㈠ 酶底物法總大腸菌群超過24小時結果有影響嗎
mpn
為最大可能數(most
probable
number)的簡稱。這種方法，對樣品進行連續系列進行稀釋，加入培養基進行培養，從規定的反應呈陽性管數的出現率，用概率論來推算樣品中菌數最近似的數值。
㈡ 利用水生生物監測和評價水體污染的兩種方法！！！急，在線等！
2.3 水污染生物監測的方法
2.3.1利用指示生物在水體中的出現或消失、數量的多少來監測水質
許木啟 [3]利用白洋淀水體中浮游動物群落優勢種的變化來判斷水體的污染程度和自凈程度。結果表明，府河—白洋淀水體從上游至下游，浮游動物耐污種類逐漸減少，廣布型種類逐漸出現較多，在下游許多正常水體出現的種類均有分布；同時，原生動物由上游的鞭毛蟲至中游出現纖毛蟲，在下游則發現很多一般分布在清潔型水體的種類，表明府河—白洋淀水體從上游到下游水體的污染程度不斷減輕，水體具有明顯而穩定的自凈功能。
2.3.2利用水生生物群落結構的變化來監測水質
蔣昭鳳等 [4]用底棲動物的變化趨勢評價湘江水質污染，結果發現湘江幹流底棲大型無脊椎動物種類數和物種的多樣性指數從上游到下游呈減少趨勢，表明毒殺生物的有毒物質對湘江的污染較為明顯，並且可根據湘江幹流各斷面種類數的減少程度判斷出各斷面的污染程度；同時也觀察到，隨著時間的推移，底棲大型無脊椎動物種類數和多樣性指數也呈減少趨勢，說明這種有毒污染仍在發展之中。
2.3.3水污染的生物測試
水污染的生物測試是利用水生生物受到污染物質的毒害所產生的生理機能的變化，測試水質污染狀況。
Belding [5]根據魚的呼吸變化指示有毒環境，在有污染物存在的情況下，魚腮呼吸加快且無規律。德國[6]從1977年開始研究利用魚的正趨流性開展生物監測，在下游設強光區或適度電擊，控制健康魚向下游的活動；或間歇性提高水流速度，迫使魚反應。如果魚不能維持在上游的位置，則表明污染產生了危害。
3 國內外水污染生物監測的研究進展
近幾年來，應用生物監測環境技術的研究廣泛開展，出現了一些新方法、新材料和新的監測物，提高了生物檢測的靈敏性。
3.1 水污染生物監測及其檢測的新方法
3.1.1 利用遺傳毒理學監測水體污染
環境污染物質對人類及其它生物危害最為嚴重的問題是對細胞遺傳物質造成的損害。因此，近20年來環境生物檢測技術的研究和應用，尤其是細胞微核技術和四分體微核技術在動植物以及人類染色體受外界理化因子的損傷等方面的分析、誘變劑的測試篩選，以及應用於環境監測的研究得到了廣泛的發展[7]。微核在生物細胞內的形成途徑以及與染色體畸變的相關性早已被人們所認識，用微核測定法替代染色體畸變方法來監測環境污染物對生物遺傳物質的損傷具有簡便、快速、靈敏度高等優點。最常用的蠶豆根尖細胞微核試驗技術是一種以染色體損傷及紡錘絲毒性等為測試終點的植物微核監測方法，該技術自1982年由Degrassi等建立以來，在環境誘變和致癌因子的檢測研究中，特別是在水質污染和致突變劑檢測研究中得到了廣泛應用[8]。
吳甘霖 [9]在利用水花生根尖微核技術（MCN）對馬鞍山市廢水的監測研究中，發現利用水花生根尖微核可作為監測水體污染的新材料。其根尖細胞微核率 MCN（‰），不僅可用於監測不同廢水的污染程度，而且由於該植物長期生活在污染水體中，還能反映不同廢水的污染物富集程度及現狀。當外界環境中存在一定濃度的致突變物時，可使細胞發生損傷，從而使微核細胞率上升。另外微核細胞率的上升，提示環境中存在有致突變物，即受試水樣中含有能打斷DNA分子的誘變劑或能打斷紡錘絲的紡錘絲毒劑，從而表現出遺傳毒性。
