李斯特菌檢測方法

⑴ 病原微生物中細菌常見檢測方法有哪些

病原微生物中細菌常見檢測方法有哪些

病原微生物種類繁多，變異迅速，快速鑒定病原微生物的檢驗技術也在不斷發展前進著。目前，應用比較廣泛的病原微生物檢測方法主要有直接塗片鏡檢、分離培養、生化反應、血清學反應、核酸分子雜交、基因晶片、多聚酶鏈反應等，該文對這些檢測技術進展做一綜述。 對人和動物具有致病性的微生物稱為病原微生物，又稱病原體，有病毒、細菌、立克次體、支原體、衣原體、螺旋體、真菌、放線菌、朊粒等。這些病原微生物可引起感染、過敏、腫瘤、痴獃等疾病，也是危害食品安全的主要因素之一。近年來出現的SARS、高致病性禽流感、西尼羅病毒感染等疾病的傳染性極強，往往造成世界性大流行，因此對病原體的檢測必須做到快速、准確。常規病原學檢測方法操作繁瑣，檢測周期長，而且對操作人員技術水平要求比較高。隨著醫學微生物學研究技術的不斷發展，病原學診斷已不再局限於病原體水平，深入到分子水平、基因水平的檢測手段不斷出現並被應用於臨床和實驗室 J。核酸分子雜交技術、PCR技術、基因晶片技術等檢測方法，自動化程度高，快速省時、無污染、結果精確，可以准確靈敏地鑒定病原微生物。1 傳統的病原微生物的檢測方法傳統的病原微生物學實驗室檢查以染色、培養、生化鑒定等為主，將標本直接塗片染色鏡檢和接種在培養基上進行分離培養是對細菌或真菌感染性疾病進行病原學診斷的常用方法。1．1 直接塗片鏡檢病原微生物體形體積微小，大多無色半透明狀，將其染色後可藉助顯微鏡觀察其大小、形態、排列等。直接塗片染色鏡檢簡便快速，對那些具有特殊形態的病原微生物感染仍然適用，例如淋球菌感染、結核分枝桿菌、螺旋體感染等的早期初步診斷。直接塗片鏡檢不需要特殊的儀器和裝置，在基層實驗室里仍然是十分重要的病原微生物檢測手段。1．2 分離培養與生化反應 分離培養主要用於臨床標本(如血液、痰、糞便等)或培養物中有多種細菌時對某一種細菌的分離。細菌的生長繁殖需要一定時間，檢測周期較長，不能同時處理批量樣本。為解決這一問題，各種自動化培養和鑒定系統不斷產生，傳統鑒定方法也在逐步改進，大大加快了檢驗速度。例如Microscan WalLCAway全自動微生物分析儀，可同時做細菌鑒定和葯敏試驗，檢驗500多個菌種。苛養菌如肺炎鏈球菌、淋病奈瑟菌、流感嗜血桿菌等對營養要求比較高，常規培養陽性率低。雍剛 等將不要同比例的葡萄糖、玉米澱粉、生長因子、酵母粉、氨基酸等特殊增菌劑加入到巧克力培養基中製成了新型淋病奈瑟菌培養基，大大提高了淋病奈瑟菌的分離培養率。蘇盛通等在營養瓊脂中加人了中葯紅棗、赤小豆培養甲型鏈球菌、乙型鏈球菌、肺炎鏈球菌等細菌，生長指數明顯高於血平板。1．3 組織細胞培養 活組織細胞培養適於專營活組織細胞內生存的病原體，包括病毒、立克次體、衣原體等。不同病原體敏感的組織細胞是不一樣的，將活細胞從病原體敏感的動物組織中取出在體外進行原代培養或用病原體敏感細胞系進行傳代培養，再將病原體接種於相應的組織細胞中後，病原體可在其中繁殖增長，引起特異性的細胞病變效應。也可以將病原體直接接種於敏感動物體內，引起相應組織器官出現特異的病理學改變。往往可以根據這些特異的病變對病原體進行鑒定。2 血清學與免疫學檢測血清學檢測是通過已知的抗體或抗原來檢測病原體的抗原或抗體從而對病原體進行快速鑒定的技術，簡化了鑒定步驟，常用的方法包括血清凝集技術、乳膠凝集實驗、熒光抗體檢測技術、協同凝集試驗、酶聯免疫測試技術等。酶聯免疫技術的應用大大提高了血清學檢測的敏感性和特異性，不僅可檢測樣本中病原體抗原，也可檢測機體的抗體成分。幽門螺奸菌在我國人群感染率高達50％ ～80％ ，應用酶聯免疫吸附法(ELISA)檢測唾液中抗HP抗體來診斷HP感染，其結果滿意。乙型肝炎病毒(HBV)在我國人群中感染率極高，ELISA應用於乙型肝炎病人早期血清學診斷的效果最為明顯。臨床上致病菌往往和非致病菌混合在一起，如何從這些細菌中分離出目標菌是關鍵。免疫磁珠分離技術(IMBS)是近年來發展起來的在微生物檢測領域中一種新技術。其基本原理是將特定病原體的單抗或多抗或二抗偶聯到磁珠微球上，通過抗原抗體反應形成磁珠一目標病原體復合物或磁珠一一抗一目標病原體復合物，在外部磁場磁力的作用下，將目標病原體分離出來。目前已經開發出了針對各種病原體的免疫磁珠，如大腸埃希菌、李斯特菌、白色念珠菌、軍團菌等，廣泛應用到各級科研和實驗室 。經IMBS分離出的白色念珠菌可直接在顯微鏡下檢測，檢測時間縮短至4 h。IM—Bs還可以和其它檢測技術聯合來檢測病原菌，免疫磁珠分離得到的目標菌可繼續用於分離培養使大腸埃希菌0157最低檢測限由200 cfu·g 提高到2 cfu·g～；IMBS結合聚合酶鏈反應(IMBS—PCR)可對培養條件比較特殊的細菌如苛養菌、厭氧菌進行快速檢測，肉類中的產毒素型產氣莢膜梭菌經IMBS．PCR檢測

