硫代巴比妥的專屬鑒別方法

A. 什麼是硫代巴比妥酸法

硫代巴比妥酸比色法

1、原理

樣品中的山梨酸在酸性溶液中，用水蒸汽蒸餾出來，然後用K2Cr2O7氧化成丙二醛和其它產物，丙二醛與硫代巴比妥酸反應，生成紅色物質，顏色的深淺與山梨酸含量成正比。（530nm下測定）

2、操作方法

⑴ 樣品制備

稱取100g左右的樣品→加蒸餾水250ml→在高速搗碎機上打漿→定容500ml→過濾→收集濾液

⑵ 山梨酸的提取

准確吸取兩份濾液各20ml→分別放入兩個250ml蒸餾瓶中→一個瓶加1ml磷酸、無水硫酸鈉20g、水70ml、玻璃珠3粒→另一瓶加1N NaOH5ml、無水硫酸鈉20g、水70ml、玻璃珠3粒→蒸餾→分別用裝有10ml0.1N NaOH的100ml容量瓶接收餾液→當餾液收集到80ml停止蒸餾，用少量水洗滌冷凝管→定容→分別吸10ml溶液→分別置於兩個100ml容量瓶→用0.01N NaOH定容→供樣液、空白測定用

⑶ 測定

准確吸樣液、空白液2ml→於25ml比色管中→加水3ml→加2ml（K2Cr2O7+硫酸）混合液→在100℃水浴5分鍾→加0.5%硫代巴比妥酸2ml→沸水浴加熱7分鍾→冷卻→定容→於1cm比色杯在530nm處比色

⑷ 標准曲線繪制

B. 如何用化學方法鑒別苯妥英鈉和硫噴妥鈉、苯妥英鈉和異戊巴比妥、地西泮和奧沙西泮

鈉鹽用硝酸銀試液，苯巴比妥鈉水溶液與硝酸銀的氨溶液作用，生成可溶於氨溶液的銀鹽，苯妥英鈉水溶液與硝酸銀的氨溶液作用，生成不溶於氨溶液的銀鹽，用吡啶—硫酸銅溶液，苯妥英鈉與之反應顯藍色，苯巴比妥與之反應顯紫色或藍紫色。

異戊巴比妥含丙二醯脲結構，有雙縮脲反應,可以與吡啶硫酸銅溶液生成紫紅色。

加氯化亞銅氨,有紅色沉澱的是苯乙炔，另外三種加入硝酸銀乙醇溶液,有白色沉澱的是苄基氯，剩餘兩種加入溴的四氯化碳溶液,有褪色的是苯乙烯。

(2)硫代巴比妥的專屬鑒別方法擴展閱讀：

硫噴妥鈉具有高度親脂性，為短效巴比妥類葯物。靜注後迅速通過血腦屏障作用於中樞神經系統，其對中樞神經的抑製作用主要是通過易化或增強腦內抑制性神經遞質γ-氨基丁酸在突觸的作用，使突觸後電位抑制延長，同時阻斷興奮性神經遞質谷氨酸鹽在突觸的作用；

從而降低大腦皮質的興奮性，抑制網狀結構的上行性激活系統，降低神經生理和腦功能的活動，產生全身麻醉作用。臨床上廣泛應用硫噴妥鈉進行基礎麻醉、全麻誘導，也用以有效地制止各種原因所致的驚厥狀態。在應用時常可引起喉痙攣和支氣管收縮。

