在核酸提取區）
將上述分裝好的PCR小管分別加入模板。首先加入陰性對照管（5μL無菌水），然後分別加標本RNA（每管5μL），最後加入陽性對照RNA（每管5μL）。
3、RT-PCR反應
將上述加好模板的反應管混勻，短暫離心後放入PCR儀進行RT-PCR
擴增，反應程序如下： 溫度 (C) 時間 循環數 60℃ 1min 1 42℃ 10min 50℃ 30min 95℃ 15min 94℃ 30s 35 52℃ 30s 72℃ 1min 72℃ 7min 1 4℃ 保存 4、RT-PCR產物檢測
1）2.0%瓊脂糖凝膠制備：稱取2.0g Agarose，倒入耐熱玻璃瓶內，再加入電泳液（1×TBE）100mL，輕輕混勻後加熱，使Agarose完全熔化。待Agarose膠溫度降至50～60℃左右，加入核酸染料，輕輕混勻（不要產生氣泡）。待膠溫度降至50℃左右時，將其倒入制膠板，插好電泳梳子。待膠完全凝固（約30～60min）之後，將梳子拔出。
2）將制備好的電泳膠放入電泳槽（帶梳子孔的一端在陰極），倒入電泳液（1×TBE）浸過膠面即可。
3）PCR產物各取10μL，加入2μL上樣緩沖液（6×Loading Buffer），混勻後加入電泳膠孔內（先加Marker（DL－2000）5μL，然後依次加標本PCR產物，再加陰性對照，最後加陽性對照產物）。
4）電泳電壓100V，約30～40min後看結果。
5）將電泳膠放入凝膠成像系統觀察結果並照相。
5、結果判斷
在系統成立，即陰陽性參考均正常的條件下，各引物所代表意義如下： PCR引物 待檢樣品1 待檢樣品2 待檢樣品3 待檢樣品4 待檢樣品5 待檢樣品6 FluA _ + + + + +/- H1HA _ _ + + + +/- HuH1HA _ _ + _ _ +/- SWH1HA-1 _ _ _ + _ +/- RnaseP + + + + + _ 結果判斷 非甲型流感病毒 甲型流感病毒
非H1N1亞型 人季節性H1N1亞型流感病毒 豬H1N1亞型流感病毒
送國家流感中心復核 送國家流感中心檢測 標本不是人源標本/標本中細胞量少/實驗或儀器問題

2. 疑似病例的疑似病例

H就是凝集素 N就是聚集區 H1N1-H100N100太多了，數之不盡
符合下列情況之一即可診斷為疑似病例：
1.發病前7天內與甲型H1N1流感疑似或確診病例有密切接觸（在無有效防護的條件下照顧患者，與患者共同居住、暴露於同一環境，或直接接觸患者的氣道分泌物或體液），出現流感樣臨床表現。
2.發病前7天內曾到過甲型H1N1流感流行（出現病毒的持續人間傳播和基於社區水平的流行和暴發）的國家或地區，出現流感樣臨床表現。
3.出現流感樣臨床表現，甲型流感病毒檢測陽性，但進一步檢測排除既往已存在的亞型。

3. 對於新冠疑似病例進行確診的實驗室檢測依據有哪些

對新冠疑似病例進行確診間實驗室檢測依據是核酸檢測呈陽性就能確診。

4. 發現疑似病例應多久採集標本進行核酸檢測復合

通過查詢相關資料顯示，發現疑似病例應立即採集標本進行核酸檢測復合。《新型冠狀病毒肺炎防控方案》顯示：發現疑似病例，應立即採集標本進行核酸檢測復核，期間單人單間隔離，連續2次新冠病毒核酸檢測陰性(采樣時間至少間隔24小時)，可排除疑似病例診斷。

