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細胞免疫功能檢測方法

發布時間:2022-12-30 05:40:02

A. 細胞免疫功能測定的常用方法

正確答案:A
解析:免疫系統功能分為體液免疫和細胞免疫
。體液免疫包括:補體、甘露聚糖結合素、急性期蛋白、干擾素、免疫球蛋白
。B、C、D、E均為體液免疫的測定
。細胞免疫包括:中性粒細胞、巨噬細胞、自然殺傷細胞、樹突細胞、T淋巴細胞、B淋巴細胞
。故選A

B. 體外測定細胞免疫功能的方法是是什麼

免疫細胞功能試驗包括體內和體外試驗。免疫細胞功能體外試驗主要根據免疫細胞的增殖活性、分泌活殺傷活性等特性而進行實驗設計。具體免疫細胞功能檢測內容包括:①淋巴細胞功能檢測,包括T細胞增殖試驗、T細胞分泌功能測定、T細胞介導的細胞毒試驗以及體內試驗;B細胞增殖試驗、溶血空斑試驗、酶聯免疫斑點法以及體內試驗;NK細胞活性檢測方法:酶釋放法、放射性核素釋放法、化學發光法、流式細胞術法等。②吞噬細胞功能檢測,方法有趨化功能檢測、吞噬和殺菌功能測定等。

C. 免疫學的檢測方法

免疫學檢測方法可分為體液免疫和細胞免疫。

D. 免疫學的檢測方法有哪些

免疫學檢測方法可分為體液免疫和細胞免疫。

E. 免疫檢測方法

免疫檢測方法大全2017

免疫學檢測技術的用途非常廣泛,它們可用於有關免疫疾病的診斷、療效評價及發病機制的研究。如對傳染病、免疫增殖性疾病、免疫缺損病、超敏反應、自身免疫病、移植排斥反應腫瘤的免疫學檢測,對診斷、治療均有很大幫助。此外在醫學生物學研究中對抗原性物質或細胞的定性、定量檢查不僅推動了對各種免疫學現象的研究,而且擴大免疫學與醫學生物許多領域的聯系。本章僅介紹常用免疫學檢測方法的原理,簡要過程和實用意義。下面是我為大家帶來的關於免疫學檢測法的知識,歡迎閱讀。

第一節抗原或抗體的檢測

一、檢測的原理

藉助抗原和抗體在體外特異結合後出現的各種現象,對樣品中的抗原或抗體進行定性、定量、定位的檢測。

1.抗原與抗體的親和力(affinity)抗原抗體的結合就像酶與底物的結合,激素與其受體的結合一樣不是化學的反應,而是非共價鍵的可逆的結合。抗原決定簇和抗體分子可變區互補構型,造成兩分子間有較強的親和力。空間構型互補程度不同,抗原和抗體分子之間結合力強弱也不同。互補程度高,則親和力強。此外,反應溫度、酸鹼度和離子濃度對抗原和抗體分子上各基因的解離性和電荷特性也有重要的影響,抗體與抗原決定簇之間的結合力大小可用親合力來表示。高親合力的抗體與抗原的結合力強,即使抗原濃度很低時也有較多的抗體結合抗原形成免疫復合物。

2.抗原或抗體外檢測原理根據抗原抗體結合形成免疫復合物的性狀與活性特點,對標本中的抗原或抗體進行定性、定位或定量的檢測。定性和定位檢測比較簡單,即用已知的抗體和待檢樣品混合,經過一段時間,若有免疫復合物形成的現象發生,就說明待檢樣品中有相應的抗原存在。若無預期的現象發生,則說明樣品中無相應的抗原存在。同理也可用已知的抗原檢測樣品中是否有相應抗體。

對抗原或抗體進行定量檢測時,以反應中加入抗原和抗體的濃度與形成免疫復物的濃度呈函數關系。

(1)根據免疫復合物產生的多少來推算樣品中抗原(或抗體)的含量:在一定的反應條件下,加入的已知抗體(或抗原)的濃度一定,反應產生的免疫復合物多少與待檢樣品中含有相應抗原(或抗體)量成正比。也就是抗體濃度一定時,免疫復合物越多則樣品中的抗原量也越多。可用實驗性標准曲線推算出樣品中抗原(或抗體)的含量。如免疫單向擴散試驗、免疫比濁試驗和酶聯免疫檢測等都屬於這類方法。

(2)抗原或抗體效價滴定的原理:當抗原抗體復合物形成多少不能反應抗原抗體反應強弱時,就不能以檢測反應強度來對抗原或抗體進行定量。在實際工作中,把濃度低的反應成分(抗原或抗體)的濃度固定,把濃度高的另一種反應成分作一系列稀釋。例如用人血清作抗原免疫3隻家兔,比較3隻家兔產生抗體的多少,即滴定3隻兔血清抗體效價,可用雙向瓊脂擴散法來滴定,例如將抗體濃度固定,將抗原作不同的稀釋度,分別將抗原或抗體滴入瓊脂的相應小孔中,觀察免疫兔血清與不同稀釋度的抗原出現明顯沉澱淺的抗原稀釋度(如甲兔的抗體效價為1/2000,而丙免的是1/8000則可比較出後者比前者產生抗體的效價要高)。也就是表示效價的稀釋度越高,樣品中所含待檢成分越多。因人血清(抗原)和抗體(免疫兔血清)相比,濃度高,故應稀釋抗原。

二、抗原或抗體檢測的實用意義

1.抗體檢測的意義檢測抗體可用於評價人和動物免疫功能的指標。抗體用於臨床治療或實驗研究時也需做純度分析和定量測定。臨床上檢測病人的抗病原生物的抗體、抗過敏原的抗體、抗HLA抗原的抗體、血型抗體及各種自身抗體,對有關疾病的診斷有重要意義。

2.抗原檢測的意義可做為抗原進行檢測的物質可分為以下四類:

(1)各種微生物及其大分子產物:用於傳染病診斷、微生物的分類及鑒定以及對菌苗、疫苗的研究。

(2)生物體內各種大分子物質:包括各種血清蛋白(如各類免疫球蛋白、補體的各種成分)、可溶性血型物質、多肽類激素、細胞因子及癌胚抗原等均可做為抗原進行檢測。在對這些成分的生物學作用的研究以及各種疾病的診斷有重要意義。

(3)人和動物細胞的表面分子:包括細胞表面各種分化抗原(如CD抗原)、同種異型抗原(血型抗原或MHC抗原)、病毒相關抗原和腫瘤相關性情抗原等。檢測這些抗原對各種細胞的分類、分化過程及功能研究、對各種與免疫有關的疾病的診斷及發病機制的研究,均有重要意義。

(4)各種半抗原物質:某些葯物、激素和炎症介質等屬於小分子的半抗原,可以分別將它們偶聯到大分子的載體上,組成人工結合的完全抗原。用其免疫動物,制備出各種半抗原的抗體,應用於各種半抗原物質的檢測,例如對某些病人在服用葯物後進行血中葯物濃度的監測。對運動員進行服用違禁葯品的檢測,都是應用半抗原檢測的方法。

三、抗原或抗體檢測的方法

由於各種檢測方法中所用的抗原性狀不同,出現結果的現象也不同。最廣泛應用方法有下述幾種:

(一)沉澱反應

可溶性抗原與抗體結合,在兩者比例合適時,可形成較大的不溶性免疫復合物。在反應體系中出現不透明的沉澱物,這種抗原抗體反應稱為沉澱反應(precipitation neaction)。

1.環狀沉澱試驗先將含抗體的未稀釋的免疫血清加到直徑小於0.5cm的小試管底部。將稀釋的含有可溶性抗原的材料重疊於上,讓抗原與抗體在兩液體的界面相遇,形成白色免疫復合物沉澱環,故名為環狀沉澱試驗(ring precipitationtest),此法簡便易行,需用材料較多是其缺點。

2.單向免疫擴散試驗單向免疫擴散試驗(single immunodiffusion)是在凝膠中進行的沉澱反應。將抗體混入加熱溶解的瓊脂中,傾注於玻片上,製成含有抗體的瓊脂板,在適當位置打孔,將抗原材料加入瓊脂板的小孔內,讓抗原從小孔向四周的瓊脂中擴散,與瓊脂中的抗體相遇形成免疫復合物。當復合物體積增加到一定程度時停止擴散,出現以小孔為中心的圓形沉澱圈,沉澱圈的直徑與加入的抗原濃度成正相關。本方法簡便,易於觀察結果,可測定抗原的靈敏度(最低濃度)約為10~20μg/ml,常用於定量測定人或動物血清IgG、IgM、IgA和C3等,其缺點是需1~2天才能看結果