C. 求食品添加劑化學檢測方法過程

防腐劑是指能防止食品腐敗、變質，抑制食品中微生物繁殖，延長食品保存期的物質。目前，我國允許使用的品種主要有苯甲酸及其鈉鹽、山梨酸及其鉀鹽、對羥基苯甲酸乙酯和丙酯、丙酸鈉、丙酸鈣、脫氫乙酸等。1苯甲酸及苯甲酸鈉的測定 苯甲酸及苯甲酸鈉是目前我國使用的主要防腐劑之一。它屬於酸型防腐劑，在酸性條件下防腐效果較好，特別適用於偏酸性食品(pH4.5～5)。我國《食品添加劑使用衛生標准》(GB2760—1996)規定：苯甲酸及苯甲酸鈉在碳酸飲料中的最大使用量為0.2g/kg，低鹽醬菜、醬菜、蜜餞、食醋、果醬(不包括罐頭)、果汁飲料、塑料裝濃縮果蔬汁中最大使用量為2g/kg(以苯甲酸計)。1.1 酸鹼滴定法1.1.1原理 於試樣中加入飽和氯化鈉溶液，在鹼性條件下進行萃取，分離出蛋白質、脂肪等，然後酸化，用乙醚提取試樣中的苯甲酸，再將乙醚蒸去，溶於中性醚醇混合液中，最後以標准鹼液滴定。1.1.2儀器和試劑(1)儀器①鹼式滴定管。 ②300ml燒杯。③250ml容量瓶。④500ml分液漏斗。⑤水浴箱。⑥吹風機。⑦分析天平。⑧錐形瓶。(2)試劑 ①純乙醚：置乙醚於蒸餾瓶中，在水浴上蒸餾，收取35℃部分的餾液。②鹽酸(6mol/L)。 ③氫氧化鈉溶液(100g/L)：准確稱取氫氧化鈉100g於小燒杯中，先用少量蒸餾水溶解，再轉移至1000ml容量瓶中，定容至刻度。④氯化鈉飽和溶液。⑤純氯化鈉。⑥95％中性乙醇：於95％乙醇中加人數滴酚酞指示劑，以氫氧化鈉溶液中和至微紅色。⑦中性醇醚混合液：將乙醚與乙醇按1：1體積等量混合，以酚酞為指示劑，用氫氧化鈉中和至微紅色。⑧酚酞指示劑(1％乙醇溶液)：溶解1g酚酞於100ml中性乙醇中。⑨氫氧化鈉標准溶液(0.05 mol/L)：稱取純氫氧化鈉約3g，加入少量蒸餾水溶去表面部分，棄去這部分溶液，隨即將剩餘的氫氧化鈉(約2g)用經過煮沸後冷卻的蒸餾水溶解並稀釋至1000 ml，按下法標定其濃度。1.1.3操作步驟(1)樣品的處理 ①固體或半固體樣品：稱取經粉碎的樣品100g置250ml容量瓶中，加入300ml蒸餾水，加入分析純氯化鈉至不溶解為止(使其飽和)，然後用100g／L氫氧化鈉溶液使其成鹼性(石蕊試紙試驗)，搖勻，再加飽和氯化鈉溶液至刻度，放置2h(要不斷振搖)，過濾，棄去最初l0ml濾液，收集濾液供測定用。 ②含酒精的樣品：吸取250ml樣品，加入100g/L氫氧化鈉溶液使其成鹼性，置水浴上蒸發至約100ml時，移入250ml容量瓶中，加入氯化鈉30g，振搖使其溶解，再加氯化鈉飽和溶液至刻度，搖勻，放置2h(要不斷振搖)，過濾，取濾液供測定用。 ③含脂肪較多的樣品：經上述方法制備後，於濾液中加入氫氧化鈉溶液使成鹼性，加入20～50ml乙醚提取，振搖3min，靜置分層，溶液供測定用。(2)提取吸取以上制備的樣品濾液100ml，移入250 ml分液漏斗中，加6mol/L鹽酸至酸性(石蕊試紙試驗)。再加3ml鹽酸(6mol/L)，然後依次用40、30、30ml純乙醚，用旋轉方法小心提取。每次搖動不少於5min。待靜置分層後，將提取液移至另一個250ml分液漏斗中(3次提取的乙醚層均放大這一分液漏斗中)。用蒸餾水洗滌乙醚提取液，每次10ml，直至最後的洗液不呈酸性(石蕊試紙試驗)為止。 將此乙醚提取液置於錐形瓶中，於40～45℃水浴上回收乙醚。待乙醚只剩下少量時，停止回收，以風扇吹乾剩餘的乙醚。(3)滴定於提取液中加入30ml中性醇醚混合液，10ml蒸餾水，酚酞指示劑3滴，以0.05mol/L氫氧化鈉標准溶液滴至微紅色為止。 4)結果計算1.2高效液相色譜法本法可同時用於苯甲酸及山梨酸的測定。1.2.1原理 樣品加溫除去二氧化碳和乙醇，調pH至近中性，過濾後進高效液相色譜儀，經反相色譜分離後，根據保留時間和峰面積進行定性和定量。1.2.2儀器和試劑(1)儀器 高效液相色譜儀(帶紫外檢測器)。(2)試劑 ①甲醇：優級純，經濾膜(0.5μm)過濾。②稀氨水溶液(1+1)：氨水加水等體積混合。 ③乙酸銨溶液(0.02mol/L)：稱取1.54g乙酸銨，加水至1 000ml，溶解，經濾膜(0.45μm)過濾。④碳酸氫鈉溶液(20g/L)：稱取2g碳酸氫鈉(優級純)，加水至100ml，振搖溶解。⑤苯甲酸標准儲備溶液：准確稱取0.1000g苯甲酸，加碳酸氫鈉溶液(20g/L)5ml，加熱溶解，移入100ml容量瓶中，加水定容至100ml，搖勻。此溶液每毫升含苯甲酸1mg。⑥山梨酸標准儲備溶液：准確稱取0.1000g山梨酸，加碳酸氫鈉溶液(20g/L)5ml，加熱溶解，移入100ml容量瓶中，加水定容至100ml，搖勻。此溶液每毫升含山梨酸為1mg。⑦苯甲酸、山梨酸標准混合使用溶液：吸取苯甲酸、山梨酸標准儲備溶液各10.0ml，放人100ml容量瓶中，加水至刻度。此溶液含苯甲酸、山梨酸各0.1mg/ml經濾膜(0.45μm)過濾。1.2.3操作步驟(1)樣品處理 ①汽水：稱取5.00～10.0g樣品，放入小燒杯中，微溫攪拌除去二氧化碳，用氨水(1+1)調pH約7。加水定容至10～20ml，經濾膜(0.45μm)過濾。 ②果汁類：稱取5.00～10.0g樣品，用氨水(1+1)調pH約7，加水定容至適當體積，離心沉澱，上清液經濾膜(0.45μm)過濾。 ③配製酒類：稱取10.0g樣品，放入小燒杯中，水浴加熱除去乙醇，用氨水(1+1)調pH約7，加水定容至適當體積，經濾膜(0.45μm)過濾。(2)高效液相色譜分析參考條件 ①色譜柱：YWG—C18 4.6mm×150mm 5μm，或其他型號C18柱。 ②流動相：甲醇+乙酸銨溶液(0.02mol／L)(5+95)。 ③流速：1.0ml/min。 ④進樣量：10μL。 ⑤檢測器：紫外檢測器，波長230nm，靈敏度0.2AUFS。 根據保留時間定性，外標峰面積法定量。 1.2.4結果計算 式中： X—樣品中苯甲酸或山梨酸的含量，g/kg； m1—進樣體積中苯甲酸或山梨酸的質量，mg； V2—進樣體積，ml； V1—樣品稀釋液總體積，ml； m—樣品質量，g。2山梨酸及山梨酸鉀的測定山梨酸與山梨酸鉀是目前國際上公認的安全防腐劑,已被很多國家和地區廣泛使用。我國《食品添加劑使用衛生標准》(GB2760—1996)規定：山梨酸及山梨酸鉀用於肉、魚、禽類製品時的最大使用限量為0.075g/kg；水果、蔬菜及碳酸飲料為0.2g/kg,膠原蛋白腸衣、低鹽醬菜類、蜜餞、果汁飲料、果凍等為0.5g/kg；果酒為0.6g/kg；塑料桶裝濃縮果蔬汁、軟糖、魚干製品、即食豆製品、糕點、麵包、乳酸菌飲料等為1.0g/kg。當山梨酸與山梨酸鉀同時使用時，以山梨酸計，不得超過最大使用量。2.1.硫代巴比妥酸比色法2.1.1原理利用自樣品中提取出來的山梨酸及其鹽類，在硫酸及重鉻酸鉀的氧化作用下產生丙二醛，丙二醛與硫代巴比妥酸作用產生紅色化合物，其紅色深淺與丙二醛濃度成正比，並於波長530nm處有最大吸收，符合比爾定律，故可用比色法測定。2.1.2儀器和試劑(1)儀器① 721型分光光度計。②組織搗碎機。③10ml比色管。(2)試劑①硫代巴比妥酸溶液：准確稱取0.5g硫代巴比妥酸於100ml容量瓶中，加20ml蒸餾水，然後再加入10ml氫氧化鈉溶液(1mol/L)，充分搖勻。使之完全溶解後再加入11ml鹽酸(1mol/L)，用水稀釋至刻度。此溶液要在使用時新配製，最好在配製後不超過6h內使用。 ②重鉻酸鉀-硫酸混合液：以0.1mol/L重鉻酸鉀和0.15mol/L硫酸以1：1的比例混合均勻配製備用。③山梨酸鉀標准溶液：准確稱取250mg山梨酸鉀於250ml容量瓶中，用蒸餾水溶解並稀釋至刻度，使之成為1mg/ml的山梨酸鉀標准溶液。④山梨酸鉀標准使用溶液：准確移取山梨酸鉀標准溶液25ml於250ml容量瓶中，稀釋至刻度，充分搖勻，使之成為0.1mg/ml的山梨酸鉀標准使用溶液。2.1.3操作步驟(1)樣品的處理 稱取100g樣品，加蒸餾水200ml，於組織搗碎機中搗成勻漿。稱取此勻漿100g，加蒸餾水200ml繼續搗碎1min，稱取10g於250ml容量並中定容搖勻，過濾備用。（2）山梨酸鉀標准曲線的繪制 分別吸取0.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0ml山梨酸鉀標准使用溶液於200ml容量瓶中，以蒸餾水定容(分別相當於0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0μg/ml的山梨酸鉀)。再分別吸取2.0ml於相應的10ml比色管中，加2.0ml重鉻酸鉀-硫酸溶液，於100℃水浴中加熱7min，立即加人2.0ml硫代巴比妥酸溶液，繼續加熱l0min，立即取出迅速用冷水冷卻，在分光光度計上以530nm測定吸光度，並繪制標准曲線。(3)樣品的測定 吸取樣品處理液2ml於10ml比色管中，按標准曲線繪制的操作程序，自「加2.0ml重鉻酸鉀-硫酸溶液」開始依次操作，在分光光計530nm處測定吸光度，從標准曲線中查出相應濃度。 2.1.4結果計算式中： X1—樣品中山梨酸鉀的含量，g/kg； X2—樣品中山梨酸的含量，g/kg； c—試樣液中含山梨酸鉀的濃度，mg/ml； m—稱取勻漿相當於試樣的質量，g； 2—用於比色時試樣溶液的體積，ml； 250—樣品處理液總體積，ml 1.34—山梨酸鉀換算為山梨酸的系數。2.2.紫外分光光度法2.2.1原理樣品經氯仿(三氯甲烷)提取後，再加人碳酸氫鈉，使山梨酸形成山梨酸鈉而溶於水溶液中。純凈的山梨酸鈉水溶液在254nm處有最大吸收，經紫外分光光度計測定其吸光度後即可測得其含量。2.2.2儀器和試劑(1)儀器 ①紫外分光光度計。②組織搗碎機。(2)試劑 ①三氯甲烷：以三氯甲烷體積50％的碳酸氫鈉(0.5mol/L)提取2次，而後以無水硫酸鈉乾燥，過濾備用。②0.5mol/L碳酸氫鈉：稱取21g碳酸氫鈉於小燒杯中，加少量蒸餾水溶解，移至500ml容量瓶中加水定容至刻度。③0.3mol/L碳酸氫鈉。④山梨酸標准溶液：准確稱取250mg山梨酸，用0.3mol/L的碳酸氫鈉定容至250ml⑤山梨酸標准使用液：准確吸取山梨酸標准溶液25.00ml，用0.3mol/L的碳酸氫鈉定容至250ml，即為100μg/ml的標准使用液。2.2.3 操作步驟(1)樣品的處理：稱取50.0g樣品，加450ml蒸餾水於組織搗碎機中，粉碎5min，使成勻漿。稱取10.0g此勻漿於50ml容量瓶中，並以水定容。移取l0ml此溶液於250ml分液漏斗中，用100ml氯仿提取1min。靜置分層。將氯仿層分至125ml錐形瓶中，加人5g無水硫酸鈉，振盪後靜置。