5. 甲型hini流感疑似病例的診斷標準是什麼

甲流症狀與感冒類似，患者會出現發燒、咳嗽、疲勞、食慾不振等。有報道說，美國2009年疫情中發現病例的主要表現為突然發熱、咳嗽、肌肉痛和疲倦，其中一些患者還出現腹瀉和嘔吐症狀；墨西哥發現病例還出現眼睛發紅、頭痛和流涕等症狀。

不過只看症狀是沒有意義的

關鍵要看流行病接觸史 有沒有去過甲流疫情爆發比較嚴重的地方，人員密集的場所，和甲流患者以及相關人員有沒有密切接觸， 如果沒有就可以排除了

對於甲流樓主沒必要過分擔心 一般來說這病症狀都很輕的
如果你不舒服有發燒症狀

就戴口罩去醫院看大夫

查下咽拭子或者鼻拭子 這項檢測是完全免費的

多多喝水 注意休息 相信要不了多久你就會恢復健康的

甲型H1N1流感又稱為A（H1N1）型流感，人感染豬流感。
[2]2009年4月30日世界衛生組織、聯合國糧農組織和世界動物衛生組織宣布，一致同意使用A（H1N1）型流感指代當時疫情，並不再使用「豬流感」一詞。中國衛生部門則相繼將原人感染豬流感改稱為甲型H1N1流感。中國衛生部2009年4月30日發布2009年第8號公告，明確將甲型H1N1流感（原稱人感染豬流感）納入傳染病防治法規定管理的乙類傳染病，並採取甲類傳染病的預防、控制措施。傳染病防治法規定管理的傳染病分為甲類、乙類和丙類。其中甲類是後果嚴重傳染性最強的傳染病，依次遞減。甲類傳染病包括鼠疫和霍亂。乙類傳染病包括傳染性非典型肺炎、艾滋病、病毒性肝炎等20餘種；丙類傳染病包括流行性感冒、手足口病等10餘種。

病毒特徵
甲型H1N1流感病毒是A型流感病毒，攜帶有H1N1亞型豬流感病毒毒株，包含有禽流感、豬流感和人流感三種流感病毒的核糖核酸基因片斷，同時擁有亞洲豬流感和非洲豬流感病毒特徵。醫學測試顯示，目前主流抗病毒葯物對這種毒株有效。美國疾控機構的照片顯示甲型H1N1流感病毒呈陰性反應。

臨床表現
潛伏期，較流感、禽流感潛伏期長，具體時間暫不確定。
甲型H1N1流感的早期症狀與普通人流感相似，包括發熱、咳嗽、喉痛、身體疼痛、頭痛、發冷和疲勞等，有些還會出現腹瀉或嘔吐、肌肉痛或疲倦、眼睛發紅等。
部分患者病情可迅速進展，來勢兇猛、突然高熱、體溫超過39℃，甚至繼發嚴重肺炎、急性呼吸窘迫綜合征、肺出血、胸腔積液、全血細胞減少、腎功能衰竭、敗血症、休克及Reye綜合症、呼吸衰竭及多器官損傷，導致死亡。患者原有的基礎疾病亦可加重。

診斷標准
衛生部2009年4月30日印發的《人感染豬流感診療方案（2009版）》中指出，人感染豬流感的診斷主要結合流行病學史、臨床表現和病原學檢查等，臨床上早發現、早診斷是治療的關鍵。
同時，診療方案還詳細介紹了人感染豬流感的診斷標准，具體有以下四種情況：
——醫學觀察病例：曾到過豬流感疫區，或與病豬及豬流感患者有密切接觸史，1周內出現流感臨床表現者。列為醫學觀察病例者，對其進行7天醫學觀察（根據病情可以居家或醫院隔離）。
——疑似病例：曾到過疫區，或與病豬及豬流感患者有密切接觸史（也可流行病學史不詳），1周內出現流感臨床表現，呼吸道分泌物、咽試子、痰液、血清H亞型病毒抗體陽性或核酸檢測陽性。
——臨床診斷病例：被診斷為疑似病例，且與其有共同暴露史的人被診斷為確診病例者。
——確診病例：從呼吸道標本或血清中分離到特定病毒；RT-PCR對上述標本檢測，有豬流感病毒RNA存在，經過測序證實，或兩次血清抗體滴度4倍升高，可確診為人感染豬流感。

