目前，細胞因子已廣泛應用於臨床的已有EPO、IFN-α、G-CSF、GM-CSF以及試用於臨床的白細胞介素等。為了研究細胞因子在生理系統的作用以及了解細胞因子產品用於臨床治療的效果，進行細胞因子的檢測就必不可少，而且用於臨床診斷的細胞因子分析方法必須適用於常規操作。細胞因子的檢測尚未在臨床診斷上廣泛開展，已知目前採用的細胞因子檢測方法均不完善，且不同的檢測方法所得的結果差異較大，給臨床治療帶來一定的困難。因此，有必要了解各種檢測方法的特性及影響細胞因子濃度的因素。 1 原理和方法細胞因子的發現依賴於其生物學活性，因此，建立了生物分析法用於細胞因子的檢測。隨後，用於檢測實驗溶液(如組織培養上清液)中細胞因子的免疫分析法被建立，並不斷用於實驗室研究。但准確地、可重復地測定細胞因子具有一定困難，主要原因是眾所周知的細胞因子的含量極低(大部分都是以pmol/L計)，同時存在著源於異嗜性抗體，類風濕因子以及特異的和非特異的細胞因子結合蛋白等的顯著干擾。在生物幫那裡可以詳細的了解一下，那裡有很多實驗領域的精品技術文件，並且圖文並茂，提供生物領域的學科知識、實驗技術方法與技巧等please click to connect www.bio1000.com/zt/cell/46213.html .that can help you細胞因子生物學活性檢測和濃度測定的分析方法主要有以下幾類。1.1 生物分析法 生物分析法方便，敏感性高，但所有細胞系有可能受幾種細胞因子的影響，特異性則較差。又由於可溶性細胞因子受體等抑制劑的存在，使生物分析法可能低估細胞因子的活性。常用的方法有2種:(1)依賴性細胞株增敏實驗。一些腫瘤細胞株依賴於細胞因子方能在體外增殖，如TF-1細胞株依賴於GM-CSF和IL-3，CTLL細胞株依賴於IL-2，TTD-1細胞株依賴於IL-6等 。可利用這些依賴株檢測相應的細胞因子。但是，並非所有細胞因子均有相應的依賴株，因此限制了此法的應用。(2)功能檢測實驗。利用一些細胞因子的功能特性而建立相應的活性測定方法。如IFN抗病毒實驗和TNF對L 929 細胞的殺傷作用等 。此外，生物分析法還有骨髓集落形成實驗，細胞毒或細胞抑制實驗，次級分子分泌的誘導，化學趨化和細胞因子分泌性的抑制實驗等。1.2 免疫分析法 利用抗原機體反應的原理，制備出抗細胞因子的單抗或多抗，可進行細胞因子的免疫檢測，它包括放免實驗(RIA)和酶聯免疫吸附實驗(ELISA)等。其優點是高特異性、高靈敏度、操作簡便。缺點是不能證明被測細胞因子是否為具有完整生物活性結構的蛋白質而非變性蛋白質。1.3 CKmRNA的測定 (1)分子雜交實驗:首先制備出細胞因子的基因探針，通過分子雜交檢測細胞內CKmRNA的表達。(2)逆轉錄PCR(RT-PCR)法技術:可快速、靈敏地檢測表達很低的CKmRNA，並可同時測定同一樣本中多種CKmRNA，操作過程包括細胞因子產生細胞的RNA提取，mRNA經逆轉錄合成cDNA，以cDNA為模板，在細胞因子引物的引導下，即可進行PCR擴增。根據定量CKmRNA方法和原理的不同，可分為半定量PCR法，競爭性定量PCR法，內參標定量PCR法，HPLC-PCR法和酶聯免疫定量PCR法。目前市售的商品試劑盒已能用於大多數細胞因子的檢測，但因其價格昂貴而阻礙了其廣泛使用。