治療葯物檢測常用的方法

❶ 體內葯物分析的樣品測定

體內樣品分析常用的方法有免疫分析法和色譜分析法 。
免疫分析法是基於抗體與抗原或半抗原之間的高選擇性反應而建立起來的一種生物化學分析法。具有很高的選擇性和很低的檢出限，可以應用於測定各種抗原、半抗原或抗體。免疫分析法分為熒光免疫法、發光免疫法、酶免疫法及電化學免疫法等非放射免疫法和放射免疫法，測定的量可以達到μg甚至ng的水平。這些分析方法多配有專用設備和試劑，操作相對簡便，適合常規實驗室使用，多應用臨床治療葯物監測。
色譜分析包括：氣相色譜（GC）、高效液相色譜（HPLC）和色譜-質譜聯用（GC-MS、LC-MS）等，這些方法適用於復雜樣品中微量葯物的專屬准確定量，多用於葯代動力學研究。 由於體內樣品取樣量少、葯物濃度低、內源性物質的干擾（如無機鹽、脂質、蛋白質、代謝物）及個體差異等多種因素影響體內樣品測定，為了保證方法的可靠性，必須在建立體內樣品分析方法的同時對方法進行驗證。
（一）特異性
必須證明所測定的物質是原形葯物或特定的活性代謝物，內源性物質和相應的代謝物及同時服用的其他葯物不得干擾樣品的測定。對於色譜法至少要提供6個不同來源的空白體內樣品色譜圖、空白體內樣品外加標准物質色譜圖（註明濃度）及用葯後的體內樣品色譜圖。
（二）標准曲線與線性范圍
根據所測定物質的濃度與響應的相關性，用回歸分析方法獲得標准曲線。標准曲線的高低濃度范圍為線性范圍，在線性范圍內濃度測定結果應達到試驗要求的精密度和准確度。
必須用至少6個濃度建立標准曲線，應使用與待測樣品相同的生物介質，線性范圍要能覆蓋全部待測濃度，不允許將線性范圍外推求算未知樣品的濃度。建立標准曲線時應隨行空白體內樣品，但標准曲線不包括零點。
標准曲線上各濃度點的實測值與標示值的偏差（bias）在可接受范圍內時，可判定標准曲線合格。偏差可按下式計算：
式中，回歸值系將各濃度點的響應值代人標准曲線計算所得的濃度值；標示值系指制備標准曲線時，各相應濃度點的配製濃度。
標准曲線上各濃度點偏差的可接受范圍一般規定為：最低濃度點的偏差在±20%以內，在其餘各濃度點的偏差在±15%以內。只有合格的標准曲線才能用於臨床待測樣品的濃度計算。當線性范圍較寬時，推薦採用加權最小二乘法（weighted least square method）進行同歸計算。
（三）定量下限
定量下限（LLOQ）是標准曲線上的最低濃度點，：要求至少能滿足測定3～5個半衰期時樣品中的葯物濃度，或Cmax的1/10～1/20時的葯物濃度，其准確度應在真實濃度的80%～120%范圍內。RSD應小於20%，S/N應大於5.應由至少5個標准樣品測試結果證明。
（四）精密度與准確度
要求選擇高、中、低3個濃度的質控（quality control，QC）樣品同時進行方法的精密度和准確度驗證。其中，低濃度接近定量下限（lower limit of quantitation，LLOQ），在LLOQ的3倍以內；高濃度接近標准曲線的上限（即定量上限，upper limit of quantitation，ULOQ），中間選一個濃度，每一濃度至少測定5個樣品。
精密度用QC樣品的批內（intra-batch）和批間（inter-batch）RSD表示，RSD一般應小於15%，在LLOQ附近應小於20%.
在測定批內RSD時，每一濃度至少制備並測定5個樣品。為獲得批間RSD應至少在不同天連續制備並測定3個分析批，至少45個樣品。
准確度是指用特定方法測得的體內樣品濃度與真實濃度的接近程度，一般應在85%～115%范圍內，在LLOQ附近應在80%～120%范圍內。
（五）樣品穩定性
