突變檢測方法

㈠ 基因突變檢測方法

基因突變檢測方法：
PCR-SSCP法是在非這性聚丙烯醯胺凝膠上，短的單鏈DNA和RNA分子依其大街基序列不同而形成不同構象，一個鹼基的改變將影響其構象而導致其在凝膠上的移動速度改變。其基本原理為單鏈DNA在中性條件下會形成二級結構，這種二級結構依賴於其鹼基組成，即使一個鹼基的不同，也會形成不同的二級結構而出刺同的遷移率。由於該法簡單快速，因而被廣泛用於未知基因突變的檢測。
異源雙鏈分析法（HA）
HA法直接在變性凝膠上分離雜交的突變型一野生型DNA雙鏈。由於突變和野生型DNA形成的異源雜合雙鏈DNA在其錯配處會形成一突起，在非變性凝膠中電泳時，會產生與相應的同源雙DNA不同的遷移率。該法與SSCP相似，所不同的是SSCP分離的是單鏈DNA，HA法分離的是雙鏈DNA，也只適合於小片段的分析。
突變體富集PCR法（mutant-enriched
PCR）本法的基本原理是利用ras基因家族某個密碼子部位存在已知的限制性內切酶位點，如K-ras基因第12密碼子的BstNI位點，第13密古巴子有BgⅠⅡ位點。用鏈續二次的巢式PCR來擴增包括K-ras第12、13密碼子的DNA片段，在兩次擴增反應之間用相應的內切酶消化擴增的DNA片段，野生型因被酶切而不能進入第二次PCR擴增，而突變型則能完整進入第二次PCR擴增並得到產物的富集。

㈡ 6，dna點突變常用的檢測方法有哪些

1．限制性片段長度多態性（Restriction Fragment Length Polymorphism,RFLP）：由DNA 的多態性,致使DNA 分子的限制酶切位點及數目發生改變,用限制酶切割基因組時,所產生的片段數目和每個片段的長度就不同,即所謂的限制性片段長度多態性,導致限製片段長度發生改變的酶切位點,又稱為多態性位點.最早是用Southern Blot/RFLP方法檢測,後來採用聚合酶鏈反應（PCR）與限制酶酶切相結合的方法.現在多採用PCR-RFLP法進行研究基因的限制性片段長度多態性.\x0d2．單鏈構象多態性（SSCP）：是一種基於單鏈DNA構象差別的點突變檢測方法.相同長度的單鏈DNA如果順序不同,甚至單個鹼基不同,就會形成不同的構象.在電泳時泳動的速度不同.將PCR產物經變性後,進行單鏈DNA凝膠電泳時,靶DNA中若發生單個鹼基替換等改變時,就會出現泳動變位（mobility shift）,多用於鑒定是否存在突變及診斷未知突變.

㈢ 對氣溫均值做突變檢驗有哪些方法

海洋上等溫線的突變是洋流的影響、從低緯向高緯遞減。 （2）、低地的氣溫低，偏離的程度和方向不一，下墊面性質差異大。 北半球比較曲折。因海陸熱力性質的差異所致。而南半球主要是海洋、山地的氣溫比平原。因太陽輻射的分布是從低緯向高緯遞減，海洋氣溫低、等溫線的突變、同緯度海陸氣溫不同。 2。影響的因素不同，既偏離緯線，陸地上等溫線的突變是由地形因素所致。冬季陸地氣溫低。夏季陸地氣溫高，等溫線大致與緯線平行，海洋氣溫高，等溫線偏離緯線。 3。這是地形因素的影響。 （3），太陽輻射是影響氣溫的主導因素。一般情況下、同緯度高原、等溫線形狀的南北差異。因北半球海陸相間，南半球比較平直。 等溫線的突變，下墊面性質單一1、全球氣溫分布的一般規律。（1）

㈣ 基因突變的檢查方法有哪些

基因突變檢測方法： PCR-SSCP法是在非這性聚丙烯醯胺凝膠上，短的單鏈DNA和RNA分子依其大街基序列不同而形成不同構象，一個鹼基的改變將影響其構象而導致其在凝膠上的移動速度改變。其基本原理為單鏈DNA在中性條件下會形成二級結構

㈤ 常用的基因突變檢測方法有哪些

1、焦磷酸測序法

測序法的基本原理是雙脫氧終止法，是進行基因突變檢測的可靠方法，也是使用最多的方法。但其過程繁瑣、耗時長，靈敏度不高，對環境和操作者有危害，故在臨床應用中存在一定的限制。

焦磷酸測序法適於對已知的短序列的測序分析，其可重復性和精確性能與SangerDNA測序法相媲美，而速度卻大大的提高。

焦磷酸測序技術產品具備同時對大量樣品進行測序分析的能力。為大通量、低成本、適時、快速、直觀地進行單核苷酸多態性研究和臨床檢驗提供了非常理想的技術操作平台。

2、微數字聚合酶鏈反應

該方法為將樣品作大倍數稀釋和細分，直至每個細分試樣中所含有的待測分子數不超過1個，再將每個細分試樣同時在相同條件下聚合酶鏈反應後，通過基因晶元逐個計數。該方法為絕對定量的方法。

