A. 實驗室中常用的DNA分子量的測定方法有哪些
第一種方法最常用
1)紫外吸收法也就是測量OD(260)和OD(280)的吸收值,這樣的方法其它的雜質對測量結果影響大一點,因為其它雜質在這兩個吸收波長也有吸收.
(2)熒光法,用PicoGreen熒光染料,測定DNA,RNA濃度比較靈敏,並且適合測量低濃度和微量DNA和RNA,並且受其它雜質的影響不大,缺點要有專門的熒光檢測儀器,試劑比較昂貴.
純化DNA可以買試劑盒,主要有膜吸附法,磁珠分離法,都很方便.
RNA與DNA最重要的區別一是RNA只有一條鏈,二是它的鹼基組成與DNA的不同,RNA沒有鹼基T(胸腺嘧啶),而有鹼基U(尿嘧啶).所以導致他們有以下性質上的不同.
1.兩性解離:DNA無,只有酸解離,鹼基被屏蔽(在分子內部形成了H鍵).RNA有,有PI.
2.粘度大:DNA;RNA,粘度由分子長度/直徑決定,DNA為線狀分子,RNA為線團.
3.鹼的作用:DNA耐鹼RNA易被鹼水解.
4.顯色反應:
鑒別DNA和RNA+濃HCl RNA ------→ 綠色化合物
DNA ------→ 藍紫色化合物苔黑酚
二苯胺啡啶溴紅(熒光染料)和溴嘧啶都可對DNA染色,原理是卡在分子中,DNA的離心和電泳顯色可用它們.
DNA和RNA的鑒別染色
利用吖啶橙的變色特性可鑒別DNA和RNA.吖啶橙作為一種熒光染料已被用於染色固定,非固定細胞核酸,或作溶酶體的一種標記.觀察死亡細胞熒光變色性變化以及區別分裂細胞和靜止細胞群體.雖然測定DNA和RNA含量時較難獲得好的重復性結果,但該方法已被許多實驗室廣泛採用.
5.溶解性:都溶於水而不溶於乙醇,因此,常用乙醇來沉澱溶液中的DNA和RNA.DNA溶於苯酚而RNA不溶,故可用苯酚來沉澱RNA.
6.紫外吸收:核酸的λm=260nm,鹼基展開程度越大,紫外吸收就越厲害.當A=1時,DNA:50ug/ml,RNA和單鏈DNA:40ug/ml,寡核苷酸:20ug/ml.用A260/A280還可來表示核酸的純度.
7.沉降速度:對於拓撲異構體(核苷酸數目相同的核酸),其沉降速度從達到小依次為:RNA ; 超螺旋DNA > 解鏈環狀DNA ; 鬆弛環狀DNA ; 線形DNA也就是在離心管中最上層是線形DNA,最下面是RNA.
8.電泳:核苷酸、核酸均可以進行電泳,泳動速度主要由分子大小來決定,因此,電泳是測定核酸分子量的好方法.
9.DNA分子量測定最直接的方法:用適當濃度的EB(溴嘧啶)染色DNA,可以將其他形式的DNA變成線形DNA,用電鏡測出其長度,按B-DNA模型算出bp數,根據核苷酸的平均分子量就可計算出DNA的分子量.