微生物的快速檢測方法有哪些

目前主要普通培養（簡稱標）般報告要用儀器、核酸檢測（PCR）、目前快速檢測（主要包括：免疫磁珠、酶聯免疫試劑盒、金標檢測卡等根據自需求選擇

食品微生物的檢測方法有哪些？

目前主要有普通培養法（簡稱國標方法）一般出報告的要用，儀器法、核酸檢測法（PCR）、還有目前的快速檢測法（主要包括：免疫磁珠、酶聯免疫試劑盒、金標檢測卡等。這個根據自己的需求來選擇吧。

簡述hiv的微生物學檢測方法有哪些

簡述hiv的微生物學檢測方法有哪些
梅毒是由蒼白螺旋體感染引起的一種性傳播性疾病 。梅毒螺旋體感染人體後出現兩種抗體：一種是特異性抗體(TPHA)，為lgM。當有補體存在和厭氧條件下，對活螺旋體的動力有抑製作用，並可將螺旋體殺死或溶解，對機體的再感染有保護作用。另一類是非特異性抗體（快速血漿反應素 RPR）。為lgA與lgM的混合物，可與正常生物組織中的類脂抗原發生非特異性結合，對人體無保護作用

微生物的傳統檢測方法有哪些？

傳統檢測有三種方法
1、直接顯微鏡觀察，正常情況，在一定的培養條件下（相同的培養基、溫度以及培養時間），同種微生物表現出穩定的菌落特徵。可以通過顯微鏡觀察菌落特徵對微生物種類進行判斷。

2、選擇培養基培養微生物或人為提供有利於目的菌株生長的條件，選擇培養基，其作用是允許特定種類的微生物生長，同時抑制或阻止其他微生物生長。選擇培養一般是通過觀察微生物的同化作用型別或某一特徵進行間接判斷，得到的微生物往往並不只有一種，但是能夠大致確定這些微生物存在的共有特徵從而對其分類。

3、鑒別培養基，根據微生物的代謝特點，在培養基中加入某種指示劑或化學葯品。與選擇培養相比，鑒別培養基的鑒別所得結果的范圍比較小，一般可直接測定某微生物的種類。

現代定義

微生物：個體難以用肉眼觀察的一切微小生物之統稱。
微生物包括細菌、病毒、真菌、和少數藻類等。（但有些微生物是肉眼可以看見的，像屬於真菌的蘑菇、靈芝等。）病毒是一類由核酸和蛋白質等少數幾種成分組成的「非細胞生物」，但是它的生存必須依賴於活細胞。
根據存在的不同環境分為空間微生物、海洋微生物等，按照細胞機構分類分為原核微生物和真核微生物。

主要特徵

1、體小面大
2、吸多轉快
3、生長繁殖快

微生物的這一特性使其在工業上有廣泛的應用，如發酵、單細胞蛋白等。微生物是人類不可或缺的好朋友。

水產品致病微生物檢測方法有哪些

這個是我在網上找到的的微生物的檢測試紙片，也不知道方法咋樣，你要也可以去網站上看看的
像大腸桿菌測試紙片 腸出血性大腸桿菌O157:H7是一種新出現的食物傳播性疾病的病因。它除了引起腹瀉、出血性腸炎外，還可發生溶血性尿毒綜合症、血栓性血小板減少性紫癜等嚴重的並發症。自1982年美國首次發現因該致病菌引起的食物中毒以來，腸出血性大腸桿菌O157:H7疫情開始逐漸擴散和蔓延，相繼在英國、加拿大、日本等多個國家引起腹瀉爆發和流行。我國已陸續有十餘個省份在市售食品、進口食品、腹瀉病患者、家畜家禽等分離到大腸桿菌O157:H7。大腸桿菌O157測試片（FilmplateTM E.coli O157BO204）3方元方圓生物的採用進口高選擇性顯色培養基作為主要原料，運用專有技術，做成一次性快速檢驗產品，一步培養15～24h就可確認，大大地簡化了檢測程式，非常適合各級檢驗部門和食品企業使用。本品適用於海產品、水產品、各類熟肉製品和冷葷、蛋及蛋製品等的快速檢測。參照標准：食品衛生微生物學檢驗大腸埃希氏菌O157:H7/NM檢驗（GB/T4789.36）。

物體表面的微生物檢測方法有哪些

; 用浸有滅菌生理鹽水的棉簽在被檢物體表面取25cm2的面積，在其內塗抹10次，然後剪去手接觸部分棉棒，將棉簽放入含10mL滅菌生理鹽水的取樣管內送檢。擦拭時棉簽要隨時轉動，保證擦拭的准確性。對每個擦拭點應詳細記錄所在分場的具 *** 置、擦拭時間及所擦拭環節的消毒時間

