T淋巴細胞亞群檢測方法

㈠ T淋巴細胞可分為哪些亞群有何功能

T細胞是相當復雜的不均一體、又不斷在體內更新、在同一時間可以存在不同發育階段或功能的亞群，但分類原則和命名比較混亂，尚未統一。按免疫應答中的功能不同，可將T細胞分成若干亞群，一致公認的有：
輔助性T細胞（Helper T cells,Th），具有協助體液免疫和細胞免疫的功能；
抑制性T細胞（Suppressor T cells,Ts），具有抑制細胞免疫及體液免疫的功能；
效應T細胞（Effector T cells,Te），具有釋放淋巴因子的功能；
細胞毒性T細胞（cytotoxic T cells,Tc），具有殺傷靶細胞的功能；
遲發性變態反應T細胞（Td），有參與Ⅳ型變態反應的作用；放大T細胞（Ta），可作用於Th和Ts，有擴大免疫效果的作用；
處女或天然T細胞（Virgin or Natural T cells），他們和抗原接觸後分化成效應T細胞和記憶T細胞；
記憶T細胞（Tm），有記憶特異性抗原刺激的作用。T細胞在體內存活的時間可數月至數年。其記憶細胞存活的時間則更長。
其中，Th細胞又被稱為CD4+細胞，因為其在表面表達CD4(cluster of differentiation 4）。通過與MHCⅡ（主要組織相容性復合體，major histocompatibility complex）遞呈的多肽抗原反應被激活。MHCⅡ在抗原遞呈細胞（antigen presenting cells,APCs）表面表達。一旦激活，可以分泌細胞因子，調節或者協助免疫反應。Tc細胞又名為CD8+細胞，其表面表達CD8.這類細胞可以通過MHCI 與抗原直接結合。
流式細胞分析儀FCM根據淋巴細胞表面標志的不同來檢測各淋巴細胞亞群：
淋巴細胞主要包括T淋巴細胞（CD3+），B淋巴細胞（CD19+），NK細胞（CD16+CD56+），

T淋巴細胞
其中T淋巴細胞可進一步測定輔助/誘導T淋巴細胞（CD3+CD4+）、抑制/細胞毒T淋巴細胞（CD3+CD8+）、CD4+T細胞純真亞群（CD4+CD45RA+/ CD4+CD45RA+62L+）和記憶亞群（CD4+CD45RA-/ CD4+CD45RO+）、功能亞群（CD28+）、激活亞群（CD38+、HLA-DR+）、凋亡亞群（CD95+）等。
T細胞按照功能和表面標志可以分成很多種類：
1、細胞毒T細胞（cytotoxic T cell）：消滅受感染的細胞。這些細胞的功能就像一個「殺手」或細胞毒素，因為它們可以對產生特殊抗原反應的目標細胞進行殺滅。細胞毒T細胞的主要表面標志是CD8，也被稱為殺手T細胞。
2、輔助T細胞（helper T cell）在免疫反應中扮演中間過程的角色：它可以增生擴散來激活其它類型的產生直接免疫反應的免疫細胞。輔助T細胞的主要表面標志是CD4。 T細胞調控或「輔助」其它淋巴細胞發揮功能。它們是已知的HIV的目標細胞，在艾滋病發病時會急劇減少。
3、調節/抑制T細胞（regulatory/suppressor T cell）：負責調節機體免疫反應。通常起著維持自身耐受和避免免疫反應過度損傷機體的重要作用。調節/抑制T細胞有很多種，目前研究最活躍的是CD25+ CD4+ T細胞。
4、記憶T細胞 (memory T cell)：在再次免疫應答中起重要作用。但暫時沒有發現記憶T細胞表面存在非常特異的表面標志物，相信隨著研究的深入，人們對記憶T細胞將會有一個更深入的了解。

㈡ 如何分析流式細胞儀檢測t淋巴細胞亞群結果

最常見的是分析CD4， CD8亞群。

先在FSC， SSC散點圖上劃出淋巴細胞gate。然後在此gate基礎上選取T細胞標志染色陽性的細胞群（一般是CD3）。在把CD34陽性的細胞根據CD4 和CD8染色情況形式為散點圖，得到CD4+/CD8-, CD4-/CD8+, 以及雙陽性的比率。如果還有其他細胞標志的染色，再進一步分析。