(2)標准曲線的繪制：分別吸取山梨酸標准使用液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml於100ml容量瓶中，用0.3mol/L碳酸氫鈉定容(分別相當於0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0μg/ml的山梨酸)。於紫外分光光計中254nm處測定吸光度，以濃度為橫坐標，以吸光度為縱坐標繪制標准曲線。(3)樣品的測定：移取樣品氯仿提取液50ml於125ml分液漏斗中，用25ml碳酸氫鈉(0.3mol/L)提取1min。靜置分層後，小心棄去氯仿層。將碳酸氫鈉提取液於紫外分光光計中254nm處測定吸光度。從標准曲線上查出相應的山梨酸含量。2.2.4結果計算式中：X—山梨酸的含量。g/kg；m1—試液中山梨酸的含量，mg/ml； V1—試樣碳酸氫鈉提取液總量，ml； V2—吸取試樣氯仿提取液體積，ml； V3—試樣氯仿提取液總體積，ml； m—用於測定的試樣水提取液相當於樣品的質量，g。2.3.氣相色譜法2.3.1原理 樣品經酸化後，用乙醚提取山梨酸和苯甲酸，再用帶氫火焰離子化檢測器的氣相色譜儀進行分離測定，然後與標准系列進行比較定量。2.3.2儀器和試劑(1)儀器 氣相色譜儀(具有氫火焰離子化檢測器)。(2)試劑 ①乙醚：不含過量氧化物。②石油醚：沸程30～60℃。③鹽酸。④無水硫酸鈉。⑤鹽酸(1：1)：取100ml鹽酸，加入稀釋至200ml。⑥氯化鈉的酸性溶液(40g/L)：於氯化鈉溶液(40g/L)中加少量鹽酸(1：1)，使之酸化。⑦山梨酸和苯甲酸標准儲備液：准確稱取山梨酸和苯甲酸各0.2000g，置於100ml容量瓶中，用石油醚-乙醚(3：1)混合溶劑溶解後，稀釋至刻度，1ml此溶液相當於200mg山梨酸或苯甲酸。⑧山梨酸和苯甲酸的標准使用液：吸取適量的山梨酸和苯甲酸的標准溶液，以石油醚-乙醚(3+1)混合溶劑稀釋至每毫升相當於50、100、150、200、250mg山梨酸或苯甲酸。2.3.3操作步驟 (1)樣品的處理 稱取2.50g事先混合均勻的樣品，置於25ml帶塞量筒中，加0.5ml鹽酸(1：1)酸化，依次用15ml和10ml乙醚提取，每次振搖1min後，將上層乙醚提取液吸人另一個25ml帶塞量筒中，合並乙醚提取液。用3ml氯化鈉的酸性溶液(40g/L)洗滌2次，靜置15min，用滴管將乙醚層通過無水硫酸鈉濾人25ml容量瓶中，加乙醚至刻度，混勻。准確吸取5ml乙醚提取液於5ml帶塞刻度試管中，置於40℃水浴上揮干，加入2ml石油醚-乙醚(3：1)混合溶劑溶解殘渣，備用。 (2)色譜參考條件 ①色譜柱：玻璃柱，內徑為3mm，長為2m，內裝塗以5％(質量分數) DEGS+l％(質量分數)H3 PO4固體液的60～80目ChromosoybWAW。②載氣：載氣為氮氣，氣流速度為50ml/min(氮氣、空氣及氫氣按各儀器型號不同，選擇各自的最佳比例條件)。③溫度：進樣品溫度為230℃，檢測器溫度為230℃，柱溫為170℃。 (3)測定 ①進樣2μL標准系列中各濃度的標准使用液於氣相色譜儀中，測得不同濃度的山梨酸和苯甲酸的峰高。以濃度為橫坐標，以峰高值為縱坐標，繪制標准曲線。山梨酸和苯甲酸的標准色譜圖如圖8—1所示，山梨酸的保留時間為173s，苯甲酸的保留時間為368s。圖8—1山梨酸和苯甲酸標准色譜圖②進樣2μL樣品溶液，測得峰高，然後與標准曲線比較定量。2.3.4結果計算 式中：X—樣品中山梨酸或苯甲酸的含量，g/kg； m1—測定用樣品溶液中山梨酸或苯甲酸的質量，μg； V1—加入石油醚-乙醚(3+1)混合溶劑的體積，ml： V2—測定時進樣的體積，μL； m2—樣品的質量，g； 由測得苯甲酸的量乘以1.18，即為樣品中苯甲酸鈉的含量。3過氧乙酸的測定 過氧乙酸又叫過醋酸，是過氧化氫、醋酸與微量硫酸的混合水溶液。過氧乙酸對細菌繁殖體、芽孢、真菌、病毒都具有高度殺滅效果，是一種廣譜、高效、速效的殺菌劑。3.1原理 在酸性條件下，過氧乙酸中含有的過氧化氫(H2O2)用高錳酸鉀標准滴定溶液滴定，然後用間接碘量法測定過氧乙酸的含量。 3.2儀器和試劑 3.2.1儀器 ①250ml碘量瓶。 ②50ml棕色滴定管。 ③分析天平。3.2.2試劑 ①硫酸溶液(1+9)：量取1ml硫酸與9ml水混合。 ②碘化鉀溶液(100g/L)。 ③硫酸錳溶液(100g/L)。 ④鉬酸銨溶液(30g/L)。 ⑤高錳酸鉀標准溶液[c(1/5KMnO4)=0.1mol/L]。 ⑥硫代硫酸鈉標准滴定溶液[c(Na2S2O3)－0.1mol/L]。 ⑦澱粉指示液(10g/L)。3.3操作步驟 稱取約0.5g試樣(或稱取相當於含過氧乙酸約0.07g的試樣)，精確至0.000 1g，置於預先盛有50ml水，5ml硫酸溶液和3滴硫酸錳溶液並已冷卻至4℃的碘量瓶中，搖勻，用高錳酸鉀標准溶液滴定至溶液呈穩定的淺粉色。隨即加入10ml碘化鉀溶液和3滴鉬酸銨溶液，輕輕搖勻，於暗處放置5～10min，用硫代硫酸鈉標准滴定溶液滴定，接近終點時(溶液呈淡黃色)加入1ml澱粉指示液，繼續滴定至藍色消失，並保持30s不變為終點。記錄消耗硫代硫酸鈉標准滴定溶液的體積數。