B. 高分子測分子量的方法都有哪些
分子測分子量的方法:
高聚物的分子量及分子量分布,是研究聚合物及高分子材料性能的最基本數據之一。它涉及到高分子材料及其製品的力學性能,高聚物的流變性質,聚合物加工性能和加工條件的選擇。也是在高分子化學、高分子物理領域對具體聚合反應,具體聚合物的結構研究所需的基本數據之一。
分子量檢測方法:GPC 凝膠滲透色譜,飛行質譜法(Maldi-tof)
分子量測定儀器參數
GPC 流動相 :THF(四氫呋喃),H2O(水相),DMF( N,N-二甲基甲醯胺), 二氯甲烷,TCB(三氯苯)
檢測方法:端基滴定法 冰點降低法 蒸汽壓下降法(VPO) 膜滲透壓法 。
檢測儀器:核磁共振 流動分析儀/流動注射分析儀(FIA SFA CFA)
電容水分測定儀 電阻水分測定儀
紅外水分測定儀 紫外可見分光光度計
紅外光譜(IR、傅立葉) 氣相分子吸收光譜儀(GMA)
C. 分子病理檢測包括哪些
分子病理檢測主要包括費氏檢測以及熒光定量PCR檢測、一代基因測序、二代基因測序檢測。病理檢測由原先的形態學為基礎的檢測,現在逐步進入到細胞和分子水平,即分子病理檢測。分子病理檢測主要包括費氏檢測以及熒光定量PCR檢測、一代基因測序、二代基因測序檢測。熒光定量PCR檢測主要為AM式方法,主要用於肺癌的EGFR和KRAS檢測,用於指導肺癌病人的靶向治療。
D. 氣體檢測的方法都有哪些
氣體檢測的方法很多,目前在工業領域都是通過氣體感測器進行氣體檢測,通常基於以下幾種原理:
1. 催化燃燒感測器:一般針對可燃性氣體,如烷類、醇類等,感測器消耗電流較大,其內部需要保持高溫,氣體在高溫下被催化燃燒,從而使感測部件的電阻發生變化。測量精度可以達到1%LEL(爆炸下限)
2 電化學原理:通過氣體與電解液的反應,在電極上產生微弱電流,一般針對CO\H2S\SO2\CL2\NH3\NO\NO2\COCL2\HCN等毒性氣體,電化學感測器的氣體選擇性不是很強,一般都會有交叉反應。常用的CO/H2S感測器價格比較便宜(價格為幾十元到上百元)。普通電化學感測器測量精度可以達到ppm級別,四電極電化學感測器測量精度可以達到ppb級別(價格為數千元,較昂貴)
3 紅外光學:CH4\CO2等對某一波段的紅外光有吸收能力,通過吸收程度的不同計算氣體的濃度(民品價格為100元左右,工業品價格為數百到數千元)
4. PID法:PID是採用一個紫外燈來離子化樣品氣體,從而檢測VOC氣體的濃度。當樣品分子吸收到高紫外線能量時,分子被電離成帶正負電荷的離子,這些離子被電荷感測器感受到,形成電流信號。(工業品價格為數百到數千元)
5. 氣相色譜/質譜(GC/MS):具有較好的氣體選擇性,價格較為昂貴,一般為數萬到數十萬元。
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E. 分子互作檢測方法有哪些
生物分子的相互作用可通過多種檢測手段進行檢測,如熒光能量共振轉移(FRET),熒光偏振(FP),時間分辨熒光(TRF)均相時間分辨熒光(HTRF),Western-Blot等, 而這些檢測技術均可在酶標儀中實現。
F. 高分子材料的檢測方法
各種方法,熱分析,核磁,紅外·······LZ這個太多了
G. 細菌分子鑒定的方法有哪些
一般從DNA、RNA和蛋白質這三個方面鑒定。將三種物質分別提取出來,各自進行鑒定。鑒定的方法可以用你提到的這些。
1.核酸雜交:簡單的說,就是將需檢測的核酸與標記的分子結合使得未知核酸可以被檢測到。
2.脈沖場凝膠電泳:利用電場讓不同大小的帶電DNA分子以不同的速度移動,從而將不同大小的分子分開。可分離10kb--10mb的DNA分子。
3.16S rRNA :16S rRNA所對應的 16S rDNA基因在微生物基因組中具有高度保守性;對16S rDNA而言,如果出現3個鹼基以上的差異就可以斷定細菌不屬於同一種屬。它具有高度的靈敏性,而且不需要培養,檢測指標也很單一。可以快速檢測未知微生物或致病微生物。
4.RAPD:對整個未知序列的基因組進行多態性分析的分子技術。先進行PCR擴增,然後電泳分離染色,在紫外透視儀上檢測多態性。