3.免疫比濁法 當抗體濃度高,加入少量可溶性抗原,即可形成一些肉眼看不見的小免疫復合物,它可使通過液體的光束發生散射,隨著加入抗原增多,形成的免疫復合物也增多,光散射現象也相應加強。免疫比濁法(immunonephelomytry)就是在一定的抗體濃度下,加入一定體積的樣品,經過一段時間,用光散射濁度計(nephelometry)測量反應液體的濁度,來推算樣品中的抗原含量。本法敏感、快速簡便,可取代單向擴散法定量測定免疫球蛋白的濃度。

4,雙向免疫擴散試驗 雙免疫擴散試驗(double immunodiffusion)是在瓊脂板上按一定距離打數個小孔,在相鄰的兩孔內分別放入抗原和抗體材料。當抗原和抗體向四周凝膠中擴散,在兩孔間可出現2~3條沉澱線,本法常用於抗原或抗體的定性或定量檢測,或用於兩種抗原材料的抗原相關性分析。

5.對流免疫電泳對流電泳(counterimmunoelectrophoresis)是一敏感快速的檢測方法,即在電場作用下的雙向免疫擴散。將瓊脂板放入電泳槽內,使瓊脂板的兩孔沿著電場的方向,於負極側的孔內加入抗原,於正極側的孔內加入抗體,通電後,抗原帶負電荷向正極泳動,抗體分子雖也帶負電荷,但因分子量大,向正極的位移小,而受瓊脂中電滲作用向負極移動,抗原和抗體能較快地集中在兩孔之間的瓊脂中形成免疫復合物的沉澱線。只需1小時左右即可觀察結果。

6.免疫電泳 免疫電泳(immunoelectrophoresis)的方法分成兩個步驟,即先進行電泳,再進行瓊脂擴散。先將樣品加入瓊脂中電泳,將抗原各成分依電泳速度不同而分散開。然後在適當的位置上沿電泳方向挖一直線形槽,於槽內加入含有針對各種抗原混合抗體液,讓各抗原成分與相應抗體進行雙向免疫擴散,可形成多答卷沉澱線。常用此法進行血清的蛋白種類分析。對於免疫球蛋白缺損或增多的疾病的診斷或鑒別診斷有重要意義

7.免疫印跡法免疫印跡法(immunoblotting)又稱為Western印跡法,用於AIDS的血清抗體檢測。第一步,為電泳分離HIV抗原,在電場中根據分子量大小不同病毒抗原各成分散開。第二步,將電泳分離的蛋白質轉移到硝酸纖維膜上(電印跡),然後將印跡有病毒抗原的硝酸纖維膜浸濕於病人血清中。如果病人血清中含有與一種或幾種抗原相對應的抗體的話,則在該抗原印跡部位形成免疫復合物沉澱。在洗去未沉澱的抗原和抗體後,在膜上加標記的抗人免疫球蛋白的抗體,此抗體可以和病毒抗原與人抗體形成的免疫復合物發生反應,最後加入顯色底物(如果抗人Ig是用酶標記的)或做放射自顯影(抗人Ig用125Ⅰ標記)以顯示結果

第一步:經電泳將HIV混合抗合抗原按分子量大小分離;

第二步:將已分離的抗原經電印跡轉移到硝酸纖維膜上;

第三步:將待檢病人血清加入覆蓋於硝酸纖維膜上;

第四步:加入標記的第二抗體使之覆蓋膜上;

第五步:加入顯色底物(或放射自顯影)顯現第二抗體

(二)凝集反應

細菌、紅細胞或表面帶有抗原的乳膠顆粒等都是不溶性的顆粒抗原,當與相應抗體結合,抗原與抗體結合形成凝集團塊,即稱為凝集反應(agglutination)。

1.直接凝集 直接凝集(direct agglutination)是將細菌或紅細胞與相應抗體結合產生的細菌凝集或紅細胞凝集現象。可用於傳染病診斷如肥達氏反應(Widal reaction)診斷傷寒病。或利用血細胞凝集現象檢查血型。

2.間接凝集 間接凝集(indirect agglutination)是用可溶性抗原包被在乳膠顆粒或紅細胞表面,與相應抗體混合出現的凝集現象。如用γ球蛋白包乳膠顆粒檢測類風濕關節炎病人血清中的類風濕因子,用甲狀腺球蛋白包被乳膠顆粒用於檢測甲狀腺球蛋的抗體。也可以將抗體吸附到乳膠顆粒上檢查臨床標本中的抗原,如細菌或真菌性腦膜炎抗體包被的乳顆粒,一旦與含有相應抗原的腦脊液混合,便可發生凝集,可進行快速診斷。故凝集反應即可測定抗原,也可測抗體,方法簡便、敏感。

3.抗球蛋白試驗 抗球蛋白試驗(antiglobulin test,coombs test)的原理為間接凝集試驗。例如應用於診斷自身免疫溶血性貧血症時,Rh+紅細胞與抗Rh血清間的反應。因抗Rh抗體是IgG只有兩個結合價,分子較小(不如IgM結合價多,分子大)很難直接引起Rh+紅細胞凝集。如果加入抗IgG的抗體,就可幫助抗Rh的IgG的抗體凝集紅細胞。也就是經抗Ig的作用提高凝集反應的'靈敏度。

(三)補體參與抗原抗體反應

這一類反應主要包括溶血反應(hemolytic assay)、補體介導的細胞毒試驗(complement mediated cytotoxicuty test)及補體結合試驗(complement fixation test)。

1.溶血反應 抗體與紅細胞表面抗原相遇,形成紅細胞-抗體復合物即可使加入反應中的補體活化,導致紅細胞溶解,此方法可用於紅細胞的各種抗原或相應抗體的檢測,此法比凝集反應敏感。溶血反應也是用於抗體分泌細胞即空斑形成細胞(PFC)檢測的原理。

2.補體介導的細胞毒試驗各種有核細胞與針對其表面抗原的抗體相遇,所形成的免疫復合物能活化反應中的補體,引起細胞膜穿孔,在一定時間內,細胞仍能維持一定的形態不破碎,加入水溶性染如伊紅Y(eosin Y)或台盼藍(trypan blue)後,染料即可進入被活化補體穿孔的細胞,不帶相應抗原細胞膜保持完整的活細胞不著色。此方法可用於帶各種抗原的細胞的檢測,如進行細胞MHC抗原的鑒定,和進行淋巴細胞中T細胞總數或其亞類的計數。在一些免疫學實驗中也可用這種方法,根據需要特異地消除帶某種抗原的細胞。

3.補體結合試驗當抗原(可溶性或顆粒性)與相應抗體結合,由於濃度低不出現可見反應時,應用補體結合試驗可檢出此抗原抗體反應,它比凝集反應或沉澱反應靈敏度高。本法包括兩個抗原抗體系統。一為檢測系統由待檢樣品與已知抗原(或抗體)組成;另一為指示系統,由綿羊紅細胞(SRBC)和抗SRBC組成。另加入作為補體的新鮮豚鼠血清。試驗時試管中先加入檢測系統和補體,混合經37℃30分鍾使抗原、抗體、補體形成復合物,再加入指示系統,如出現溶血現象,說明檢測系統中沒有相對應的抗原抗體,補體是游離的指示系統的SRBC和抗體結合而出現溶血,即為反應陰性。如不出現溶血,表明檢測系統中有抗原抗體復合物並結合補體,則指示系統無多餘的補體作用而沒有溶血現象,即為陽性。

在敏感的抗原、抗體檢測方法(如酶標方法)出現之前補體結合試驗曾廣泛用於檢測各種細菌、病毒或螺旋體(如梅毒)的抗原或抗體,由於本試驗影響因素多,結果不穩定現已被新檢測方法所代替。

四、用標記抗體或抗原進行的抗原、抗體反應

用熒光素、同位素或酶標記抗體或抗原,用於抗原或抗體檢測是目前廣泛應用的敏感、可靠的方法。上述三種常用的標記物與抗原或抗體化學連接之後不改變後者的免疫特性。本方法可用於定性、定量或定位檢測。