單細胞凝膠電泳（SCGE），即彗星試驗也是一種通過檢測DNA鏈損傷來判別遺傳毒性的技術。它比微核試驗更有益，因為環境中的遺傳毒物濃度一般很低，而彗星試驗檢測低濃度遺傳毒物具有高度靈敏性，所研究的細胞不需要處於有絲分裂期。同時，這種技術只需要少量細胞。目前它已經被用於檢測哺乳動物、蚯蚓、一些高等植物、魚類、兩棲動物以及海洋無脊椎動物的細胞[11]。Mirjana Pavlica等 [10]用暴露在五氯苯酚（PCP）中的淡水蚌類（Dreissena polymorpha Pallas）血細胞進行彗星試驗，觀察血細胞中DNA損傷程度。在進行實驗室實驗和原位實驗後，發現高濃度的PCP(80g/L)會引起血細胞中DNA斷裂，表明用彗星試驗檢測DNA損傷能夠監測水體中PCP污染。
SOS顯色法[12]是國內在20世紀80年代發展起來的一種遺傳毒性檢測新方法，具有快速、准確、靈敏及假陽性率低的特點，被廣泛用於遺傳毒性的測定中。其原理是：在DNA分子受到外因引起的大范圍損傷、其復制又受到抑制的情況下，會導致一種容易發生錯誤的修復。所有這些在遺傳毒物處理後大腸桿菌中出現的一系列反應統稱為SOS應答。SOS顯色法有許多優於Ames的特點：（1）快速、簡便，測定過程只需7h；（2）靈敏，被處理的細胞全產生或不產生SOS反應，用分光光度法測定β-ONPG(鄰硝基苯β-D-半乳糖苷)分解產物非常靈敏；（3）准確，SOS顯色法測定的是遺傳毒物對細胞原發的直接反應，其陽性結果十分可信，而Ames試驗的假陽性率較高。因此，SOS顯色法已引起人們的密切關注，成為一種值得推廣的水質監測評價方法。
3.1.2 微型生物監測（PFU法）
以前生物監測的研究重點多放在分類和結構方面。然而，生物系統的結構變化並非總與生物系統的其它變化相關聯，僅以某個種類、某個種群構成的生物反應系統的變化來評價一個水生生態系統，其偏差較大。因此，為掌握水生生態系統對環境污染的完整反應，要求我們在生物系統（細胞、組織、個體、種群、群落、生態系統）中選擇超出單一種類水平即群落或生態系統來作為生物監測的生物反應系統，並對該系統的結構和功能變化均進行研究。美國Cains創建了用聚氨酯泡沫塑料塊（簡寫為PFU）測定微型生物群落的結構和功能參數，進而進行監測預報的新方法。中科院水生所沈韞芬研究員把PFU應用到生物監測中，並使PFU法成為我國生物監測的一種標准方法[13]。PFU法適用於原生動物、藻類對水質的檢測。此方法可以鑒別水體是有機污染還是毒性污染。
尹福祥、楊立輝 [13]應用PFU法對某印染廠印染廢水處理設施的凈化效能進行了監測。結果表明，微型生物群落的結構參數和功能參數均較好地反映了印染廢水的凈化效果。與經典的生物監測方法相比，PFU法由單一監測結構(或功能 )參數轉變為結構參數（種類組成、優勢種）和功能參數（群集參數）同時監測，提高了生物監測的信息捕獲能力，並使監測信息能更完整、准確、精密地評價環境狀況。PFU法可快速、准確地監測水質的突變，通過1d的試驗結果就能預測、預報受納系統環境質量的狀態及其變化過程。某樣點的群集曲線突然大幅下降，說明該點的水質發生了突變，應調查有無事故性排放。