5.質粒質譜分析法:我只了解過蛋白質的質譜分析技術,質粒的沒有了解過。
蛋白質:將蛋白質酶解成小肽段並混合基質,用激光將呈離子化氣體狀態的待測物噴射,經電場到達檢測器,根據到達的時間分析肽段的分子質量。
H. 可以用什麼方法測無機高分子的分子量
1.粘度法測相對分子量(粘均分子量Mη)
用烏式粘度計,測高分子稀釋溶液的特性粘數[η],根據Mark-Houwink公式[η]=kMα,從文獻或有關手冊查出k、α值,計算出高分子的分子量。其中,k、α值因所用溶劑的不同及實驗溫度的不同而具有不同數值。
2.小角激光光散射法測重均分子量(Mw)
當入射光電磁波通過介質時,使介質中的小粒子(如高分子)中的電子產生強迫振動,從而產生二次波源向各方向發射與振盪電場(入射光電磁波)同樣頻率的 散射光波。這種散射波的強弱和小粒子(高分子)中的偶極子數量相關,即和該高分子的質量或摩爾質量有關。根據上述原理,使用激光光散射儀對高分子稀溶液測 定和入射光呈小角度(2℃-7℃)時的散射光強度,從而計算出稀溶液中高分子的絕對重均分子量(MW) 值。採用動態光散射的測定可以測定粒子(高分子)的流體力學半徑的分布,進而計算得到高分子分子量的分布曲線。
3.體積排除色譜法(SES)(也稱凝膠滲透色譜法(GPC))
當高分子溶液通過填充有特種多孔性填料的柱子時,溶液中高分子因其分子量的不同,而呈現不同大小的流體力學體積。柱子的填充料表面和內部存在著各種大 小不同的孔洞和通道,當被檢測的高分子溶液隨著淋洗液引入柱子後,高分子溶質即向填料內部孔洞滲透,滲透的程度和高分子體積的大小有關。大於填料孔洞直徑 的高分子只能穿行於填料的顆粒之間,因此將首先被淋洗液帶出柱子,而其他分子體積小於填料孔洞的高分子,則可以在填料孔洞內滯留,分子體積越小,則在填料 內可滯留的孔洞越多,因此被淋洗出來的時間越長。按此原理,用相關凝膠滲透色譜儀,可以得到聚合物中分子量分布曲線。配合不同組分高分子的質譜分析,可得 到不同組分高分子的絕對分子量。用已知分子量的高分子對上述分子量分布曲線進行分子量標定,可得到各組分的相對分子量。由於不同高分子在溶劑中的溶解溫度 不同,有時需在較高溫度下才能製成高分子溶液,這時GPC柱子需在較高溫度下工作。
4.質譜法
質譜法是精確測定物質分子量的一種方法,質譜測定的分子量給出的是分子質量m對電荷數Z之比,即質荷比(m/Z)過去的質譜難於測定高分子的分子量, 但近20餘年由於我的離子化技術的發展,使得質譜可用於測定分子量高達百萬的高分子化合物。這些新的離子化1.粘度法測相對分子量(粘均分子量Mη)
用烏式粘度計,測高分子稀釋溶液的特性粘數[η],根據Mark-Houwink公式[η]=kMα,從文獻或有關手冊查出k、α值,計算出高分子的分子量。其中,k、α值因所用溶劑的不同及實驗溫度的不同而具有不同數值。
2.小角激光光散射法測重均分子量(Mw)
當入射光電磁波通過介質時,使介質中的小粒子(如高分子)中的電子產生強迫振動,從而產生二次波源向各方向發射與振盪電場(入射光電磁波)同樣頻率的 散射光波。這種散射波的強弱和小粒子(高分子)中的偶極子數量相關,即和該高分子的質量或摩爾質量有關。根據上述原理,使用激光光散射儀對高分子稀溶液測 定和入射光呈小角度(2℃-7℃)時的散射光強度,從而計算出稀溶液中高分子的絕對重均分子量(MW) 值。採用動態光散射的測定可以測定粒子(高分子)的流體力學半徑的分布,進而計算得到高分子分子量的分布曲線。
3.體積排除色譜法(SES)(也稱凝膠滲透色譜法(GPC))
當高分子溶液通過填充有特種多孔性填料的柱子時,溶液中高分子因其分子量的不同,而呈現不同大小的流體力學體積。柱子的填充料表面和內部存在著各種大 小不同的孔洞和通道,當被檢測的高分子溶液隨著淋洗液引入柱子後,高分子溶質即向填料內部孔洞滲透,滲透的程度和高分子體積的大小有關。大於填料孔洞直徑 的高分子只能穿行於填料的顆粒之間,因此將首先被淋洗液帶出柱子,而其他分子體積小於填料孔洞的高分子,則可以在填料孔洞內滯留,分子體積越小,則在填料 內可滯留的孔洞越多,因此被淋洗出來的時間越長。按此原理,用相關凝膠滲透色譜儀,可以得到聚合物中分子量分布曲線。配合不同組分高分子的質譜分析,可得 到不同組分高分子的絕對分子量。用已知分子量的高分子對上述分子量分布曲線進行分子量標定,可得到各組分的相對分子量。由於不同高分子在溶劑中的溶解溫度 不同,有時需在較高溫度下才能製成高分子溶液,這時GPC柱子需在較高溫度下工作。