同時，人細胞因子的測定仍存在許多問題，檢測方法選擇不當可能得到不一致的結果，有時有必要選擇一個以上的檢測方法測定細胞因子。 2 靈敏度細胞因子具有很強的生物學活性，其生物分析法的靈敏度極高。然而，在測定血漿中細胞因子正常濃度時，難以確定免疫分析法令人滿意的靈敏度。不同細胞因子的參考值變化很大，難以定義其參考值范圍。如Damas等[7] 在研 究細胞因子與敗血症時，使用兩步免疫放射測定實驗(IRˉMA)測定IL-6(靈敏度:5ng/ml)一步IRMA法測定TNF-α(靈敏度:5ng/L)和IL-1β(靈敏度:4ng/L)，在正常血清中未測得上述細胞因子。而Riikonen等使用具有相似檢測限的RIA法，在20例健康兒童中，IL-1β的平均濃度為12.1ng/L，IL-6的平均濃度為83ng/L;在71例健康兒童中，TNF-α的平均濃度為40±2ng/L。由此可見，不同的免疫分析方法之間存在極大的差異，其靈敏度變化可能是由於其准確度和特異性的不同而引起。3 准確度和特異性影響細胞因子檢測准確度和特異性的因素有:(1)抗體:單抗的表位識別;(2)細胞因子:多種分子形式，結合蛋白復合物、抑制劑和可溶性受體復合物;(3)血漿基質:干擾抗體，異嗜性抗體和類風濕因子;(4)標准:重組參考物質可能不顯示與樣品平行的劑量———反應曲線。3.1 細胞因子結合蛋白 已知IL-1β、TNF-α和IL-6能結合從細胞進入血漿的可溶性受體或特異的拮抗劑。免疫分析法是否能識別這樣的結合形式幾乎是未知的，但是對TNF的研究得出了一些重要結論。20世紀80年代後期，《Lancet》上發表了大量關於癌症病人TNF-α測定缺乏可靠性和生物分析法與免疫分析法關系的文章。但使用競爭性免疫分析法時，癌症病人與敗血症病人的TNF-α是可被檢測的。而ELISA法由於不能測定TNF-α與P 55 TNF受體的結合物而無法測定癌症病人血漿中的TNF-α。3.2 血漿中包含幾種形式的IL-6分子，它們與一些抗血清的作用較弱，缺乏生物學活性並與其它血漿蛋白質以及IL-6的可溶性受體組成復合物。已知IL-6免疫分析法和生物分析測定其在正常血清中的濃度為0或在10～75ng/L范圍，敗血症病人的IL-6濃度升高到1～2μg/L，腦膜炎病人的IL-6濃度升到200μg/L。然而，May等說明大多數的檢測方法僅僅測定了低分子量的IL-6，他們採用能識別IL-6高分子量的單抗，測得在正常血清中IL-6的濃度為1～10μg/L，並且在1例骨髓移植後病人的血清樣品中，測得IL-6的濃度為5～10mg/L。3.3 多種分子的形式 一些細胞因子的多種分子形式已被充分認識，但是其對細胞因子測定影響的重要性並未得到徹底的研究。IL-6是一個最好的例子，它由一個位於第7染色體上，包含5個外顯子的單一多傑基因編碼。其氨基酸序列包括幾個潛在的O-糖基位點，2個N-糖基位點和幾個絲氨酸磷酸化位點。由細菌產生的重組IL-6的相對分子量為21Kd。人成纖維細胞至少分泌6種形式，相對分子量為23～30Kd的IL-6，它們均是糖蛋白，能在敗血症病人的血漿中被檢測。人內皮細胞分泌一種分子量為45Kd的IL-6，它似乎是血漿中的IL-6的主要存在形式。3.4 人血漿中的干擾物質 血漿中通常包含有與IgG反應的抗體。這些異嗜性的抗體可影響夾心免疫分析法，它們在俘獲抗體和被標記的抗體間形成橋梁，而錯誤地導致高分析值。