由於潮汐流和環流的影響，PFU法用於海水水質監測的有效性不如在淡水中監測。Kuidong Xu等 [14]用一種改良的PFU法—瓶裝聚氨酯泡沫塑料塊（BPFU）法進行海水的生物監測。BPFU法是將2塊聚氨酯泡沫塑料塊裝入1個圓柱形塑料瓶中，塑料瓶有4道裂縫，用於保護聚氨酯泡沫塑料塊不受粗糙條件的干擾，同時便於微生物群落進入聚氨酯泡沫塑料塊，達到平衡。BPFU法比傳統的PFU法在海水生物監測中的優越性體現在：⑴取樣穩定；⑵海水生物評價結構和功能的精確性；⑶定量比較時可以保持水體積的穩定性。實驗結果表明，用BPFU法進行海水生物監測比PFU法更加有效。通過BPFU法聚集的物種數量隨污染物強度的增大而減少，減少程度大於PFU法。由BPFU法計算出的多樣性指數同樣也高於PFU法。
3.1.3 應用分子生態毒理學方法監測水體污染
隨著社會的進步，生物技術也在不斷地發展，在此基礎上逐步形成了分子生態毒理學。分子生態毒理學採用現代分子生物學方法與技術，研究污染物及代謝產物與細胞內大分子，包括蛋白質、核酸、酶的相互作用，找出作用的靶位或靶分子，並揭示其作用機理，從而能對在個體、種群、群落或生態系統水平上的影響作出預報，具有很大的預測價值。目前最常用的是把腺三磷酶作為生物學標志，方法是測定體內三磷酸腺苷酶ATPase的活性，並以其活性強弱作為多種污染物脅迫的指標[15]。
Petrovi S等 [16]通過測定貽貝 (Mytilus galloprovincialis Lam.)消化腺上皮細胞中的溶酶體（Lysosome）膜的穩定性和金屬硫蛋白（Metallothionein,MT）的含量來監測水體中有毒物質。貽貝消化腺上皮細胞中的溶酶體是有毒物質積累滯留的主要場所，同時它在排泄有毒污染物質的過程中起著關鍵作用。溶酶體中的有毒物質會削弱膜的穩定性，減少產生水解作用的溶酶體酶向細胞溶質中擴散。MT是動物對周圍環境中過量金屬的一種防禦機制，能夠阻止有毒物質及其代謝產物產生的細胞毒素對有機體產生影響。一般來說，監測MT的方法比監測組織中金屬總量更可行，因為這種方法可以將胞內具有顯著毒理效應的金屬結合片段與不可利用的金屬絡合物區分出來[17]。因此貽貝消化腺上皮細胞中的溶酶體膜的穩定性和金屬硫蛋白的含量的測定可以作為水體環境有毒物質變化的早期警報。
近年來，生物體內膽鹼脂酶活性的測定已經成為海水和淡水水體污染的一種監測工具。由於環境中的有機磷農葯和氨基甲酸鹽殺蟲劑與底物乙醯膽鹼的分子形狀類似，能與酶酯基的活性中心發生不可逆的鍵合從而抑制酶活性，因此它可以用來評價有機體在殺蟲劑和毒害神經的污染物質（如重金屬）中的暴露程度。Mohamed Dellali等 [18]用蛤和貽貝監測瀉湖的水體污染，結果表明，蛤和貽貝體內乙醯膽鹼脂酶的活性能很好地反映當地水體的污染狀況。
3.1.4水生生物環境診斷技術
用常規的毒性測試可以檢測污染嚴重水體的毒性，但對於低毒性水體，用常規的毒性試驗難以檢測到其毒性水平。為此，日本NUS株式會社開發出一種低毒性水體的新的生物測試方法——水生生物環境診斷技術（Aquatic Organisms Environment Diagnostics，簡稱AOD）[19]。該方法採用冷凍濃縮技術 ,將低毒性水體樣品中的部分水分脫出，使水樣中的毒理成分合理地濃縮，再進行生物毒性試驗，進而判定水體的毒性水平。AOD技術所選用的測試魚要求體積較小，同時要滿足測試生物所必備的高敏感性、取材方便、便於飼養或繁殖、品系純等條件。目前，AOD主要採用紅鰭魚（T.albnubes）和淡水蝦（P.compressa）作測試生物。
