㈠ bca法測蛋白濃度為什麼稀釋蛋白質濃度
BCA法測定蛋白質濃度原理：
BCA與二價銅離子的硫酸銅等其他試劑組成的試劑混合一起即成為蘋果綠，即 BCA 工作試劑。在鹼性條件下，BCA 與蛋白質結合時，蛋白質將 Cu2+ 還原為 Cu+，工作試劑由原來的蘋果綠色變為紫色復合物。562 nm 下其光吸收強度與蛋白質濃度成正比。
BCA 蛋白濃度測定試劑盒，Abbkine的蛋白質定量試劑盒(BCA法)提供一個簡單，快捷，兼容去污劑的方法，准確定量總蛋白。
成分：
試劑 A，100 mL
試劑 B，2 mL
標准蛋白(BSA)1 mL×2，1 mg/mL
保存條件運輸溫度:室溫(標准蛋白 4~8 ℃ 運輸)
保存溫度:室溫(標准蛋白 -20 ℃ 保存)
有效日期:12 個月
使用方法：
方法一:96 孔板
1.配製 BCA 工作液:根據標准品和樣品數量，按 50 體積試劑 A，1 體積試劑 B 配製適量 BCA 工作液。充分混勻。
2.將蛋白標准品按 0 μL，1 μL，2 μL，4 μL，6 μL，8 μL，10 μL 加入 96 孔板的蛋白標准品孔中。加滅菌雙蒸水補足到 10 μL。取 10 μL 待測樣品加入 96 孔板的待測樣品孔中。每個測定要做 2~3 個平行。
3.向待測樣品孔和蛋白標准品孔中各加入 200 μL BCA 工作液(即樣品與工作液的體積比為 1:20)，混勻。
4.37 ℃ 溫浴 30 min。冷卻至室溫。
5.酶標儀 562 nm 波長下測定吸光度。
6.製作標准曲線。從標准曲線中求出樣品濃度。
㈡ BCA蛋白濃度檢測的實驗操作
繪制標准曲線：
取96孔酶標板，按下表加入試劑。
管號
1
2
3
4
5
6
7
8
標准蛋白溶液（μl）蒸餾水（μl）
BCA試劑（μl）
蛋白質濃度（mg/ml）
0
20
200
0
1
19
200
0.025
2
18
200
0.05
4
16
200
0.1
8
12
200
0.2
12
8
200
0.3
16
4
200
0.4
20
0
200
0.5
上述試劑加完後，准確吸取20μl樣品溶液於酶標孔中，加入BCA試劑200μl，輕搖，於37℃保溫30-60min，冷卻至室溫後，以空白為對照，在酶標儀上590nm處比色，以牛血清白蛋白含量為橫坐標，以吸光值為縱坐標，繪制標准曲線。以標准曲線空白為對照，根據樣品的吸光值從標准曲線上查出樣品的蛋白質含量。
㈢ BCA蛋白檢測方法的原理是什麼
原理簡介
BCA(bicinchoninic acid)法蛋白濃度定量試劑盒是在世界上常用的蛋白濃度檢測方法之一BCA法基礎上改進而成。眾所周知，二價銅離子在鹼性的條件下，可以被蛋白質還原成一價銅離子（biuret reaction），一價銅離子和獨特的BCA Solution A（含有BCA）相互作用產生敏感的顏色反應。兩分子的BCA螯合一個銅離子，形成紫色的反應復合物。該水溶性的復合物在562nm處顯示強烈的吸光性，吸光度和蛋白濃度在廣泛范圍內有良好的線性關系，因此根據吸光值可以推算出蛋白濃度。
產品特點
1．步驟簡單，45分鍾內完成測定，比經典的Lowry法快4倍而且更加方便。
2．靈敏度高，檢測濃度下限達到25μg/ml，最小檢測蛋白量達到0.5μg，待測樣品體積為1-20μl 。
3．BCA法測定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的去污劑等化學物質的影響，可以兼容樣品中高達5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween 20, 60, 80。
4．在20-2000μg/ml濃度范圍內有良好的線性關系。
5. 檢測不同蛋白質分子的變異系數遠小於考馬斯亮藍法蛋白定量。
BCA蛋白質定量檢測試劑
在蛋白質的表達純化，結構和功能的研究工作中，蛋白質的定量隨處可見。但是，什麼是理想的蛋白質定量方法？如何准確、快速的對蛋白質進行定量，對於不同的樣本，如何選取相應的蛋白質定量試劑和方案？如何避免實驗中引入的其它物質對蛋白質定量的干擾，PIERCE為這一切提供了可以信賴的解決方案。
PIERCE的BCA(bicinchoninic acid)蛋白質檢測試劑是當前比Lowry法更優越的專用於檢測總蛋白質含量的產品。該方法以快速靈敏、穩定可靠且對不同種類蛋白質變異系數甚小而深受專業人士的青睞。其中MicroBCA產品可檢測到0.5μg/ml的微量蛋白，是目前已知的最靈敏的蛋白質檢測試劑之一。
主要特點：
· 准確靈敏：BCA試劑的蛋白質測定范圍是20－2000μg/ml,採用加強方法可檢測到
5μg/ml；MicroBCA試劑測定范圍是0.5-20μg/ml。
· 快速：45分鍾內完成測定，比經典的Lowry法快4倍而且更加方便。
· 經濟實用：除試管外，測定可在微孔板中進行，大大節約樣品和試劑用量。
· 不受樣品中離子型和非離子型去污劑影響。
· 檢測不同蛋白質分子的變異系數遠小於考瑪斯亮藍。
基本原理：
鹼性條件下，蛋白將Cu++還原為Cu+， Cu+與BCA試劑形成紫顏色的絡合物，測定其在562nm處的吸收值，並與標准曲線對比，即可計算待測蛋白的濃度。
BCA分子式：
原理圖：
用PIERCE的BCA試劑盒所得的標准曲線：
MicroBCA蛋白標准曲線
BCA蛋白標准曲線
BCA蛋白質檢測流程：
圖片點擊：
http://www.perbio.com.cn/PIERCE/Protein%20Chemistry/bca.htm
㈣ BCA蛋白濃度檢測的實驗試劑
Bicinchoninic acid (BCA )法是在世界上常用的蛋白濃度檢驗方法之一BCA法基礎上改進而成。其原理與Lowery法蛋白定量相似，即在鹼性環境下蛋白質與Cu 2+ 絡合並將Cu 2+ 還原成Cu + 。兩分子BCA與一個Cu + 螯合形成穩定的紫藍色復合物，在562 nm處有高的光吸收值並與蛋白質濃度成正比，據此可測定蛋白質濃度。
組成與儲存：
組分名稱 規格 保存
BCA Reagent 100ml 2-8℃
Cu Reagent 3.0ml 2-8℃
BSA標准液5 mg/ml 1ml -20ºC凍存
可進行500T微板(microplate)測定或50T2ml比色杯測定。