研究表明，15%～40%的病人樣本中含有能夠干擾檢測的抗體。異嗜性抗體能與鼠、兔和牛血清免疫球蛋白發生反應，在大多數情況下，它們與牛IgG的結合最強。在檢測中，加入正常的非免疫動物血清吸附異嗜性抗體，常能夠消除這種形式的干擾。3.5 類風濕因子是IgM的自身抗體 Hamilton等的研究說明，IgM類風濕因子與鼠IgG的結合發生於1%的健康獻血者和31%的類風濕關節炎病人。然而，也有研究表明，在9.1%的正常獻血者中發生了這類結合。這些抗體可造成與異嗜性抗體完全相同的影響，並且他們在對細胞因子檢測具有特別意義的類風濕病患者中的濃度極高。
❷ 測細胞因子含量常用的 elisa 方法為
有一個朋友來找我咨詢用流式檢測細胞因子的問題，他之前用ELISA 檢測細胞因子的話，發現樣本量需求很多，然而有些樣本量又比較少怎麼辦呢，那麼接下來我來對比幾種檢測細胞因子的優缺點，供各位大大們閱讀參考啦~
細胞因子（cytokine，CK）：是由免疫細胞（如單核、巨噬細胞、T細胞、B細胞、NK細胞等）和某些非免疫細胞（內皮細胞、表皮細胞、纖維母細胞等）經刺激而合成（一般是免疫細胞）、分泌的一類生物活性物質分泌的蛋白質，在體內廣泛參與免疫調節及炎症反應、組織修復、刺激造血系統、刺激細胞的增殖與凋亡等重要生理活動，在抵抗外來病原及維持機體內環境平衡中均起重要作用。
細胞因子的作用方式：自分泌作用、旁分泌作用、內分泌作用。
細胞因子的作用特點：多效性、重疊性、協同性、拮抗性和雙重性。
根據產生細胞因子的細胞種類不同分類：白細胞介素（interleukin, IL)、干擾素（interferon, IFN)、腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor, TNF)、轉化生長因子-β家族（transforming growth factor-β family, TGF-β family)、集落刺激因子（colony stimulating factor, CSF)、趨化因子（chemokinefamily)、生長因子（growth factor,GF）等。
細胞因子的檢測方法一般分為生物學、分子生物學測定法及免疫學（重點介紹）
1、生物學測定法 其原理是根據細胞因子對特定的依賴性細胞株(即靶細胞)的促增殖作用,以增殖細胞中的DNA的合成或酶活性為指標,間接推算出細胞因子的活性單位,如對IL-1、IL-2等細胞因子活性的檢測。亦可根據某些細胞因子對特定靶細胞的殺傷效應或對病毒的抑製作用進行測定,如對腫瘤壞死因子及干擾素的生物活性測定。
2、分子生物學測定法 目前採用的技術有各種印跡法、斑點雜交、原位雜交和PCR等。通過檢測細胞內細胞因子的基因組成或mRNA量,推算出細胞因子的合成量。
3、免疫學檢測法 其基本原理是將細胞因子作為抗原進行定量檢測。如免疫斑點法、ELISA法、免疫印跡法和流式細胞儀等均已用於細胞因子的檢測。
細胞因子的檢測方法對比
1、酶聯免疫吸附實驗（ELISA）
原理：使抗原或抗體與某種酶連接成酶標抗原或抗體，這種酶標抗原或抗體既保留其免疫活性，又保留酶的活性。由於酶的催化頻率很高，故可放大反應效果，從而使測定方法達到很高的敏感度。
優點：避免特異性抗體直接標記，便宜。
缺點：所需樣本量多、每次僅能測定一項細胞因子、操作步驟和測定時間過長、酶聯反應所致的人工假象