牛奶中細菌檢測方法有哪些

先配製固體培養基，再劃線培養1天，之後挑每一種菌落的細菌製片，顯微鏡下觀察細菌的種類

⑵ 食品微生物學檢驗標准

食品微生物學檢驗標准匯總

食品微生物學檢驗標准眾多，其中有較為通用的也有與具體產品相關聯的。下面是我為大家帶來的關於食品微生物學檢驗標准匯總的知識，歡迎閱讀。

1GB類

GB 4789.1-2010 食品安全國家標准 食品微生物學檢驗 總則

GB 4789.2-2010 食品安全國家標准 食品微生物學檢驗 菌落總數測定

GB 4789.3-2010 食品安全國家標准 食品微生物學檢驗 大腸菌群計數

GB 4789.4-2010 食品安全國家標准 食品微生物學檢驗沙門氏菌檢驗

GB 4789.5-2012 食品安全國家標准 食品微生物學檢驗 志賀氏菌檢驗

GB 4789.7-2013 食品安全國家標准 食品微生物學檢驗 副溶血性弧菌檢驗

GB 4789.9-2014 食品安全國家標准 食品微生物學檢驗 空腸彎麴菌檢驗

GB 4789.10-2010 食品安全國家標准 食品微生物學檢驗 金黃色葡萄球菌檢驗

GB 4789.11-2014 食品安全國家標准 食品微生物學檢驗 β型溶血性鏈球菌檢驗

GB 4789.13-2012 食品安全國家標准 食品微生物學檢驗 產氣莢膜梭菌檢驗

GB 4789.14-2014 食品安全國家標准 食品微生物學檢驗 蠟樣芽胞桿菌檢驗

GB 4789.15-2010 食品安全國家標准 食品微生物學檢驗 黴菌和酵母計數

GB 4789.26-2013 食品安全國家標准 食品微生物學檢驗 商業無菌檢驗

GB 4789.28-2013 食品微生物學檢驗 培養基和試劑的`質量要求

GB 4789.30-2010 食品安全國家標准 食品微生物學檢驗單核細胞增生李斯特氏菌檢驗

GB 4789.31-2013 食品安全國家標准 食品微生物學檢驗 沙門氏菌、志賀氏菌和致瀉大腸埃希氏菌的腸桿菌科噬菌體診斷檢驗

GB 4789.34-2012 食品安全國家標准 食品微生物學檢驗 雙歧桿菌的鑒定

GB 4789.35-2010 食品安全國家標准 食品微生物學檢驗 乳酸菌檢驗

GB 4789.38-2012 食品安全國家標准 食品微生物學檢驗 大腸埃希氏菌計數

GB 4789.39-2013 食品安全國家標准 食品微生物學檢驗 糞大腸菌群計數

GB 4789.40-2010 食品安全國家標准 食品微生物學檢驗 阪崎腸桿菌檢驗

2GBT類

GBT 22429-2008 食品中沙門氏菌、腸出血性大腸埃希氏菌O157及單核細胞增生李斯特氏菌的快速篩選檢驗 酶聯免疫法

GBT 27635-2011 斑點叉尾鮰嗜麥芽寡養單胞菌檢測操作方法

GBT 4789.6-2003 食品衛生微生物學檢驗 致瀉大腸埃希氏菌檢驗

GBT 4789.8-2008 食品衛生微生物學檢驗 小腸結腸炎耶爾森氏菌檢驗

GBT 4789.12-2003 食品衛生微生物學檢驗 肉毒梭菌及肉毒毒素檢驗

GBT 4789.16-2003 食品衛生微生物學檢驗 常見產毒黴菌的鑒定

GBT 4789.29-2003 食品衛生微生物學檢驗 椰毒假單胞菌酵米面亞種檢驗

GBT 4789.32-2002 食品衛生微生物學檢驗 大腸菌群的快速檢測

GBT 4789.36-2008 食品衛生微生物學檢驗 大腸埃希氏菌O157:H7NM檢驗

2SBT類

SBT 10315-1999 孢子數測定法

SBT 10316-1999 孢子發芽率測定法

3SN類

SN 0170-1992 出口食品沙門氏菌屬(包括亞利桑那菌)檢驗方法

SNT 0040-1992 出口食品沙門氏菌屬(包括亞利桑那菌)計數檢驗方法

SNT 0168-2015 進出口食品中菌落總數計數方法

SNT 0169-2010 進出口食品中大腸菌群、糞大腸菌群和大腸桿菌檢測方法

SNT 0172-2010 進出口食品中金黃色葡萄球菌檢驗方法

SNT 0173-2010 進出口食品中副溶血性弧菌檢驗方法

SNT 0174-2011 出口食品小腸結腸炎耶爾森氏菌檢驗方法

SNT 0175-2010 進出口食品中彎麴菌的檢測方法

SNT 0176-2013 出口食品中蠟樣芽胞桿菌檢測方法

SNT 0177-2011 出口食品中產氣莢膜梭狀芽孢桿菌計數方法

SNT 0178-2011 出口食品嗜熱菌芽胞(需氧芽胞總數、平酸芽胞和厭氧芽胞)計數方法

SNT 0184.3-2008 進出口食品中單核細胞增生李斯特氏菌檢測方法 免疫磁珠法

SNT 0184.4-2010 食品中李斯特氏菌檢測 第4部分:膠體金法

SNT 0330-2012 出口食品微生物學檢驗通則

SNT 0475-1995 出口商品中糞鏈球菌群檢驗方法

SNT 0477-1995 出口食品中B群鏈球菌檢驗方法

SNT 0738-1997 出口食品中腸桿菌科檢驗方法

SNT 0751-2010 進出口食品中嗜水氣單胞菌檢驗方法

SNT 0865-2000 進出口食品中肉毒梭菌及其肉毒毒素檢驗方法

SNT 1022-2010 進出口食品中霍亂弧菌檢驗方法

SNT 1035-2011 進出口食品中產毒青黴屬、麴黴屬及其毒素的檢測方法

SNT 1059.1-2002 進出口食品中沙門氏菌 濾膜篩選法

SNT 1059.4-2005 進出口食品中大腸桿菌檢驗方法 谷氨酸脫羧酶法

SNT 1059.5-2006 食品和動物飼料大腸桿菌O157的檢測方法 免疫磁珠法

SNT 1059.6-2008 進出口食品中沙門氏菌屬檢測方法 垂直膜過濾法

SNT 1059.7-2010 進出口食品中沙門氏菌檢測方法 實時熒光PCR法

SNT 1071-2014 出口食品中厭氧亞硫酸鹽還原梭狀芽孢桿菌檢測方法

SNT 1538.1-2005 培養基制備指南 第1部分 實驗室培養基制備質量保證通則

SNT 1538.2-2007 培養基制備指南 第2部分 培養基性能測試實用指南