症狀
豬流感的潛伏期一般1至7天左右，普遍易感，以青壯年為主。
早期症狀與普通流感相似，包括發熱、咳嗽、喉痛、身體疼痛、頭痛、發冷和疲勞等，有些還會出現腹瀉或嘔吐、肌肉痛或疲倦、眼睛發紅等。
部分患者病情可迅速進展，來勢兇猛、突然高熱、體溫超過39℃，甚至繼發嚴重肺炎、急性呼吸窘迫綜合征、肺出血、胸腔積液、全血細胞減少、腎功能衰竭、敗血症、休克及Reye綜合征、呼吸衰竭及多器官損傷，導致死亡。
人感染豬流感的預後與感染的病毒亞型有關，大多預後良好；而感染H1N1者預後較差，病死率約為6%。

治療
應及早應用抗病毒葯物，可試用奧司他韋(oseltamivir達菲)，如出現細菌感染可使用抗生素。
·毒襲肺衛症狀：發熱、惡寒、咽痛、頭痛、肌肉酸痛、咳嗽
常用中成葯：蓮花清瘟膠囊、銀黃類制劑、雙黃連口服制劑。
·毒犯肺胃症狀：發熱或惡寒，惡心、嘔吐、腹痛腹瀉、頭身、肌肉酸痛
常用中成葯：葛根芩連微丸、藿香正氣制劑等
·毒壅氣營症狀：高熱、咳嗽、胸悶憋氣、喘促氣短、煩躁不安、甚者神昏譫語
參考方葯：必要時可選用安宮牛黃丸以及痰熱清、血必凈、清開靈等。

6. 如何判定口蹄疫確診病例

（1）疑似口蹄疫病例，以下病原學檢測方法任何一項陽性，可判定為確診口蹄疫病例：
①間接夾心酶聯免疫吸附試驗，檢測陽性（ELISAOIE標准方法）；
②RT-PCR試驗，檢測陽性（採用國家確認的方法）；
③反向間接血凝試驗（RIHA），檢測陽性；
④病毒分離，鑒定陽性。
（2）疑似口蹄疫病例，在不能獲得病原學檢測樣本的情況下，未免疫家畜血清抗體檢測陽性或免疫家畜非結構蛋白抗體ELISA檢測陽性，可判定為確診口蹄疫病例。
①中和試驗，抗體陽性；
②液相阻斷酶聯免疫吸附試驗，抗體陽性；
③非結構蛋白ELISA檢測感染抗體陽性；
④正向間接血凝試驗（IHA），抗體陽性。

7. 疑似病例診斷標準是什麼多選題

疑似病例的判斷標準是（）。

A、流行病學史中的任何1條

B、流行病學史中的任何1條，且符合臨床表現中任意2條

C、流行病學史中的任何1條，且符合臨床表現中任意3條

D、流行病學史中的任何1條，且符合臨床表現中任意1條

題目【疑似病例的判斷標準是（）。】的正確答案為：B、

二、臨床表現：
1、發熱和呼吸道症狀等新型冠狀病毒感染的相關臨床表現；
2、具有新型冠狀病毒肺炎影像學特徵；
3、發病早期白細胞總數正常或者降低，淋巴細胞計數正常或減少。
確診病例診斷標準是疑似病例，同時具備以下病原學和血清學證據之一者：
1、應用病毒核酸檢測陽性；
2、病毒基因測序與已知的新型冠狀病毒高度同源；
3、新型冠狀病毒的特異性抗體IgM抗體和IgG抗體陽性；
4、新型冠狀病毒特異性抗體IgG抗體由陰性轉為陽性，或者是恢復期IgG抗體滴度較急性期呈四倍以上升高。

