液相色譜檢測丙酸的最佳方法

A. 如何建立好葯物含量的高效液相色譜分析方法

1，首先必須去進行配製葯物溶液前處理的工作。找出該葯物的溶解性，探索出該葯物的有效溶劑，使該葯物能在該溶劑中充分溶解，這是葯物溶液配製的前處理必然途徑，也是進行高效液相色譜含量分析的首要條件。

2，然後就是根據該葯物配製溶液的前處理方法，配製好適當濃度的葯物溶液，利用該葯物溶液，在紫外-可見分光光度計上進行紫外掃描，找到該葯物的最大吸收波長，確立適合的高效液相色譜分析的檢測波長。因為它是進行高效液相色譜含量分析的基本條件

3，再是色譜柱的選擇：根據葯物的極性來選擇合適極性的色譜柱類型

4，再是流動相的確立。配製一系列的流動相，考察合適的流動相。

5，再是准確度考察。通過精密度、重復性和重現性的考察來衡量儀器的准確度

6，接著是線性關系考察。配製不同濃度的一系列溶液，進行其溶液的色譜掃描。根據所得的不同濃度下的葯物峰面積作為縱坐標（Y軸）、以溶液濃度為橫坐標（X軸）進行線性回歸，得到其線性圖，考察其線性程度，即線性相關系數R=？。考察的目的就是：為了我們在做含量分析時，選擇一個合適的濃度進行檢測，不至於你配製的待測溶液濃度范圍不在線性范圍之內，造成測量結果的錯誤。

7，再是最低檢測濃度和檢測限的考察。目的是為了考察這種方法的實用性，是否符合痕量分析的要求。

8，再是回收率考察。目的是考察方法的准確性。

9，再是穩定性考察。目的是考察試驗方法的時間性，指導我們在分析檢測時，建立合適的溶液配製到進樣的時間段，保證實驗結果的准確性。

10，最後是專屬性考察。

B. 丙酸氯倍他索的制備

方法名稱： 丙酸氯倍他索原料葯－丙酸氯倍他索－高效液相色譜法
應用范圍： 本方法採用高效液相色譜法測定丙酸氯倍他索原料葯中丙酸氯倍他索的含量。
本方法適用於丙酸氯倍他索原料葯。
方法原理： 供試品經甲醇定量稀釋並加入內標後，進入高效液相色譜儀進行色譜分離，用紫外吸收檢測器，於波長240nm處檢測丙酸氯倍他索的峰面積，計算出其含量。
試劑： 1. 甲醇
2. 0.05mol/L磷酸二氫鈉溶液
3. 乙腈
儀器設備： 1. 儀器
1.1 高效液相色譜儀
1.2 色譜柱
十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，理論塔板數按丙酸氯倍他索峰計算應不低於5000。
1.3 紫外吸收檢測器
2. 色譜條件
2.1 流動相：0.05mol/L磷酸二氫鈉溶液（用85%磷酸調節pH值至2.5） 乙腈 甲醇=425 475 100
2.2 檢測波長：240nm
2.3 柱溫：室溫
試樣制備： 1. 內標溶液的制備
精密稱取丙酸倍氯米松適量，加甲醇製成每1mL中約含0.40mg的溶液，即為內標溶液。
2. 對照品溶液的制備
精密稱取丙酸氯倍他索對照品適量，加甲醇溶解並定量稀釋製成每1mL中約含0.20mg的溶液，精密量取該溶液與內標溶液各5mL，置25mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即為對照品溶液。
註：「精密稱取」系指稱取重量應准確至所稱取重量的千分之一。「精密量取」系指量取體積的准確度應符合國家標准中對該體積移液管的精度要求。
操作步驟： 分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10mL，注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測器於波長240nm處測定丙酸氯倍他索（C25H32ClFO5）的峰面積，計算出其含量。

C. 求2-氯丙酸用液相色譜檢測的具體方法

用反相HPLC方法分析2－氯丙酸，下面的操作條件：
色譜儀: LC-6 A chromatography with SPD-6AV U－vis detector
柱子: Shim-pack CLC-ODS 4.6mm×250mm
流動相: 乙腈 : 水= 50: 50
柱溫: 30 ℃
流速: 1.0 ml/min
進樣體積: 20ml
檢測波長: 224nm
外標法