1.免疫熒光技術免疫熒光技術(immunofluorescence techni)是用化學方法使熒光素標記的抗體(或抗原)與組織或細胞中的相應抗原(或抗體)結合,進行定性定位檢查抗原或抗體的方法。

(1)直接熒光法:把熒光抗體加到待檢的細胞懸液,細胞塗片或組織切片上進行染色,經抗原抗體反應後,洗去未結合的熒光抗體,將待檢標本在熒光顯微鏡下觀察,有熒光的部位即有相應抗原存在,此法可用於病毒感染細胞、帶某種特異抗原的細胞(如T細胞和B細胞)或病原菌的檢查,也可用於組織中沉著的免疫復合物的檢查。本法的缺點是檢查多種抗原,就需分別制備相應的多種標記抗體。

(2)間接熒光法:可克服直接法需制備多種熒光抗體的復雜操作。將組織或細胞上的抗原直接與相應抗體(不標記熒光)結合,此為第一抗體,再把能與第一抗體特異結合的熒游標記的抗免疫球蛋白抗體加入,此為熒游標記的第二抗體,觀察結果與直接法相同。間接法比直接法敏感性高,如果用於檢查抗原的第一抗體是人或動物的只需制備一種抗人或動物的免疫球蛋白熒光抗體

免疫熒光技術在傳染病診斷上有廣泛的用途,如在細菌、病毒、螺旋體感染的疾病,檢查抗原或抗體,如查出IgM抗體,可做為近期接觸抗原的標志,所以使用熒游標記抗IgM可診斷近期感染。除微生物學方面的應用外,還可利用單克隆抗體鑒定淋巴細胞的亞類。使用流式細胞儀(fluorescene-activated cell sorting,FACS),能自動檢測細胞的大小、熒光強度。針對細胞表面不同抗原,可以使用兩種不同的熒光染料,如用異硫氰熒光素(FITC)發黃綠熒光,用羅丹明(TMRITC)發紅色熒光。由於熒光顏色不同標記兩種不同的抗體,對同一細胞進行雙標記染色。對淋巴細胞亞類鑒定起著巨大推動作用。應用間接熒光法也用於自身免疫病的抗核抗體檢查。

2.放射免疫分析法 放射免疫分析法(radioimmunoassay RIA)應用競爭性結合的原理,應作放射性同素標記抗原(或抗體)與相應抗體(或抗原)結合,通過測定抗原抗體結合物的放射活性判斷結果,本方法可進行超微量分析,敏感性高,可用於測定抗原、抗體、抗原抗體復合物。本法常用的同位素有125Ⅰ和131Ⅰ。

放射免疫分析常用的有液相法和固相法兩種:

(1)液相法:將待檢標本(例如含胰島素抗原)與定時的同位素標記的胰島素(抗原)和定時的抗胰島素抗體混合,經一定作用時間後,分離收集抗原抗體復合物及游離的抗原,測定這兩部分的放射活性,計算結合率。在反應系統中,待檢標本的胰島素抗原與同位素標記的胰島素競爭奪戰性與胰島素抗體結合。非標記的抗原越多,標記抗原與抗體形成的復合物越少。非標記抗原含量與標記抗原抗體復合物的量呈一定的函數關系。預先用標準的非標記抗原作成標准曲線後,即可查出待檢標本中胰島素的含量

(2)固相法:將抗原或抗體吸附到固相載體表面,然後加待檢標本,最後加標記抗體。測定固相載體的放射活性,常用的固相載體有溴化氰(CNBr)海豹化的紙片或聚苯乙烯小管

放射免疫分析法應用范圍廣泛,包括多種激素(胰島素、生長激素、甲狀腺素等)維生素、葯物、IgE等。

3.酶聯免疫分析法 酶聯免疫分析法(enzyme immunoassay,EIA)是當前應用最廣泛的免疫檢測方法。本法將抗原抗體反應的特異性與酶對底物高效催化作用結合起來,根據酶作用底物後顯色,以顏色變化判斷試驗結果,可經酶標測定儀作定量分析,敏感度可達ng水平。常用於標記的酶有辣根過氧化物酶(horseradish peroxidase)、鹼性磷酶(alkaline phosphatase)等。它們與抗體結合不影響抗體活性。這些酶具有一定的穩定性,製成酶標抗體可保存較長時間。目前常用的方法有酶標免疫組化法和酶聯免疫吸附法。前者測定細胞表面抗原或組織內的抗原;後者主要測定可溶性抗原或抗體。本法既沒有放射性污染又不需昂貴的測試儀器,所以較放射免疫分析法更易推廣。

(1)酶聯免疫吸附試驗(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA):是與上述固相RIA相似的原理,將抗原或抗體吸附在固相載體表面。使抗原抗體反應在固相載體表面進行政區。可用間接法、雙抗體夾心法或競爭法測定抗原或抗體。

(2)夾心法(sandwich assay):將已知的特異抗體包裝在固相載體(塑料板凹孔或紙片上),加入待檢標本,標本中的抗原即可與載體上的抗原結合,洗去未結合的材料後加入該抗原的酶標記抗體,洗去未結合的酶標抗體,加底物顯色,用酶免疫檢測儀測量顏色的光密度,可定量測定抗原。

間接法(indirecr ELISA)常用於檢查特異抗體。先將已知特異抗原包被固相載體,加入待檢標本(可能含有相應抗體),再加入酶標抗Ig的抗全(即第二抗體),經加底物顯色後,根據顏色的光密度計算出標本中抗體的含量。

(3)BAS-ELISA:近年來對酶免設分析法的改進是使用生物素-親合素-過氧化物酶復合物作為指示劑,組成一新的生物放大系統進一步提高檢測的敏感度。可用來檢測多種抗原抗體系統如細菌、病毒、腫瘤細胞表面抗原等。一個親合素(avidin)分子可以結合4個生物素分子(biotin)。結合非常穩定。親合素和生物素都可與抗全、酶、熒光素等分子結合,而不影響後者的生物活性。一個抗體分子可偶聯90個生物素分子,通過生物素又可連接多個親合素。因此大提高檢測的敏感度。目前應用生物-酶標親合素系統(biotinavidin system- ELISA,BAS-ELISA),它是通過生物素標記抗體連接免疫反應系統,同時藉助生物素化酶或酶標親合素引入酶與底物反應系統。