3.1.5 幼蟲變態實驗
近年來，對於以海洋無脊椎動物的胚胎和幼蟲期毒性實驗研究較為廣泛。然而研究表明[20]，浮游幼蟲變態比現有的生物個體水平的毒性實驗指標更為敏感。海洋底棲無脊椎動物幼蟲的變態期是其生活史的關鍵階段，變態期的幼體對污染物的敏感性要高於其它階段，胚胎發生和幼蟲發育不受影響的污染物濃度會阻礙其變態。幼蟲的變態過程易於觀察（受到外來信息物質的調控），易受環境污染的干擾。與死亡率比較，能否在附著基表面順利變態是監測污染物毒性的更敏感的指標。
3.1.6 四膜蟲 (Tetrahymena pyriformis) 刺泡發射法
四膜蟲是一種淡水單細胞生物，生長速度快、繁殖量大，實驗室內易無菌培養和控制，適用於水質監測。以前應用四膜蟲監測水質都是通過測試四膜蟲的生長曲線和繁殖曲線等生物學特徵來反映水質變化情況。然而四膜蟲個體差異小、對化學毒物敏感，在誘變實驗中無須添加活化酶、自發突變率低，也是一種理想的致突變試驗材料。四膜蟲的刺泡是附著在細胞質表面，由基粒分化而來，垂直胞質排列，當外界環境因子觸發可誘導刺泡發射，形成顯微鏡下可見的分泌泡。吳偉等[21]用陽性致突變物誘發四膜蟲刺泡發射，試驗結果表明，四膜蟲對致突變陽性物質相當敏感，且有劑量效應關系。因此利用四膜蟲刺泡發射是評價水體中化學物質致突變的一種快速、簡便、良好的方法。
3.2 水污染生物監測的新材料和新的監測物
近年來，水污染生物監測不僅出現了一些新的方法，同時也出現了一些新材料、新的監測物。席玉英、韓鳳英等 [22]對長葉異痣蟌〔Ischnura elegans（VanderLinden）〕體內汞含量及與水體汞污染的關系進行了研究，結果發現，長葉異痣蟌對水體汞具有富集性，富集倍數高達5448～7600倍，可作為水體汞污染的監測生物。其中雌性長葉異痣蟌體內汞含量樣體（同時、同地採集的）間存在很大差異，因此可作為水體汞污染的定性研究，不宜作為水體汞污染的定量監測。而雄性長葉異痣蟌體內汞含量樣本間的差異則不顯著，並且雄性長葉異痣蟌體內汞含量隨水體汞含量的增加及時間的延長而增加，可作為水體汞污染的指示生物。
Flammarion P等 [23]通過測定白鮭(Leuciscus cephalus)體內膽鹼脂酶的活性來監測水體污染，發現白鮭可以成為很好的水體污染監測工具。而Khan R A等 [24]用比目魚(Pleuronectes americanus)體內乙氧基-異吩惡唑酮-脫乙基酶（EthoxyresorufinO－Deethylase，EROD）活性的強弱來判斷紐芬蘭島水體的污染狀況，發現它也有很好的監測效果。
Kahle J等[25]測定一種橈腳類動物Metridia gerlachei對威德爾海中痕量金屬的生物累積率，發現Metridia gerlachei對Co、Cu、Ni、 Pb 、 Zn等金屬元素的敏感度較高，可以作為海水中金屬元素的監測物。而Rainbow P S 等[26]利用藤壺監測香港海域中痕量金屬，同樣也得到很好的效果。
