檢測基因表達的方法

1. 基因表達的檢測方法有哪些

用最高科技的儀器

2. 基因表達的檢測方法有哪些

老兄。我掃個盲哈。檢測基因表達的方法主要有：表達譜，全轉錄組的信息，目前最流行平台包括47，000個轉錄本，檢測全基因組的表達變化。簡單的經典的方法有Northern Blot,常用的有反轉錄PCR，定量分析表達的變化qRT-PCR這些都是檢測單一轉錄子的方法。

3. 檢驗目的基因是否成功表達用什麼方法

應用分子雜交進行檢測。
分子雜交技術：不同的dna
片段之間，dna
片段與rna
片段之間，如果彼此間的核苷酸排列順序互補也可以復性，形成新的雙螺旋結構。這種按照互補鹼基配對而使不完全互補的兩條多核苷酸相互結合的過程稱為分子雜交。檢測目的基因是否進行轉錄，即有無互補rna產生，可以使用分子雜交技術。

4. 檢測dna上的目的基因是否表達常用的檢測方法是

A 對目的基因的檢測和表達檢測的方法混淆，不能准確應用。目的基因的檢測常採用DNA分子雜交技術，即將含有目的基因的DNA片段用放射性同位素作標記，以此作為探針，使探針與基因組DNA雜交，若出現雜交帶，則表明目的基因已插入到染色體中。DNA—RNA分子雜交與抗原——抗體雜交法是目的基因的表達檢測。目的基因是否轉錄出了相應的信使RNA分子，用DNA—RNA分子雜交法檢測。細胞內是否合成了由目的基因控制的蛋白質，使用抗原——抗體雜交法檢測。要准確區分目的基因的檢測和表達檢測使用的方法。顯微注射技術是目的基因導入受體細胞的方法。

5. 檢測基因表達的方法

主要用探針檢測mRNA或用抗體檢測出表達的蛋白質(轉錄水平上對特異mRNA的檢測和翻譯水平上對特異蛋白質的檢測)

一、外源基因轉錄水平的鑒定

基因表達分為轉錄及翻譯兩階段，轉錄是以DNA（基因）為模板生成mRNA的過程，翻譯是以mRNA為模板生成蛋白質的過程，檢測外源基因的表達就是檢測特異mRNA及特異蛋白質的生成。所以基因表達檢測分為兩個水平。

即轉錄水平上對特異mRNA的檢測和翻譯水平上對特異蛋白質的檢測。轉錄水平上的檢測主要方法是Northern雜交，它是以DNA或RNA為探針，檢測RNA鏈。和Southern雜交相同，Northern雜交包括斑點雜交和印跡雜交。

也可用RT-PCR（reverse transcribed PCR）方法檢測外源DNA在植物體內的轉錄表達。其原理是以植物總RNA或mRNA為模板進行反轉錄，然後再經PCR擴增。

如果從細胞總RNA提取物中得到特異的cDNA擴增條帶，則表明外源基因實現了轉錄。此法簡單、快速，但對外源基因轉錄的最後決定，還需與Northern雜交的實驗結果結合。

二、外源基因表達蛋白的檢測

表達蛋白的檢測方法有三種：

1、生化反應檢測法：主要通過酶反應來檢測；

2、免疫學檢測法：通過目的蛋白（抗原）與其抗體的特異性結合進行檢測，具體方法有Western雜交、酶聯免疫吸附法（ELISA）及免疫沉澱法；

3、生物學活性的檢測。

Western雜交是將聚丙烯醯胺凝膠（SDS-PAGE）電泳分離抗原（Antigen）固定在固體支持物上（如硝酸纖維素膜，NC膜）。不同分子量大小的蛋白質在凝膠中遷移率不同，據此可確定特定的抗原存在與否以及相對豐度，或者蛋白質是否遭到降解等。

蛋白質電泳後轉到NC膜，放在蛋白質（如牛血清蛋白BSA）或奶粉溶液中，溫育，以封閉非特異性位點，然後用含有放射性標記或酶標記的特定抗體雜交，抗原-抗體結合，再通過放射性自顯影或顯色觀察。