根據具體情況，對含葯體內樣品在室溫、冰凍和凍融條件下以及不同存放時間進行穩定性考察，以確定體內樣品的存放條件和時間。還應注意考查儲備液的穩定性以及樣品處理後的溶液中分析物的穩定性，以保證測試結果的准確性和重現性。
（六）提取回收率
應考察高、中、低3個濃度的提取回收率。其結果應一致、精密和可重現。
（七）質控樣品
質控（QC）樣品系將已知量的待測葯物加入到生物介質中配製的樣品，用於質量控制。
（八）質量控制
應在體內樣品分析方法驗證完成之後開始測試未知體內樣品，每個樣品一般測定一次，必要時進行復測。每個分析批均應建立相應的標准曲線，並隨行測定高、中、低3個濃度的QC樣品，每個濃度至少雙樣本。並應均勻分布在未知樣品測試順序中。當一個分析批中未知樣品數目較多時，應增加各濃度QC樣品數，使QC樣品數大於未知樣品總數的5%，QC樣品數的增加以組（高、中、低3個濃度）為單位。QC樣品測定結果的可接受標准為：偏差應小於15%，低濃度點偏差應小於20%，最多允許1/3不在同一濃度的QC樣品結果超限。如QC樣品測定結果不符合上述要求，則該分析批未知樣品測試結果作廢。濃度高於ULOQ的未知體內樣品，應採用相應的空白介質稀釋後重新測定。
（九）測試結果
應詳細描述所用的分析方法，引用已有的參考文獻，提供每個分析批的標准曲線、質控樣品及未知樣品的測試結果及計算過程。還應提供全部未知樣品分析的色譜圖，包括全部相關的標准曲線、質控樣品的色譜圖，以供審查。 （一）治療葯物監測的對象
對於治療安全濃度范圍窄、治療劑量與中毒劑量接近、毒副作用強、具有非線性葯代動力學特徵、長期使用葯效和毒性不明確、以及聯合用葯可能發生相互作用的葯物，通常都應當進行監測。應當進行治療葯物監測的葯物包括部分抗癲癇葯、抗心律失常葯、強心苷類葯、抗生素、抗精神病葯、抗哮喘葯、抗惡性腫瘤葯和一些解熱鎮痛葯，如表7-1所示。部分應當進行治療葯物監測的葯物的治療濃度范圍和中毒濃度，如表7-2所示。治療葯物監測示例見第十章第一節「苯巴比妥體內樣品的分析。
（二）在葯代動力學研究中的應用
地高辛在臨床上用於心衰治療，其有效濃度（0.8～2.0ng/ml）與中毒濃度（>2.4ng/ml）接近。消除半衰期長，成人的約為36小時、兒童的約為30小時，屬一級動力學。地高辛在腸部被吸收，60%～90%以原型經腎小球濾過或腎小管排泌，僅有約10%在體內通過氫化、水解、結合等反應代謝，另有約7%發生腸-肝循環。
以毛地黃毒苷為內標，對人血漿和尿液中地高辛濃度LC-MS測定如下。
（1）樣品處理方法精密吸取血漿1.0ml，置具塞離心管中，精密加入內標溶液（20ng/ml）50μl，加濃氨水100μl和甲基叔丁基醚5.0ml，振盪混勻30分鍾後，3000×g力離心10分鍾，分取有機層，置另一離心管中，在減壓離心條件下揮千，殘留物用100μl 含0.25mmol/L醋酸鈉的甲醇-水（40：60）流動相溶解，14000×g力離心2分鍾，取上清液15μl進行LC-MS分析。尿樣用空白血漿按1：10或1：50稀釋後照血漿方法處理和測定。
（2）色譜和質譜條件色譜柱C8（2.1mm×50mm，5μm）柱，流動相含0.25mmol/L醋酸鈉的甲醇（A）-水（B）梯度洗脫，流速0.25ml/min.電噴霧正離子化，噴霧電壓5000V，傳輸裂解電壓250V，乾燥氮氣溫度350℃，流速10.0L/min，噴霧口氣壓25psi.選擇性離子【M+Na】+監測（SIM），m/z分別為803.4（地高辛）和787.4（毛地黃毒苷）。
（3）測定結果血漿濃度線性范圍為0.05～1.5ng/ml，應用於人體葯代動力學研究，測得女性受試者口服0.25mg地高辛後的典型血漿濃度-時間曲線如圖7-2所示，其尿液48小時累積排泄量為30.2%。