㈢ 今天檢查淋巴細胞亞群

淋巴細胞亞群分析正是檢測免疫功能的重要指標
它能反映機體當前的免疫功能、狀態和平衡水平，並可以輔助診斷某些疾病（如自身免疫病、免疫缺陷病、惡性腫瘤、血液病、變態反應性疾病等），對分析發病機制，觀察療效及檢測預後都有重要意義

一、什麼是淋巴細胞亞群？

人體的免疫細胞包括T細胞、B細胞、NK細胞等。T細胞主要參與細胞免疫，表達CD3抗原；B細胞主要參與體液免疫，表達CD19抗原；NK細胞表達CD16和/或CD56，在機體中不依賴抗原刺激自發地發揮細胞毒效應。其中，T細胞又包括輔助T細胞（Th）和抑制T細胞（Ts），它們分別表達CD4和CD8。

2、CD4+/CD8+細胞比值改變：表明機體細胞免疫功能紊亂。不管是CD4+或CD8+細胞數發生變化均影響該比值。（1）CD4淋巴細胞減少：見於惡性腫瘤、遺傳性免疫缺陷病、艾滋病、應用免疫抑制劑患者。（2）CD8淋巴細胞增多：見於自身免疫性疾病，如SLE、艾滋病初期、慢性活動性肝炎、腫瘤及病毒感染等。（3）CD4/CD8>2.5表明細胞免疫功能處於“過度活躍”狀態，容易出現自體免疫反應，見於類風濕性關節炎、I型糖尿病等。（4）CD4/CD8<1.4稱為“免疫抑制”狀態，常見於：A.免疫缺陷病，如艾滋病時的比值常顯著小於0.5；B.惡性腫瘤；C.再生障礙性貧血、白血病；D.某些病毒感染。CD4/CD8降到1.0以下為“倒置”，是較為明顯的異常。（5）若移植後CD4/CD8較移植前明顯增加，則可能發生排斥反應。

3、NK細胞（CD3-CD16+和/或CD56+）能夠介導對某些腫瘤細胞和病毒感染細胞的細胞毒性作用。

四、什麼人該檢測淋巴細胞亞群？

原則上來講，在機體的免疫（防禦、自穩、監視）功能受損的情況下要考慮檢查淋巴細胞亞群，下面列出了一些常見情況：

（1）免疫防禦功能受損（反復、嚴重、多重感染，常規治療效果不佳）

（2）免疫自穩和耐受功能受損（過敏性疾病、自身免疫/炎症疾病表現）

（3）免疫監視功能受損（腫瘤性改變）

（4）其他特殊情況（血常規中淋巴細胞明顯異常、家族免疫缺陷病史、長期使用免疫抑制劑）

近年來，新的細胞表面位點的發現、新單克隆抗體的問世、高新儀器的更新換代等都為淋巴細胞亞群檢測的發展提供了可能性，進一步為臨床診斷和治療提供指導和幫助。希望大家也能多多了解和關注淋巴細胞亞群檢測，為自己的免疫功能保駕護航。

㈣ 如何運用流式細胞儀進行T淋巴細胞亞群分析

簡單的概括：

1、先在FSC/SSC散點圖gate出淋巴細胞；
2、然後把淋巴細胞顯示到柱狀圖，gate出CD3陽性的（T細胞）；
3、再把T細胞顯示到散點圖，橫坐標，縱坐標分別為CD4和CD8。

㈤ T細胞亞群檢測有何臨床意義

檢測淋巴細胞亞群可以了解患者機體的免疫功能是否處於平衡狀態。某種細胞亞群所佔百分比過高或過低，都提示存在免疫功能的紊亂。

T淋巴細胞亞群在某些臨床疾病，如自身免疫性疾病、免疫缺陷性疾病、變態反應性疾病、病毒感染、惡性腫瘤等均有異常改變。因此，T淋巴細胞亞群的檢測對控制這些疾病的發生發展、了解疾病的機制、指導臨床治療都有極其重要的意義。

目前，最為快速和准確的T細胞亞群的檢測方法是流式細胞術熒游標記法，即用抗人T細胞表面分化抗原的單克隆抗體進行免疫熒游標記，通過流式細胞儀檢測T淋巴細胞各亞群的百分率或絕對計數。