2、流式細胞儀（CBA）
原理：利用微小、分散的顆粒捕獲液體待測物，並利用流式細胞儀檢測類似「三明治」的顆粒——待測物復合體所散發的熒光，從而測定待測物的數量。
優點：所需樣本量少、快速（實驗6-8h可以完成）操作簡便、靈敏度高、重復性好、高效（同一個樣品可以同時檢測多個因子）、安全、接近生物體的分析條件（全血檢測保留細胞及生化微環境更准確反應了體內狀況）。
❸ 細胞免疫功能檢測常用有哪幾種方法
細胞免疫（CMⅠ）是由多種細胞相互作用的結果。免疫細胞間相互作用導致多種細胞因子的釋放。因此細胞功能測定不僅涉及T細胞的數量和功能與包括各類因子活性測定，因此評價機體的細胞免疫功能不僅程序復雜，且很難標准化。
一、遲發型過敏反應的體外檢測方法
皮膚試驗和接觸性過敏的誘發是檢測遲發型過敏反應（DTH）的兩種常用方法。皮膚試驗中誘發對曾經使病人致敏的抗原的再次應答，而接觸性過敏是測試受者對從未接觸過的物質發生致敏的能力。
1．皮膚試驗 用皮膚試驗診斷DTH，常用的抗原有結核菌純蛋白衍生物（PPD）、腮腺炎病毒、念珠菌素等，在人類試驗時在前臂皮內注射少量可溶性抗原，24～48小後，測量紅腫硬結的大小，硬結直徑大於10mm即被看作為陽性。表明受試者對該病原菌有了一定的細胞免疫能力，若皮試無反應，可用更高濃度的抗原重復試驗，若仍無反應即為陰性，需排除皮試技術誤差，也可能受試者從未接觸過此抗原，也可能由於細胞免疫功能缺損，或由於細胞免疫功能缺損，或由於嚴重感染（麻疹、慢性播散性結核）造成的無反應性。
2．接觸性過敏常應用低分子量化合物如二硝基氯苯（DNCB）誘生接觸性過敏。化合物與皮膚蛋白質結合而導至DTH反應。在動物試驗時，初次皮膚上塗抹DNCB後間隔7～10天再激發刺激，則皮膚出現即為陽性。此試驗人類已不使用。
二、細胞免疫的體外檢測方法
體外檢測淋巴細胞的數量和功能，最易採集的是血標本，首先需分離或純化淋巴細胞，一般使用萄聚糖-泛影葡胺配成比重為1.077的淋巴細胞分層液，當將血液重疊於淋巴細胞分層液之上離心時，由於紅細胞（1.092）、多形核白細胞（1.090）、淋巴細胞（1.070）的比重不同而相互分開。淋巴細胞和單核細胞在血漿和分層液交界處形成一薄層。仔細分出這一薄層的細胞，其中淋巴細胞佔80%，單核細胞佔20%，淋巴細胞中T細胞佔80%，B細胞佔4%～10%，其作為非DT、非B細胞。
1．T細胞計數
（1）E花環法：人類T細胞表面有SRBC受體（CD2）能與SRBC結合形成玫瑰花環樣結構，將經分層液分離現的RBM懸液與SRBC在含有血清的平衡鹽水中混合，經37℃培養5～10分鍾放4℃過夜，取細胞懸計數，外周血淋巴細胞中約70%～80%淋巴細胞結成花環即為T細胞。目前此方法已用來分離T細胞，而不用做T細胞計數。
（2）用單克隆抗體計數T細胞：將人的PBM分成三等份，分別用小鼠抗人CD3、CD4和CD8的單克隆抗體作第一抗體與細胞結合，再用FITC標記的兔抗小鼠IgG抗體作第二抗體進行間接免疫熒光染色，在熒光顯微鏡下或流式細胞儀檢測結果，在PBM中被CD3抗體染上熒光的細胞稱為CD3 細胞即總T細胞。正常人在PBM中T細胞佔70%～80%。正常人的CD4 細胞和CD8 細胞之和應與CD3 細胞數一致。CD4 細胞與CD8 細胞的比值正常人約為2/1而艾滋病患者則比值小於1.7。