8. mers如何檢測用什麼儀器或者試劑檢測是什麼樣方法學

病毒分離為金標准，但不易進行，主要是使用PCR
【實驗室檢查】
1.一般實驗室檢查。
（1）血常規：白細胞總數一般不高，可伴有淋巴細胞減少。
（2）血生化檢查。部分患者肌酸激酶、天門冬氨酸氨基轉移酶、丙氨酸氨基轉移酶、乳酸脫氫酶、肌酐等升高。
2.病原學相關檢查。
主要包括病毒分離、病毒核酸檢測。病毒分離為實驗室檢測的「金標准」；病毒核酸檢測可以用於早期診斷。及時留取多種標本（咽拭子、鼻拭子、鼻咽或氣管抽取物、痰或肺組織，以及血液和糞便）進行檢測，其中以下呼吸道標本陽性檢出率更高。
（1）病毒核酸檢測。以RT-PCR（最好採用real-time RT-PCR）法檢測呼吸道標本中的MERS冠狀病毒核酸。
（2）病毒分離培養。可從呼吸道標本中分離出MERS冠狀病毒,但一般呼吸道冠狀病毒在細胞中分離培養較為困難。
【臨床診斷】
（一）疑似病例。
患者符合流行病學史和臨床表現，但尚無實驗室確認依據。
1.流行病學史。發病前14天內有中東地區旅遊或居住史；或與疑似/臨床診斷/確診病例有密切接觸史。
2.臨床表現。難以用其他病原感染解釋的發熱（體溫≥38℃）伴呼吸道症狀。
（二）臨床診斷病例。
1.滿足疑似病例標准，僅有實驗室陽性篩查結果（如僅呈單靶標PCR或單份血清抗體陽性）的患者。
2.滿足疑似病例標准，因僅有單份採集或處理不當的標本而導致實驗室檢測結果陰性或無法判斷結果的患者。
（三）確診病例。
疑似和臨床診斷病例具備下述4項之一，可確診為中東呼吸綜合征實驗室確診病例：
1.至少雙靶標PCR檢測陽性。
2.單個靶標PCR陽性產物，經基因測序確認。
3.從呼吸道標本中分離出中東呼吸綜合征冠狀病毒。
4.恢復期血清中東呼吸綜合征冠狀病毒抗體較急性期血清抗體水平陽轉或呈4倍以上升高。
（四）無症狀感染者。
無臨床症狀，但具備實驗室確診依據4項之一者。

9. 如何界定本土病例和境外輸入病例呢

本土疫情地區就是指該地區近期沒有外出旅行的人卻被當地的人傳染上了新冠。

防控態勢不能鬆懈，新冠病毒的傳染性強，部分病人的傳染源較為隱秘，因此疫情防控力度不能減輕。及時篩查、發現病人最為關鍵，短期內出現零星新增病例難以避免，但可以做好篩查工作，避免病毒進一步傳播。

要對新增本土病例做好流行病學調查，為下一步防控提供充足依據。本土的病例，他是因為這種病毒的基因所構成和以前發現的是一樣的，就屬於本土病例。

如果是有變異程度和別的地方一樣的就是境外的。境外輸入病例就已經感染或有相應新冠肺炎症狀的人員從國外回到國內，經檢測確診為新冠肺炎病例人員，稱為境外輸入性病例。

發現病例的處理方式

各級各類醫療機構發現符合病例定義的疑似病例或新型冠狀病毒抗原檢測結果為陽性者，應立即採集標本進行核酸檢測或閉環轉運至有條件的上級醫療機構進行核酸檢測，期間單人單間隔離。核酸檢測結果為陽性者，進行集中隔離管理或送至定點醫院治療，並按照規定進行網路直報。

連續兩次新型冠狀病毒核酸檢測陰性（采樣時間至少間隔24小時），可排除疑似病例診斷。