1. 如何實現快速檢測及有效控制沙門氏菌
沙門氏菌(Salmonella)是一種革蘭氏陰性腸桿菌, 也是腸桿菌科中最主要的食源性致病菌。據有關資料統計由沙門氏菌引起的疾病病例在病原菌食源性疾病病例中所佔比例已超過三分之二，2007年發生的「 花生醬事件」以及 2008 年發生的「 西紅柿 事件」等[1]沙門氏菌中毒事件的發生也使得食品中沙門氏菌的檢測受到人們的普遍關注。本文主要是對食品中沙門氏菌的傳統檢測方法以及後續建立的以分子生物學、免疫學、生物感測器和電化學為基礎的快速檢測方法進行了系統的綜述，旨在為該致病菌的檢測方法的研究應用提供一定的參考。
1、 傳統的檢測方法（國標法）
目前, 我國對食品中沙門氏菌的檢測大多採用GB 4789.4-2010《食品微生物學檢驗 沙門氏菌檢驗》對食品樣品進行檢測，這種傳統的培養方法可分為前增菌、增菌、分離培養、生化試驗和血清學鑒定等步驟進行。雖然傳統培養法可靠性高，但是其操作繁瑣且耗時費力，並不能滿足食品快速檢測的要求。
2、分子生物學檢測方法
2.1聚合酶鏈反應技術
PCR技術是一項敏感性高、特異性強且快速准確的微生物檢測技術，也被許多學者用於對食品中沙門氏菌進行檢測和研究。汪琦等[2]就採用傳統培養方法 、BAX(r)方法和PCR 方法 3 種方法對沙門氏菌進行檢測。在常規PCR的基礎上宋東曉[3]建立了檢測食品中沙門氏菌的新的PCR方法——多重PCR。此外其他新的PCR技術也運用於食品中沙門氏菌的檢測，鍾偉軍[4]通過對熒光定量PCR反應體系和反應條件的摸索,建立了檢測沙門氏菌的核酸熒光定量PCR方法，此研究為食品中沙門氏菌快速檢測試劑盒的研製打下了良好的基礎。
2.2核酸探針技術
核酸探針技術是根據核苷酸鹼基互補的原理,在已變異的DNA樣品中加入用同位素等標記的DNA特異片段，在一定條件下兩片段進行雜交從而達到檢測DNA的目的。此技術不僅簡便、快速而且敏感性高、特異性強，已用於食品中沙門氏菌的檢測。Almeida等[5]通過建立一種新穎的肽核酸探針結合熒光原位雜交方法對血液、糞便、水以及嬰兒奶粉樣品中沙門氏菌進行了檢測，准確度高達 100%。
2.3基因晶元技術
基因晶元技術是利用已知核酸序列的探針與靶核苷酸序列雜交，然後通過信號檢測對其進行定性與定量分析，在沙門氏菌等各種致病菌的分析檢測中有很好的應用前景。饒寶等[6]通過建立檢測致病菌的基因晶元檢測方法，設計了通用引物和特異性探針: 沙門氏菌探針、大腸桿菌探針和金黃色葡萄球菌探針,實現了同時檢測並區分沙門氏菌、大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的目的。祝儒剛等[7]運用多重 PCR 結合基因晶元技術建立了檢測肉及肉製品中的大腸埃希氏菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、志賀氏菌和單核細胞增生李斯特菌等5種食源性致病菌的快速檢驗方法。
2.4噬菌體裂解技術
噬菌體有特異性裂解細菌的作用。張碧波等學者利用此技術進行沙門氏菌
快速檢測，結果和其他學者相同，據此得出特異性噬菌體可以檢測出沙門氏菌，此法方便可行。姜琴等[8]利用噬菌體裂解對150份食品樣品進行快速檢測，結果說明腸桿菌科噬菌體組合對培養10h的沙門氏菌敏感性和特異性較高，這對實現沙門氏菌實時、快速而准確的檢測有重要意義。
2.5環介導等溫擴增技術（LAMP）
環介導等溫擴增技術是2000年Notomi等開發的一種新的恆溫核酸擴增方法,此方法的特點是特異性強、靈敏度高且簡單、快速,適合對大規模樣品的快速檢測[9]。李佳桐[10]通過實驗建立了沙門氏菌的LAMP檢測方法,並將此方法與常規PCR進行比較,結果顯示：LAMP方法對沙門氏菌的檢測恆溫65℃下只需要40min,只擴增沙門氏菌,不會擴增其他革蘭氏陰性菌,最低可檢出濃度10cfu/mL,比常規PCR的最低檢出濃度高1個數量級,通過添加熒光染料SYBR Green Ⅰ,能夠快速簡便的觀察檢測出綠色的陽性結果十分明顯的區別於橙色的陰性結果。