2．T細胞活化試驗 T細胞能被非特異的物質稱為有絲分裂原所激活而向淋巴母細胞轉化。T細胞轉化過程可伴隨有DNA、RNA、蛋白質的合成增加，最圖導致細胞分裂。在光學顯微鏡下可計數轉化後的淋巴細胞數，也可用氚標記的胸腺嘧啶核苷（3HTdR）摻入正在分裂的淋巴細胞，用液閃測定儀檢查摻入正在分裂的淋巴細胞，用液測量儀檢查摻入的3H-TdR的多少確定淋巴細胞轉化率。最近有一種不用同位素，又可用儀器測量的淋巴細胞增殖反應的檢查法，稱為MTT檢測法，MTT是一種甲氮唑鹽，它是細胞線粒體脫氫酶的底物，細胞內的酶可將MTT分解產生藍黑色甲（fromazan）產物。該產物的多少與活性細胞數正相關。結果可用酶標檢測儀（595mm）測量匯豐銀行密度，做為MTT法的檢查指標。此法的結果與3H-TdR摻入法平行，並能反應試驗中的活細胞數。
3．細胞毒試驗 TC細胞、NK細胞、LAK細胞、TIL細胞對其靶細胞有直接的細胞毒（殺傷）作用。常用的栓測細胞毒效應的方法是51Cr-Na2Cro4鹽水溶液與靶細胞胞混合，於37℃培養1小時左右，51Cr即可進入靶細胞，與胞漿蛋白結合，洗去游離的51Cr後，即可得到51Cr標記的靶細胞，將待檢細胞毒性的細胞與51Cr標記的靶細胞混合（比例約為50：1或100：1）靶細胞被殺傷越多，釋放到上清液中的液游離的51Cr越多，且不能被其他細胞吸收。用γ射線測量儀檢測上清液中的cpm值，即可計算出待檢細胞殺傷活性的高低。
細胞毒試驗檢測Tc細胞效應功能是否健全，及經IgG介導的ADCC效應，或NK細胞在抗腫瘤免疫中的作用是有意義的。
4．混合淋巴細胞的反應（MIR） 是體外研究T細胞的較好的方法，雙向MLR常被用來篩選骨髓移植的供體。來自不同供體的淋巴細胞分別與病人的淋巴細胞混合培養4～5天，在最後8小時摻入51TdR摻入法測T細胞的反應性。或用細胞毒法觀察受刺激的T細胞與活的靶細胞混合（靶細胞來自與刺激細胞相同的個體）如果T細胞受刺激後產生了細胞毒T細胞，可殺死活的細胞，根據靶細胞釋放51Cr的多少算出T細胞移動抑制因子）和LIF（白細胞移動抑制因子）來評估細胞免疫功能。近年來應用測定IL-2的免疫酶技術，操作簡單，並能定量以取代了MIF和LIF的測定。單個核細胞與分裂原一起培養24小時，然後測定清液中的IL-2活性。在細胞免疫功能缺損時，特別是AIDS病人，IL-2分泌明顯降低。而有些疾病，如多發性硬化、類風濕關節炎、移植排斥反應等病人體內血清中IL-2水平升高，表明病人T細胞活性增高。發生移植排斥反應的病人尿中IL-2也可升高。
也可用酶聯免疫吸附試驗測定各種體液中活化的T細胞脫落的IL-2受體（CD25），一般來說IL-2的水平和IL-2受體水平是平行的，IL-2和IL-2受體的檢測可用於對某些疾病的監測，如移桿排斥、自身免疫病以及接受免疫抑制治療的病人。
對體外培養的細胞進行細胞因子產生能力檢測是檢查細胞培養上清液中細胞因子的生物活性或抗原性。現已可用核酸雜交技術，即從組織中或細胞中提取RNA，與同位素或酶標記的該種細胞因子的cDNA探針作分子雜交試驗，即印跡（dot blotting）或Northern印跡，若查出有某種因子的mRNA存在，即說明該細胞在所處培養條件下有產生某種細胞因子的能力。
❹ 細胞因子檢測可以用哪些方法，簡述其原理