SNT 1615-2005 食品和動物飼料中嗜冷微生物計數方法

SNT 1748-2006 進出口食品中寄生蟲的檢驗方法

SNT 1800-2006 食品和動物飼料微生物學30℃菌落計數方法

SNT 1827-2006 進出口食品中產志賀毒素大腸桿菌檢驗方法

SNT 1869-2007 食品中多種致病菌快速檢測方法 PCR法

SNT 1870-2007 食品中致病菌檢測方法 實時PCR法

SNT 1895-2007 食品中金黃色葡萄球菌的快速計數法 PetrifilmTM 測試片法

SNT 1896-2007 食品中大腸菌群和大腸桿菌快速計數法 PetrifilmTM 測試片法

SNT 1897-2007 食品中菌落總數的測定 PetrifilmTM測試片法

SNT 1933.1-2007 食品和水中腸球菌檢驗方法 第1部分 平板計數法和最近似值測定法

SNT 1933.2-2007 食品和水中腸球菌檢驗方法 第2部分 濾膜法

SNT 1941.1-2007 進出口食品中乳酸菌檢驗方法 第1部分 分離與計數方法

SNT 1941.2-2007 進出口食品中乳酸菌檢驗方法 第2部分 PetrifilmTM測試片法

SNT 1941.3-2007 進出口食品中乳酸菌檢驗方法 第3部分 乳酸桿菌的PCR法

SNT 1962-2007 食品中克雷伯氏菌檢測方法

SNT 2098-2008 食品和化妝品中的菌落計數檢測方法 螺旋平板法

SNT 2099-2008 進出口食品中綠膿桿菌檢測方法

SNT 2416-2010 進出口食品中金黃色葡萄球菌腸毒素A檢測方法 電泳和免疫印跡法

SNT 2522.1-2010 進出口輻照食品檢測方法 微生物學篩選法

SNT 2524.1-2010 進出口食品中變形桿菌檢測方法 第1部分 定性檢測方法

SNT 2524.2-2010 進出口食品中變形桿菌檢測方法 第2部分 MPN法

SNT 2525-2010 食品中肉毒梭菌的PCR檢測方法

SNT 2562-2010 食品中霍亂弧菌分群檢測 MPCR-DHPLC法

SNT 2565-2010 食品中志賀氏菌分群檢測 MPCR-DHPLC法

SNT 2566-2010 食品中黴菌和酵母菌的計數 Petrifilm 測試片法

SNT 2567-2010 食品及包裝品無菌檢驗

SNT 2582-2010 產黃麴黴毒素真菌PCR檢測方法

SNT 2632-2010 微生物菌種常規保藏技術規程

SNT 2641-2010 食品中常見致病菌檢測 PCR-DHPLC法

SNT 2660-2010 食品微生物實驗室菌種保藏方法

SNT 2754.1-2011 出口食品中致病菌環介導恆溫擴增(LAMP)檢測方法 金黃色葡萄球菌

SNT 2754.2-2011 出口食品中致病菌環介導恆溫擴增(LAMP)檢測方法 大腸桿菌O157

SNT 2754.3-2011 出口食品中致病菌環介導恆溫擴增(LAMP)檢測方法 志賀氏菌

SNT 2754.4-2011 出口食品中致病菌環介導恆溫擴增(LAMP)檢測方法 單核細胞增生李斯特菌

SNT 2754.5-2011 出口食品中致病菌環介導恆溫擴增(LAMP)檢測方法 副溶血性弧菌

SNT 2754.6-2011 出口食品中致病菌環介導恆溫擴增(LAMP)檢測方法 小腸結腸炎耶爾森氏菌

SNT 2754.7-2011 出口食品中致病菌環介導恆溫擴增(LAMP)檢測方法 空腸彎麴菌

SNT 2754.8-2011 出口食品中致病菌環介導恆溫擴增(LAMP)檢測方法 肺炎克雷伯氏菌

SNT 2754.9-2011 出口食品中致病菌環介導恆溫擴增(LAMP)檢測方法 溶血性鏈球菌

SNT 2754.10-2011 出口食品中致病菌環介導恆溫擴增(LAMP)檢測方法 產氣莢膜梭菌

SNT 2754.11-2011 出口食品中致病菌環介導恆溫擴增(LAMP)檢測方法 產霍亂毒素的霍亂弧菌

SNT 2754.12-2011 出口食品中致病菌環介導恆溫擴增(LAMP)檢測方法 溶藻弧菌

SNT 2754.13-2011 出口食品中致病菌環介導恆溫擴增(LAMP)檢測方法 創傷弧菌

SNT 2754.14-2011 出口食品中致病菌環介導恆溫擴增(LAMP)檢測方法 假結核耶爾森氏菌

SNT 2754.15-2011 出口食品中致病菌環介導恆溫擴增(LAMP)檢測方法 阪琦腸桿菌

SNT 2775-2011 商品化食品檢測試劑盒評價方法

SNT 2797-2011 食品中致瀉大腸埃希氏菌檢測 MPCR-DHPLC法

SNT 3063.1-2011 航空食品 第1部分:冷加工車間環境微生物檢驗方法

SNT 3141-2012 出口食品包裝物微生物檢測指南

SNT 3152-2012 出口食品中致瀉大腸埃希氏菌檢測方法 基因晶元法

SNT 3263-2012 出口食品中黃麴黴毒素殘留量的測定

SNT 3266-2012 食品微生物檢驗方法確認技術規范

SNT 3306.5-2013 國境口岸環介導恆溫擴增(LAMP)檢測方法 第5部分 布魯氏菌

SNT 3384-2012 出口食品中空腸彎麴菌葯物敏感性的測定 微量稀釋法

SNT 3567.1-2013 交叉引物恆溫擴增檢測方法 第1部分 通用技術規程

SNT 3724-2013 進出口食品中幽門螺桿菌的檢驗方法

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⑶ 病原微生物中細菌常見檢測方法有哪些

1、快速測試片技術法

快速測試片是指以紙片、紙膜、膠片等作為培養基載體，將特定的培養基和顯色物質附著在上面，通過微生物在上面的生長、顯色來測定食品中微生物的方法。

細菌總數檢測紙片的研製始於 20 世紀 80 年代，其主要優點是簡便、實用、經濟、操作性強。近年來以濾紙和美國某公司的 Petrifilm 為載體的測試片已開始被廣泛應用。