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F. 簡述T細胞功能測定的常用方法

免疫學檢測方法可分為體液免疫和細胞免疫測定。1.體液免疫測定主要利用抗原與相應抗體在體外發生特異性結合,並在一些輔助因子參與下出現反應,從而用已知抗原或抗體來測知未知抗體或抗原。此外,尚包括檢測體液中的各種可溶性免疫分子,如補體、免疫球蛋白、循環復合物、溶菌酶等。2.細胞免疫測定法是根據各種免疫細胞(T細胞、B細胞、K細胞、NK細胞及巨噬細胞等)表面所具有的獨特標志和產生的細胞因子等,測定各種免疫細胞及其亞群的數量和功能,以幫助了解機體的細胞免疫水平。體液免疫檢測法1.凝集反應。顆粒性抗原(細菌或紅細胞等)與相應抗體特異性結合,在電解質參與下形成肉眼可見的凝集物,稱之為凝集反應。1)直接凝集反應。顆粒性抗原與相應抗體直接結合所產生的凝集現象,前者多為細胞表面的結構成分,如細菌或紅細胞的表面結構抗原。⑴玻片法:多用於抗原的定性檢測。⑵試管法:多用於抗體的定量檢測。2)間接凝集反應。將可溶性抗原吸附於載體顆粒(如乳膠顆粒、紅細胞等)的表面,稱之為致敏顆粒。當致敏顆粒與相應抗體結合,即可出現凝集現象。這個反應常用於測定細菌性抗體、病毒性抗體、鉤端螺旋體和梅毒螺旋體抗體及某些自身抗體(如抗核抗體、抗腎抗體、抗甲狀腺抗體等)。根據凝集反應的原理,還有間接凝集抑制試驗、反向間接凝集試驗、協同凝集試驗等。2.沉澱反應。可溶性抗原(外毒素、血清、細菌培養的濾液、組織浸出液等)與相應抗體特異性結合,在電解質參與下,形成沉澱物,稱為沉澱反應。沉澱反應的抗原多為多糖、類脂、蛋白質等。1)單向擴散試驗。這是一種抗原定量試驗,是可溶性抗原在含抗體的瓊脂介質中擴散的沉澱反應。此法常用於檢測血清免疫球蛋白和補體各成分的含量。2)雙向擴散試驗。這是可溶性抗原與抗體在瓊脂介質中相互擴散的沉澱反應。本法常用於定性試驗,如檢測血清免疫球蛋白、甲胎蛋白、乙型肝炎表面抗原等。單克隆抗體技術3)對流免疫電泳。對流電泳是一敏感快速的檢測方法,即在電場作用下的雙向免疫擴散。此法常用於檢測血清中的乙型肝炎表面抗原與甲胎蛋白等。3.中和試驗。特異性抗體可抑制相應抗原物質的活性,抗體使相應抗原的毒性或傳染性消失的反應為中和試驗。例如抗毒素中和外毒素的毒性,病毒的中和抗體可使病毒失去感染性等。診斷風濕熱的抗鏈球菌溶血毒素「O」試驗也為一種中和試驗。乙型溶血性鏈球菌能產生一種溶解人、兔紅細胞的溶血毒素「O」,該毒素的溶血毒性可被抗溶血毒素「O」抗體所中和而不出現溶血。試驗時將病人血清與溶血毒素「O」混合,作用一段時間後加入人紅細胞,紅細胞不被溶解為陽性反應,表示病人血清中存在抗溶血毒素「O」抗體。血清抗體效價達400單位以上時提示患者曾感染乙型溶血性鏈球菌,有助於風濕熱的診斷。4.免疫熒光法(熒光抗體法)。是應用熒光素染料(如異硫氰酸熒光黃等)來標記抗體,但不影響其活性,此種抗體稱熒光抗體。用已知種類的熒光抗體浸染待檢的含有抗原的細胞或組織切片,如有相應抗原存在,則抗原即與此種抗體發生特異性結合,形成復合物而粘著在細胞上,不易洗脫,在熒光顯微鏡下成為發出熒光的可見物,可達到診斷或定位的目的。包括直接法和間接法。5.酶聯免疫吸附試驗。本法的原理是利用酶(常用辣根過氧化物酶)標記的抗原或抗體,以測定被檢標本中有無相應的抗原或抗體。有間接法、雙抗體法、競爭法三種。6.溶血空斑試驗。7.免疫印跡技術。免疫印跡或免疫轉印技術(immunoblotting或Westernblot)是在Southern(1975)抗體抗原反應創建的DNA印跡術(Southernblotting)基礎上發展起來的新型免疫生化技術。細胞免疫檢測法近代免疫學廣泛採用了細胞生物學、免疫血清學、免疫標記、免疫組化等多方面技術,不斷發展和完善了一系列細胞免疫檢測技術,用於檢測各類免疫細胞的表面標志(包括抗原及受體)、細胞的活化、增殖、吞噬、殺傷功能、各種細胞因子的活性或含量等方面。這些技術為深入研究和認識機體免疫系統的生理、病理改變,闡明某些疾病的發病機制和臨床診治提供了有用的手段。隨著細胞免疫學的迅猛發展,時有新的細胞免疫檢測技術出現。二十一世紀初期,新發展的項目集中在對有關細胞因子以及細胞受體方面的檢測。1.淋巴細胞轉化試驗。人類淋巴細胞在體外與特異性抗原(如結核菌素)或非特異性有絲分裂原(如植物血凝素,PHA)等一起孵育,T細胞即被激活而向淋巴母細胞轉化。T細胞轉化過程可伴隨有DNA、RNA、蛋白質的合成增加,最後導致細胞分裂。在光學顯微鏡下可計數轉化後的淋巴母細胞數,也可用氚標記的胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)摻入正在分裂的淋巴細胞,用液閃測定儀來確定摻入量以確定淋巴細胞轉化率。2000年開始出現一種不用同位素,又可用儀器測量的淋巴細胞增殖反應的檢查法,稱為MTT檢測法。MTT是一種甲氮唑鹽,它是細胞線粒體脫氫酶的底物,細胞內的酶可將MTT分解產生藍黑色成分。該產物的多少與活細胞數成正比,結果可用酶標儀(595nm)測量光密度,作為MTT法的指標。2.E-花環法。人類T細胞表面有羊細胞受體(CD2)能與羊紅細胞結合形成玫瑰花樣結構。即將分離液分離出的外周的單個核細胞懸液與羊紅細胞在體外混合,經37℃培養5~10分鍾後放4℃過夜,取細胞懸液計數,外周血淋巴細胞中約70%~80%淋巴細胞結成花環即為T細胞,此法可用來分離T細胞。3.T細胞亞群檢測。4.細胞毒試驗。Tc細胞、NK細胞、LAK細胞、TIL細胞等對其靶細胞有直接的細胞毒(殺傷)作用。抗體制備常用的檢測方法是51Cr(鉻)釋放法,將51Cr-Na2CrO4鹽水溶液與靶細胞(不同的細胞需不同的靶細胞,如NK細胞的靶細胞為K562),於37℃培養1小時左右,51Cr即進入靶細胞,與胞漿結合,洗去游離的51Cr後,即可得到51Cr標記的靶細胞,將待測細胞毒的細胞與51Cr標記的靶細胞混合(比例約為50:1或100:1),靶細胞殺傷越多,釋放到上清液中的游離51Cr就越多,且不能再被其他細胞吸收,用γ射線測量儀檢測上清液中的cpm值,可計算出待檢細胞殺傷活性高低。細胞毒的檢測對腫瘤免疫有較大價值。5.巨噬細胞吞噬功能的測定。將中葯(10%斑蝥)乙醇浸出液浸漬的濾紙(1cm2大小)置於受試者前臂屈側皮膚上,4~5小時後取下濾紙。48小時內皮膚局部可水泡,內含巨噬細胞。取水泡液0.5ml加雞紅細胞懸液0.01ml,37℃經30分鍾後作塗片、染色與鏡檢,計算吞噬百分率及每個巨噬細胞吞噬雞紅細胞的平均數。本試驗有助於腫瘤病情及療效的觀察。6.移動抑制試驗。致敏淋巴細胞與其特異性抗原再次接觸時,可以產生移動抑制因子(MIF)。這種因子可以抑制巨噬細胞和中性粒細胞的移動,使之定位於局部而增強其免疫作用。本試驗用來觀察受檢者淋巴細胞在體外受特異性抗原刺激後,有無MIF產生,以測定機體對某種抗原的特異性細胞免疫反應的功能。7.時間分辨熒光測量技術。時間分辨熒光測量技術(time-resolvedfluorometry,TrF)是一項新型的超微量非放射性分析技術。該技術的敏感性和特異性與放射性核素測量技術相仿,但無放射測量的弊端,故問世雖短,進展卻極為迅速,有取代放射測量之勢。8.細胞因子檢測技術。細胞因子的檢測,2005年起在中醫臨床及實驗室中已廣泛應用。9.細胞受體的檢測。受體是細胞表面標志之一,通過對受體的檢測,可以了解細胞的功能,並為某些疾病的發病機制提供一定的理論依據。

G. 免疫力檢查

免疫力檢查主要是看臨床表現和免疫功能的實驗室檢測。輕的免疫力降低,主要靠臨床表現來判斷;重的免疫缺陷則主要依靠實驗室檢測。

免疫檢查

免疫力檢查是怎麼回事?免疫力的評估主要靠兩方面,一是臨床表現,二是免疫功能的實驗室檢測。

1、較輕的免疫力降低,主要靠臨床表現來判斷。當人體免疫功能失調,或者免疫系統不健全時,感冒、扁桃體炎、哮喘、支氣管炎、肺炎、腹瀉、過敏等疾病就會反復發作,此時最好就醫檢查寶寶的免疫力了。

其次,醫生也可能會讓寶寶做一些化驗,包括 免疫五項 、化驗查血鋅銅等 微量元素檢測 、以及 血常規

2、重的免疫力低下,也就是醫學所說的免疫缺陷。免疫缺陷可以通過實驗室檢測出來,並且檢測的實驗室指標是客觀的。通過細胞免疫、體液免疫、吞噬功能等三方面的檢測,80%的免疫缺陷都可以被發現。免疫缺陷主要有三大臨床表現:反復感染、易發生自身免疫性疾病、易患惡性腫瘤。這與一般意義上的免疫力低下,也就是人們常說的「容易生病」不同。