3、免疫學方法
3.1酶聯免疫吸附技術
酶聯免疫吸附法簡稱 ELISA， ,此技術敏感性高 ,不需特殊設備 ,結果觀察簡便，早在1977年就有報道將酶聯免疫吸附法用於食品中沙門氏菌的檢測。伍燕華等[11]設計捕獲抗體和檢測抗體，建立快速檢測沙門氏菌雙抗夾心ELISA方法對食品中的沙門氏菌進行檢測。張帥等[12]建立雙抗夾心ELISA體系，檢測模擬污染肉樣中沙門氏菌,其檢測限為800CFU/g，等均並與其他血清型沙門氏菌、單增李斯特菌等菌均無交叉反應,特異性良好。
3.2免疫熒游標記技術
免疫熒游標記技術是根據抗原抗體的特異性反應，將熒光素標記在已知抗原(或抗體)上,與特異抗體(或抗原)結合後產生熒光，可用來定位抗原或抗體、並通過定量分析，確定測定含量。葉明強[13]基於納米免疫磁珠富集,免疫量子點標記,建立了一種食品中沙門氏菌的含量進行快速檢測的方法，研究出了一種新型的免疫熒光食源性致病菌檢測技術。
3.3斑點免疫金滲濾法
免疫膠體金技術是以膠體金作為標記物結合免疫原理的一種應用於抗原抗體的新型技術，該技術運用最廣泛的就是斑點免疫金滲濾法（DIGFA）。孔繁德等及曹春梅等都利用此技術對沙門氏菌的快速檢測進行了研究，曹春梅等[14]是利用斑點免疫金滲濾法對沙門氏菌O9抗原進行了研究，結果表明此法簡單、快速，適合推廣運用；孔繁德等[15]是通過建立直接檢測沙門氏菌的斑點免疫金滲濾法檢測試紙盒對該菌進行了研究。
3.4免疫磁性分離技術
免疫磁珠分離技術是將特定病原體的單抗或多抗與磁珠微球偶聯，並通過抗原抗體反應形成磁珠，在外加磁場作用下磁珠會發生定向移動，從而達到分離目標病原體的作用。食品樣品中致病菌含量很少，常規的方法是很難從中分離出來的，藉助免疫磁性分離技術可以達到快速分離的目的。王海明等[16]應用磁免疫技術建立快速檢測食源性沙門氏菌的方法，結果表明此方法能對食品基質中的目標菌進行快速有效的富集,其檢測限<10cfu/25g,檢測周期約為40小時。胡霏[17]也通過實驗針對鼠傷寒沙門氏菌建立免疫磁分離技術結合熒光層析技術的快速檢測方法。
4、生物感測器技術
生物感測器是利用一些生物活性物質如酶 、多酶體系 、抗體等做為敏感器件，然後配以適當的信號傳導器所構成的分析檢測的工具。我國學者已採用此法對沙門氏菌的抗原、抗體的免疫吸附進行檢測，並已用於快速檢測食品中致病的沙門氏菌，而僅需 1h 完成，達到了快速的檢測目的。寧毅[18]在對碳納米管性質研究的基礎上,結合分子探針構建了碳納米管生物感測器，並將其用於沙門氏菌的檢測，結果顯示所構建的感測器靈敏度高、特異性強、穩定性好。
5、電阻抗技術
電阻抗法是近年發展起來的一項生物學技術，因為具有檢測速度快、靈敏度高、准確性好等優點，目前此法已用於食品中沙門氏菌檢測檢驗並已通過美國公職分析化學協會(AOAC)認可。陳廣全等[19]建立了電阻抗法快速檢測食品中沙門氏菌的方法，並將其與常規培養法進行比較，對食品中的沙門氏菌屬進行檢測,結果表明電阻抗法比傳統培養法更加快速、可靠。
6、總結
綜上所述，沙門氏菌檢驗技術正從傳統的培養方法向分子檢測方法改進，並向儀器化、標准化、自動化方向發展，並且食品安全、致病菌等問題對人類健康以及生活環境都造成了嚴重威脅，加強沙門氏菌檢測勢在必行。目前沙門氏菌快速檢測技術大多具有檢測迅速、靈敏度高、特異性強等特點，此外這些方法還具有各自的優點和局限性，在未來發展過程中需要我們不斷改進和創新，建立更成熟可靠、方便快捷的沙門氏菌快速檢測技術。
2. 沙門菌的實驗室診斷程序是什麼
實驗室檢驗程序如下：