❷ 常用的葯品不良反應監測方法有哪些

1、病例對照研究(CaseControlStudies)

病例對照研究將患有某種疾病的病例與未患有某疾病的對照組進行比較的研究，其目的是為了找出兩組對先前的葯物暴露的差異。即在人群中患有擬研究的疾病，患者組(病例組)同沒有患那種疾病的人群(對照組)相比較，研究前者是否擁有假說因素的比例更高。

在葯物不良反應監測中，擬研究的疾病為懷疑葯物引起的不良反應，假說因素則是可疑葯物。可疑葯物是在病例組的暴露率與對照組比較，如果兩者在統計學上有意義說明它們相關。

2、隊列研究(CohortStudy)

隊列研究是將樣本分為兩個組，一組為暴露於某葯物的患者，另一組為不暴露於該葯物的患者，進行觀察，驗證其結果的差異，即不良事件的發生率或療效。一般分為前瞻性調查和回顧性調查，前者在葯物不良反應監測中較常用，前瞻性調查是從現在時點起，對固定人群的觀察。

3、自發報告系統的評價方法

自發呈報是指醫務人員在醫療實踐中，對某種葯物所引起的ADR通過醫葯學文獻雜志進行報道，或直接呈報給葯政機構、制葯廠商等。自發呈報的基本作用是發現ADR信號。盡管呈報的ADR報告沒有詳盡的因果關系判斷，但基於這樣一種假設:如果某葯物確實會產生某ADR，只要可疑即報。

則在國家ADR中心或全球ADR中心必然會收到大量有關該葯物的該ADR的報告，當報告累計多了到一定程度，則強烈提示該葯物會引起該ADR，其一一對應之因果關系自然明了。

4、處方事件監測(PEM)

PEM最初是在反應停事件後，由英國統計學家DavidFinney於1965年首先提出，強調對葯物不良事件(ADE)而非葯物不良反應的報道，「處方事件監測」中的「事件」完全改變了最初的概念。

即凡確認為不良反應的症狀以及懷疑為不良反應的症狀或因發現症狀而到醫院就診等都包含在「事件」之列，例如醫生在病歷上記載的「發疹」、「血壓170/110」、「貧血傾向」、「黃痘」等均屬「事件」。

這樣，在「處方事件監測」中，「事件監測」都是按照醫生的主觀判斷而作出的報告，然後在患者病歷里抽出客觀的「事件」，就可對其用葯的相關性進行審查。

5、醫院集中監測系統

醫院集中監測是指在一定的時間(數月或數年)、一定的范圍內對某一醫院或某一地區內所發生的ADR及葯物利用詳細記錄，以探討ADR的發生規律，既可是病人源性或葯物源性的集中監測，也可是專科性集中監測，從而計算相應的ADR發生率並探討其危險因素，資料詳盡，數據准確可靠。

集中監測由於是在一定的時間、一定的范圍內進行，故得出的數據代表性較差、缺乏連續性，且費用較高，其應用受到一定限制，除非為某一特別目的而進行。我國在ADR監測初期階段曾進行多次集中監測，但規模偏小，資料難以共享，對此我們曾做過meta-analysis。

