過氧化物檢測方法

1. 過氧化物酶活性測定的方法有哪些

實驗
48
過氧化物酶活性的測定（比色法）
過氧化物酶是植物體內普遍存在的、活性較高的一種酶，它與呼吸作用、光合作用及生長素的氧化等都有密切關系，在植物生長發育過程中，它的活性不斷發生變化，因此測量這種酶，可以反映某一時期植物體內代謝的變化。
一、原理
在有過氧化氫存在下，過氧化物酶能使愈創木酚氧化，生成茶褐色物質，該物質在
470
nm
處有最大吸收，可用分光光度計測量
470
nm
的吸光度變化測定過氧化物酶活性。
二、實驗材料、試劑與儀器設備
（一）實驗材料
馬鈴薯塊莖。
（二）試劑
1
．
100
mmol
／
L
磷酸緩沖液
pH6.0
（見附錄）。
2
．反應混合液：
100
mmol
／
L
磷酸緩沖液（
pH6.0
）
50
mL
於燒杯中，加入愈創木酚
28
μl
，於磁力攪拌器上加熱攪拌，直至愈創木酚溶解，待溶液冷卻後，加入
30
%
過氧化氫
19
μl
，混合均勻，保存於冰箱中。
（三）儀器設備
分光光度計，研缽，恆溫水浴鍋，
100
mL
容量瓶，吸管，
離心機。
三、實驗步驟
1
．稱取植物材料
1
g
，剪碎，放入研缽中，加適量的磷酸緩沖液研磨成勻漿，以
4000
r
／
min
離心
15
min
，上清液轉入
100
mL
容量瓶中，殘渣再用
5
mL
磷酸緩沖液提取一次，上清液並入容量瓶中，定容至刻度，貯於低溫下備用。
2
．取光徑
1
cm
比色杯
2
只，於
1
只中加入反應混合液
3
mL
和磷酸緩沖液
1mL
，作為對照，另
1
只中加入反應混合液
3
mL
和上述酶液
1mL
（如酶活性過高可稀釋之），立即開啟秒錶記錄時間，於分光光度計上測量波長
470
nm
下吸光度值，每隔
1min
讀數一次。
四、結果計算
以每分鍾吸光度變化值表示酶活性大小，即以
ΔA
470
/[min
•
g
（鮮重）
]
表示之。也可以用每
min
內
A
470
變化
0.01
為
1
個過氧化物酶活性單位（
u
）表示。
過氧化物酶活性
[u/
（
g
•
min
）
]=
式中：
Δ
A
470
——反應時間內吸光度的變化。
W
——植物鮮重，
g
。
V
T
——提取酶液總體積，
mL
。
V
s
——測定時取用酶液體積
,
mL
。
t
——反應時間，
min
。

2. 怎樣檢測過氧化物的有效氧含量

以火電廠大氣污染物排放標准為例（現行版本非2011年新標准）（脫硝設施一般也是用於大型火電廠的）標准中規定的排放濃度並非是實測污染物濃度需進行折算,其折算系數稱為過氧系數折算方法為X*Y/1.4,式中X為實測污染物濃度,Y為實測過氧系數計算方式為21/（21-x）、x為實測煙道中氧含量,標准中規定的過氧系數為1.4（即式中會除以1.4）,所以要測量氧含量,氧含量越高折算後污染物的濃度越大,當實測氧含量超過6%時則折算值會大於實測值. 因為標准中計算煙氣排放量是以標准干煙氣形態（簡稱標干態）計,是在273k°,1個大氣壓,絕對濕度為0的條件下的煙氣體積,而實測煙氣中污染物濃度是濕煙氣下的濃度需折算成干煙氣下的濃度.