1。檢驗程序
直接鏡檢 p-標本採取與處理一增菌培養被檢材料血清學檢查（凝集反應等）
2。檢驗方法
(1)標本採取與處理可採取糞尿、血液、水源、禽蛋、食 品等作為標本送檢。採取標本如在疾病後期或用過抗菌葯物 之後，糞中沙門氏菌的含量銳減，需用增菌培養基（一般用
0。
5%亞硒酸鹽肉湯）接種1克左右的糞便，37℃過夜後再分 離。尿經離心沉澱後，取沉澱物直接分離或予以增菌法同 糞便。食物和食物中毒標本經用前增菌或選擇性增菌，再分 離培養。對血清學試驗呈陽性的家禽或其他被檢禽須先作剖 檢，取臟器、心血、心包液、卵巢和輸卵管或其他病變組織，直 接在S。
S或麥康凱瓊脂平板上，塗布分離培養。
(2)直接鏡檢標本直接塗片染色鏡檢,沙門氏菌為革 蘭氏染色陰性、無夾膜和鞭毛、有菌毛的直桿狀菌。大多數細 菌為周毛菌，具有活潑運動性，但雞白痢沙門氏菌和雞傷寒沙 門氏菌恆定地無運動力。
(3)分離培養為了提高陽性檢出率和血清學鑒定時減 少誘導手續，應進行增菌或選擇性增菌。
同血清型沙門氏菌 在各種選擇性增菌培養中的生長能力並不一致，可用幾種選 擇性增菌方法。分離沙門氏菌一般常用瓊脂，但亞硫酸 鉍瓊脂（BSA)的分離率高於S。 S瓊脂。但BSA不適宜於分但必須與當地致病型對口，效果才好。致病性大腸桿菌，大多 能合成K88ab或K88'這種細胞壁抗原包被在大腸桿菌表面, 使大腸桿菌粘附於小腸黏膜引起下痢。
致病性大腸桿菌還能產生L℃毒素（不耐熱）、S℃毒素 (能耐熱）和溶血毒素（能引發仔豬水腫病或黃痢，死亡率可 高達100%)。日本曾因0157型大腸桿菌造成人的嚴重腹瀉 症。仔豬白痢主要發生於7 ~30日齡仔豬，多由08、1<88或 060、0„5等血清型大腸桿菌引起。
犢白痢主要發生於10日齡 以內犢牛。大腸桿菌、類大腸桿菌、變形桿菌、綠膿桿菌均可 致病,分腸型、敗血型、腸毒血型三型。羔羊3 ~8周易患「羔 羊大腸桿菌病」，冬、春多發，由那波里大腸桿菌引起。
幼禽（雞、鴨、鵝、火雞、肉鴿）都能發病，作為腸道中的常 在菌，還能通過種蛋傳染。
以2 ~4周齡最易感。各種應激因 素如衛生不良，飼養管理不當，氣候突變，營養缺乏，禽舍潮 濕、擁擠或其他傳染病（法氏囊炎、雞新城疫）爆發時,易誘發 大腸桿菌病。
3. 關於沙門氏菌的檢測
沙門氏菌屬腸道細菌科，包括那些引起食物中毒、導致腸胃炎、傷寒和副傷寒的細菌。能引起食物傳播性疾病，近年來，已經成為最常見的食物中毒原因。腸炎沙門氏菌感染通常源於奶製品、禽產品和肉產品；雞肉和雞蛋尤其是高風險食品。沙門氏菌感染的症狀通常是腸胃出現問題，包括惡心、腹部絞痛、嘔吐和腹瀉，一般最多持續7天。在免疫力低下的人群中，如果不及時服用抗生素類葯品，沙門氏菌感染將導致生命危險。沙門氏菌測試片（FilmplateTM Salmonella BS205）含有選擇性培養基、沙門氏菌特有辛酯酶的顯色指示劑和高分子吸水凝膠，運用微生物測試片專有技術，做成一次性快速檢驗產品，一步培養15～24h就可確認是否帶有沙門氏菌，非常適合各級檢驗部門和食品企業使用。本產品適用於肉和肉產品、蛋及蛋製品、冷飲等的快速檢測。
三方圓沙門氏菌測試片操作方法:
1、樣品處理：取樣品25mL（g）放入含有225mL滅菌磷酸緩沖液稀釋液（或生理鹽水）的取樣罐或均質杯內，製成1:10的樣品勻液。
2、接種：將沙門氏菌測試片（BS205）置於平坦實驗檯面，揭開上層膜，用無菌吸管吸取1mL樣品勻液慢慢均勻地滴加到紙片上，然後再將上層膜緩慢蓋下，靜置10s左右，使培養基凝固，每個樣品接種兩片。同時做一片空白陰性對照。
3、培養： 將測試片疊在一起放回原自封袋中並封口。透明面朝上水平置於恆溫培養箱內，堆疊片數不超過12片。培養溫度為36℃±1℃，培養15～24h。
結果判讀:
對測試片進行觀察，呈紫紅色的菌落為沙門氏菌；呈藍色的菌落為其他菌群。出現陽性菌落的樣本，最好用其他更為可靠的方法進行驗證，沒有條件的至少要再取樣重復檢驗一次。
4. 美正生物的沙門氏菌血清型分子鑒定試劑盒的檢測步驟
美正生物的沙門氏菌血清型分子鑒定試劑盒的檢測步驟：
1、核酸提取
加熱法：刮取至少10個菌落，懸浮於100μL的無菌水中，漩渦震盪10s（如果菌落未能均勻分散，可適當延長震盪時間），95℃或沸水浴5min，冷卻至室溫，12000rpm離心5min，吸取上清。
試劑盒法：可使用商品化的試劑盒提取沙門氏菌的基因組DNA。
2、反應體系配置
從試劑盒中取出預混液，充分融化，渦旋後短暫離心，取22.5μL置於PCR管或PCR板中，然後各取模板2.5μL分別加入PCR管或PCR板中（每種模板要使用十二種預混液），蓋好管蓋或板膜，短暫離心，立即進行PCR擴增反應。
3、PCR擴增
PCR管或PCR板置於PCR儀上，推薦反應程序設定如下：反應體系為25μL，在第二步每個循環60℃時檢測熒光信號，檢測通道選擇FAM、HEX（VIC）、CY5。
5. 沙門氏菌的檢測標准
太多，DB標准設有列出，只列了國標和部分部標
GB/T 13091-2018 飼料中沙門氏菌的測定
GB/T 14926.1-2001 實驗動物 沙門菌檢測方法
GB/T 17999.8-2008 SPF雞 微生物學監測 第8部分：SPF雞 雞白痢沙門氏菌檢驗
GB/T 22429-2008 食品中沙門氏菌、腸出血性大腸埃希氏菌O157及單核細胞增生李斯特氏菌的快速篩選檢驗 酶聯免疫法
GB/T 28642-2012 飼料中沙門氏菌的快速檢測方法 聚合酶鏈式反應（PCR）法
GB 4789.31-2013 食品安全國家標准 食品微生物學檢驗 沙門氏菌、志賀氏菌和致瀉大腸埃希氏菌的腸桿菌科噬菌體診斷檢驗
GB 4789.4-2016 食品安全國家標准 食品微生物學檢驗 沙門氏菌檢驗
GSB 11-2275-2017 奶粉中沙門氏菌定性標准樣品
GSB 11-3354-2016 腸沙門氏菌腸亞種標准樣品
NY/T 550-2002 動物和動物產品沙門氏菌檢測方法
SN/T 1059.6-2016 出口食品中沙門氏菌屬檢測方法 第6部分：垂直膜過濾法
SN/T 1059.7-2010 進出口食品中沙門氏菌檢測方法 實時熒光PCR法
SN/T 1169-2002 猴沙門氏菌檢驗操作規程
SN/T 1382-2011 馬流產沙門氏菌凝集試驗方法
SN/T 2206.1-2016 化妝品微生物檢驗方法 第1部分：沙門氏菌
SN/T 3306.15-2018 國境口岸環介導恆溫擴增（LAMP）檢測方法 第15部分：沙門氏菌
SN/T 4274-2015 國境口岸沙門氏菌、志賀氏菌、大腸桿菌O157:H7的三重熒光PCR檢測方法
SN/T 4525.1-2016 出口食品中致病菌的分子分型 MLST方法 第1部分：沙門氏菌
SN/T 4545.1-2016 商品化試劑盒檢測方法 沙門氏菌 方法一
SN/T 4545.2-2016 商品化試劑盒檢測方法 沙門氏菌 方法二
SN/T 4624.7-2016 入境環保用微生物菌劑檢測方法 第7部分：沙門氏菌
6. PCR法檢測沙門氏菌的操作過程
首先你要有檢測沙門氏菌的特異性引物！
然後將PCR的各個組分混合到一起，根據引物調整好退火溫度和延伸時間25-30個循環後電泳看結果
7. 沙門氏菌快速檢測
用沙門氏菌顯色培養基，檢測原理：蛋白腖和酵母膏粉提供碳氮源和微量元素;氯化鈉可維持均衡的滲透壓;瓊脂是培養基的凝固劑;膽鹽抑製革蘭氏陽性菌;選擇性添加劑增強培養基的抑制雜菌的能力;混合色素分別與沙門氏菌和大腸菌群所對應的酶發生特異性反應，水解底物，釋放出顯色基團，在淡黃色平板上沙門氏菌產生品紅色的菌落。資料來自環凱官網，可以上去具體了解一下。