3.4結果計算 式中：X—過氧乙酸的質量分數，％； V—消耗的硫代硫酸鈉標准滴定溶液的體積，ml； c—硫代硫酸鈉標准滴定溶液濃度，mol/L； m—試樣的質量，g； M—與1.00ml硫代硫酸鈉標准滴定溶液(c=1.000mol/L)相當的過氧乙酸的摩爾質量(M=0.03803g/mol)； 取2次平行測定結果的算術平均值為測定結果，兩次平行測定結果之差不得大於0.3%。4對羥基苯甲酸酯類的測定 對羥基苯甲酸乙酯、對羥基苯甲酸丙酯和對羥基苯甲丁酯，又名尼泊金乙酯、尼泊金丙酯和尼泊金丁酯。三者均為苯甲酸的衍生物。我國《食品添加劑使用衛生標准》(GB2760—1996)規定：對羥基苯甲酸乙酯、丙酯和丁酯用於果蔬保鮮時的最大使用量(以對羥基苯甲酸計)為0.012g/kg；食醋0.10g/kg；碳酸飲料、蛋糕、蛋黃餡0.20g/kg；果汁飲料、果醬(不包括罐頭)、醬油等為0.25g/kg；糕點餡為0.5g/kg。4.1.高效液相色譜法4.1.1原理 樣品中對羥基苯甲酸酯類，用乙腈提取，經過濾後進高效液相色譜儀進行測定，與標准比較，以保留時間定性，以峰高定量。4.1.2儀器和試劑(1)儀器 ①組織搗碎機。 ②離心機。 ③高效液相色譜儀(帶紫外檢測器)。(2)試劑 ①乙腈。全玻蒸餾。 ②對羥基苯甲酸酯類的標准溶液：稱取50mg相應的對羥基苯甲酸酯，溶於100ml容量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，混勻。分別吸取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml上述溶液，置於100ml容量瓶中，用乙腈稀釋至刻度。該系列標准溶液中每毫升分別含5.0、10.0、15.0、20.0、25.0μg的對羥基苯甲酸酯。4.1.3操作步驟(1)樣品提取 稱取約20g樣品，粉碎。准確稱取2g樣品於10ml具塞離心管中，加入5.0ml乙腈，塞上塞子。振搖30s後，於500r/min離心5min，將上清液轉移至25.0ml容量瓶中，重復操作3次，用乙腈稀釋至刻度。用0.45μm濾膜過濾，供色譜測定用。(2)高效液相色譜分析參考條件 ①色譜柱：μBondapak C18 30cm×4.6mm。 ②流速：1.4ml/min。 ③檢測波長：254nm。 (3)測定分別進樣10μL對羥基苯甲酸酯標准系列中各濃度的標准溶液，以濃度為橫坐標，峰高為縱坐標繪制標准曲線。同時進樣10μL樣品溶液，與標准曲線比較定性、定量。 對羥基苯甲酸甲酯、丙酯的保留時間分別約為4.2min和7.6min，其標准色譜圖如圖8-2所示。4.1.4結果計算 式中：X—樣品中對羥基苯甲酸酯類的含量，mg/g; m1—被測樣品液中對羥基苯甲酸酯類的含量，μg/ml; m—樣品的質量，g； 25—樣品溶液的體積，ml。4.2.氣相色譜法4.2.1原理 樣品經酸化後，對羥基苯甲酸酯類用乙醚提取濃縮後，用具氫火焰離子化檢測器的氣相色譜儀進行分離測定，與標准系列比較定量。4.2.2儀器和試劑 (1)儀器 ①K-D濃縮器。 ②氣相色譜儀：具氫火焰離子化檢測器。(2)試劑 ①乙醚，重蒸。 ②無水乙醇。 ③無水硫酸鈉。 ④飽和氯化鈉溶液。 ⑤碳酸氫鈉溶液(1g/100ml)。 ⑥鹽酸(1+1)：量取50ml鹽酸，用水稀釋至100ml。 ⑦對羥基苯甲酸乙酯、丙酯的標准溶液：准確稱取對羥基苯甲酸乙酯、丙酯各0.050g，溶於50ml容量瓶中，用無水乙醇稀釋至刻度，該溶液每毫升相當於lmg對羥基苯甲酸乙酯、丙酯。 ⑧對羥基苯甲酸乙酯、丙酯的使用溶液：吸取適量的對羥基苯甲酸乙酯、丙酯標准溶液，用無水乙醇分別稀釋至每毫升相當於50、100、200、400、600、800μg的對羥基苯甲酸乙酯、丙酯。4.2.3操作步驟(1)樣品的提取與凈化。 ①醬油、醋、果汁等：吸取5g預先均勻化的樣品於125ml分液漏斗中，加入1ml鹽酸(1+1)酸化，l0ml飽和氯化鈉溶液，搖勻，分別以75、50、50ml，乙醚提取三次，每次2min，放置片刻，棄去水層，合並乙醚層於250ml分液漏斗中，加10ml飽和氯化鈉溶液洗滌一次，再分別以碳酸氫鈉溶液(1g/100ml)30、30、30ml洗滌3次，棄去水層。用濾紙吸去漏斗頸部水分，塞上脫脂棉，加10g無水硫酸鈉於室溫放置30min，在K—D濃縮器上濃縮近干，用吹氮除去殘留溶劑。用無水乙醇定容至每毫升含1mg對羥基苯甲酸乙酯、丙酯供氣相色譜用。 ②果醬：稱取5g預先均勻化的樣品於100ml具塞試管中，加入1ml鹽酸(1+1)，10ml飽和氯化鈉溶液，搖勻，用50、30、30ml乙醚提取3次，每次2min，用吸管轉移乙醚至250ml分液漏斗中，以下按上法操作。(2)氣相色譜分析參考條件。 ①色譜柱：內徑3mm，長2.6m，內塗以3%SE-30/Chromoserb W AWI)-MCS，60～80目。 ②檢測溫度：柱溫170℃，進樣口和檢測器溫度220℃。 ③氣體流速：氮氣，40ml/min；氫氣，50ml/min；空氣，500ml/min。(3)測定 進樣1μL對羥基苯甲酸乙酯、丙酯標准系列中各濃度標准使用液於氣相色譜儀中，測定不同濃度對羥基苯甲酸乙酯、丙酯的峰高。以濃度為橫坐標，峰高為縱坐標繪制標准曲線。 同時進樣1μL樣品溶液，測定峰高並與標准曲線比較定量。4.2.4結果計算 式中：X—樣品中對羥基苯甲酸酯類的含量，g/kg； A—測定樣品中對羥基苯甲酸酯類的含量，μg； V1—樣品制備液體積，ml； V2—樣品進樣體積，μL；m—樣品質量，g。