細胞因子主要是指由內分泌細胞分泌的一類可以參與免疫應答的蛋白多肽。對於細胞因子的檢測方法主要有三種：細胞生物學檢測、免疫學檢測和分子生物學檢測。細胞因子的發現依賴於其生物學活性，因此，建立了生物分析法用於細胞因子的檢測。隨後，用於檢測實驗溶液(如組織培養上清液)中細胞因子的免疫分析法被建立，並不斷用於實驗室研究。但准確地、可重復地測定細胞因子具有一定困難，主要原因是眾所周知的細胞因子的含量極低(大部分都是以pmol/L計)，同時存在著源於異嗜性抗體，類風濕因子以及特異的和非特異的細胞因子結合蛋白等[1，2] 的顯著干擾。
❺ 如何用ELISA方法檢測組織細胞因子
因為elisa方法是比較常見，也是比較成熟的檢測組織細胞因子的方法哈
❻ 細胞內細胞因子的流式細胞怎樣檢測
胞內流式分析法是用抗細胞因子抗體與細胞表面或胞內特定亞群標志組合，即可檢測不同細胞亞群細胞因子的分泌，同時採用特殊的化學與抗體選擇，確保靜止與無細胞因子分泌細胞的最小熒光背景。具有其它方法難以比擬的優點： 快速：流式定量檢測細胞內細胞因子可在一天內完成，實驗流程需6-8小時，實際操作時間為1-2小時，快速簡便; 簡便：無需組織培養，可以全血分析，無需分離PBMCs; 靈敏度高：高度靈敏的熒游標記與檢測系統; 高效：可以在同一個細胞內同時檢測兩種或更多種細胞因子，也可根據細胞免疫表型區分分泌細胞因子的細胞的亞型，進行多參數相關分析; 安全：減少樣本處理與生物源性污染 接近生物體的分析條件：全血檢測保留細胞及生化微環境更准確反映了體內狀況。 生物幫上面有這方面的詳細內容，SDS提取法 http://www.bio1000.com/experiment/hesuan/241857.html
❼ 常用的細胞因子檢測方法有哪些
（1）生物學檢測法：又稱生物活性檢測，是根據細胞因子特定的生物活性而設計的檢測法。生物活性檢測法又可分為： 1、細胞增殖法； 2、靶細胞殺傷法； 3、細胞因子誘導的產物分析法； 4、細胞病變抑製法。
（2）免疫學檢測法：細胞因子均為蛋白或多肽，具有較強的抗原性，可利用抗原抗體特異性反應的特性，用免疫學技術定量檢測細胞因子，常用的方法包括ELlSA、RlA及免疫印跡法
（3）分子生物學方法：目前公認的細胞因子的基因均已克隆化，較容易地得到某一細胞因子cDNA探針或根據已知的核苷酸序列人工合成寡聚核苷酸探針。常使用斑點雜交、Northernblot、逆轉錄PCR，細胞或組織原位雜交等。具有靈敏、快速等優點，甚至從l～10個細胞中就可檢出其中的特異mRNA
❽ 請教通過何種方法檢測細胞因子，如何知道細胞
細胞因子主要是指由內分泌細胞分泌的一類可以參與免疫應答的蛋白多肽。對於細胞因子的檢測方法主要有三種：細胞生物學檢測、免疫學檢測和分子生物學檢測。
細胞因子的發現依賴於其生物學活性，因此，建立了生物分析法用於細胞因子的檢測。隨後，用於檢測實驗溶液(如組織培養上清液)中細胞因子的免疫分析法被建立，並不斷用於實驗室研究。但准確地、可重復地測定細胞因子具有一定困難，主要原因是眾所周知的細胞因子的含量極低(大部分都是以pmol/L計)，同時存在著源於異嗜性抗體，類風濕因子以及特異的和非特異的細胞因子結合蛋白等[1，2] 的顯著干擾。
❾ 如何檢測組織中炎症細胞因子
檢測細胞因子的方法主要有生物學檢測法、免疫學檢測法和分子生物學檢測法。
1、生物學檢測法
2、免疫學檢測法
3、分子生物學方法