D. 丙酸倍氯米松的葯物分析

方法名稱： 丙酸倍氯米松原料葯－丙酸倍氯米松－高效液相色譜法
應用范圍： 本方法採用高效液相色譜法測定丙酸倍氯米松原料葯中丙酸倍氯米松的含量。
本方法適用於丙酸倍氯米松原料葯。
方法原理： 供試品經流動相稀釋並加入內標後，進入高效液相色譜儀進行色譜分離，用紫外吸收檢測器，於波長240nm處檢測丙酸倍氯米松的峰面積，計算出其含量。
試劑： 1. 甲醇
2. 甲睾酮
儀器設備： 1. 儀器
1.1 高效液相色譜儀
1.2 色譜柱
十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，理論塔板數按丙酸倍氯米松峰計算應不低於2500。
1.3 紫外吸收檢測器
2. 色譜條件
2.1 流動相：甲醇 水=74 26
2.2 檢測波長：240nm
2.3 柱溫：室溫
試樣制備： 1. 稱取供試品
精密稱取本品約12.5mg為供試品。
2. 內標溶液的制備
精密稱取甲睾酮適量，加流動相製成每1mL中約含0.12mg的溶液，即為內標溶液。
3. 對照品溶液的制備
精密稱取丙酸倍氯米松對照品約12.5mg，置100mL量瓶中，加甲醇74mL使溶解，用水稀釋至刻度，搖勻，精密量取該溶液10mL與內標溶液5mL，置50mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即為對照品溶液。
4. 供試品溶液的制備
取供試品置100mL量瓶中，加甲醇74mL使溶解，用水稀釋至刻度，搖勻，精密量取該溶液10mL與內標溶液5mL，置50mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即為供試品溶液。
註：「精密稱取」系指稱取重量應准確至所稱取重量的千分之一。「精密量取」系指量取體積的准確度應符合國家標准中對該體積移液管的精度要求。
操作步驟： 分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各20mL，注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測器於波長240nm處測定丙酸倍氯米松（C28H37ClO7）的峰面積，計算出其含量。
參考文獻： 中華人民共和國葯典，國家葯典委員會編，化學工業出版社，2005版，一部，p.79。

E. 丙酸睾丸素的測定法

取本品約25mg，精密稱定，置25ml量瓶中，以甲醇溶解並稀釋至刻度，搖勻；精密量取該溶液與內標溶液各5ml，置25ml量瓶中，以甲醇稀釋至刻度，搖勻，取5μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取黃體酮對照品適量，同法測定。按內標法以峰面積計算，即得。
本品的紅外光吸收圖譜應與對照的圖譜（光譜集434圖）一致。取本品約5mg，置小試管中，加甲醇0.2ml溶解後，加亞硝基鐵氰化鈉的細粉約3mg、碳酸鈉及醋酸銨各約50mg，搖勻，放置10～30分鍾，應顯藍紫色。取本品約0.5mg，置小試管中，加異煙肼約1mg與甲醇1ml溶解後，加稀鹽酸1滴，即顯黃色。色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇－水(65:35)為流動相；檢測波長為254nm。
理論板數按黃體酮峰計算應不低於1000，黃體酮峰和內標物質峰的分離度應符合要求。內標溶液的制備取己烯雌酚約25mg，精密稱定，置25ml量瓶中，以甲醇溶解並稀釋至刻度，搖勻，即得。
方法名稱： 丙酸睾酮原料葯－丙酸睾酮－高效液相色譜法
應用范圍： 本方法採用高效液相色譜法測定丙酸睾酮原料葯中丙酸睾酮的含量。
本方法適用於丙酸睾酮原料葯。
方法原理： 供試品經甲醇定量稀釋並加入內標後，進入高效液相色譜儀進行色譜分離，用紫外吸收檢測器，於波長241nm處檢測丙酸睾酮的峰面積，計算出其含量。
試劑： 甲醇
儀器設備： 1. 儀器
1.1 高效液相色譜儀
1.2 色譜柱
十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，理論塔板數按丙酸睾酮峰計算應不低於1000。
1.3 紫外吸收檢測器
2. 色譜條件
2.1 流動相：甲醇 水=80 20
2.2 檢測波長：241nm
2.3 柱溫：室溫
試樣制備： 1. 內標溶液的制備
精密稱取苯丙酸諾龍，用甲醇製成每1mL中含1.6mg的溶液，即為內標溶液。
2. 對照品溶液的制備
精密稱取丙酸睾酮對照品約25mg，置25mL量瓶中，用甲醇溶解並稀釋至刻度，搖勻，精密量取該溶液與內標溶液各5mL，置25mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即為對照品溶液。
3. 供試品溶液的制備
精密稱取供試品約25mg，置25mL量瓶中，用甲醇溶解並稀釋至刻度，搖勻，精密量取該溶液與內標溶液各5mL，置25mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即為供試品溶液。
註：「精密稱取」系指稱取重量應准確至所稱取重量的千分之一。「精密量取」系指量取體積的准確度應符合國家標准中對該體積移液管的精度要求。
操作步驟： 分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各5mL，注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測器於波長240nm處測定丙酸睾酮（C22H32O3）的峰面積，計算出其含量。
參考文獻： 中華人民共和國葯典，國家葯典委員會編，化學工業出版社，2005版，一部，p.81。