4.質譜法
質譜法是精確測定物質分子量的一種方法,質譜測定的分子量給出的是分子質量m對電荷數Z之比,即質荷比(m/Z)過去的質譜難於測定高分子的分子量, 但近20餘年由於我的離子化技術的發展,使得質譜可用於測定分子量高達百萬的高分子化合物。這些新的離子化技術包括場解吸技術(FD),快離子或原子轟擊 技術(FIB或FAB),基質輔助激光解吸技術(MALDI-TOF MS)和電噴霧離子化技術(ESI-MS)。由激光解吸電離技術和離子化飛行時間質譜相結合而構成的儀器稱為「基質輔助激光解吸-離子化飛行時間質譜」 (MALDI-TOF MS 激光質譜)可測量分子量分布比較窄的高分子的重均分子量(Mw)。由電噴霧電離技術和離子阱質譜相結合而構成的儀器稱為「電噴霧離子阱質譜」(ESI- ITMS 電噴霧質譜)。可測量高分子的重均分子量(Mw)。
5.其他方法
測定高分子分子量的其他方法還有:端基測定法,沸點升高法,冰點降低法,膜滲透壓法,蒸汽壓滲透法,小角X-光散射法,小角中子散射法,超速離心沉降法等。
I. 高分子材料性能測試的具體方法有哪些
高分子材料的性能有很多
力學性能可以用拉伸機,熱學性能用DSC,DTA,TGA,DMA,結晶性能用XRD,NMR
含水可以用壓差儀,粘度用流變儀或者烏氏,分子結構圖譜用IR,拉曼,UV等
J. 高分子材料性能測試的具體方法有哪些有沒有好點的檢測機構推薦
高分子材料性能測試的具體方法:
高分子材料剖析是利用現有的儀器分析手段,對高分子材料的主成分以及其填料、增塑劑等成分進行定性定量的一種分析方法。
主要包括:
高分子材料主成分鑒定、橡膠種類鑒定、高分子材料成分剖析、無機填料測試等。
常見的需要測試的產品有:
塑料:聚乙烯(PE)、聚丙烯(PP)、聚(PVC)、聚苯乙烯(PS)、聚氨酯(PU)、聚醯胺(PA)、聚甲醛(POM)、聚苯醚(PPS)、聚碳酸酯(PC)、聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)、聚對苯二乙二醇酯(PET)等。
橡膠:氯丁橡膠(CR)、天然橡膠(NR)、丁苯橡膠(SBR)、丁基橡膠(IIR)、丁腈橡膠(NBR)、乙丙橡膠(EPM)等。
纖維:棉、麻、毛天然纖維,黏膠纖維等合成纖維。
塗料剖析:油脂漆、天然樹脂漆、酚醛漆、瀝青漆、醇酸漆、氨基漆、硝基漆、過氧乙烯漆、環氧漆等。
有機溶劑剖析:油漆稀釋劑,脫漆劑,電子電器行業使用的清洗劑和溶劑等。
其他材料剖析:助焊劑、表面活性劑等
案例1
高分子材料主成分定性
主成分定性主要是利用傅里葉變換紅外光譜儀(FTIR)對材料進行測試,獲取其紅外光譜,通過分析其出峰位置的所屬的官能團,並對照其標准譜圖,判斷樣品所屬的高分子類型。例如:
由紅外光譜結果可知,3392.01cm-1 處的強吸收峰譜帶為-OH 的伸縮振動吸收,C=O伸縮振動的吸收在1732.68cm-1 ,1267.63cm-1處是包含苯環碳的C-C-O不對稱伸縮振動,1124.32cm-1和1069.29cm-1處的雙峰為O-CH2-CH2的伸縮振動吸收。3000~2800cm-1為飽和C-H的伸縮振動區域,>3000cm-1處的小峰為飽和C-H伸縮振動。1500~1300cm-1之間為CH3和CH2 的彎曲變形振動區域。742.71cm-1處的吸收峰為苯環的鄰位雙取代吸收。通過比較樣品圖譜與標准圖譜可知,樣品的主成分為醇酸樹脂。
案例2
橡膠種類鑒定
橡膠鑒定主要是依據《GBT 7764-2001 橡膠鑒定 紅外光譜法》標准方法,通過熱解法對樣品進行前處理,利用傅里葉變換紅外光譜儀(FTIR)對樣品進行進行測試,獲取目標樣品的紅外光譜圖,通過分析其出峰位置的所屬的官能團,並對照其標准譜圖,判斷樣品所屬的橡膠種類。