劉綺 [27]進行了一種新的生物監測方法研究。他以孵化好的Ⅱ～Ⅲ期鹵蟲為受試生物，實驗研究了K2Cr2O7、HgCl2、As2O3、KCN、六六六、苯酚、苯7種物質對鹵蟲的中毒閾值和 LC50 -24h（Leathal Concentration 50-24h, 24 h半致死濃度）的測定，闡明了該方法具有操作簡便、快速、覆蓋面寬、技術易掌握、所需設備不復雜等特點。此生物監測方法在環境科學與工程中的研究和應用可進一步擴展到對入江、河、海的工業排放物的檢毒、農葯殘留量分析、真菌毒素分析等廣泛領域。
㈢ 水中糞大腸菌群的測定
化妝品檢測項目中糞大腸菌群的檢測流程：
10g/mL樣品+90mL滅菌生理鹽水 →10mL+10mL雙倍乳糖膽（含中和劑）培養基→糞大腸菌群 44.5℃，48h培養
註：在化妝品檢測項目中，如果樣品含有油脂性的成分，如精油，在樣品前處理中需加入液體石蠟、吐溫80、生理鹽水進行均質，使樣品能夠均勻分散開來。
糞大腸菌群又是一個什麼樣的微生物呢？下面我們來詳細介紹下：
大腸菌群：大腸菌群並非細菌學分類命名，而是衛生細菌領域的用語，它不代表某一個或某一屬細菌，而指的是具有某些特性的一組與糞便污染有關的細菌，這些細菌在生化及血清學方面並非完全一致。
定義（GB2010）：在一定培養條件下能發酵乳糖、產酸產氣的需氧和兼性厭氧革蘭氏陰性無芽孢桿菌。
糞大腸菌群：大腸菌群的一種，又稱耐熱大腸菌群，培養溫度：44.5±0.5℃，糞大腸菌群是化妝品檢測項目中必檢的微生物項目。
大腸埃希氏菌：（(Escherichia. coli )通常稱為大腸桿菌。根據不同的生物學特性將致病性大腸桿菌分為5類：
致病性大腸桿菌(EPEC)、
腸產毒性大腸桿菌(ETEC)、
腸侵襲性大腸桿菌(EIEC)、
腸出血性大腸桿菌(EHEC)、
腸黏附性大腸桿菌(EAEC)。
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㈣ 50克需酶解的底物，200mL的水，加酶量為底物的1%。酶活是10U/g，那加酶量是多少U/g
加酶量為底物的1%
那就應該是加0.5g也就是500mg的酶啊
U/g是酶活的單位。酶量的單位可以是質量mg，體積ml或者就是活性單位U。不會是U/g
㈤ 底物濃度與酶的濃度對水解有什麼影響添加酶的量與底物濃度有什麼關系，底物濃度是怎麼設定的
如果底物濃度低，隨著底物濃度升高，水解速度先升高後不變。當底物濃度不變時，若濃度低，隨著酶濃度增加，速度先升後降，若底物濃度足夠多，速度升高，意思就是這兩個相互影響，你意會一下
㈥ 是否可以利用蒸餾水 酶和底物證明酶具有催化作用
當然可以利用蒸餾水，酶和底物證明酶具有催化作用。
酶催化都是在水中進行的，水不可缺少，底物是反應物，酶是催化劑。將底物溶於水中，加入酶，常溫下反應即開始。只要底物濃度減少，有產物出現，即可證明酶具有催化作用。
㈦ 如何檢測水產品中含有孔雀石綠
檢測方法
孔雀石綠在水生動物體內迅速代謝成無色孔雀石綠，而無色孔雀石綠的毒性甚至超過孔雀石綠，所以通常將孔雀石綠和無色孔雀石綠的總量作為動物源性食品中孔雀石綠殘留的限量指標。孔雀石綠的檢測方法以理化檢測法和免疫學檢測法為主。其中理化檢測法包括：薄層層析法、分光光度法、 高壓液相色譜法、液相色譜質譜聯用法、氣相色譜質譜聯用法等，相較之下免疫學檢測方法更為常用。