(5)T淋巴細胞亞群檢測方法擴展閱讀：

T細胞亞群檢測臨床上常用來觀察的指標：

1、CD3＋：成熟T淋巴細胞的標志；

2、CD3＋CD4＋CD8－：T輔助／誘導細胞的標志；

3、CD3＋CD8＋CD4－：T抑制／殺傷細胞的標志；

4、CD25＋：白介素2受體的標的標志，即激活的T淋巴細胞。

健康人外周血T淋巴細胞亞群的參考范圍為：CD3＋：61％～85％；CD3＋CD4＋CD8－：28％～58％；CD3＋CD8＋CD4－：19％～48％；CD4＋／CD8＋：0.9～2.0。

㈥ 如何運用流式細胞儀進行T淋巴細胞亞群分析

簡單的概括：

1 先在FSC/SSC散點圖gate出淋巴細胞
2 然後把淋巴細胞顯示到柱狀圖，gate出CD3陽性的（T細胞）
3 再把T細胞顯示到散點圖，橫坐標，縱坐標分別為CD4和CD8

㈦ 簡述T細胞功能測定的常用方法

免疫學檢測方法可分為體液免疫和細胞免疫測定。1．體液免疫測定主要利用抗原與相應抗體在體外發生特異性結合，並在一些輔助因子參與下出現反應，從而用已知抗原或抗體來測知未知抗體或抗原。此外，尚包括檢測體液中的各種可溶性免疫分子，如補體、免疫球蛋白、循環復合物、溶菌酶等。2．細胞免疫測定法是根據各種免疫細胞（T細胞、B細胞、K細胞、NK細胞及巨噬細胞等）表面所具有的獨特標志和產生的細胞因子等，測定各種免疫細胞及其亞群的數量和功能，以幫助了解機體的細胞免疫水平。體液免疫檢測法1.凝集反應。顆粒性抗原（細菌或紅細胞等）與相應抗體特異性結合，在電解質參與下形成肉眼可見的凝集物，稱之為凝集反應。1）直接凝集反應。顆粒性抗原與相應抗體直接結合所產生的凝集現象，前者多為細胞表面的結構成分，如細菌或紅細胞的表面結構抗原。⑴玻片法：多用於抗原的定性檢測。⑵試管法：多用於抗體的定量檢測。2）間接凝集反應。將可溶性抗原吸附於載體顆粒（如乳膠顆粒、紅細胞等）的表面，稱之為致敏顆粒。當致敏顆粒與相應抗體結合，即可出現凝集現象。這個反應常用於測定細菌性抗體、病毒性抗體、鉤端螺旋體和梅毒螺旋體抗體及某些自身抗體（如抗核抗體、抗腎抗體、抗甲狀腺抗體等）。根據凝集反應的原理，還有間接凝集抑制試驗、反向間接凝集試驗、協同凝集試驗等。2．沉澱反應。可溶性抗原（外毒素、血清、細菌培養的濾液、組織浸出液等）與相應抗體特異性結合，在電解質參與下，形成沉澱物，稱為沉澱反應。沉澱反應的抗原多為多糖、類脂、蛋白質等。1）單向擴散試驗。這是一種抗原定量試驗，是可溶性抗原在含抗體的瓊脂介質中擴散的沉澱反應。此法常用於檢測血清免疫球蛋白和補體各成分的含量。2）雙向擴散試驗。這是可溶性抗原與抗體在瓊脂介質中相互擴散的沉澱反應。本法常用於定性試驗，如檢測血清免疫球蛋白、甲胎蛋白、乙型肝炎表面抗原等。單克隆抗體技術3）對流免疫電泳。對流電泳是一敏感快速的檢測方法，即在電場作用下的雙向免疫擴散。此法常用於檢測血清中的乙型肝炎表面抗原與甲胎蛋白等。3．中和試驗。特異性抗體可抑制相應抗原物質的活性，抗體使相應抗原的毒性或傳染性消失的反應為中和試驗。例如抗毒素中和外毒素的毒性，病毒的中和抗體可使病毒失去感染性等。診斷風濕熱的抗鏈球菌溶血毒素「O」試驗也為一種中和試驗。乙型溶血性鏈球菌能產生一種溶解人、兔紅細胞的溶血毒素「O」，該毒素的溶血毒性可被抗溶血毒素「O」抗體所中和而不出現溶血。試驗時將病人血清與溶血毒素「O」混合，作用一段時間後加入人紅細胞，紅細胞不被溶解為陽性反應，表示病人血清中存在抗溶血毒素「O」抗體。血清抗體效價達400單位以上時提示患者曾感染乙型溶血性鏈球菌，有助於風濕熱的診斷。4.免疫熒光法（熒光抗體法）。是應用熒光素染料（如異硫氰酸熒光黃等）來標記抗體，但不影響其活性，此種抗體稱熒光抗體。用已知種類的熒光抗體浸染待檢的含有抗原的細胞或組織切片，如有相應抗原存在，則抗原即與此種抗體發生特異性結合，形成復合物而粘著在細胞上，不易洗脫，在熒光顯微鏡下成為發出熒光的可見物，可達到診斷或定位的目的。包括直接法和間接法。5．酶聯免疫吸附試驗。本法的原理是利用酶（常用辣根過氧化物酶）標記的抗原或抗體，以測定被檢標本中有無相應的抗原或抗體。