3、聚合酶鏈反應-限制性片段長度多態性分析技術

聚合酶鏈式反應（PCR）是一種用於放大擴增特定的DNA片段的分子生物學技術，它可看作是生物體外的特殊DNA復制，PCR的最大特點是能將微量的DNA大幅增加。該法一般用於檢測已知的突變位點。

因此，無論是化石中的古生物、歷史人物的殘骸，還是幾十年前兇殺案中兇手所遺留的毛發、皮膚或血液，只要能分離出一丁點的DNA，就能用PCR加以放大，進行比對。這也是「微量證據」的威力之所在。

由1983年美國Mullis首先提出設想，1985年由其發明了聚合酶鏈反應，即簡易DNA擴增法，意味著PCR技術的真正誕生。到如今2013年，PCR已發展到第三代技術。1976年，台灣科學家錢嘉韻，發現了穩定的Taq DNA聚合酶，為PCR技術發展也做出了基礎性貢獻。

PCR是利用DNA在體外攝氏95°高溫時變性會變成單鏈，低溫（經常是60°C左右）時引物與單鏈按鹼基互補配對的原則結合，再調溫度至DNA聚合酶最適反應溫度（72°C左右）。

DNA聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互補鏈。基於聚合酶製造的PCR儀實際就是一個溫控設備，能在變性溫度，復性溫度，延伸溫度之間很好地進行控制。

4、高效液相色譜法

該方法是基於發生錯配的雜合雙鏈DNA與完全匹配的純合雙鏈DNA解鏈特徵的差異而進行檢測的，可檢測出含有單個鹼基的置換、插入或缺失的異源雙鏈片段。

與測序法相比，該法簡單、快速，不僅可用於已知突變的檢測，還可用於未知突變的掃描。但只能檢查有無突變，不能檢測出突變類型，結果判斷容易出錯。

5、單鏈構象異構多態分析技術

依據單鏈DNA在某一種非變性環境中具有其特定的第二構象，構象不同導致電泳的遷移率不同，從而將正常鏈與突變鏈分離出來。與測序法相比，靈敏性更高。

㈥ APC的APC基因突變檢測方法

通過檢測APC基因突變,可篩選出FAP家族成員高危患者,也可用於評估結直腸癌的療效和預後,所以檢測APC基因變化對預防、早期診斷及早期治療結直腸癌具有重大意義[13]. 檢測APC基因突變的方法報道較多,大致分為3類.
第1類,直接序列分析,PCRSSCP法. 檢測APC基因高度多態性DNA標記,不必對整個龐大的APC基因所有外顯子進行檢測[14]. 應用微衛星多態性標記進行LOH分析是目前抑癌基因定位和等位基因丟失研究中最經常採用的方法. APC基因等位丟失亦常出現在散發性結直腸癌中,LOH發生率為35%～45%[15]. 此類方法適合於較小片段基因(100～500 bp)突變的檢測,對APC基因需分成40個相互重疊的片段來檢測,費時,費力.
第2類,包括異源脫氧核糖核酸分子(DNA)分析法(Hdxa)和錯配化學清除/羥胺鋨酸酐(CCM/HOT)等. 一次可檢測較大片段的DNA,減少受檢片段,如CCM/HOT法使之降到25個片段. 然而,仍要對外顯子進行突變檢測,需較大片段的序列分析來確定,對APC基因檢測也非簡便的方法.
第3類,是針對基因突變產生終止密碼而表達不全蛋白質(截短蛋白質)來設計的. 如體外合成蛋白質試驗(IVSP法)和藍/白選擇試驗,可以檢測大片段的DNA或RNA,又能選擇性發現產生終止密碼的突變,與藍/白選擇試驗不同的是,IVSP法還可根據不全蛋白大小來確定突變的位點. 通過對APC基因進行體外合成蛋白質及等位基因特異性表達的測定,可以更有效地檢測到不能被PCRSSCP法所檢測到的APC基因突變.總之，由於APC基因突變與FAP早期發生密切相關，且FAP具有較高的遺傳傾向，這種疾病如果不加治療，其惡變率幾乎達到100%，所以對APC基因的定位及其功能的研究對於FAP的早期診斷和治療顯得尤為迫切和重要[16]. 如果說最初APC基因的發現為FAP的分子診斷學提供了理論基礎，現APC基因的研究進展正使針對這種疾病的分子診斷方法成為可能. 相信通過對APC基因的進一步研究，不僅會有更實用的基因檢測診斷方法問世，而且可能得到針對腫瘤發生機制的特異性基因治療方法
APC啟動子有兩個區，1A和1B。啟動子1A區最為活躍。APC啟動子高甲基化也可能是導致結直腸癌的原因。有研究表明APC啟動子1A區在結直腸癌中高甲基化，二在腺瘤中不甲基化。APC啟動子高甲基化抑制了APC的轉錄。據報道APC的1A啟動子區高甲基化也發生在胃腸癌症中，比如食管癌，胃癌，胰腺癌，肝癌，結直腸癌。