酶聯免疫檢測法（ELISA）：酶聯免疫法的基本原理是將酶分子與抗體分子共價結合，結合產物不會改變抗體的免疫學特性，也不影響酶的生物學活性。此種酶標抗體可與吸附在固相載體上的抗原或抗體發生特異性結合。底物可在酶的作用下使其所含的供氫體由無色的還原型轉變成有色的氧化型，出現顏色反應，顏色反應的深淺與樣品中相應抗體或抗原的量呈一定的比例，顯色反應可通過酶標儀進行定量測定。ELISA方法是一種特異、敏感的檢測方法，可分為： 間接競爭抑製法、抗體/抗原包被直接競爭法和夾心法。
其中間接競爭抑製法，是用人工抗原包被酶反應板後加入抗血清和待測葯物進行競爭性結合反應，洗滌後板上只留有與包被抗原結合的抗體(一抗) ，再加酶標記物的二抗與一抗結合，洗滌後加入酶的底物。酶催化反應的產物量與被結合的一抗和二抗量呈正比，與待測樣品中相應的葯物量呈反比。其特點在於一個一抗可結合多個二抗，放大待測物的量，提高了方法的靈敏度。截至2013年的商品ELISA孔雀石綠試劑盒，都只能檢測孔雀石綠總量，不能同時檢測孔雀石綠和無色孔雀石綠各自的含量，在樣品前處理過程中應注意根據抗原和抗體的類型，將目標化合物全部轉化成相對應的形態。
㈧ 怎樣快速檢測水中的重金屬含量
快速檢測方法很多方法一，使用攜帶型儀器檢測方法二，使用試紙法快速檢測水中重金屬方法三，檢測重金屬污染程度的可能性.在CA培養基內分別加入不同濃度的鋅、銅、鉛等重金屬,再將水黴菌菌株移至此些培養基上培養.由實驗結果得知,培養基內含500 ppm硫酸鋅、40 ppm硫酸銅與500ppm硝酸鉛時,皆會使水霉無法生長；而含有450 ppm硫酸鋅、30 ppm硫酸銅與450ppm硝酸鉛時,水霉雖生長不佳,但仍可生長、繁殖. 由於水黴菌在適當濕度、溫度並提供適量光照的環境下生長十分快速,約1～2日,所以可以十分快速檢驗水中重金屬的含量,加上菌株容易取得、培養材料十分便宜,因此,利用水霉或檢測水中水霉含量即可作為檢測重金屬污染程度一項十分經濟、快速、簡便且准確的參考指標之一.至於有關水黴菌對各種重金屬的靈敏度與如何推廣應用水霉來檢測水中,甚至土壤中重金屬污染程度則有待進一步試驗和改善.
㈨ 酶底物法測定水質糞大腸菌群是國標方法嗎
目前酶底物法檢測糞大腸菌群已經被列入城鎮污水水質標准檢驗方法，且只有酶底物法。有標可詢！
㈩ 生活飲用水中大腸埃希氏菌檢驗探討
水樣中的細菌包括很多「屬」和很多「種", 我國《生活飲用水衛生標准》2006版[ 1] 的衛生學評價標準是以菌落總數、總大腸菌群、耐熱大腸菌群和大腸埃希氏菌4項作為微生物指標。
總大腸菌群可來自人類和溫血動物的腸道及自然環境, 包含有埃希氏菌屬、檸檬酸菌屬、克雷伯氏菌屬和腸桿菌屬等一大群在37℃經24小時培養能發酵乳糖、產酸產氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽胞桿菌。他們在伊紅美藍平板生長特徵是：（1）深紫黑色、具有金屬光澤；（2）紫黑色、不帶或略帶金屬光澤；（3）淡紫紅色菌落。
耐熱大腸菌群，又稱糞大腸菌群，主要包括埃希氏菌屬和耐熱克雷伯菌屬[6],是利用提高溫度的方法將大自然的大腸菌群和糞便中的大腸菌群區分開的，它是一群能在44.5 ℃下生長的大腸菌群，只有來源於動物和人類糞便的大腸菌群能生長，而來自大自然的大腸菌群不能耐熱生長[8-9]。