有間接法、雙抗體法、競爭法三種。6．溶血空斑試驗。7．免疫印跡技術。免疫印跡或免疫轉印技術(immunoblotting或Westernblot）是在Southern(1975)抗體抗原反應創建的DNA印跡術(Southernblotting）基礎上發展起來的新型免疫生化技術。細胞免疫檢測法近代免疫學廣泛採用了細胞生物學、免疫血清學、免疫標記、免疫組化等多方面技術，不斷發展和完善了一系列細胞免疫檢測技術，用於檢測各類免疫細胞的表面標志（包括抗原及受體）、細胞的活化、增殖、吞噬、殺傷功能、各種細胞因子的活性或含量等方面。這些技術為深入研究和認識機體免疫系統的生理、病理改變，闡明某些疾病的發病機制和臨床診治提供了有用的手段。隨著細胞免疫學的迅猛發展，時有新的細胞免疫檢測技術出現。二十一世紀初期，新發展的項目集中在對有關細胞因子以及細胞受體方面的檢測。1．淋巴細胞轉化試驗。人類淋巴細胞在體外與特異性抗原（如結核菌素）或非特異性有絲分裂原（如植物血凝素，PHA）等一起孵育，T細胞即被激活而向淋巴母細胞轉化。T細胞轉化過程可伴隨有DNA、RNA、蛋白質的合成增加，最後導致細胞分裂。在光學顯微鏡下可計數轉化後的淋巴母細胞數，也可用氚標記的胸腺嘧啶核苷(3H-TdR）摻入正在分裂的淋巴細胞，用液閃測定儀來確定摻入量以確定淋巴細胞轉化率。2000年開始出現一種不用同位素，又可用儀器測量的淋巴細胞增殖反應的檢查法，稱為MTT檢測法。MTT是一種甲氮唑鹽，它是細胞線粒體脫氫酶的底物，細胞內的酶可將MTT分解產生藍黑色成分。該產物的多少與活細胞數成正比，結果可用酶標儀(595nm）測量光密度，作為MTT法的指標。2．E-花環法。人類T細胞表面有羊細胞受體(CD2）能與羊紅細胞結合形成玫瑰花樣結構。即將分離液分離出的外周的單個核細胞懸液與羊紅細胞在體外混合，經37℃培養5～10分鍾後放4℃過夜，取細胞懸液計數，外周血淋巴細胞中約70%～80%淋巴細胞結成花環即為T細胞，此法可用來分離T細胞。3．T細胞亞群檢測。4．細胞毒試驗。Tc細胞、NK細胞、LAK細胞、TIL細胞等對其靶細胞有直接的細胞毒（殺傷）作用。抗體制備常用的檢測方法是51Cr（鉻）釋放法，將51Cr-Na2CrO4鹽水溶液與靶細胞（不同的細胞需不同的靶細胞，如NK細胞的靶細胞為K562），於37℃培養1小時左右，51Cr即進入靶細胞，與胞漿結合，洗去游離的51Cr後，即可得到51Cr標記的靶細胞，將待測細胞毒的細胞與51Cr標記的靶細胞混合（比例約為50:1或100:1），靶細胞殺傷越多，釋放到上清液中的游離51Cr就越多，且不能再被其他細胞吸收，用γ射線測量儀檢測上清液中的cpm值，可計算出待檢細胞殺傷活性高低。細胞毒的檢測對腫瘤免疫有較大價值。5．巨噬細胞吞噬功能的測定。將中葯(10%斑蝥）乙醇浸出液浸漬的濾紙（1cm2大小）置於受試者前臂屈側皮膚上，4～5小時後取下濾紙。48小時內皮膚局部可水泡，內含巨噬細胞。取水泡液0.5ml加雞紅細胞懸液0.01ml，37℃經30分鍾後作塗片、染色與鏡檢，計算吞噬百分率及每個巨噬細胞吞噬雞紅細胞的平均數。本試驗有助於腫瘤病情及療效的觀察。6．移動抑制試驗。致敏淋巴細胞與其特異性抗原再次接觸時，可以產生移動抑制因子(MIF）。這種因子可以抑制巨噬細胞和中性粒細胞的移動，使之定位於局部而增強其免疫作用。本試驗用來觀察受檢者淋巴細胞在體外受特異性抗原刺激後，有無MIF產生，以測定機體對某種抗原的特異性細胞免疫反應的功能。7．時間分辨熒光測量技術。時間分辨熒光測量技術(time-resolvedfluorometry,TrF）是一項新型的超微量非放射性分析技術。該技術的敏感性和特異性與放射性核素測量技術相仿，但無放射測量的弊端，故問世雖短，進展卻極為迅速，有取代放射測量之勢。8．細胞因子檢測技術。細胞因子的檢測，2005年起在中醫臨床及實驗室中已廣泛應用。9．細胞受體的檢測。受體是細胞表面標志之一，通過對受體的檢測，可以了解細胞的功能，並為某些疾病的發病機制提供一定的理論依據。