D. 什麼是硫代巴比妥酸試驗

硫代巴比妥酸法(TBA test) TBA試驗自1944年由Kohn和Liversedgd提出後即應用於食品和生物材料中脂類氧化的檢測和定量，其應用程度居所有測試方法之首。TBA試驗是用2-硫代巴比妥酸與脂類氧化產物丙二醛作用生成一種粉紅色化合物，此化合物在532nm波長下有最大吸收值。通常將測試結果表示為532nm下的吸光值與丙二醛吸光系數之積，即通常所說的TBA值。 然而TBA試驗的特異性一直受到爭議，其原因有三：①丙二醛僅僅是脂類氧化的某些初級和次級產物再降解形成的低分子量終產物中的其中一種：② 只有含有三個或三個以上雙鍵的多聚不飽和脂肪酸才能進行一系列環化反應繼而生成丙二醛③丙二醛可與除TBA以外的其它分子反應。

E. 急求2-硫代巴比妥酸的具體性質

2-硫代巴比妥酸(2-Thiobarbituric acid，TBA)生化試劑分子式：C4H4N2O2S分子量：144.15性狀：微黃色或微橙紅色粉狀結晶，溶於沸水、鹼液中貯藏條件：常溫含 量：≥98.5%灼燒殘渣：≤0.2%；2-硫代巴比妥酸，TBA保管與使用時的注意事項：放在堅固的密閉容器中，存放於陰涼乾燥處。

F. 如何用化學方法鑒別巴比妥，苯巴比妥，司可巴比妥和含硫巴比妥

苯巴比妥可發生硝化反應得到黃色物質
司可巴比妥可以與溴水反應
含硫巴比妥可以與鉛離子形成PbS黑色沉澱。

G. 為什麼水解反應能鑒別異戊巴比妥和巴比妥

水解反應——具有醯亞胺結構與鹼液共沸NH3

可用於異戊巴比妥和巴比妥的鑒別試驗；在室溫和pH10以下水解較慢，pH11以上隨著鹼度的增加水解速度加快（宜做成粉針劑）。

H. TBA是什麼意思

硫代巴比妥酸(TBA)法：TBA法的原理是脂質過氧化的降解產物之一一丙二醛(MDA)，可以與硫代巴比妥酸成色。是肝細胞以膽固醇為原料直接合成的膽汁酸，包括膽酸、鵝脫氧膽酸及相應結合型膽汁酸。

TBA法是一非常簡便的方法，一般實驗室均可進行。此法與熒光法、化學發光法等有較好的相關性，但不足之處是靈敏度較差，某些因素應加以控制，如線粒體污染，樣品中的鐵離子等。

(8)硫代巴比妥的專屬鑒別方法擴展閱讀：

硫代巴比妥酸(TBA)法在520nm處進行比色測定，可檢測丙二醛相對含量的變化，以了解生物膜質過氧化的情況。 TBA法是一非常簡便的方法，一般實驗室均可進行。

此法與熒光法、化學發光法等有較好的相關性，但不足之處是靈敏度較差，某些因素應加以控制，如線粒體污染，樣品中的鐵離子等。

I. 用化學方法區別硫噴妥鈉、苯巴比妥、司可巴比妥和異戊巴比妥。

四種物質主要是R1和R2取代基不同，分別採用CuSO4，甲醛-硫酸，Br2，Pb來進行鑒別

J. 鹽酸普魯卡因鑒別反應為什麼磺化反應和碘化反應不行

鹽酸普魯卡因：

1. 具有芳伯氨基，可用重氮化偶合反應鑒別2本品顯氯化物的鑒別反應3水解反應 檢查：對氨基苯甲酸，TLC法 原理： 方法：

指示終點的方法：永停滴定法、電位法、內指示劑法或外指示劑法。

滴定時：將滴定管的尖端插入液面下約2/3處，用亞硝酸鈉滴定液迅速滴定，隨滴隨攪拌，至終點時，將滴定管的尖端提出液面，用少量水淋洗尖端，洗液並入溶液中，繼續緩緩滴定。 鹽酸：加快重氮化反應速度，重氮鹽在酸性溶液中穩定。防止生成偶氮氨基化合物。 溴化鉀：催化劑，加快反應速度。 維生素a

三氯化銻反應：無水無醇條件下，在三氯化銻氯仿溶液中立刻呈藍色後變紅 紫外分光光度法348、367、389波長處有吸收峰322處有拐點 Tlc：顯色劑：磷鉬酸 維生素b1

鑒別：1.硫色素反應：鹼性溶液中被鐵氰化鉀氧化成硫色素，在正丁醇中顯藍色熒光 2.沉澱反應：與生物鹼試劑反應 3.氯化物反應

硝酸鉛反應：與鹼供熱產生na2s，與硝酸鉛生成pbs

原料葯採用非水溶液滴定法，其原理是維生素b1分子中含有兩個鹼性的已成鹽的伯胺和季銨基團，在非水溶液中（醋酸汞存在下）均可與高氯酸作用，根據消耗高氯酸的量即可計算維生素b1的含量。主要條件：精密稱取本品一定量，加冰醋酸與醋酸汞試液、喹哪啶紅-亞甲基藍混合指示液，用高氯酸滴定液（0.1mol/l）滴定，空白實驗校正。每1ml高氯酸滴定液相當於16.86mg維生素b1 維生素b1 維生素c

鑒別1.Agno3反應：產生Ag

2.2，6一二氯靛酚反應（酸玫瑰紅，鹼性藍色，反應後變無色） 3.紅外光譜法

維生素c分子中的二基具有較強的還原性，在酸性條件下可被碘液氧化為二酮基，以澱粉為指示劑，可用碘液直接滴定

注意 ：1.滴定反應在酸性溶液（醋酸）中進行，可使維生素C受空氣中氧的化速度減慢；2加新沸過放冷蒸餾水溶解，是為了減少水中溶解氧的影響；3供試品溶於稀酸後仍需立即滴定，以減少空氣中氧的干擾。