大腸埃希氏菌(Escherichiacoli),以前常稱大腸桿菌, 廣泛存在於人類和溫血動物的腸道中, 是人類和動物腸道中需氧性共生菌的優勢菌群, 維持宿主健康部分生理功能必需的腸道菌.雖然大多數的大腸埃希氏菌為非致病菌, 但是當宿主免疫力降低或細菌侵入腸道的外組織或器官時, 可引起腸外感染。某些血清型可產生毒素, 為致病性大腸埃希氏菌, 可引起人類腹瀉。所以生活飲用水中大腸埃希氏菌成為腸道疾病的重要致病菌之一。[2]
他們從屬范圍邏輯關系如下
《生活飲用水衛生標准》2006版標准, 增加了生活飲用水中大腸埃希氏菌的檢驗。
為了提高實驗室檢測能力，近日，本實驗室開展了生活飲用水中大腸埃希氏菌檢測的質控活動，質控活動達到如下目標：
一、使用工作中分離的耐熱大腸菌群、標准菌株產氣腸桿菌、標准菌株大腸埃希氏菌三種菌進行試驗，觀察不同大腸菌群在EC-MUG培養基熒光實況，取得陽性標本熒光視覺效果。
二、使用的試管進行酸浸泡、蒸餾水處理和水龍水直接清洗處理，尋找大腸埃希菌熒光效果影響因素。
三、使用北京陸橋EC-MUG培養基試劑及青島海博EC-MUG培養基試劑進行比較試驗，評價實驗室常規使用的試劑是否優良。
1材料與儀器
1.1 EC-MUG培養基, 購自北京陸橋有限責任公司、青島海博
1.2伊紅美蘭培養基, 購自北京陸橋有限責任公司。
1.3營養肉湯，購自北京陸橋有限責任公司。
1.4培養箱, 36℃ ±1℃;44.5±0.5℃;波長366nm紫外燈
2方法與結果
2.1方法原理
大腸埃希氏菌能特異性產生產生β -葡萄糖醛酸酶(β -glucuronidase), 此酶能分解培養基上的EC-MUG熒光底物釋放出熒光產物, 使培養基在366 nm紫外光下產生特徵性熒光, 以此技術來檢測大腸埃希氏菌。
2.2操作步驟與結果
上圖是產氣腸桿菌與大腸埃希氏菌在EC-MUG培養基經44.5℃培養後，在日光燈背景下，產氣腸桿菌液體清亮，說明產氣腸桿菌在44.5℃中不能生長繁殖；大腸埃希氏菌液體混濁，說明大腸埃希氏菌在44.5℃中能生長繁殖。
對上述經培養過的EC-MUG培養基，在日光燈觀察背景下，使用366nm紫外線燈進行觀察。產氣腸桿菌依然清亮，無藍光；不同稀釋度的大腸埃希氏菌菌液有明顯的藍光，藍光間無明顯差別。因此，在觀察大腸埃希氏菌發酵效果時，可以在普通光線下，使用366nm紫外線燈進行觀察，結果顯著。
上圖為在暗室下對前述經培養過的EC-MUG培養基觀察實驗效果。大腸埃希氏菌發酵後產生熒光，並且不同稀釋度的菌液，目視無顯著差別；與產氣腸桿菌效果陰性效果有非常明顯的差別。產氣腸桿菌培養管有微弱熒光，可能存在EC-MUG培養基自身有熒光事實！
該圖是滅菌蒸餾水與EC-MUG培養基效果比對。1、2試管是泡酸清洗的試管，5、6為未泡酸清洗的試管。
在暗室下觀察，產氣腸桿菌在EC-MUG培養管相對於蒸餾水，用手機拍照有明顯熒光，實際觀察中，這種熒光相對弱些，但依然是有熒光產生。所以，普通試管及蒸餾水可能產生的熒光可以忽略不計，但試劑本身產生有一定量的熒光是實驗事實。
因此，為了減少個人觀察經驗不足，建議，在實驗過程中，應該帶標進行比對觀察，這樣頭腦中才有熒光陰陽直觀效果。
上圖中的耐熱大腸菌群，是日常工作中檢出的工作株，實驗室證實他們在伊紅美蘭平板上能產生鐵銹色樣金屬光澤的大腸菌群，屬於耐熱大腸菌群。目前該菌在EC-MUG培養基經44.5℃培養後中也能混濁生長。