需要說明的是,寶寶的免疫力不能單純以是否「容易生病」或者感染的次數多少來衡量。以感冒為例,不能說1年患10次感冒的寶寶就比1年患1-2次感冒的寶寶在免疫力方面有問題。一般情況下,正常人感冒通常3-5天就好了,而免疫力有問題的人往往不易恢復,可能還會發展成肺炎;正常人感冒,用幾天葯後就好了,而免疫力有問題的人治療效果差。另外,反復發生中耳炎、反復皮膚感染、其他反復感染,影響到生長發育,要注意有免疫力問題。


免疫五項

免疫五項:包括 IgG、IgA、IgM、IgE、IgD的正常值及增高和降低的意義,可以了解寶寶免疫方面的狀況。

項目 正常值 增高 降低 血清免疫球蛋白G(IgG) 6-16g/L 慢性肝病、結締組織疾病等。 蛋白丟失性腸病、腎病綜合征、混合性免疫缺陷綜合征、遺傳性或獲得性抗體缺乏症等。 血清免疫球蛋白A(IgA) 760-3900mg/L 慢性肝病、亞急性或急性感染性疾病、自身免疫性疾病等。 反復性呼吸道感染、腎病綜合征、自身免疫性疾病、免疫抑制劑治療或妊娠後期等。 血清免疫球蛋白M(IgM) 400-3450mg/L 肝炎、類風濕性關節炎、結締組織疾病、慢性或亞急性感染等。 蛋白喪失性胃腸炎、混合性免疫缺陷綜合征、遺傳性或獲得性抗體缺乏症。 血清免疫球蛋白D(IgD) 1-4mg/L 慢性感染、結締組織病、某些肝病、葡萄菌感染等。 遺傳性或獲得性IgD缺乏綜合征、重症復合性免疫缺陷症等。 血清免疫球蛋白E(IgE) 0.1-0.9mg/L 某些變態反應性疾病(如血清病、變應性亞敗血症等)、哮喘、寄生蟲感染、T細胞功能不全症、急性肝炎、肝硬化、風濕性關節炎、小兒腹瀉等。 復合性免疫缺陷病、無γ-球蛋白血症等。

其他免疫檢查詳解

微量元素檢查 :人體健康與體內微量元素的含量密切相關,兒童時期微量元素的缺乏可以導致生長發育遲緩,免疫功能下降等。

銅:國外曾有報道,機體內銅總量減少,可減弱免疫機制(抵抗疾病力量),降低抗病能力,助長細菌感染,從某種意義上說,微量元素比維生素對機體更需要。銅缺乏可以導致長期反復感染。銅主要參與造血及酶的合成,兒童缺銅也可導致貧血、發育遲緩等。

鐵:嬰幼兒在生長發育過程中,非常容易出現缺鐵問題,缺鐵會使血紅蛋白合成降低,引起缺鐵性貧血。鐵參與構成血紅蛋白,運輸和儲存氧。由於鐵是製造Hb的原料,不足可使Hb合成量減少,嬰幼兒由於生長發育迅速所致鐵供應不足可引起貧血。兒童缺鐵可引起缺鐵性貧血,從而影響生長發育。

鋅:鋅也是人體重要的必需微量元素之一,小兒缺鋅的主要表現為食慾差、生長發育緩慢、免疫功能降低。

鎂:鎂是維持機體代謝的重要微量元素,是機體代謝的重要催化劑,幾乎參與人體的所有新陳代謝過程,兒童缺鎂能引起蛋白質合成系統的停滯,荷爾蒙分泌的減退,消化系統機能異常,腦神經系統障礙等,獲得鎂的最好辦法是多吃綠色蔬菜、胡蘿卜、麵粉等,常喝硬水。鎂能激活多種酶,兒童缺鎂容易感到疲勞,免疫力下降。

鈣:鈣是骨骼和牙齒的主要成分,鈣在維持肌肉興奮、酶的激活中起重要作用。兒童缺鈣可導致兒童佝僂病、生長停滯、骨軟化症等。兒童處於生長發育快速期,膳食結構不合理或兒童偏食、挑食可導致缺鈣。因此,在學齡前對兒童進行合理的補鈣是非常必要的。在補鈣過程中,補充維生素AD非常有必要,這樣可以保證鈣質的最佳吸收和利用

血常規 :血常規化驗是了解寶寶免疫力的化驗項目之一。血紅蛋白的減少可能代表貧血,缺鐵性貧血可引起細胞免疫功能缺陷。



補體的檢測

補體的檢測包括總補體 (CH50)、補體C3(正常值為0.85-2.00g/L)、C4(0.12-0.40g/L)、B因子、補體組分裂解產物(C3c、C3d、C3a 、 C4a 、 C5a 、Ba 和 C5b-C9 復合物等補體裂解片段)、C1 抑制物(診斷遺傳性血管神經性水腫)等。補體系統異常包括先天異常和後天異常,前者見於遺傳性血管神經性水腫、補體各個單一組分缺陷病等。後者分補體含量增多和降低,增高見於部分感染性疾病早期,降低的原因有:

1、免疫機制激活而消耗了補體:如系統性紅斑狼瘡活動期、急性腎小球腎炎早期、系統性紅斑狼瘡伴腎病者、高球蛋白血症等;

2、補體合成減少,如某些慢性肝病、小兒進行性腎小球腎炎等。

【補體檢測臨床意義】

補體C3 :C3是補體系統中含量最多、最重要的一個組分,它是補體兩條主要激活途徑的中心環節,有著重要的生物學功能,因此對C3的研究日趨重視。

補體C4 :C4是補體經典激活途徑的一個重要組分,它的測定有助於SLE等自身免疫性疾病診斷,治療和病因探討。

血清總補體溶血活性(CH50)測定 :補體是存在於正常人新鮮血清中的一組不耐熱、具有酶活性的、比較復雜的血清蛋白。補體是一個多種血清蛋白組成的復雜系統。它除了具有溶血作用和一定的殺菌作用外,還可以促進炎症反應,參與一些變態反應和自身免疫性疾病的病理過程。補體並不隨機體的免疫反應增加而升高,只有在疾病情況下才出現波動。

要機體發生炎症時,補體值可以增高,但在多種自身免疫性疾患和變態反應性疾患,補體值往往下降。因此,臨床上動態觀察補體值的變化,以這一類疾病的診斷、病因研究及預後判斷有重要意義。

項目 正常值 增高 降低 補體C3 1.12±0.55mg/L(1.01-1.86) 見於各種傳染病及組織損傷和急性炎症,肝癌等。 主要見於免疫復合物引起的腎炎、系統性紅斑狼瘡、反復性感染、皮疹、肝炎、肝硬化、關節疼痛等。 補體C4 0.553±0.109mg/L(0.16-0.47) 見於各種傳染病、急性炎症、組織損傷、多發性骨髓瘤等。 見於免疫復合物引起的腎炎、系統性紅斑狼瘡、病毒性感染、狼瘡性症侯群、肝硬化、肝炎等。 血清總補體溶血活性(CH50)測定 50-100kU/L(CH50) 血清補體值增高:可見於許多炎症疾患以及阻塞性黃疸、糖尿病、急性風濕熱、皮肌炎、甲狀腺炎、結節性結腸炎、菌血症、急性心肌梗塞、各種傳染病、肺炎、腫瘤等。 補體減低:見於免疫復合物引起的腎炎、系統性紅斑狼瘡、類風濕關節炎、病毒性肝炎、肝硬化、休克、異體移植排斥反應、痢疾的反復發作、橋本氏甲狀腺炎等。

細胞免疫檢查

細胞免疫檢查:參與免疫應答或與免疫應答有關的細胞檢查。包括淋巴細胞、單核細胞、巨噬細胞、粒細胞、肥大細胞、輔佐細胞,以及它們的前體細胞等。主要有淋巴細胞轉換試驗、FBC玫瑰花試驗、T淋巴細胞亞群、淋巴細胞毒試驗和NK細胞活性測定。

異常結果:

1、T淋巴細胞:可用於T淋巴細胞計數,T淋巴細胞亞群的分類以及判斷T淋巴細胞的活化程度。CD3分子表達於所有成熟T淋巴細胞的表面,是總T淋巴細胞的重要標志,CD3+常見於甲狀腺功能亢進、淋巴細胞性甲狀腺炎、重症肌無力以及器官移植後排斥反應。主要見於免疫缺陷病,如AIDS、先天性胸腺發育不全綜合征以及聯合免疫缺陷病等。亦可見於惡性腫瘤、SLE、免疫抑制劑治療等。