醫院集中監測因較自發呈報明顯的優點，一些學者建議每隔10年左右進行一次大規模的醫院集中監測，以對ADR的發生概況及葯物利用進行全面的葯物流行病學研究。

❸ 常用的葯物分析方法有哪些

1、重量分析法

重量分析法是葯物分析檢測中化學分析的基礎方法，指的是稱取一定重量的試樣，用適當的方法將被測組分與試樣中其他組分分離後，轉化成一定的稱量形式，稱重，從而求得該組分含量的方法。根據分離方法的不同，重量分析法通常分為沉澱重量法、揮發重量法、提取重量法和電解重量法，其優點是直接採用分析天平稱量的數據來獲得分析結果，在分析過程中不需要標准溶液和基準物質，也就不需要容量器皿引入數據，這樣引入的誤差較小，因此分析結果准確度較高。
2、酸鹼滴定法
酸鹼滴定法在葯品分析檢測中的應用十分廣泛，是將一種已知其准確濃度的試劑溶液滴加到被測物質的溶液中，直到化學反應完全時為止，然後根據所用試劑溶液的濃度和體積可以求得被測組分的含量。作為一種化學分析方法，酸鹼滴定法在生產實際中應用非常廣泛。許多工業品如燒鹼、純鹼、硫酸銨和碳酸氫銨等，一般都採用酸鹼滴定法測定其主要成分的含量。食品工業中的原料、中間產品和成品的分析等也常用到酸鹼滴定法。

❹ 體內葯物分析常用的分析方法有

葯學專業知識（一）第六章生物葯劑學，是研究葯物吸收、分布、代謝與排泄過程，闡明葯物制劑劑型因素，生物因素與葯效關系。下面小編總結了葯物在體內的各過程：

體內過程示意圖
了解完葯物在體內的過程示意圖，接著我們來掌握執業葯師考試中涉及的相關考點：

1. 需要掌握的幾個概念

2. 葯物的跨膜轉運

【相關考題】

1.大部分口服葯物的胃腸道中最主要的吸收部分是

A.胃

B.小腸

C.盲腸

D.結腸

E.直腸

2.藉助載體或酶促系統，消耗機體能量，從膜的低濃度一側向高濃度一側轉運的方式是

A.濾過

B.簡單擴散

C.易化擴散

D.主動轉運

E.膜動轉運

答案：B D

❺ 葯品檢驗時，有哪些常用分析方法

1、重量分析法：

重量分析法是葯物分析檢測中化學分析的基礎方法，指的是稱取一定重量的試樣，用適當的方法將被測組分與試樣中其他組分分離後，轉化成一定的稱量形式，稱重，從而求得該組分含量的方法。

2、酸鹼滴定法：

酸鹼滴定法在葯品分析檢測中的應用十分廣泛，是將一種已知其准確濃度的試劑溶液滴加到被測物質的溶液中，直到化學反應完全時為止，然後根據所用試劑溶液的濃度和體積可以求得被測組分的含量。

3、PH值測定方法：

pH值是溶液中氫離子活度的負對數，用來表示溶液的酸度。用於pH值測定的裝置稱為pH計或酸度計，酸度計由pH測量電池和pH指示器兩部分組成。

4、光譜技術：

光譜技術的主要原理就是可以通過不同的頻率對其要檢測的葯物進行輻射，在一定范圍中的頻率被一些物質接受的時候就會出現振動以及轉動的狀況。

5、化學發光技術：

在葯物分析檢測中，化學發光法是一種較為常見的技術方式，其主要就是基於化學檢測系統中相關檢測物的濃度以及體系的化學發光強度在特定狀況之下呈線性定量關系的原理，通過儀器對整個體系的化學發光強度進行檢測，確定待檢測的實際含量的方式就是一種痕量分析方法。

6、色譜法：

色譜法又稱為「色譜分析」、「色譜分析法」、「層析法」，是一種分離以及分析的方式與手段。它主要就是通過不同的物質在不同的相態之下對其進行有選擇的分配，通過流動相對固定相中存在的混合物進行洗脫操作，而在混合物中存在的不同物質會則會通過不同的速度基於固定相進行移動，進而實現分離的最終效果。