在日光燈背景下用三用紫外燈366nm紫外線波觀察，各個試管有微許藍光，實際目視觀察沒有很強。手機拍照顯示都有微量熒光效果，產氣腸桿菌顏色似乎還更深點。可以判斷全部10管試驗管均為大腸埃希氏菌陰性。
上圖為暗室下對產氣腸桿菌和工作株的耐熱大腸菌群在EC-MUG熒光效果圖。手機拍照顯示有較強熒光，實際目視效果較弱，如沒有陽性對照比較，易誤以為大腸埃希氏菌陽性結果。但在暗室下觀察，該耐熱大腸菌群、產氣腸桿菌沒有差別，也可以判斷為結果陰性。
通過產氣腸桿菌與實驗室耐熱大腸菌群在EC-MUG高溫培養後的熒光效果比較。產氣腸桿菌在高溫中不能生長，液體清亮，也不能分解熒光底物。本實驗室工作株耐熱大腸菌群能在高溫中生長，所以液體混濁，但本次工作菌株不分解分解培養基上的MUG熒光底物釋放出熒光產物，通過與產氣腸桿菌（商品標准菌株）比較，判定為熒光陰性，因此可能本實驗室該耐熱大腸菌群工作株是耐熱克雷伯菌屬。（耐熱大腸菌群，又稱糞大腸菌群，它由埃希氏菌屬和耐熱克雷伯菌屬組成。非細菌學分類命名，而是衛生細菌領域的用語。）
以下圖片為兩種不同試劑用相同處理的試管進行EC-MUG培養觀察效果：
暗室下觀察熒光效果圖，北京陸橋產品陰陽對照明顯。
日光燈下，用紫外線燈觀察熒光效果圖，北京陸橋產品陰陽對照明顯。
暗室下觀察熒光效果圖，青島海博產品陰陽對照明顯。
日光燈下，用紫外線燈觀察熒光效果圖，青島海博產品陰陽對照明顯。
上圖為正常光線下的實驗培養結果照片。
通過北京陸橋、青島海博兩種試劑的比較，兩種試劑在不同方式處置的試管內培養大腸埃希氏菌，稀釋倍數不同，產生的熒光效果是一樣的。
3.討論
3.1、有關文獻及實驗結果中，試管本身會產生微量熒光[3]。本次實驗使用的試管分兩部分，一部分是用酸浸泡試管七天以上，然後進行蒸餾水清洗；另一部分是直接用水龍頭水直接清洗，兩類試管均165℃2小時以上高溫滅菌。兩類試管分別均分裝有蒸餾水對照、產氣腸桿菌（標准菌株）、耐熱大腸菌群（工作菌株）、大腸埃希氏菌株（標准菌株）。同一菌株在不同方法處置的試管，實驗效果無差別，說明一般試管可能產生的熒光對實驗沒有影響。
3.2、EC-MUG培養基試劑本身經培養後會溢出一定的熒光物質，如果沒有陽性對照作比較，可能會誤以為是真陽性，造成假陽性結果。因此，初級實驗者或日常工作中，應帶標准菌株同步實驗並觀察實驗結果。
3.3、兩家試劑廠家生產的EC-MUG培養基，陽性結果產生熒光效果均顯著，實際操作中，日常生活飲用水中的大腸埃希氏菌試驗結果與陰性對照相差無異時，可以按未檢出大腸埃希氏菌結果進行報告。
3.4、GB/T5750.12－2006檢測大腸埃希氏菌有多管發酵法、濾膜法，大腸埃希氏菌酶底法。推薦的第一法為多管發酵法，是在檢測總大腸菌發酵乳糖蛋白腖基礎上，有選擇地進行EC-MUG培養，從批量工作中，減少了工作量及工作經費。在日常生活飲用水監測中，第一法相對第二法過濾法更簡便易行；相對第三法酶底法來講，更經濟實惠。因此，第一法多管發酵法，在常規檢測工作中仍是值得推廣的方法。
3.5、不同稀釋度的大腸埃希氏菌液在EC-MUG培養液中，產生熒光效果無顯著區別。因此，總大腸菌發酵後，在下步實驗操作中，移液管要一管一用，不同發酵管不能出現交叉污染，防止陽性值偏高。
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