3. 常用於檢測有機物中是否含有過氧化物的是ki澱粉

因為在空氣中長期存放乙醚時，醚中的碳氫鍵由於生成過氧鍵而形成有機過氧化聚合物，聚合物不穩定，受熱易分解，會引起爆炸等危險事故。因而必須檢驗是否有過氧化物。方法：將少量的醚用濕潤的澱粉碘化鉀試紙檢驗，試紙變藍，說明有過氧化物生成。去除：用硫酸亞鐵或亞硫酸鈉溶液除去希望對你有用

4. 過氧化值檢測國標

過氧化值表示油脂和脂肪酸等被氧化程度的一種指標。是1千克樣品中的活性氧含量，以過氧化物的毫摩爾數表示。用於說明樣品是否因已被氧化而變質。那些以油脂、脂肪為原料而製作的食品，通過檢測其過氧化值來判斷其質量和變質程度。
基本信息
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中文名
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過氧化值
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檢測意義
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一定程度上可以反映食品的質量
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作用
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判斷其質量和變質程度
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表示
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毫摩爾數
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釋義
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油脂和脂肪酸等被氧化程度的一種指標
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檢測方法
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滴定法和比色法
_
目錄 1簡介
2標准檢測方法 3快速檢測
4檢測意義 5超標危害
折疊編輯本段簡介
油脂氧化後生成過氧化物、醛、酮等。氧化能力較強，能將碘化鉀氧化成游離碘。可用硫代硫酸鈉來滴定。
過氧化值是衡量油脂酸敗程度，一般來說過氧化值越高其酸敗就越厲害!
因為油脂氧化酸敗產生的一些小分子物質在體內對人體產生不良的影響，如產生自由基，所以過氧化值太高的油對身體不好 。
折疊編輯本段標准檢測方法
在中國食品質量標准GB/T 5009.37-2003食用油衛生標准分析方法中，提及或介紹了對食用植物油中酸價、過氧化值、羥基價、游離棉酚(適用於棉籽油)、砷、苯並芘、黃麴黴毒素B1、殘留溶劑、鎳、非食用油、黃麴黴毒素的檢測方法和標准，其中涉及到過氧化值的主要有兩種檢測方法滴定法和比色法。
折疊滴定法
試劑
1、飽和碘化鉀溶液:稱取14g碘化鉀，加10ml水溶解，必要時微熱加速溶解，冷卻後貯於棕色瓶中。
2、三氯甲烷-冰乙酸混合液:量取40ml三氯甲烷，加60ml冰乙酸，混勻。
3、0.02mol/L硫代硫酸鈉標准溶液:稱取5g硫代硫酸鈉(Na2S2O3 ·5H2O)(或3g無水硫代硫酸鈉)，溶於1000ml水中，緩緩煮沸10分鍾，冷卻。放置兩周後過濾備用。
4、10g/L 澱粉指示劑:稱取可溶性澱粉0.50g，加入少許水調成糊狀倒入50ml沸水中調勻，煮沸，臨用時現配。
測定步驟
精確稱取2.00-3.00g混勻的樣品 ，置於250ml碘量瓶中，加30ml三氯甲烷-冰乙酸混合液(因為純品對光敏感，遇光照會與空氣中的氧作用，逐漸分解而生成劇毒的光氣(碳醯氯)和氯化氫。可加入0.6%~1%的乙醇作穩定劑。能與乙醇、苯、乙醚、石油醚、四氯化碳、二硫化碳和油類等混溶)，使樣品完全溶解;加入1.00ml飽和碘化鉀溶液。緊密塞好瓶塞，並輕輕振搖0.5min，然後在暗處放置5min，取出加100ml水，搖勻。立即用硫代硫酸鈉標准溶液滴定，至淡黃色時，加1ml澱粉指示劑，繼續滴定至藍色消失為終點，取相同量三氯甲烷-冰乙酸混合液、碘化鉀溶液、水，按同一方法，做試劑空白試驗。
測定結果的計算與分析
1、計算:
X=[(V-V0)×N×0.1269]/m
式中:X-樣品的過氧化值，%。
V-樣品消耗硫代硫酸鈉溶液的體積，ml。
V0-空白消耗硫代硫酸鈉溶液的體積，ml。
N-硫代硫酸鈉標准溶液的麾爾濃度，mol/L。
0.1269-1N硫代硫酸鈉1ml相當於碘的克數。
2、分析:
油脂新鮮，其過氧化值不應大於0.15%。
折疊比色法
原理:試樣用三氯甲烷-甲醇混合溶劑溶解，試樣中的過氧化物將二價鐵離子氧化成三價鐵離子，三價鐵離子與硫氰酸鹽反應生成橙紅色硫氰酸鐵配合物，在波長500nm處測定吸光度，與標准系列比較定量。
試劑:鹽酸溶液、過氧化氫、三氯甲烷+甲醇混合溶劑、氯化亞鐵溶液、硫氰酸鉀溶液、鐵標准儲備溶液(1.0g/L)、鐵標准使用溶液(0.01g/L)。
儀器:分光光度計，10mL具塞玻璃比色管。
分析步驟
試樣溶液的制備:精密稱取約0.01g~1.0g試樣(准確至刻度0.0001g)於10mL容量瓶內，加三氯甲烷+甲醇(7+3)混合溶劑溶解並稀釋至刻度，混勻。
分別精密吸取鐵標准使用溶液(10ug/mL)0,0.2,0.5,1.0,2.0,3.0,4.0mL(各自相當於鐵濃度0,2.0,5.0,10.0,20.0,30.0,40.0ug)於乾燥的10mL比色管中，用三氯甲烷+甲醇(7+3)混合溶劑稀釋至刻度，混勻。加1滴(約0.05mL)硫氰酸鉀溶液(300g/L)，混勻。室溫(10℃-35℃)下准確放置5min後，移入25px比色皿中，以三氯甲烷+甲醇(7+3)混合溶劑為參比，於波長500nm處測定吸光度，以標准各點吸光度減去零管吸光度後繪制標准曲線或計算直線回歸方程。
試樣測定:精密吸取1.0mL試樣溶液於乾燥的10mL比色管內，加1滴(約0.05mL)氯化亞鐵(3.5g/L)溶液，用三氯甲烷+甲醇(7+3)混合溶劑稀釋至刻度，混勻。以下按試樣溶液制備中自"加1滴(約0.05mL)硫氰酸鉀溶液(300g/L)??"起依法操作。試樣吸光度減去零管吸光度後與曲線比較或代入回歸方程求得含量。