碘量法用於測定維生素C注射劑含量時，由於處方中加有穩定劑焦亞硫酸鈉，而焦亞硫酸鈉易水解生成亞硫酸鈉，有還原性，對本法有干擾。所以在滴定前需加入丙酮（或甲醛）作掩蔽劑，與穩定劑生成無還原性的加成產物，以消除其干擾。 鹽酸異丙嗪 紫外區分別在205nm、254nm、300nm 分子結構中含有氮原子而呈弱鹼性，酸鹼電位滴定法測定原料葯的含量。鹽酸異丙嗪片劑和注射劑因賦形劑和抗氧劑等的影響（中國葯典）兩者均採用高效液相色譜法測定含量 雜質檢查：澄清度與顏色（控制吸光度法）草酸（比濁法） 鐵銅的檢查（原子吸收分光光度法）

巴比妥（丙二醯脲結構）

弱酸性：母核環狀結構中含1，3-二醯亞胺，因而其分子結構能發生酮式-烯醇式互變結構，在水溶液中能發生二級電離二線弱酸性

水解反應：巴比妥類葯物的分子結構中含有醯亞胺結構，與鹼液共沸，釋放出氨氣，可使紅色石蕊試紙變藍 與重金屬離子反應： 巴比妥鑒別反應：

1銀鹽反應取供試品約0.1g，叫碳酸鈉試液1ml與水10ml，振搖2min，濾液中逐滴加入硝酸銀溶液即產生白色沉澱，振搖，沉澱即溶解；繼續滴加過量的硝酸銀溶液，沉澱不溶解。 2銅鹽反應： 銅吡啶試液（巴比妥類：紫色沉澱，硫代巴比妥類：綠色） 3苯取代基基反應：苯巴比妥：（硝酸鉀加硫酸：黃色硝基化合物，甲醛+硫酸：玫瑰紅色產物）

4不飽和取代反應：與碘、溴、高錳酸鉀反應褪色

5硫元素反應：與鉛離子生成白色沉澱，加熱後變成pbs

苯巴比妥雜質：苯基丙二醯脲（酸度檢查）苯巴比妥（乙醇溶液澄清度檢查） 有關物質（HPLC） 中鹼性物質（乙醚溶解，提取稱量） 阿司匹林

理化性質1酸性：有羧基2光譜：有特定光譜3三氯化鐵反應 鑒別：三氯化鐵反應

雜質檢查：Na2co3不溶物（澄清度檢查）易碳物質（比色法）有關物質（HPLC） 吡啶類：異煙肼鑒別：吡啶開環反應（戊烯二醛反應） 喹啉類：綠奎寧反應：奎寧鹽在微酸性水溶液中滴過過量的溴水或氯水，再滴加過量的氨水，即顯綠色。

地西泮1水解後重氮化-偶合反應：鹽酸溶液加熱煮沸，放冷，加硝酸鈉和鹼性B-萘酚試液，生成橙紅色沉澱

2沉澱反應：有弱鹼性，可與金屬鹽或大分子酸形成沉澱 3氯元素反應 4紫外光度法和紅外光度法 雜質：有關物質：hplc

激素類:1 C17-a-醇酮基反應：能與鹼性酒石酸銅試液、氨制硝酸鹽試液以及四氮唑試液反應呈紅色，氨 制硝酸銀試液反應（黑Ag）

2酮基呈色反應：和某系羰基試劑如異煙肼反應形成黃色的腙而用於鑒別 3甲酮基呈色：與亞硝基鐵氰化鈉反應，黃體酮呈藍紫色

4酚羥基反應：雌激素c3有酚羥基，與重氮苯磺酸反應生成紅色偶氮染料 5炔基的沉澱反應：遇硝酸銀試液生成白色的炔銀沉澱

古蔡氏法：金屬鋅和酸作用產生新生態的氫，與葯物中微量砷鹽反應生成砷化氫氣體，遇溴化汞試紙，產生黃色至棕色的砷斑，與一定量標准溶液生成的砷斑比較，判斷是否符合規定主要試劑：碘化鉀，酸性氯化亞錫

碘化鉀作用：1.將AS5+還原成3+。2.與反應產生的鋅離子形成穩定的化合物，利於生成砷化氫的反應不斷進行；3可抑制銻化氫的形成

酸化氯化亞錫的作用：還原劑，與KI共同將AS5+還原成3+；2.將生成的I2還原成I-；3與鋅作用，在鋅表面形成鋅錫齊，去去極化作用，從而使氫氣均勻地發生4抑制銻化氫的形成 醋酸鉛棉花的作用：吸收硫化氫（少量硫化氫在酸性溶液中產生避免硫化氫與溴化汞作用生成硫化汞色斑干擾。

提取方法：冷浸法、迴流提取法、連續迴流提取法、水蒸氣蒸餾法、超聲波提取法、超臨界流體萃取法

葯品非臨床研究質量管理規范GLP葯材種植質量管理規范GAP 葯品生產質量管理規范GMP葯品臨場研究質量管理規范GCP 葯品經營質量管理規范GSP

特殊雜質檢查方法

物理法 1（顏色差異：對氨基水楊酸鈉溶液顏色差異）（臭味及揮發性差異：麻醉乙醚中異臭檢

查）（溶解度差異：阿司匹林澄清度檢查） 化學法 （酸鹼反應：枸緣酸鉀酸鹼度檢查）（呈色反應：貝諾酯中的對氨基酚）（沉澱反應：硫

脲）（產生氣體：氨，銨鹽）

光學分析法 （旋光法：VB2，硫酸阿托品）（紫外—可見分光光度法：鹽酸丙米嗪，腎上腺素，

碘解磷定）（紅外分光光度法：甲苯咪唑） 色譜分析法 （TLC游離肼）（HPLC水楊酸）

1.抗生素的含量或效價測定方法可分為生物學方法和理化方法 抗生素檢定法的測定方法包括管碟法和濁度法

流動相的分析系統（FIA）包括：采樣單元，感測單元和數據處理單元 十一、1高效凝膠色譜法:慶大黴素雜志檢查

2.生物製品分析 檢測的特殊性:生活活性檢查，安全性檢查，效價測定

3.檢測內容:鑒別實驗，理化鑒定內容，安全檢查對象，安全檢查內容，生物製品的效力

測定

安全檢查內容包括:過敏性物質的檢查，殺菌,滅活和脫毒檢查，殘餘毒力和毒性物質的

檢查，外源性污染的檢查

4.生化葯物特點:分子量不確定，容易失活，易引入熱原等雜質，效價測定，結構確證困難 5.鑒別與定量方法:理化鑒別法 例子：胰蛋白酶(呈色法) 魚肝油(HPLC) 胃蛋白