2、生物電化學方法

生物電化學方法是指通過電極測定微生物產生或消耗的電荷，從而提供分析信號的方法。微生物在滋生代謝過程中，培養基的電化學性質如電流、電位、電阻和電導等會發生變化，所以可以通過檢測分析這些電化學參量的變化來實現對微生物的快速測定。

常見的有：阻抗分析法、電位分析法、電流分析法等。生物電化學方法具有測量快速、直觀、操作簡單、測量設備成本低和信號的可控性等特點。

3、微菌落技術

微菌落是指細菌生長繁殖早期在固相載體上所形成的只能藉助於顯微鏡觀察的微小菌落。微菌落技術具有快速、經濟、實用的特點，其研究始於 20 世紀50年代，定量測定技術從 20 世紀 70 年代開始，國外已有報道將該法應用於水、食品中細菌總數的快速檢測。

4、氣相色譜法

氣相色譜應用到微生物的檢測中，主要是依據不同微生物的化學組成或其產生的代謝產物各異，利用上述色譜檢測可直接分析各種體液中的細菌代謝產物、細胞中的脂肪酸、蛋白質、氨基酸、多肽、多糖等，以確定病原微生物的特異性化學標志成分，協助病原診斷和檢測。

5、高效液相色譜法

利用高效液相色譜檢測可分析各種體液中的細菌代謝產物、病原微生物等，以確定病原微生物的特異性化學標志成分，協助病原診斷和檢測。

⑷ 關於國標中單增李斯特菌檢測的問題

iQ-Check系統採用了所有的實時熒光PCR方法的優點為食品中病原微生物提供快速和可靠地檢測解決方案。iQ-Check試劑盒為食品和環境樣品中的單增李斯特菌(Listeria
monocytogenes)定性檢測試劑盒。
iQ-Check系統是以單核細胞增生性李斯特菌的毒力基因(hlyA)為靶序列的DNA片段來檢測單增李斯特菌。通過測定被擴增DNA序列的螢光信號來檢測被測樣品中病原微生物的存在。在所有的反應系統中，通過在每支PCR管中加入的內標DNA(陰性和陽性對照)與目標DNA同時進行擴增，由不同的探針和熒光產物來檢測。
自動檢測目標病原微生物的特定基因探針、內標DNA、擴增後的PCR復合物，從而得到實時快速的解決方案。

⑸ 李斯特氏菌屬的生化反應

該菌觸酶陽性，氧化酶陰性，能發酵多種糖類，產酸不產氣，如發酵葡萄糖、乳糖、水楊素、麥芽糖、鼠李糖、七葉苷、蔗糖（遲發酵）、山梨醇、海藻糖、果糖，不發酵木糖、甘露醇、肌醇、阿拉伯糖、側金盞花醇、棉子糖、衛矛醇和纖維二糖，不利用枸櫞酸鹽，40%膽汁不溶解，吲哚、硫化氫、尿素、明膠液化、硝酸鹽還原、賴氨酸、鳥氨酸均陰性，VP、甲基紅試驗和精氨酸水解陽性。
（四）血清型
根據菌體（O）抗原和鞭毛(H)抗原，將單增李氏菌分成13個血清型，分別是1/2a、1/2b、1/2c、3a、3b、3c、4a、4b、4ab、4c、4d、4e 和「7」13 個血清型。致病菌株的血清型一般為1/2b、1/2c、3a、3b、3c、4a、1/2a和4b,後兩型尤多。
（五）抵抗力
該菌對理化因素抵抗力較強，在土壤、糞便、青儲飼料和乾草內能長期存活，對鹼和鹽抵抗力強，60-70℃經5-20min可殺死，70%酒精5min、2.5%石炭酸、2.5%氫氧化鈉、2.5%福爾馬林20min 可殺死此菌。該菌對青黴素、氨苄青黴素、四環素、磺胺均敏感。
（六）來源與分布及感染途徑
單增李斯特氏菌廣泛存在於自然界中，不易被凍融，能耐受較高的滲透壓，在土壤、地表水、污水、廢水、植物、青儲飼料、爛菜中均有該菌存在，所以動物很容易食入該菌，並通過口腔-糞便的途徑進行傳播。據報道，健康人糞便中單增李氏菌的攜帶率為0.6-16%,有70%的人可短期帶菌，4-8%的水產品、5-10%的奶及其產品、30%以上的肉製品及15%以上的家禽均被該菌污染。人主要通過食入軟乳酪、未充分加熱的雞肉、未再次加熱的熱狗、鮮牛奶、巴氏消毒奶、冰激凌、生牛排、羊排、捲心菜色拉、芹菜、西紅柿、法式餡餅、凍豬舌等而感染，約佔85-90%的病例是由被污染的食品引起的。
該菌可通過眼及破損皮膚、粘膜進入體內而造成感染，孕婦感染後通過胎盤或產道感染胎兒或新生兒,棲居於陰道、子宮頸的該菌也引起感染，性接觸也是本病傳播的可能途徑，且有上升趨勢。
（七）臨床症狀
健康成人個體出現輕微類似流感症狀，新生兒、孕婦、免疫缺陷患者表現為呼吸急促、嘔吐、出血性皮疹、化膿性結膜炎、發熱、抽搐、昏迷、自然流產、腦膜炎、敗血症直至死亡。
（八）控制
單增李斯特氏菌在一般熱加工處理中能存活，熱處理已殺滅了競爭性細菌群，使單增李斯特氏菌在沒有競爭的環境條件下易於存活，所以在食品加工中，中心溫度必須達到70℃持續2分鍾以上。
由於單增李斯特氏菌在4℃下仍然能生長繁殖，所以未加熱的冰箱食品增加了食物中毒的危險。冰箱食品需加熱後再食用。
（九）檢測
（1）傳統分離鑒定方法
增菌培養→生化反應 →動物實驗→協同溶血試驗→血清型分析樣品：
冷凍樣品，2－5℃解凍，不超過18h
若不能及時檢驗，應置於－15 ℃保存。
非冷凍易腐樣品應盡可能及時檢驗。
若不能及時檢驗，應置於4 ℃冰箱保存，在24h之內檢驗。
增菌方法：
冷增菌法 ：將樣品置於胰蛋腖水中4~5℃增菌一個月，再劃線分離
缺點：時間太長，不適於食品衛生的常規檢驗。
快速增菌法 常用選擇性增菌法，分步增菌，增加病原檢出率
總之，傳統的單核細胞增生李斯特氏菌的檢測方法全過程需4~7D，而且沒有一種培養基可以全面的保持所有食品基質或各種李斯特氏菌血清型
（2）免疫學檢測方法
免疫學檢測方法就是利用抗原抗體反應的顯著特異性，而建立的一種快速檢測食品中病原菌的方法。
目前主要利用ELISA技術
特點：操作簡便，快速，可在同一時間內檢測大量樣品，可將純肉湯培養物中的分離物進行術水平的鑒定，但難以進行菌種間的特異分析。
ELISA法的檢測極限為105~106cfu/mL
（3）核酸檢測方法
該方法以李斯特氏菌屬或種特異核酸序列的互補序列為探針進行李斯特氏菌屬或種水平的鑒定
目前多利用PCR技術
特點：敏感性好，但必須經過選擇性增菌以稀釋可能幹擾檢測反應的某些成分。
探針雜交技術檢測極限為105~106cfu/mL