5. 長久存放的乙醚使用前,為何要檢查是否會含有過氧化物如何除去過氧化物

因為在空氣中長期存放乙醚時，醚中的碳氫鍵由於生成過氧鍵而形成有機過氧化聚合物，聚合物不穩定，受熱易分解，會引起爆炸等危險事故。因而必須檢驗是否有過氧化物。

方法：將少量的醚用濕潤的澱粉碘化鉀試紙檢驗，試紙變藍，說明有過氧化物生成。

去除：用硫酸亞鐵或亞硫酸鈉溶液除去。

當乙醚中含有過氧化物時，在蒸發後所分離殘留的過氧化物加熱到100℃以上時能引起強烈爆炸； 這些過氧化物可加5%硫酸亞鐵水溶液振搖除去。與無水硝酸、濃硫酸和濃硝酸的混合物反應也會發生猛烈爆炸。溶於低碳醇、苯、氯仿、石油醚和油類，微溶於水。

(5)過氧化物檢測方法擴展閱讀：

過氧化物分為無機過氧化物和有機過氧化物。過氧化物在紡織業，漂白工業里有重要的作用。過氧化物包括金屬過氧化物、過氧化氫、過氧酸鹽和有機過氧化物。周期表中ⅠA、ⅡA、ⅢB、ⅣB族元素以及某些過渡元素（如銅、銀、汞)能形成金屬過氧化物。

活潑金屬(如鈉、鉀）在氧氣中燃燒。(註：金屬鋰是活潑金屬，但在氧氣中燃燒只生成氧化鋰。將活潑金屬（如鉀）溶解在液氨中，通入氧氣。過氧化氫與鹽作用。金屬過氧化物都是強氧化劑，加熱時釋放出氧氣，與稀酸作用，產生過水。