F. 3-硝基丙酸的3-硝基丙酸的化學結構式

目前國外測定3-硝基丙酸的方法有薄層色譜法、高效液相色譜法、氣相色譜法等。我國建立了測定3-硝基丙酸的薄層色譜法。 以下試劑均為分析純。
（一）乙酸乙酯、三氯甲烷、苯、冰乙酸。
（二）無水硫酸鈉、2%碳酸氫鈉、85%磷酸，6mol/L鹽酸。
（三）硅膠G。
（四）顯色劑：0.5%MBTH水溶液，置於4℃冰箱保存，每3d重新配製；
（五）展開劑：苯：冰乙酸（9+1，V/V）；確證用展開劑為石油醚：冰乙酸（9+1，V/V）。
（六）3-硝基丙酸標准溶液：精確稱取3-硝基丙酸標准品，用乙酸乙酯製成儲備液，再將此液用乙酸乙酯稀釋成使用液，此標准溶液含3-硝基丙酸20μg/mL，置4℃保存。 （一）島津CS-910雙波長掃描儀及C-EIB微處理機。
（二）減壓吹氣濃縮裝置。
（三）層析槽：內徑25cm，寬6cm，高4cm。
（四）噴霧裝置：日本島津公司產。 （一）提取和凈化
1. 甘蔗樣品：取經去皮後切碎擠壓得到的甘蔗汁10mL，置於100mL分液漏斗中，用6mol/L鹽酸調節pH至2~3，用乙酸乙酯等體積提取三次，合並乙酸乙酯層於另一100mL分液漏斗中，用2%碳酸氫鈉溶液30mL和10mL分別提取，振搖2min，靜置分層，將水相置於另一100mL分液漏斗中，棄去乙酸乙酯層。用三氯甲烷20mL提取碳酸氫鈉層，棄去三氯甲烷層，用6mol/L鹽酸調節pH至2～3，用乙酸乙酯40mL、30mL、20mL分別提取，將乙酸乙酯吸出於150mL梨形瓶中，濃縮至干，用少量乙酸乙酯洗瓶壁數次，分別在40～45℃水浴中減壓濃縮至干，加1mL乙酸乙酯定容，待測定。
2.甘蔗樣品：將市售經冰凍的樣品去皮後切碎，取20g置具塞200mL錐形瓶中，加無水硫酸鈉20g，混勻，加乙酸乙酯60mL，85%磷酸0.12mL，浸泡30min後，振盪30min，且粗濾紙過濾，取濾液30mL於100mL分液漏斗中。以下按五（一）1「用2%碳酸氫鈉溶液」方法操作。
（二）薄層色譜測定
1. 制板：取硅膠G3g，加水10mL，攪成勻漿，塗布於三塊5cm×20cm玻璃板上，薄層厚度為0.3mm，乾燥後於110℃烘烤3h後，置乾燥器中備用。
2. 點板：以薄層板的短邊為底邊，距底邊3cm的基線上用微量注射器滴加10μL標准液（20μg/mL）一個點，10μL樣液兩個點，在其中一個10μL樣液點上再滴加10μL標准液（20μg/mL）。
3. 展開：上行展開16cm，展開劑為苯：冰乙酸（9+1，V/V）。
4. 顯色：展開後的薄層板經揮干後，噴以顯色劑至剛剛潮濕，置145~150℃烤箱中烘烤15min，冷卻後，在波長365nm紫外光燈下目視定量或用薄層掃描儀定量。3-硝基丙酸的Rf值約為0.39。
5. 掃描條件：島津CS-910雙波長薄層掃描儀，用氙燈作光源，在380nm激發波長，500nm發射波長條件下，測量標准與樣液斑點的熒光。
6. 目測條件：在波長365nm紫外光燈下觀察，結果判定如下：
（1）標准點應出現黃色熒光；
（2）如樣液點在標准點相應處未出現黃色熒光，則樣品中3-硝基丙酸的含量在測定方法靈敏度以下。如在相應位置上有黃色熒光點，而另一點中樣液點與標准點重疊，則為陽性。根據樣液點的熒光強度估計減少滴加微升數，或稀釋後滴加不同微升數，直至樣液點與標准點的熒光強度一致為止。
7. 確證試驗：用石油醚：冰乙酸（9+1，V/V）展開至16cm，揮干後顯色，再測定，Rf值約為0.23。 式中：M——樣品中3-硝基丙酸的量，μg/g或μg/mL；
0.2——3-硝基丙酸的最低檢出量，μg；
V1——加入乙酸乙酯的體積，mL；
V2——出現最低檢出量時滴加樣液的體積，mL；
D——樣液的總稀釋倍數。
W——甘蔗取樣質量，g；或甘蔗汁取樣質量，mL。
本方法的靈敏度為2mg/kg。