⑹ 食品車間設備菌落總數怎麼測定 標準是什麼

SN/T 1897-2007食品中菌落總數的測定也可以用於與食品接觸的設備表面的。附錄A。
另有自定的
例一：
物體表面采樣及檢查方法
采樣面積
被采表面＜100cm2，取全部表面；被采表面≥100cm2，取100cm2。
采樣方法
用5×5cm2的標准滅菌規格板；放在被檢物體表面，用浸有無菌生理鹽水液的棉拭子1支，在規格板內橫豎往返各塗抹5次；並隨之轉動棉拭於。連續采樣1～4個規格板面積；剪去手接觸部分，將棉拭於放入裝10ml采樣液的試管中送檢。門把手等小型物體則採用棉拭子直接塗抹物體的方法采樣。
培養（略）
例二：
空氣及與食品接觸面微生物檢驗方法、檢驗標准
1、 目的：
檢測生產車間空氣、操作人員手部、與食品有直接接觸面的機械設備的微生物指標，生產區域環境當中病原微生物的監控，達到規定標准，以控制食品成品的質量。
2、 參照標准：
中華人民共和國國家標准《一次性使用衛生用品衛生標准》GB15979－1995、《HACCP原理與實施》、中華人民共和國國家標准《公共場所空氣微生物檢驗方法細菌總數測定》GB/T 18204.1－2000、中華人民共和國進出口商品檢驗行業標准SN 0169-92/SN 0172-92/ SN 0170-92、 出入境檢驗檢疫局二000四年《出入食品微生物檢驗培訓教材》中《出入食品生產廠衛生細菌檢驗方法》、日本東京冷凍食品檢驗方法。
3、 采樣與檢測方法：
3.1空氣的采樣與測試方法
3.1.1樣品採集：
(1)取樣頻率：
a)車間轉換不同衛生要求的產品時，在加工前進行采樣，以便了解車間衛生清掃消毒情況。
b)全廠統一放長假後，車間生產前，進行采樣。
c)產品檢驗結果超內控標准時，應及時對車間進行采樣，如有檢驗不合格點，整改後再進行采樣檢驗。
d)實驗性新產品，按客戶規定頻率采樣檢驗。
e)正常生產狀態的采樣，每周一次。
（2）采樣方法
在動態下進行，室內面積不超過30 m2，在對角線上設里、中、外三點，里、外點位置距牆1 m；室內面積超過30 m2，設東、西、南、北、中五點，周圍4點距牆1 m。采樣時，將含平板計數瓊脂培養基的平板(直徑9 cm)置采樣點(約桌面高度)，並避開空調、門窗等空氣流通處，打開平皿蓋，使平板在空氣中暴露5 min。采樣後必須盡快對樣品進行相應指標的檢測，送檢時間不得超過6h，若樣品保存於0～4℃條件時，送檢時間不得超過24h。
3.1.2菌落培養：
（1）在采樣前將准備好的平板計數瓊脂培養基平板置37℃±1℃ 培養24 h，取出檢查有無污染，將污染培養基剔除。
（2）將已採集樣品的培養基在6 h內送實驗室，細菌總數於37℃±1℃培養48h觀察結果，計數平板上細菌菌落數。
（3）菌落計算：
a) 記錄平均菌落數，用「個/皿」來報告結果。用肉眼直接計數，標記或在菌落計數器上點計，然後用5～10倍放大鏡檢查，不可遺漏。
b) 若培養皿上有2個或2個以上的菌落重疊，可分辨時仍以2 個或2個以上菌落計數。
3.2工作台（機械器具）表面與工人手錶面采樣與測試方法：
3.2.1樣品採集：
(1)取樣頻率：
a)車間轉換不同衛生要求的產品時，在加工前進行擦拭檢驗，以便了解車間衛生清掃消毒情況。
b)全廠統一放長假後，車間生產前，進行全面擦拭檢驗。
c)產品檢驗結果超內控標准時，應及時對車間可疑處進行擦拭，如有檢驗不合格點，整改後再進行擦拭檢驗。
d)實驗新產品，按客戶規定擦拭頻率擦拭檢驗。
e)對工作表面消毒產生懷疑時，進行擦拭檢驗。
f)正常生產狀態的擦拭，每周一次。
（2） 采樣方法：
a) 工作台（機械器具）：用浸有滅菌生理鹽水的棉簽在被檢物體表面（取與食品直接接觸或有一定影響的表面）取25cm2 的面積，在其內塗抹10次，然後剪去手接觸部分棉棒，將棉簽放入含10mL滅菌生理鹽水的采樣管內送檢。
b) 工人手：被檢人五指並攏，用浸濕生理鹽水的棉簽在右手指曲面，從指尖到指端來回塗擦10次，然後剪去手接觸部分棉棒，將棉簽放入含10mL滅菌生理鹽水的采樣管內送檢。
（3）采樣注意事項：
擦拭時棉簽要隨時轉動，保證擦拭的准確性。對每個擦拭點應詳細記錄所在分場的具體位置、擦拭時間及所擦拭環節的消毒時間
3.2.2 細菌•大腸菌群的檢測培養:
樣液稀釋：將放有棉棒的試管充分振搖。此液為1：10稀釋液。如污染嚴重，可十倍遞增稀釋，吸取1ml 1：10樣液加9ml無菌生理鹽水中，混勻，此液為1：100稀釋液。
3.2.2.1 細菌總數：