(5)檢測基因表達的方法擴展閱讀

外顯子與內含子表達過程中的相對性 從內含子與外顯子的定義來看，兩者是不能混淆的，但是真核生物的外顯子也並非都「顯」（編碼氨基酸），除了tRNA基因和rRNA基因的外顯子完全「不顯」之外，幾乎全部的結構基因的首尾兩外顯子都只有部分核苷酸順序編碼氨基酸，還有完全不編碼基酸的外顯子，如人類G6PD基因的第一外顯子核苷酸順序。

已發現一個基因的外顯子可以是另一基因的內含子，所這亦然。以小鼠的澱粉酶基因為例，來源於肝的與來源於唾液腺的是同一基因。澱粉酶基因包括4個外顯子，肝生成的澱粉酶不保留外顯子1，而唾液腺中的澱粉酶則保留了外顯子1的50bp順序，但把外顯子2與前後兩段內含子一起剪切掉，經過這樣剪接，外顯子2就變成唾液澱粉酶基因中的內含子。

同一基因在不同組織能生成不同的基因產物來源於不同組織的類似蛋白，可以由同一基因編碼產生，這種現象首先是由於基因中的增強子等有組織特異性，它能與不同組織中的組織特異因子結合，故在不同組織中同一基因會產生不同的轉錄物與轉錄後加工作用。

此外真核生物基因可有一個以一的poly(A)位點，因此能在不同的細胞中產生具有不同3』末端的前mRNA，從而會有不同的剪接方式。由於大多數真核生物基因的轉錄物是先加poly(A)尾巴，然後再行剪接，因此不同組織、細胞中會有不同的因子干預多聚腺苷酸化作用，最後影響剪接模式。

6. 目的基因是否表達的檢測方法

最直接的就是檢測目的蛋白，一般都是用western blot；如果是分泌蛋白，可以做ELISA；如果蛋白有特殊的功能（比如GFP，綠色熒光蛋白），也可以直接檢測其功能（比如看有無綠色熒光）。間接的話，可以檢測目的mRNA是否存在，用的是northern blot或者RT-PCR。要注意的是，因為翻譯階段有可能存在調控，所以有些情況下mRNA存在不代表蛋白存在，即基因轉錄了未必翻譯。所以間接的手段一般作為旁證。

7. 檢測基因表達的方法有哪些

基因工程第四步中包括導入檢測，轉錄檢測和翻譯檢測，方法分別是dna分子雜交技術、分子雜交技術、抗原-抗體雜交技術。有的還可在個體水平是進行檢測，如抗性檢測等

8. (4)檢測該目的基因是否表達的方法是

先用realtime檢測mRNA水平是否表達，如果本身就存在這個基因，就看「是否表達」提高了很多，然後再做westernblot檢測蛋白水平是否表達，如果這個基因可以影響細胞的某些功能的話，再檢測細胞的一些指標看是否有預期的變化。基因(遺傳因子)是具有遺傳效應的DNA片段(部分病毒如煙草花葉病毒、HIV的遺傳物質是RNA)。基因支持著生命的基本構造和性能。儲存著生命的種族、血型、孕育、生長、凋亡等過程的全部信息。

9. 介紹幾種檢測基因表達水平的方法

1 western bloting
a.將編碼目標蛋白基因通過載體進行體外重組，然後導入宿主細胞表達
b.將目標蛋白注入兔子或其他動物體內獲得一抗
c.將樣品蛋白進行聚丙烯醯胺凝膠電泳、轉移、吸附固定
d.用一抗與之雜交再用二抗檢測其是否表達
2 fluorescent real-time PCR
a.提取樣品總RNA，再通過超速離心獲得mRNA
b.用逆轉錄酶獲得cDNA
c.加入特異性探針
d.利用專門的儀器檢測熒光強度即可
3半定量 PCR
a.提取樣品總RNA，再通過超速離心獲得mRNA
b.用逆轉錄酶獲得cDNA
c.做半定量PCR
4cDNA microarray
5蛋白質 晶元
實質就是高通量的分子雜交，免疫酶連反應再運用計算機處理