7、電泳法：

電泳法是生物技術及生化葯物分析的重要手段之一，具有靈敏度高、重現性好、檢測范圍廣、操作簡便並兼備分離、鑒定、分析等優點。

8、DNA擴增法：

DNA擴增技術屬於PCR技術，可以把試管中的DNA樣品的片段進行拓展，達到上百萬倍左右，可以通過肉眼直接對其進行觀察。

綜上，葯品質量的優劣關系著人民的用葯和身體健康，為了保證葯品的質量，應嚴格按照葯品質量標准進行葯物分析檢測，為葯品能否流通上市和提供用葯提供依據。

❻ 葯物中測定某物質含量的常用方法有那些(3種以上)

方法的驗證：
訂入質量標準的含量測定法不同於一般質量考察的方法，須經過嚴格的方法學驗證，不同原理的測定法具有不同的驗證內容及要求：
（1）容量分析法的驗證：①精密度：用原料葯精製品考察方法精密度，平行試驗5個樣本的RSD≤0.2%；②准確度：以測定原料精製品（含量>99.5%）的回收率（測定值與理論值的比值）計算，應在99.7%～100.3%之間（n＝5,RSD≤0.1%）；③滴定終點確定的依據：包括滴定曲線的繪制，如用指示劑法確定終點，應用電位法校準終點顏色，提供指示劑顏色與電位變化情況的對比結果；④耐用性：考察測定條件（供試液穩定性、樣品提取次數、時間等）有微小變動時，測定結果不受影響的承受程度，如測試條件要求苛刻時則應在方法中註明。
（2）HPLC法的驗證：①精密度：RSD≤2%（n＝5）；②准確度：用於制劑時，要考察輔料的影響，將一定量葯物加到按處方比例配製的輔料中（為標示量的80%～120%）製成高、中、低三個劑量，混合均勻後，每個劑量取三份樣品，按擬定方法測定回收率，應在98%～102%之間（n＝9,
RSD≤2%）。③線性范圍：用已知含量的精製品配製一系列濃度的溶液（n＝5～7），用濃度C對峰面積A或峰高h或被測物的響應值之比進行回歸處理，線性方程的相關系數r≥0.999，截距應趨於零，並提供線性關系圖；④專屬性：輔料、有關物質或降解產物峰對主葯峰應無干擾；⑤耐用性：考察測定條件（供試液穩定性、流動相組成和pH值、不同品牌或批號的同類色譜柱、柱溫、流速、樣品提取次數、時間等）有微小變動時，測定結果不受影響的承受程度，如測試條件要求苛刻時則應在方法中註明；⑥靈敏度：作為常量分析法，此項可不作主要要求。
（3）UV法的驗證：①精密度：RSD≤1%（n＝5）；②准確度：方法同HPLC法，回收率應在98%～102%之間（n＝9,
RSD≤2%），同時要求輔料、有關物質或降解產物在測定波長處無吸收。③線性范圍：用已知含量的精製品配製一系列濃度的溶液（n＝5～7，吸收度A在0.2～0.7間），用濃度C對峰面積A或峰高h或被測物的響應值之比進行回歸處理，線性方程的相關系數r應≥0.999，截距應趨於零，並提供線性關系圖；④耐用性：考察測定條件（供試液穩定性、樣品提取次數、時間、比色法中顯色劑用量、反應溫度、時間、pH值等）有微小變動時，測定結果不受影響的承受程度，如測試條件要求苛刻時則應在方法中註明；⑤靈敏度：作為常量分析法，此項可不作主要要求。
吸收度A在0.2～0.8間其線形關系好，利用標准品建立標准曲線後，受測溶液做適當的稀釋，使其吸收度在0.2～0.8，如果太小或太大，都將影響測定的准確性的。

❼ 常用的葯物鑒別試驗方法有哪些

物理常數測定法：熔點 吸收系數 比旋度 折光率 化學鑒別法：顏色生成 沉澱。。氣體。。 熒光反應 衍生物熔點測定 光譜鑒別法：紫外 紅外 色譜鑒別法：氣相 液相 氣質連用 生物鑒別法