（1）以無菌操作，選擇1～2個稀釋度各取1ml樣液分別注入到無菌平皿內，每個稀釋度做兩個平皿（平行樣），將已融化冷至45℃左右的平板計數瓊脂培養基傾入平皿，每皿約15ml，充分混合。
（2）待瓊脂凝固後，將平皿翻轉，置36℃±1℃ 培養48 h後計數。
（3）結果報告：報告每25cm2食品接觸面中或每隻手的菌落數
3.2.2.2大腸菌群：
（1）平板法:
a) 以無菌操作，選擇1～2個稀釋度各取1ml樣液分別注入到無菌平皿內，每個稀釋度做兩個平皿（平行樣），將已融化冷至45℃左右的去氧膽酸鹽瓊脂培養基傾入平皿，每皿約15ml，充分混合。待瓊脂凝固後,再覆蓋一層培養基，約3-5 ml。
b) 待瓊脂凝固後，將平皿翻轉，置36℃±1℃ 培養24h後計數。
c) 結果計算： 以平板上出現紫紅色菌落的個數乘以稀釋倍數得出。
d) 結果報告：報告每25cm2食品接觸面中或每隻手的菌落數
（2）試管法:
a) 以無菌操作，選擇3個稀釋度各取1ml樣液分別接種到BGLB肉湯培養基中，每個稀釋度接種三管。
b) 置BGLB肉湯管於36℃±1℃培養48±2h。記錄所有BGLB肉湯管的產氣管數。
c) 結果報告：按BGLB肉湯管產氣管數，查MPN表報告每25cm2食品接觸面中或每隻手的大腸菌群值。
3.2.3 金黃色葡萄球菌檢測
（1）定性檢測
a) 取1ml 稀釋液注入滅菌的平皿內，傾注15-20ml的B-P培養基，（或是吸取0.1稀釋液，用L棒塗布於表面乾燥的B-P瓊脂平板），放進36±1℃的恆溫箱內培養48±2小時。
b) 從每個平板上至少挑取1個可疑金黃色葡萄球菌的菌落作血漿凝固酶實驗。
c) 結果報告：B-P瓊脂平板的可疑菌落作血漿凝固酶實驗為陽性，即報告手（工器具）上有金黃色葡萄球菌存在。
（2）定量檢測
a) 以無菌操作，選擇3個稀釋度各取1ml樣液分別接種到含10％氯化鈉胰蛋白腖大豆肉湯培養基中，每個稀釋度接種三管。
b) 置肉湯管於36±1℃的恆溫箱內培養48小時。劃線接種於表面乾燥的B-P瓊脂平板，置36℃±1℃ 培養45～48小時。
c) 從B-P瓊脂平板上，挑取典型或可疑金黃色葡萄球菌菌落接種肉湯培養基，36℃±1℃培養20～24小時。
d) 取肉湯培養物做血漿凝固酶試驗，記錄試驗結果。
e) 報告結果：根據凝固酶試驗結果，查MPN表報告每25 cm2食品接觸面中或每隻手的金黃色葡萄球菌值。
3.3工廠環境中病原體的檢測計劃與方法
檢測計劃：為了保證食品安全，工廠應該對生產環境中的病原微生物進行檢測和評估，檢測項目包括李斯特菌，沙門氏菌等病原體微生物，化驗室應該按照一定的計劃對生產場所環境中的病原體進行檢測，其中包括地面、下水道、 排水溝、牆壁、天花板、設備框架、運輸的支架，冷藏裝置、速凍機、傳送帶、設備的螺絲、維修工具等部位。當某個點檢測到病員微生物時，應該對環境中的相似點加大檢測頻率；在把所有的預定點檢測完後，應該對環境中的病原微生物的存在狀況進行全面評估，在下一次環境檢測循環過程中加強檢測容易出現病原體的環境點，達到持續改進的目的。
檢測頻率: 每月兩次,每次每個區域至少選取5個檢測點,分別進行檢測。
3.3.1 環境李斯特菌的檢測方法（3MTM PetrifilmTM 環境李斯特菌的測試片）
3.3.1.1 用塗抹棒，海綿或者其他采樣設備收集環境樣本。
3.3.1.2 將收集的樣本添加10毫升滅菌的緩沖蛋白腖水，將樣本與緩沖蛋白腖混合1分鍾，將樣品置於室溫（20-30℃）1小時，最久不超過1.5小時，以修復損傷的李斯特菌。
3.3.1.3 將測試片放在平坦處，掀起上層膜。
3.3.1.4 用移液器垂直滴加3毫升樣品到下層膜中央，將上層膜緩慢蓋下，以免產生氣泡。
3.3.1.5 輕輕將塑料壓板放在位於接種區上層膜上，不要壓，扭轉或者滑動壓板。提起壓板等至少十分鍾，以使膠體凝固。
3.3.1.6 將測試片透明面朝上，可疊放至十片，在37℃±1℃培養26-30小時，可以用標准菌落記數器或者其他光學放大器判讀，不要記數圓形輪廓上的菌落，因為他們不受選擇性培養基的影響。
3.3.1.7 對於定性檢測，根據紫紅色菌落是否存在，結果記為檢出或者未檢出。
3.3.2 環境中沙門氏菌的檢測方法
3.3.2.1采樣地點: 選取采樣點時因盡量選取微生物容易滋生的地方
3.3.2.2 操作步驟
3.3.2.2.1采樣應在生產開始後進行，用已浸潤過的棉拭在選定的被測表面旋轉塗抹約100cm2的面積，然後將棉拭放回塗抹試管並蓋緊。
3.3.2.2.2將樣品帶回實驗室，每5個點混合成一個樣品, 登記編號,按照SN0170-92標准及時檢測，若有陽性結果出現，應逐步對所混合的每個點分別檢測。