2、B淋巴細胞:SmIg+細胞增高:常與B細胞惡性增殖有關,主要見於慢淋、毛細胞白血病以及巨球蛋白血症等。SmIg+細胞減低:主要與體液免疫缺陷有關,常見於性聯丙種球蛋白缺乏症、嚴重聯合免疫缺陷病等。

需要檢查的人群:免疫力低下者和細胞免疫有缺陷者均可檢查。

【細胞免疫檢查正常值】一般呈陰性結果。有些試驗則是在一定的參考值范圍內。

免疫球蛋白

免疫球蛋白G

【正常值】IgG8.44-19.12g/L

【臨床意義】

1.年齡與血中Ig含量有一定關系。

2.免疫球蛋白異常

(1)低Ig血症:有先天性和獲得性二類。先天性低Ig血症,主要見於體液免疫缺損和聯合免疫缺陷病。一種情況是Ig全缺,如Bruton型無Ig血症,血中IgG<1g/L,IgA與IgM含量也明顯降低。另一種情況是三種Ig中缺一或二種。最多見的是缺乏IgA,患者易患呼吸道反復感染;缺乏IgG易患化膿性感染;缺乏IgM易患革蘭陰性細菌敗血症。獲得性低Ig血症,血清中IgG<5g/L,引起的原因較多,如有大量蛋白丟失的疾病(剝脫性皮炎、腸淋巴管擴張症、腎病綜合征);淋巴網狀系統腫瘤(淋巴肉瘤、何傑金病);中毒性骨髓疾病等。

(2)高Ig血症感染:各種感染,特別是慢性細菌感染可使Ig升高。如慢性骨髓炎、慢性肺膿腫,血IgG可升高。子宮內感染時臍血或生後兩日的新生兒清中IgM含量可>0.2g/L或>0.3g/L。自身免疫病、肝臟疾病(慢性活動性肝炎、原發性膽汗肝硬變、隱匿性肝硬變)患者可有3種Ig升高。慢性活動性肝炎IgG和IgM升高明顯。各種結締組織病中常見Ig升高。SLE以IgG、IgA或IgG、IgM升高較多見;類風濕性關節炎以IgM增高為主。

M蛋白血症:主要見於漿細胞惡性病變,包括多發性骨髓瘤、巨球蛋白血症等。

免疫球蛋白A

【正常值】0.6-3.4g/L(濁度計法)。

【分析變異】濁度計法分析變異系數CV=8%。

【生物學變異】

1.升高社會—經濟學因素(黑色人種)約可升高20%-75%,60-80歲老人約升高15%-60%,雨季較旱季約高20%。鍛煉約升高14%,冬季較夏季約高10%-14%。肥胖女性約升高30%,男性約升高4%-30%。

2.降低新生兒顯著減低達98%-100%,3-5歲兒童約低50%,口服避孕葯約降低11%-40%,妊娠約升高20%

【葯物影響】

L-門冬醯受酶通過增加肝臟合成IgA的作用約升高30%-60%,嗜酒者如繼續飲酒可導致IgA升高。

甲基強的松龍致43%病例的IgA明顯降低。甲苯、二甲苯和苯的職業接觸者其IgA明顯降低,嗜酒者戒酒一年以後可降低。右旋糖苷導致IgA降低。

【病理學變異】

1.升高見於多發性骨髓瘤,α-重鏈病、良性低蛋白血症、酒精性肝硬化、活動性慢性肝炎、多發性硬化、風濕病、感染性疾病和接種。

2、降低見於小腸病、腎臟病、癌、誇希奧科營養不良、醫源性低丙種球蛋白血症、原發性低丙種球蛋白血症和無γ-球蛋白血症。

免疫球蛋白M

【正常值】IgM0.5-1.96g/L

免疫球蛋白D

【正常值】IgDxxg/L

IgD的生物學功能未完全闡明。妊娠末期、大量吸煙者、IgD型骨髓瘤患者血清中IgD含量升高。

免疫球蛋白E

【正常值】IgExxg/L

變態反應性疾病、寄生蟲感染、急性或慢性肝炎、IgE骨髓瘤、SLE、類風濕性關節炎患者血清IgE含量升高。

體液免疫檢查

體液免疫主要是由B細胞承擔,反映體液免疫的項目有B細胞及其亞群計數、B細胞分泌的免疫球蛋白或自身抗體水平、補體及循環免疫復合物水平測定等。

(一)B 細胞及其亞群計數

由於淋巴細胞表面有一種抗原稱為CD抗原或CD分子(已發現130餘種),不同的淋巴細胞類型有不同的CD抗原。通過採用單克隆抗體以免疫熒光技術檢測各群淋巴細胞的CD 抗原來計數淋巴細胞的數量。B細胞表面抗原為CD19 或 CD20。根據B細胞產生抗體時是否需要T細胞輔助分為B1(標記為CD5+CD19+ )和B2(標記為CD5-CD19+)細胞。前者為T細胞非依賴性細胞,產生低親和力的IgM、IgA和IgG3抗體,參與抗細菌感染的黏膜免疫應答,還能產生多種針對自身抗原的抗體,與自身免疫病相關;後者為T細胞依賴性細胞,可產生高親和力抗體,是參與體液免疫應答的主要B細胞,還有抗原提呈和免疫調節功能。外周血中B1細胞和B2細胞的百分比正常值分別為(0-0.964%)和(1.45%-9.49%)。研究顯示,系統性紅斑狼瘡患者的外周血B1淋巴細胞亞群的百分比、B1/B2淋巴細胞亞群比值顯著高於正常對照,B1淋巴細胞亞群與狼瘡活動性顯著相關。

(二)B 細胞功能檢測

1.免疫球蛋白 (Ig) 測定:(1)IgG、IgA、IgM 定量檢測:用散射比濁計進行測定的血清免疫球蛋白正常值為:IgG 6.94-16.18g/L,IgA0.7-3.8g/L,IgM 0.6-2.62g/L。高於正常值為B細胞功能亢進,低於以下值為B細胞功能缺陷:IgG<2.5g/L,IgA<(0.05-0.1)g/L,IgM<(0.05-0.1) g/L。表1列舉不同疾病的血清 IgG、IgA和IgM水平變化。(2)IgE的檢測:包括IgE 總量測定和過敏原特異性 IgE檢測,前者正常值為0-100IU/ml,數值與年齡相關,因過敏與非過敏者的總 IgE 水平有較大交叉,因此總 IgE 測定對於篩查過敏性疾病的意義不大。但也有資料顯示嬰幼兒總 IgE 增高患過敏性疾病的可能性增大,成人總 IgE 水平低(< 50 mg/L)患過敏性疾病的可能性小。過敏原特異性 IgE檢測為檢測針對某種過敏原的特異性 IgE 類抗體含量。經典測定法為放射性過敏原吸附試驗(為體外檢測血清過敏原特異性 IgE),也可用皮膚試驗或點刺法。放射性過敏原吸附試驗適於:①嚴重的皮炎及皮膚劃痕症陽性患者;②皮膚試驗可能激發過敏性休克者;③有毒、非水溶性或高度致敏作用的抗原;④食品過敏原等。皮膚試驗和接觸性過敏的誘發是檢測遲發型過敏反應的兩種常用方法。

2.特異性抗體應答反應 主要是檢測機體接觸各種病原抗原後產生抗體的能力。免疫缺陷的患者抗體產生能力低下或缺如。

(三)自身抗體檢查

自身抗體是B細胞針對自身抗原成分所產生的對自身組織或器官起反應的抗體,自身抗體可以針對細胞內成分也可以針對細胞外成分。根據影響的范圍,自身抗體可以分為器官特異性和器官非特異性自身抗體。

1.器官非特異性自身抗體

(1)類風濕因子(RF):是抗人類多克隆 IgG Fc 段的自身抗體。一般實驗室檢測的類風濕因子是 IgM 抗體 。因為類風濕因子最先在類風濕性關節炎病人血清中檢測到,故得此名稱。一般正常人類風濕因子滴度為 1:80 。需要強調的是即便存在類風濕因子,甚至是高滴度的,也不能做為診斷類風濕關節炎的特異性依據。約 1%-5% 健康人群體內存在類風濕因子。