G. 苯丙酸諾龍的檢查與含量測定

其他甾體取本品適量，精密稱定，以甲醇為溶劑，配製成每1ml含2mg的溶液(1)與每1ml含0.04mg的溶液(2)。用含量測定項下的方法和溶液，取8μl注入液相色譜儀，調整儀器靈敏度，使主成分峰高度達記錄儀的滿標度。再分別取溶液(1)和(2)各8μl，進樣。記錄色譜圖至主成分峰保留時間的1.5倍。溶液(1)顯示的雜質峰數不得超過3個，各雜質峰面積及其總和分別不得大於溶液(2)主峰面積的1/2和3/4。乾燥失重取本品，置五氧化二磷乾燥器中，減壓乾燥至恆重，減失重量不得過0.5%（附錄ⅧL）。
含量測定：照高效液相色譜法（附錄ⅤD）測定。色譜條件與系統適用性試驗，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇－水(82:18)為流動相；檢測波長為241nm。理論板數按苯丙酸諾龍峰計算應不低於2300，苯丙酸諾龍峰與內標物質峰的分離度應符合要求。內標溶液的制備取丙酸睾酮約50mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加甲醇溶解並稀釋至刻度，搖勻，即得。
測定法：取苯丙酸諾龍對照品約50mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇溶解並稀釋至刻度，搖勻；精密量取該溶液與內標溶液各5ml，置25ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻；取8μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取本品適量，同法測定，按內標法以峰面積計算，即得。
測定法
方法名稱： 苯丙酸諾龍原料葯－苯丙酸諾龍－高效液相色譜法
應用范圍： 本方法採用高效液相色譜法測定苯丙酸諾龍原料葯中苯丙酸諾龍的含量。
本方法適用於苯丙酸諾龍原料葯。
方法原理： 供試品經甲醇溶解並定量稀釋，加入內標後再經甲醇定量稀釋，進入高效液相色譜儀進行色譜分離，用紫外吸收檢測器，於波長241nm處檢測苯丙酸諾龍的峰面積，計算出其含量。
試劑： 1. 甲醇
2. 丙酸睾酮
儀器設備： 1. 儀器
1.1 高效液相色譜儀
1.2 色譜柱
十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，理論塔板數按苯丙酸諾龍峰計算應不低於2300。
1.3 紫外吸收檢測器
2. 色譜條件
2.1 流動相：甲醇 水=82 18
2.2 檢測波長：241nm
2.3 柱溫：室溫
試樣制備： 1. 內標溶液的制備
精密稱取丙酸睾酮50mg，置50mL量瓶中，加甲醇溶解並稀釋至刻度，搖勻，即為內標溶液。
2. 對照品溶液的制備
精密稱取苯丙酸諾龍對照品50mg，置25mL量瓶中，加甲醇溶解並稀釋至刻度，搖勻，精密量取該溶液與內標溶液各5mL，置25mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即為對照品溶液。
3. 供試品溶液的制備
精密稱取供試品50mg，同對照品溶液的制備，即為供試品溶液。
註：「精密稱取」系指稱取重量應准確至所稱取重量的千分之一。「精密量取」系指量取體積的准確度應符合國家標准中對該體積移液管的精度要求。
操作步驟： 分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10mL，注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測器於波長241nm處測定苯丙酸諾龍（C27H34O3）的峰面積，計算出其含量。
參考文獻： 中華人民共和國葯典，國家葯典委員會編，化學工業出版社，2005版，二部，p.319。

H. 高效液相色譜有幾種定量方法其中那種是比較精確的定量方法並簡述

峰面積法、峰高法、歸一法、外標法。峰面積法是比較精確的定量方法

I. 高效液相檢測食品中丙酸鈣的用什麼色譜柱

高效液相檢測食品中丙酸鈣的用什麼色譜柱
使用高效液相色譜時,液體待檢測物被注入色譜柱,通過壓力在固定相中移動,由於被測物種不同物質與固定相的相互作用不同,不同的物質順序離開色譜柱,通過檢測器得到不同的峰信號,最後通過分析比對這些信號來判斷待側物所含有的物質.高效液相色譜作為一種重要的分析方法,廣泛的應用於化學和生化分析中.高效液相色譜從原理上與經典的液相色譜沒有本質的差別,它的特點是採用了高壓輸液泵、高靈敏度檢測器和高效微粒固定相,適於分析高沸點不易揮發、分子量大、不同極性的有機化合物.高效液相色譜使用粒徑更細的固定相填充色譜柱,提高色譜柱的塔板數,以高壓驅動流動相,使得經典液相色譜需要數日乃至數月完成的分離工作得以在幾個小時甚至幾十分鍾內完成.