⑺ 李斯特氏族顯色培養基能分離出伊氏李斯特氏菌嗎

李斯特氏族顯色培養基能分離出伊氏李斯特氏菌，李斯特氏菌顯色培養基可快速檢測食品和葯品中單增李斯特氏菌。陰性結果可在3天內檢測完成。單增李斯特氏菌顯藍色，菌落周圍有一不透明環。蛋白腖提供氮源和氨基酸，氯化鈉維持滲透壓，瓊脂是凝固劑，氯化鋰抑製革蘭氏陰性菌生長，抑菌劑抑制除李氏菌外的革蘭氏陽性菌生長李斯特菌顯色培養基是根據李斯特菌的β-葡萄糖苷酶活性、鼠李糖發酵特性和磷脂醯肌醇特異性磷脂酶C（PIPLC）活性進行的特異顯色。有β-葡萄糖苷酶活性則菌落為藍綠色，有鼠李糖發酵特性則菌落背景為黃色，有PIPLC活性則菌落周圍有不透明光暈。

李斯特菌顯色培養基的工作原理：不同微生物內，含有不同胞內酶。顯色培養基在分離培養基中，加入了人工合成的微生物特異性酶的底物。（該底物由顯色基團和微生物可代謝物質組成，通常無色。）當顯色培養基里的目標菌大量繁殖時，在細菌特異性酶作用下，培養基中的底物游離出顯色基團，使目標菌落呈現出特定的顏色。實驗者可通過觀察菌落的顏色，直接對菌種做出鑒定。

⑻ 李斯特菌病的檢查

1.血常規
患者血白細胞總數常增高，分類中以中性粒細胞增多明顯，單核細胞並不增多。
2.腦脊液常規
腦膜炎患者腦脊液大多外觀混濁，白細胞數為（100～10000）×106/L，其中2/3為多核細胞，蛋白質含量增高達0.5～3.0g/L，而糖量降低者僅佔40%，未合並腦膜炎的患者腦脊液常規多為正常，或僅有輕度蛋白質含量增高及淋巴細胞增多。
3.細菌學檢查
是診斷本病的關鍵。
（1）細菌塗片取膿性分泌物，穿刺液，腦脊液，活組織細胞，胎兒糞便等塗片，行革蘭染色檢查，但據報道腦脊液鏡檢有2/3的患者標本為陰性。
（2）細菌培養在疾病早期取血，腦脊液，骨髓，羊水，胎糞，胎盤，新生兒臍帶殘端，受損皮膚或黏膜，孕婦陰道排泄物等作細菌培養，可分離到致病菌。
4.血清學檢查
對該菌的抗體反應主要是免疫球蛋白M（IgM）抗體升高，雙份血清抗體效價遞升有助於診斷，但血清抗體檢查對本病診斷價值有限，只用於流行病學研究，主要原因是由於：①該菌與葡萄球菌，鏈球菌，肺炎鏈球菌等其他革蘭陽性菌具有共同抗原，常呈交叉反應，出現假陽性。②血清抗體檢測的靈敏度差。③新生兒及免疫缺陷患者血清中的特異性抗體常不升高。
5.分子生物學檢測
近年來應用核酸分子雜交技術及聚合酶鏈反應（PCR）方法來進行臨床診斷，應用PCR方法可在250µl血液中測出1×104cfu的李斯特菌，敏感性強。
6.常規檢查
做X線胸片，心電圖，B超和腦CT等檢查。

⑼ 關於國標中單增李斯特菌檢測的問題

實驗室驗證食品中李斯特菌新國家標准檢驗方法可操作性及可行性.方法:按照國家CDC"食品衛生微生物學檢驗李斯特菌檢驗標准"驗證方案進行.結果:用不同濃度的沙門菌菌懸液人工染菌二類食品各加份,用增菌液兩步增菌,兩種分離培養基分離,對比檢出率及分離效果.檢出率62.5％,最低檢出限為0.5 cfu/25 g～13 cfu/25 g.結論:該方法使用了選擇性強、特異性高的分離培養基及快速篩選方法,如Vitek GNI、API10300、顯色培養基等,克服了傳統李斯特菌檢測方法檢測周期較長、所需試劑繁多、菌落生長慢等缺點,使李斯特菌的檢測更加快速、簡便、特異、敏感.該方法使李斯特菌檢測具有更好的適用性和可操作性.