㈦ 基因突變的檢測方法有哪些

基因突變的檢測方法可以用放射性標記的基因探針進行檢測

㈧ germline 突變怎麼檢測

如何檢測超低頻突變？

腫瘤是高度異質性的，其中致病突變可能以極低比例存在，比如allel frequency< 0.1%~0.01%，甚至更低。而目前最準的Hiseq測序本身的單個鹼基的錯誤率就在0.2%左右，再加上眾所周知的DNA聚合酶的固有錯誤率（10-7~10-5），那如何能測出0.1%的超低比例的突變？

MichaelW. Schmitta等人提出了極富創造力的方法，該方法的檢測靈敏度達到0.01%，甚至更好。具體原理如下圖：

(A) Adapter synthesis. A double-stranded, randomized Duplex Tag sequence is appended to a sequencing adapter by ing a degenerate sequence in one strand of the adapter with DNA polymerase. Complete adapter A-tailing is ensured by extended incubation with polymerase and dATP.

在Illumina的標准建庫接頭中的一條上加上12個簡並鹼基和4個固定序列鹼基作為分子標簽。

並通過復制把互補鏈也補上16個簡並鹼基。

(B) Duplex Sequencing workflow. Sheared, T-tailed double-stranded DNA is ligated to A-tailed adapters. Because every adapter contains a Duplex Tag on each end, every DNA fragment becomes labeled with two distinct tag sequences (arbitrarily designated α and β in the single fragment shown). PCR amplification with primers containing Illumina flow-cell–compatible tails is carried out to generate families of PCR plicates. Two types of PCR procts are proced from each DNA fragment. Those derived from one strand will have the α tag sequence adjacent to flow cell sequence 1 and the β tag sequence adjacent to flow cell sequence 2. PCR procts originating from the complementary strand are labeled reciprocally.

用改造好的接頭與樣本DNA進行連接，雖然接頭總體上是簡並的，但是具體到每個分子，還是有其特定的序列。

樣本DNA加好接頭後，得到的原始測序模板，而每個模板的每一頭都被加上了12個鹼基的分子標簽，那每個模板的左、右兩頭加起來就有24個鹼基的分子標簽。

每個鹼基是4種選擇，24個鹼基就是4的24次方，等於281T種可能性。這保證了每個原始模板在原始文庫里都是獨一無二的。

PCR擴增原始文庫，每個模板會形成基於原始模板的2個中間序列互補的分子家族：正向和反向

(C) Error correction. (i–iii) Sequence reads sharing a unique set of tags are grouped into paired families with members having strand identifiers in either the αβ or βα orientation. Each family pair reflects the amplification of one double-stranded DNA fragment. (i) Mutations (colored spots) present in only one or a few family members represent sequencing mistakes or PCR-introced errors occurring

㈨ 在醫學遺傳學中常用什麼方法檢測基因突變

SNP檢測，
樓上答的挺多一看就是網上摘的，但有點錯誤，我更正和補充一下。 主觀填空題 1.干係 2.基因組DNA 3.遺傳物質 4.染色體（或DNA）復制一次 5.交叉遺傳 6.細胞癌基因 7.點突變 8.完全顯性遺傳 9.羅伯遜易位 10.重排 四、名詞解釋 聚合酶鏈式反應(PC...
11多重PCR 12正確 13正確 14正確 15正確 16正確 17錯誤 18正確 19正確 20錯誤
1.減數分裂是指生殖細胞成熟過程中(DNA復制一次 )後，細胞連續分裂二次。 2.發生於近端著絲粒染色體間的易位稱為(著絲粒融合 )。 3.在一個腫瘤細胞群體中，佔主導地位的克隆就構成其(干係 ) 4.結構異常是指由於染色體斷裂、重接後，形成結構改變...
醫學遺傳學英文名稱：medical genetics定義：應用遺傳學的理論與方法研究遺傳因素在疾病的發生、流行、診斷、預防、治療和遺傳咨詢等中的作用機制及其規律的遺傳學分支學科。 遺傳學在醫學中的應用，包括，生理、病理和葯理的遺傳學分析。遺傳學...
遺傳學是研究生物的遺傳和變異，即研究親子間的異同的生物學分支學科。 遺傳學的研究范圍包括遺傳物質的本質、遺傳物質的傳遞和遺傳信息的實現三個方面。遺傳物質的本質包括它的化學本質、它所包含的遺傳信息、它的結構、組織和變化等；遺傳物質...

㈩ 如何用PCR的方法檢測已知點突變

我接觸國的點突變檢測方法包括：1、KASP、TaqMAN標記都是可以通過PCR區分點突變的。2，PCR產物測序。3，CEL I酶切，最早的突變篩選就是用的這酶。