(2)抗核抗體(ANA):抗核抗體是以細胞的核抗原為靶抗原的自身抗體的總稱。使用不同的血清稀釋度(滴度)可以對血清中抗核抗體行半定量。結果以陽性(滴度)、陰性表示。還可描述熒光圖譜,如均質型、周邊型、斑點型、核仁型等,各型提示存在不同種類抗體。抗核抗體通常作為各種針對核抗原的不同抗體的篩查實驗。抗核抗體檢測是診斷系統性紅斑狼瘡等結締組織病的重要實驗室依據。

(3)抗雙鏈DNA抗體(ds-DNA 抗體):是診斷系統性紅斑狼瘡的特異性抗體,抗體滴度還與疾病的嚴重程度相關,有助於臨床診斷、判斷預後以及了解系統性紅斑狼瘡的活動程度。

(4)抗可提取核抗原(extractable nuclear antigen,ENA )抗體:血清中針對一組水溶性、可使用鹽水提取的核抗原成分的抗體。抗ENA 抗體是診斷自身免疫病有效的實驗室檢測(表 3 ),包括對系統性紅斑狼瘡、系統性硬化症、多發性肌炎、皮肌炎、混合性結締組織病、乾燥綜合征和重疊綜合征等的診斷。

( 5)抗 Sm 抗體:對診斷系統性紅斑狼瘡具有高度特異性,但診斷時系統性紅斑狼瘡病人只有15%-30%呈陽性,與病情活動無關。亞裔和非洲裔陽性率比白種人高。

(6)抗核糖核蛋白(U1RNP)抗體:是混合性結締組織病的特徵性抗體。系統性紅斑狼瘡 和系統硬化症患者血清中也可陽性。

(7)抗SSA和抗SSB抗體:兩者常同時存在,是乾燥綜合征的特徵性抗體。 系統性紅斑狼瘡病人也可存在上述兩種抗體,尤其是明顯對光敏感而無腎損害的病人。此外,新生兒狼瘡綜合征也可出現抗 SSA 和 / 或 SSB 抗體。

(8)抗 Jo-1 抗體:是針對組氨醯-tRNA 合成酶的抗體。與皮肌炎關系較密切。雖然僅 25%-30%的皮肌炎病人抗 Jo-1 抗體陽性,但具有較高特異性。在合並有間質性肺部疾病的皮肌炎患者抗Jo-1 抗體陽性率較高。

(9)抗 Scl-70 抗體:是針對DNA 拓撲異構酶 I的抗體,與彌漫性系統性硬化症關系最大,陽性率約 30%。

(10)抗組蛋白抗體:與葯物性狼瘡相關。

(11)抗中性粒細胞抗體( ANCA):主要有2種免疫熒光類型,即分布於細胞漿 (cANCA) 和分布於細胞核周圍 (pANCA)。cANCA 與 Wegener's肉芽腫有關,滴度與臨床表現嚴重性相關。

(12)抗心磷脂抗體:約40%的系統性紅斑狼瘡患者抗心磷脂抗體陽性。

2.器官特異性自身抗體

此類抗體較多,而且不斷有新的抗體被發現和應用於臨床。由於僅僅是針對特定組織或器官抗原產生的抗體,所以這類抗體主要與相對應的組織器官起反應,引起這些組織器官的損害。一般這類抗體在診斷相應的疾病中具有重要的價值,尤其是存在高滴度抗體時。

H. 免疫細胞功能檢測方案

免疫細胞功能檢測方案

為什麼要做體檢

可以清晰了解自己身體當前狀態:

通過體檢能了解自身處於健康狀態、亞健康狀態、疾病狀態

早期發現疾病隱患:

隨著年齡的增長,人類罹患某些疾病的機會也在增加。這些疾病大都是早期沒有明顯狀態,但往往有嚴重的後果,通過體檢中先進的檢測手段及精密儀器,可早期發現疾病隱患。

早期干預:

健康體檢是身體健康時主動到醫院或專門的體檢中心對整個身體進行檢查,主要目的是為了通過檢查發現是否有潛在的疾病,以便及時採取預防和治療措施。體檢過程中有專業的全科醫師對體檢報告進行解讀,根據健康狀況給予正確的臨床就醫及自我保健方案指導。

免疫力低下有什麼表現

免疫力低下的表現為身體易於被感染或患癌症:免疫力超常也會產生對身體有害的結果,如引發過敏反應、自身免疫系統疾病等。因為常患病,加重了機體的消耗,所以一般有體質虛弱、營養不良、精神萎靡、疲乏無力、食慾降低睡眠障礙等表現,生病、打針吃葯便成了家常便飯。每次生病都要很長時間才能恢復,而且常常反復發作。長此以往會導致身體和智力發育不良,還易誘發重大疾病。

深層原因是免疫力低下或免疫力不健全。當人體免疫功能失調,或者免疫系統不健全時, 感冒反復發作、扁桃體炎反復發作、哮喘反復發作、支氣管炎反復發作、肺炎反復發作、腹瀉反復發作,所以千萬不可小視。

為什麼要做免疫力檢測?

人體之所以得癌症,一定是出現了免疫逃逸,因為人體的免疫監測能力出現了缺失,導致癌症細胞游離到免疫力最弱的地方發生,好比一個沒有監控的體制,一定會出現腐`一樣,所以就成了癌症滋生的溫床。

通過免疫功能檢測,靶向發現人體的.監測能力,識別能力,抵抗能力,殺傷能力,再用靶向細胞進行修復。

免疫系統重要性

免疫系統最重要的功能是清楚體內各種垃圾,它涉及不計其數的細胞、特殊物質及器官之間的高度紛繁復雜的相互作用。它隨時處於戰備狀態,能夠預防疾病,並能准確地知道應該什麼時候、在哪裡、怎樣採取適當行動摧毀入侵的物質,而不會傷害人體其他細胞。任何葯物也無法取代人體內與生俱來的,兼具

防禦和修復雙重功能的免疫系統。 這也就是為什麼不是每個人感染了病毒都要生病。

醫學研究顯示,人體百分之九十的疾病與免疫系統失調有關。免疫系統猶如一支訓練有素的精銳部隊,捍衛人體的健康。它具有保護人體免於感染細菌、病毒、識別並清除腫瘤、清除代謝廢物,修補受損器官組織、產生抵抗力等功能。

免疫系統的細微差別直接影響壽命,可見免疫系統對人類的重要性。

免疫力檢測內容

●醫學研究顯示,人體百分之九十的疾病與免疫系統有關,它具有保護人體免於感染細菌、病毒、識別並清除腫瘤、清除代謝廢物、修補受損器官組織,產生抵抗力等功能。

●自身細胞免疫功能檢測是當前國際上最為先進檢測技術。通過檢測可以了解自身免疫細胞活性數量和殺傷病毒能力,總體反應機體當前的免疫功能、狀態和平衡水平,並可以輔助診斷某些疾病。

免疫力檢測主要指標的意義

1NK 細胞

是機體重要的免疫細胞,與抗腫瘤、抗病毒感染和免疫調節有關

NK-T 細胞

主要參與免疫調節和細胞毒作用,具有消滅癌細胞和抗癌復發的作用

總 T 細胞

機體細胞免疫的整體反應

殺傷性 T 細胞

隨著年齡的增長而降低,增加了人體病毒感染的機會,並與抗腫瘤免疫功能低下有關

CD4/CD8

反應機體免疫功能狀態的指標。過高時表明細胞免疫功能處於過度活躍」狀態,容易出現自體免疫反應。過低時表明免疫功能處於抑制狀態

初始 T 細胞、記憶 T 細胞

免疫系統的衰老,初始 T 細胞比例越來越低,而記憶 T 細胞的比例則隨之升高。換言之,免疫應答基礎越來越差

效應性記憶細胞

機體存在炎症時偏高

初始細胞

早期分化程度低的細胞,免疫系統的基礎

中央型記憶細胞

偏高提示為體內免疫處於激活狀態,可能存在感染後;偏低抗感染能力較差,免疫應答基礎較差。

MDSC

髓源性抑制細胞,在腫瘤、感染、炎症、敗血症、外科損傷等情況下增高

免疫力重建作用及原理

體內 T 細胞的多態性顯著下降,意味著你的 T 細胞種類不夠豐富了(或趨於匱乏),對於某些新出現的「敵人」可能喪失了識別與應答能力了。這個新「敵人」可能就是一個腫瘤細胞,一旦它逃避了 T 細胞的識別和應答,他就可以以最快的速度有小變大,細胞由 1 個變成 2 個,再由 2 個變成 4 個、8 個、16 個。