㈧ T淋巴細胞亞群的檢查過程

在前散射(FSC)和側散射(SSC)的二維Dot-plot圖中，劃出淋巴細胞區，然後對淋巴細胞作FITC和PE的熒光強度檢測，熒光Ⅰ(FL1)為FITC，濾過片為(530±10) nm帶通，熒光Ⅱ(FL2)為PE，濾光片為(575±10) nm帶通。數據分析時，在確定每次檢測陽性細胞百分率之前，根據isotype的非特異性熒光強度設定界限，以確定雙陰性、雙陽性和單陽性區。

㈨ t淋巴細胞亞群實驗的常用方法有哪些

T淋巴細胞又分為輔助性T淋巴細胞（CD3+CD4+）和抑制性/細胞毒性T淋巴細胞（CD3+CD8+）。在正常情況下，各群淋巴細胞的數目和相對比例都在一定的范圍內。 1. 總T（CD3+）淋巴細胞的絕對計數： 就如白細胞計數一樣，該細胞的絕對計數(個/ul)一般也

㈩ T淋巴細胞亞群檢測【類A】

[項目名稱]T淋巴細胞亞群測定

[參考值]
免疫熒光法、橋聯酶免疫檢測法、SPA花環法：
CD3+細胞陽性率71．5％±6．2％
CD4+細胞陽性率45．7％±5．3％
CD8+細胞陽性率27．9％±5．0％
CD4／cD8比值為1．66±0．33
流式細胞術：
CD3+細胞陽性率61％一85％
CD4+細胞陽性率28％～58％
CD8+細胞陽性率19％一48％
CD4/CD8比值為0．9--2.0

[臨床意義]T淋巴細胞亞群的測定是檢測機體細胞免疫功能的重要指標，且對某些疾病(如自身免疫病、免疫缺陷病、惡性腫瘤、血液病、變態反應性疾病等)的輔助診斷，分析發病機制，觀察療效及監測預後有重要意義。
1．CD4淋巴細胞減少：見於惡性腫瘤、遺傳性免疫缺陷病、艾滋病、應用免疫抑制劑的患者。
2．CD8淋巴細胞增多：見於自身免疫病，如SLE、慢性活動性肝炎、腫瘤及病毒感染等。
3．CD4／CD8比值異常：艾滋病患者比值顯著降低，多在0．5以下。比值降低的還有：SLE腎病、傳染性單核細胞增多症、急性巨細胞病毒感染、骨髓移植恢復期等。比值增高見於類風濕性關節炎、I型糖尿病等。此外還可用於監測器官移植的排斥反應，若移植後CD4/CD8較移植前明顯增加，則可能發生排異反應。