酶(沉澱法) 組氨酸(TLC) 細胞色素(紫外) 尿激酶(酶法) 肝素(電泳法)

6.安全性檢查:熱原檢查法和細菌內毒素檢查法(兔) 異常毒性試驗(小鼠) 過敏試驗(豚鼠)

降壓物質試驗(貓) 無菌試驗(薄膜過濾法) 十二、1.飲用水水樣的檢驗指標:揮發酚類檢驗，硼的檢驗，鉛的檢驗，農葯指標對硫磷的檢驗，

總大腸菌群的檢驗

2.制葯用油有：大豆油，氫化大豆油，氫化蓖麻油，橄欖油，精製玉米油 3.評價制葯用油質量的重要指標：相對密度，折射率，皂化值，酸值

4.硬脂酸鎂要檢查重金屬，鐵鹽，硫酸鹽和氯化物等一般雜質及微生物限度，相對含量的檢查採用氣相色譜法（GC）

二、QM質量管理 QI質量改進 .QC質量控制:對原材料,中間體,產品的系統質量制

三、1.中國葯典由凡例,正文,附錄,索引組成2.中國葯典ChP，美國葯典USP，英國葯典BP，日本葯局方JP

四、1.樣品採集原則:均勻,合理,真實性,科學性,代表性；

樣品前處理不經有機破壞的分析法:直接測定法,經水解後測定法,經氧化還原後測定法,溶劑萃取法

4.經有機破壞分析法:濕法有機破壞法(凱氏定氮法),干法有機破壞法(氧瓶燃燒法)

含F HF 茜素氟藍比色法 水 含P P2O5 鉬藍(磷鉬藍)比色法 水

含Se SeO2,SeO3 二氨基萘比色法 硝酸溶液 五、1.鑒別實驗條件:溶液的酸鹼度,溶液的濃度,反應的溫度,反應介質

2.鑒別實驗方法:物理:熔點,比旋度,吸收系數(摩爾吸收系數R,百分吸收系數E1m),折射率

光譜:紫外-可見光譜鑒別法,紅外光譜鑒別法

色譜:薄層色譜法(TLC),高效液相色譜法(HPLC),氣相色譜法(GC) HPLC系統適應性指標:重復性,拖尾因子,分離度(R),理論塔板數(n)

葯物重金屬檢查法中，重金屬以什麼代表？有哪幾種顯色劑？檢查的方法共有哪幾種？

答：(1)在葯品生產中遇到鉛的機會較多，鉛在體內易積蓄中毒，檢查時以鉛為代表。 (2)有H2S、硫代乙醯胺、硫化鈉

(3)中國葯典(2005版)重金屬檢查法一共載有四法。

第一法 硫代乙醯胺法

第二法 將樣品熾灼破壞後檢查的方法。

第三法 難溶於酸而能溶於鹼性水溶液的葯物，用Na2S作為顯色劑

第四法 微孔濾膜法

葯物的雜質檢查的內容(包括雜質的來源，雜質的限量檢查，什麼是一般雜質和特殊雜質。

答：(1)雜質的來源：一是生產過程中引入。二是在儲存過程中產生。

(2)雜質的限量檢查：葯物中所含雜質的最大允許量叫做雜質限量。通常用百分之

幾或百萬分之幾表示。

(3)一般雜質及特殊雜質一般雜質：多數葯物在生產和儲存過程中易引入的雜質如：

氯化物、硫酸鹽、鐵鹽、重金屬、砷鹽、有色金屬等。

特殊雜質：是指在該葯物的生產和儲存過程中可能引入的特殊雜質。如阿司匹林中

的游離水楊酸、腎上腺素中的酮體等。 硫代乙醯胺法檢查重金屬的原理和方法

答：(1)原理 硫代乙醯胺在弱酸性條件下(pH3.5醋酸鹽緩沖液)水解，產生硫化氫，與微量重金屬生成黃色到棕色的硫化物混懸液。 CH3CSNH2 + H2O CH3CONH2 + H2S

(2)方法 取各葯品項下規定量的供試品，加醋酸鹽緩沖液(pH3.5)2ml與水適量使

成25ml，加硫代乙醯胺試液2ml，放置，與標准鉛溶液一定量同法製成的對照液比較，判斷供試品中重金屬是否超過限量。

請說明阿司匹林片劑採用兩步滴定法的原因及解釋何為兩步滴定法？

答： (1)因為片劑中除加入少量酒石酸或枸櫞酸穩定劑外，制劑工藝過程中又可能有水解產物(水楊酸、醋酸)產生，因此不能採用直接滴定法，而採用先中和共存酸，再在鹼性條件下水解後測定。

(2)中和：取片粉、加入中性醇溶液後，以酚酞為指示劑，滴加氫氧化鈉滴定液，

至溶液顯紫色，此時中和了存在的游離酸，阿司匹林成了鈉鹽。

水解與測定：在中和後的供試品溶液中，加入定量過量的氫氧化鈉滴定液，置

水浴上加熱使酯結構水解、放冷，再用硫酸鹽滴定液滴定剩餘的鹼。

在亞硝酸鈉滴定法中，一般向供試品溶液中加入適量溴化鉀。加入KBr的目的是什麼？

答：使重氮化反應速度加快。

因為溴化鉀與HCl作用產生溴化氫。溴化氫與亞硝酸作用生成NOBr。

若供試液中僅有HCl，則生成NOCl由於生成NOBr的平衡常數比生成NOCl的平衡常數大300位。所以加速了重氮化反應的進行。