直至形成腫瘤細胞團塊,此時就形成了「腫瘤優勢狀態」,就會有症狀出現,進

而去醫院檢查就會發現體內有腫塊、腫瘤標記物升高等。

免疫重建過程就是恢復體內 T 細胞的多態性的過程。操作過程概要為:抽取受試者 80ml 靜脈血,在超潔凈的實驗室里分離出 T 淋巴細胞,並將其置於特殊培養基中連續培養 15-19 天,使這些 T 細胞最終被擴增 100-200 倍,成為中央型記憶 T 細胞或幹細胞樣中央型記憶 T細胞。這些記憶 T 細胞的特點是種類豐富,分化為效應型 T 細胞的潛能巨大,具有自我更新的能力,在體內存活時間很長(例如 TSCM 可存活 12 年之久),無任何毒副作用。這些細胞回到體內可以在一定的時間內恢復 T 細胞的多態性,也就是達到了免疫重建的目的。

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I. 細胞免疫功能檢測常用有哪幾種方法

細胞免疫(CMⅠ)是由多種細胞相互作用的結果。免疫細胞間相互作用導致多種細胞因子的釋放。因此細胞功能測定不僅涉及T細胞的數量和功能與包括各類因子活性測定,因此評價機體的細胞免疫功能不僅程序復雜,且很難標准化。
一、遲發型過敏反應的體外檢測方法
皮膚試驗和接觸性過敏的誘發是檢測遲發型過敏反應(DTH)的兩種常用方法。皮膚試驗中誘發對曾經使病人致敏的抗原的再次應答,而接觸性過敏是測試受者對從未接觸過的物質發生致敏的能力。
1.皮膚試驗 用皮膚試驗診斷DTH,常用的抗原有結核菌純蛋白衍生物(PPD)、腮腺炎病毒、念珠菌素等,在人類試驗時在前臂皮內注射少量可溶性抗原,24~48小後,測量紅腫硬結的大小,硬結直徑大於10mm即被看作為陽性。表明受試者對該病原菌有了一定的細胞免疫能力,若皮試無反應,可用更高濃度的抗原重復試驗,若仍無反應即為陰性,需排除皮試技術誤差,也可能受試者從未接觸過此抗原,也可能由於細胞免疫功能缺損,或由於細胞免疫功能缺損,或由於嚴重感染(麻疹、慢性播散性結核)造成的無反應性。
2.接觸性過敏常應用低分子量化合物如二硝基氯苯(DNCB)誘生接觸性過敏。化合物與皮膚蛋白質結合而導至DTH反應。在動物試驗時,初次皮膚上塗抹DNCB後間隔7~10天再激發刺激,則皮膚出現即為陽性。此試驗人類已不使用。
二、細胞免疫的體外檢測方法
體外檢測淋巴細胞的數量和功能,最易採集的是血標本,首先需分離或純化淋巴細胞,一般使用萄聚糖-泛影葡胺配成比重為1.077的淋巴細胞分層液,當將血液重疊於淋巴細胞分層液之上離心時,由於紅細胞(1.092)、多形核白細胞(1.090)、淋巴細胞(1.070)的比重不同而相互分開。淋巴細胞和單核細胞在血漿和分層液交界處形成一薄層。仔細分出這一薄層的細胞,其中淋巴細胞佔80%,單核細胞佔20%,淋巴細胞中T細胞佔80%,B細胞佔4%~10%,其作為非DT、非B細胞。
1.T細胞計數
(1)E花環法:人類T細胞表面有SRBC受體(CD2)能與SRBC結合形成玫瑰花環樣結構,將經分層液分離現的RBM懸液與SRBC在含有血清的平衡鹽水中混合,經37℃培養5~10分鍾放4℃過夜,取細胞懸計數,外周血淋巴細胞中約70%~80%淋巴細胞結成花環即為T細胞。目前此方法已用來分離T細胞,而不用做T細胞計數。
(2)用單克隆抗體計數T細胞:將人的PBM分成三等份,分別用小鼠抗人CD3、CD4和CD8的單克隆抗體作第一抗體與細胞結合,再用FITC標記的兔抗小鼠IgG抗體作第二抗體進行間接免疫熒光染色,在熒光顯微鏡下或流式細胞儀檢測結果,在PBM中被CD3抗體染上熒光的細胞稱為CD3 細胞即總T細胞。正常人在PBM中T細胞佔70%~80%。正常人的CD4 細胞和CD8 細胞之和應與CD3 細胞數一致。CD4 細胞與CD8 細胞的比值正常人約為2/1而艾滋病患者則比值小於1.7。
2.T細胞活化試驗 T細胞能被非特異的物質稱為有絲分裂原所激活而向淋巴母細胞轉化。T細胞轉化過程可伴隨有DNA、RNA、蛋白質的合成增加,最圖導致細胞分裂。在光學顯微鏡下可計數轉化後的淋巴細胞數,也可用氚標記的胸腺嘧啶核苷(3HTdR)摻入正在分裂的淋巴細胞,用液閃測定儀檢查摻入正在分裂的淋巴細胞,用液測量儀檢查摻入的3H-TdR的多少確定淋巴細胞轉化率。最近有一種不用同位素,又可用儀器測量的淋巴細胞增殖反應的檢查法,稱為MTT檢測法,MTT是一種甲氮唑鹽,它是細胞線粒體脫氫酶的底物,細胞內的酶可將MTT分解產生藍黑色甲(fromazan)產物。該產物的多少與活性細胞數正相關。結果可用酶標檢測儀(595mm)測量匯豐銀行密度,做為MTT法的檢查指標。此法的結果與3H-TdR摻入法平行,並能反應試驗中的活細胞數。
3.細胞毒試驗 TC細胞、NK細胞、LAK細胞、TIL細胞對其靶細胞有直接的細胞毒(殺傷)作用。常用的栓測細胞毒效應的方法是51Cr-Na2Cro4鹽水溶液與靶細胞胞混合,於37℃培養1小時左右,51Cr即可進入靶細胞,與胞漿蛋白結合,洗去游離的51Cr後,即可得到51Cr標記的靶細胞,將待檢細胞毒性的細胞與51Cr標記的靶細胞混合(比例約為50:1或100:1)靶細胞被殺傷越多,釋放到上清液中的液游離的51Cr越多,且不能被其他細胞吸收。用γ射線測量儀檢測上清液中的cpm值,即可計算出待檢細胞殺傷活性的高低。
細胞毒試驗檢測Tc細胞效應功能是否健全,及經IgG介導的ADCC效應,或NK細胞在抗腫瘤免疫中的作用是有意義的。
4.混合淋巴細胞的反應(MIR) 是體外研究T細胞的較好的方法,雙向MLR常被用來篩選骨髓移植的供體。來自不同供體的淋巴細胞分別與病人的淋巴細胞混合培養4~5天,在最後8小時摻入51TdR摻入法測T細胞的反應性。或用細胞毒法觀察受刺激的T細胞與活的靶細胞混合(靶細胞來自與刺激細胞相同的個體)如果T細胞受刺激後產生了細胞毒T細胞,可殺死活的細胞,根據靶細胞釋放51Cr的多少算出T細胞移動抑制因子)和LIF(白細胞移動抑制因子)來評估細胞免疫功能。近年來應用測定IL-2的免疫酶技術,操作簡單,並能定量以取代了MIF和LIF的測定。單個核細胞與分裂原一起培養24小時,然後測定清液中的IL-2活性。在細胞免疫功能缺損時,特別是AIDS病人,IL-2分泌明顯降低。而有些疾病,如多發性硬化、類風濕關節炎、移植排斥反應等病人體內血清中IL-2水平升高,表明病人T細胞活性增高。發生移植排斥反應的病人尿中IL-2也可升高。
也可用酶聯免疫吸附試驗測定各種體液中活化的T細胞脫落的IL-2受體(CD25),一般來說IL-2的水平和IL-2受體水平是平行的,IL-2和IL-2受體的檢測可用於對某些疾病的監測,如移桿排斥、自身免疫病以及接受免疫抑制治療的病人。
對體外培養的細胞進行細胞因子產生能力檢測是檢查細胞培養上清液中細胞因子的生物活性或抗原性。現已可用核酸雜交技術,即從組織中或細胞中提取RNA,與同位素或酶標記的該種細胞因子的cDNA探針作分子雜交試驗,即印跡(dot blotting)或Northern印跡,若查出有某種因子的mRNA存在,即說明該細胞在所處培養條件下有產生某種細胞因子的能力。

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